Плотность р18: Марочник сталей характеристики, свойства сталей и сплавов

alexxlab | 03.08.1984 | 0 | Разное

Содержание

характеристики и расшифовка, применение и свойства стали

Страна Стандарт Описание
Россия ГОСТ 19265-73 Прутки и полосы из быстрорежущей стали. Технические условия

Характеристики стали Р18

Классификация Сталь инструментальная быстрорежущая
Применение Резцы, сверла, фрезы, резьбовые фрезы, долбяки, развертки, зенкеры, метчики, протяжки для обработки конструкционных сталей с прочностью до 1000 МПа, от которых требуется сохранение режущих свойств при нагревании во время работы до 600 °С.

Сталь имеет пониженную склонность к перегреву при закалке, хорошую вязкость, хорошее сопротивление износу, повышенную шлифуемость

Р18 :: Металлические материалы: классификация и свойства

Сталь Р18   ГОСТ 19265-73

Массовая доля элемента, %

углерода

марганца

кремния

хрома

вольфрама

ванадия

кобальта

молибдена

никеля

меди

серы

фосфора

азота

ниобия

не более

0,73– 0,83

0,20 – 0,50

0,20 – 0,50

3,80 – 4,40

17,00 – 18,50

1,00 – 1,40

Не более 0,50

Не более 1,00

0,6

0,25

0,030

0,030


Ас1

Ас3 (Асm)

Ar3(Асm)

Мн

Температура критических точек, °С

820

860

770

725


Температура испытания °С

20

100

200

300

400

500

600

700

800

900

Модуль нормаль­ной упругости, Е, ГПа

228

223

219

210

201

192

181

Модуль упругости при сдвиге кручением G, ГПа

83

Плотность ρn,  г/см3

8800

Коэффициент теп­лопроводности λ, Вт/(м * °С)

26

27

28

29

28

27

27

Удельное элекро­сопротивление    (ρ, Ном*м)

419

472

544

627

718

815

922

1037

1152

1173


Твердость

Температура 0С

после отжига

После закалки с отпуском, HRCэ (HRC), не менее

закалки

отпуска

HB, не более

255

63 (62)

1270

560


Температура нагрева для закалки и отпуска образцов должна соответствовать значениям, указанным в таблице.

Охлаждение образцов после закалки проводят в масле.

Отпуск образцов проводят двух-, трехкратный, с выдержкой по 1 ч. и охлаждением на воздухе.

Время выдержки при нагреве устанавливают согласно черт. 1.

Толщина (диаметр) образца, мм

1.     – для прямоугольных образцов

2.  – для круглых образцов

Черт. 1.

Кривая зависимости твердости от температуры отпуска

Механические свойства стали в состоянии поставки (после отжига) при 20 °С

σ0,05

σ0,2

σВ

δ5

ψ

σСЖ0,2

σСЖ

ε, %

τК,

МПа

ν, %

KCU, Дж/см2

МПа

%

Мпа

210 (5)

510 (20)

840 (30)

8 (1)

10 (1)

520 (13)

2600 (80)

50 (1,5)

560 (17)

50 (0,7)

19 (1)


Механические свойства стали в термообработанном состоянии

σ0,05

σВ

σСЖ0,2

σСЖ

τК,

σизг

KCU, Дж/см2

МПа

2480 (70)

2150 (110)

3060 (90)

3820 (120)

1880 (100)

3000 (200)

30 (3)


Механические свойства стали в состоянии поставки (после отжига) при повышенных температурах

Температура испытания, °С

σ0,2

σВ

δ5

ψ

σсж

τК,

KCU

Дж/см2

НВ

МПа

%

МПа

200

450 (50)

830 (80)

13 (2)

22 (4)

1050 (50)

520 (30)

227 (6)

400

420 (40)

700 (70)

15 (2)

22 (4)

850 (50)

450 (30)

210 (6)

600

300 (40)

480 (50)

31 (3)

55 (6)

620 (20)

300 (20)

140 (6)

800

110 (20)

200 (20)

60 (5)

70 (6)

100 (20)

100 (20)

30 (4)

1000

90 (20)

100 (20)

42 (4)

55 (6)

50 (10)

50 (10)

100 (10)

24 (4)

1100

130 (15)

1200

30 (10)

30 (10)

12 (3)

25 (5)

40 (10)

40 (10)

45 (5)

4 (1)


Механические свойства стали в термообработанном состоянии при повышенных температурах

Температура испытания, °С

σизг,

МПа

HV

HRC

200

3570 (180)

815 (10)

64

400

3730 (180)

755 (10)

62

500

3290 (160)

712 (10)

60

550

3060 (150)

661 (10)

58

600

2430 (120)

615 (10)

56

650

2180 (110)

504 (10)

51


Механические свойства в зависимости от температуры отпуска

Температура отпуска, °С

σВ

МПа

KCU

Дж/см2

НRCЭ

Закалка 1280 °С, масло. Отпуск трехкратный по 1 ч

 

400

1370

23

61

 

500

1470

19

63

 

550

2350

17

66

 

600

2210

65

 


Вяз­кость

Сопротив­ление из­носу

Шлифуе­мость

Красно­стой­кость  59HRCэ при от­пуске в течении 4ч, 0С

Особые свойства

Хо­рошая

Хорошее

Повы­шенная

620

Пониженная склонность к нагреву при закалке.

Заменитель – сталь Р12

Температура ковки, °С:

начала 1200,

конца 900.

Охлаждение в колодцах при 750 – 800 °С.

Свариваемость – хорошая при стыковой электросварке со сталями 45 и 40Х.

Обрабатываемость резанием – при HB 212 – 228, Кυ тв. спл=0,6;  Кυ б. ст=0,3.

Применение: Резцы, сверла фрезы, резьбовые фрезы, долбяки, развертки, зенкеры, метчики, протяжки для обработки конструкционных сталей с прочностью до 1000 МПа, от которых требуется сохранение режущих свойств при нагревании во время работы до 600 °С.

Сортамент:

горячекатаная круглого и квадратного сечений – ГОСТ 2590-88 и ГОСТ 2591-88;

кованая – ГОСТ 1133-71;

полосовая – ГОСТ 4405-75;

калиброванная – ГОСТ 7417-75;

сталь со специальной отделкой поверхности – ГОСТ 14955-77 диаметром от 1 до 25 мм включительно.

расшифровка и характеристики. Плюсы и минусы стали для ножей, ее применение и состав марки быстрорежущей стали. ГОСТ

Сплав марки P18 еще называют быстрорежущей сталью. Как правило, этот материал используется в производстве качественных сверл, резцов, метчиков, врез и прочих подобных составляющих. Продукция получается высокопрочной и надежной благодаря качествам стали P18. В данной статье мы узнаем все об этом практичном материале.

Состав и расшифровка

О составе того или иного сплава можно узнать многое, если обратить внимание на его название. Так, буква «Р» в наименовании марки рассматриваемой стали выступает в качестве обозначения непосредственного типа металла – быстрорежущая сталь. После буквенного обозначения ставится цифровое значение, указывающее на процент содержания вольфрама в сплаве.

Для рассматриваемой марки Р18 характерно содержание 17–18,5% такого элемента, как вольфрам. Существуют и другие распространенные марки, к примеру, Р6М5 и прочие, в которых на тот же химический элемент приходится от 5 до 6,5%. Вольфрам является компонентом, который делает металл более прочным, но при этом повышает его вязкость, способность утрачивать твердость на фоне нагрева высокими температурами.

В названии материала также может присутствовать буква «М». Она говорит о наличии в составе металла молибдена. Этот компонент ответственен за показатели прокаливаемости материала, его плотность, твердость. Именно за счет молибдена сталь приобретает антикоррозийные свойства, легче поддается дополнительным обрабатывающим операциям.

В остальном составы Р18 и Р6М5 во многом являются схожими. Оба этих сплава включают углерод, кремний, никель, хром, фосфор, ванадий, марганец.

Плюсы и минусы

Сталь, что относится к марке Р18, является весьма востребованной. Актуальность данного материала легко объясняется множеством достоинств, которыми он обладает.

  • Главный плюс сплава Р18 заключается в его высочайшем качестве. Изделия, произведенные из рассматриваемого типа стали, обычно не имеют никаких дефектов и недоработок. Такой эффект достигается за счет прекрасного качества изначального сырья. По этой причине, приобретая быстрорез из стали Р18, пользователь может ни о чем не беспокоиться.
  • Для материала характерен высокий уровень твердости. Это очень важный параметр, который играет одну из главных ролей при выборе инструментов и приспособлений со стальными деталями. Рассматриваемая марка отличается твердостью 64–65 в соответствии со шкалой по Роквеллу. К примеру, для ножа такие показатели оказываются крайне высокими. Стальные элементы придется редко подвергать заточке, поскольку о прочие материалы они не затупляются – ими можно резать даже древесину.
  • Сталь Р18 также характеризуется отличной упругостью и ударной вязкостью благодаря наличию добавок в составе. Как правило, твердые виды металлов демонстрируют хрупкость – они легко ломаются при боковых нагрузках. Однако рассматриваемый сплав обычно может гнуться, но при этом не ломается. На это влияют такие примеси, как марганец и никель, – эти составляющие делают материал более пластичным, гибким. А комбинация кремния и углерода не только придает стали повышенную прочность, но и предупреждает формирование заломов. Благодаря этому из Р18 получаются прекрасные пилы и фрезы.
  • Клинки, сделанные из стали Р18, могут похвастаться замечательной способностью к эффективной резке. Режущие детали в них не тупятся быстро, очень хорошо могут удерживать кромку. Для достижения таких результатов в материале присутствует кобальтовая примесь, отвечающая за качество реза. Кобальт позволяет клинкам держать кромку, а также позволяет точить лезвия до высокой остроты.
  • Используя ножи, изготовленные с применением Р18, можно легко разрезать те изделия, которые сделаны из более мягких материалов. Рассматриваемый сплав по стандарту используют для изготовления инструментария, с которым мастера обрабатывают металлы.
  • Сталь Р18 можно смело отнести к категории максимально сбалансированных материалов, имеющих идеальную структуру. Металл твердый, высокопрочный, надолго сохраняет режущую способность. Качество и практичность такого материала по достоинству оценили многие пользователи

Серьезных недостатков сталь марки Р18 не имеет, однако нужно учитывать, что продукция из этого материала стоит довольно дорого. В первую очередь это касается изделий, выпущенных известными и популярными брендами.

Характеристики

Инструментально быстрорежущая сталь Р18 характеризуется уровнем твердости в HB 10-1=255 Мпа. Несмотря на такой параметр, металл является быстросвариваемым. Его можно легко и беспроблемно подвергать шлифовке. Чтобы сплав был наделен более высокими режущими качествами, его дополнительно легируют одним из сильных карбидообразующих компонентов. Это может быть как вольфрам, так и молибден или ванадий, упомянутые выше. Кроме того, зачастую задействуются вспомогательные элементы, повышающие показатели красностойкости металла. Речь идет об алюминии и кобальте.

Главным условием получения качественного материала, соответствующего ГОСТ, является неукоснительное соблюдение технологии термической обработки. Под такой обработкой подразумевается воздействие очень высоких температур (от 1200 до 1300 градусов Цельсия). Также необходим грамотный отпуск при 550–560 градусах Цельсия. Этот этап работ приводит к дисперсионному затвердению металла. Сталь Р18 относится к группе быстрорежущих металлов, характеризующихся нормальным уровнем теплостойкости (500–650 градусов Цельсия). Твердость металла является довольно высокой и составляет 68–70 HRC. Кроме того, рассматриваемый вид стали характеризуется износостойкостью, демонстрирует очень высокое сопротивление пластическим деформациям.

Аналоги

Современные высококачественные сплавы с маркировками Р18 и Р6М5 имеют множество не менее качественных аналогов. Производство последних налажено на территории разных стран. Обозначим, о каких именно сплавах идет речь:

  • Р12 – отечественный аналог, который максимально приближен по своим характеристикам к материалу марки Р18;
  • Т1 – американский сплав;
  • W18Cr4V – производится в Китае;
  • 1,3355 – европейский материал;
  • HS18-0-1 – немецкий аналог Р18.

Применение

Особенно часто сталь с маркировкой Р18 применяется для производства множества качественных режущих составляющих. Заточка надежных инструментов, производящихся с применением подобного металла, проходит во много раз быстрее. Режущие предметы такого рода отличаются прекрасным качеством и эффективностью работы. Ими можно пользоваться даже в самых сложных условиях, на фоне сильных нагревов и механических нагрузок. При этом технические характеристики стальных компонентов сохраняются. По этой причине материал Р18 часто используется в автоматизированных цехах.

Высочайшее качество реза объясняется наличием легирующих компонентов в стали. Заточку можно осуществлять посредством наждачных кругов. Главное, чтобы при этом процессе не было вибрационных или динамических воздействий. Из стали Р18 получаются: прекрасное сверло по металлу, метчики, плашки, ножи, надежные резцы и прочий полезный инструмент. Однако сплав также отлично подходит для изготовления кранов, промышленных приспособлений.

Перечисленные изделия отличаются износостойкостью и ударопрочностью.

Обработка

Чтобы режущие изделия, изготовленные из высококачественной и сбалансированной стали Р18, приобрели высокий уровень износостойкости и прочности, металл подвергают определенным способам термической обработки. Этот процесс проходит в два основных этапа.

  • В первую очередь материалу необходимо правильное закаливание при термообработке. Речь идет о нагреве до температурных значений в 1200–1300 градусов Цельсия. Чтобы не столкнуться с формированием ненужных трещин, процедура должна осуществляться постепенно – торопиться нельзя. Сначала металл подогревают до 400–500 градусов Цельсия, а потом достигают других температур – 800–850 градусов Цельсия.
  • На фоне максимального режима подогрева заготовка должна обрабатываться только в рамках определенного отведенного времени. На каждый миллиметр толщины металлического листа должно уходить не больше 10–15 секунд. По ходу процедуры закалки начнется разложение карбида, сплав будет насыщаться такими составляющими, как углерод и вольфрам.
  • Важным этапом термической обработки стали Р18 является отпуск. Его следует проводить по всем правилам. Действовать необходимо при температуре, составляющей от 550 до 650 градусов Цельсия. Процедура проводится в 2 основных этапа. Длительность каждого из них должна составлять не меньше 1 часа. По ходу таких действий будут повышаться прочностные характеристики стали.

Чтобы правильно закалить сталь, а также провести ее качественный отжиг, необходимо создать для этого все условия. К примеру, непосредственный нагрев рассматриваемого типа металла обычно осуществляется в специализированных соляных ваннах. Последние составляются из хлорида бария и хлористого натрия. Фтористый магний целесообразно задействовать с целью раскисления необходимого раствора.

размеры, вес 1 метра, основные характеристики R18 плотности по ГОСТу 6368 82

Содержание статьи
  1. Общие параметры
  2. Особенности изготовления
  3. Маркировка
  4. Схемы
  5. Сфера применения
  6. Расчетные значения размеров
  7. Хранение
  8. Транспортировка

Железнодорожное сообщение с успехом пользуется в самых разнообразных сферах промышленности, производства, поставок. И если стандартное полотно по типу Р65 зачастую необходимо для обычной транспортировки грузов между муниципальными образованиями, то конкретно в горнодобывающих компаниях, судостроительных, для подачи сырья на склады или на производственные площадки нужны узкоколейные пути. Именно о таком подвиде и пойдет речь в текущем обзоре. Разберем рельс Р18 характеристики, плотность, размеры, ГОСТ, вес 1 метра и иные сопутствующие факторы, изучим параметры на схемах. И что важнее, точно определим предназначение и область эксплуатации такого полотна.

Общие параметры

До изучения технических характеристик стоит пристально посмотреть на сферу эксплуатации этой продукции, чтобы понять, будет ли вариант эффективен конкретно в вашем случае. Железная дорога была изобретена уже очень давно. Но первые ее прототипы как раз и базировались на узкой колее. В те времена не было возможность развернуться производство полноценных путей на железобетонных шпалах, способных выдержать высокий трафик составов. Поэтому тяжелые рельсы, Р65, Р75 не были необходимыми. Интересно то, что с течением времени актуальность узкоколейных железнодорожных путей не снизилась. Напротив, если сложить все участки такого типа, их длину, то она не уступит широким путевым линиям в совокупности. Просто зачастую они скрыты от глаз.

Это линии сообщений, соединяющие между собой сырьевые базы, склады, площадки для производства, заводы. На основе такого вида строятся крановые мосты, опорные кран-балки, дороги прокладываются внутри шахт, рудников. Это часто вагонеточные пути, по которым также могут передвигаться специальный автоматизированный транспорт небольших габаритов. Но, помимо этого, это еще и подача сырья на различных типах конвейерного производства. Отсюда вытекает две основные группы узкоколейных путей.

https://promputsnab.ru/obshee-opisanie-rels.html

Учитывая, что рельс 18 размеры имеет скромные, проложенные участки дороги легко помещаются в производственных зданиях, так сказать, под крышей. Внутри ангаров, складов, цехов. Такие участки называются внутренними. К внешним же относятся все остальные начиная от распространенных вагонеточных путей, до кран-балок.

Также стоит сразу уточнить, что Р18 – это только один из двух основных видов узкой колеи. Не меньшей актуальностью пользуется и Р24. Логично даже использовать оба варианта в условиях одного производства. Например, более широкие типы можно применять для внешнего сообщения, а узкие уже внутри самого производственного здания.

Также стоит понимать, что все типы с более крупным размерным рядом уже относятся к стандартному полотну, и не могут применяться в основе для тех же вагонеточных скреплений. Помните, что качество продукты опирается не только на размеры, но и на сталь, из которой производится продукция. Распространены три ключевых варианта, это мартеновская сталь, электросталь и конвертерная. Они обозначаются соответствующей маркировкой: М, Э, К.

Также продукция может иметь термическое упрочнение. Это, соответственно, способ создать более надежный товар. Но ценовая позиция тоже становится выше. В любом случае особенно если речь идет о крупной партии, важно подобрать надежного поставщика.

И отличным выбором станет «ПромПутьСнабжение». Очевидные плюсы сотрудничества в следующем:

  •  Качественная продукция. Все товары проходят полноценные проверки на соответствие нормативным документам. Если говорить про рельс Р18 – ГОСТ 6368 82. Именно этот стандарт качества регламентирует все основные параметры эталонной продукции, выявляет нормы допустимых отклонений. 

  •  Огромный ассортимент. Логично предположить, что при укладке железнодорожного пути не получится обойтись только самим полотном. Понадобится масса метизов, предназначать которые нужно в качестве фиксирующих, предохраняющих, крепежных элементов. Это путевые болты, клеммы, гайки, прижимы, шайбы и требуемый для монтажа инструментарий. В ПромПутьСнабжение вы можете сразу приобрести все необходимое для выполнения работ по укладке. Не придется искать никакие дополнительные магазины, поставщиков. Один заказ – это товары для работы под ключ. 

  • Удобная ценовая политика. И конкретно сейчас стоит отметить, что как раз на узкоколейные рельсы действует специальная акция. Массовая распродажа со склада, которая позволит вам приобрести продукцию с впечатляющей скидкой. И это при том, что даже стандартный прейскурант в принципе весьма лоялен по сравнению со среднерыночной ценой. А так он становится еще более приветливым. 

  • Доставка любыми удобными способами. Компания может взять все вопросы, связанные с транспортировкой на себя. Возможны различные варианты по желанию заказчику. Также исходя из объема поставок выбирается водное сообщение, железнодорожные пути или обычный автомобильный транспорт. И что важнее всего, главный критерий выбора – оперативность исполнения. 

Теперь же перейдем к сугубо техническим параметрам, которые помогут точно разобраться в аспектах монтажа, транспортировки. Ведь без знания основных характеристик невозможно заблаговременно рассчитать корректный план-проект.

Ширина основания

Рельсы R18, как и остальные их собратья, состоят из нескольких частей. И нижняя из них – это основание. Его еще принято называть «подошвой». Если разбирать вопрос на схеме, то эта плоскость обозначается буквой B. Именно к основанию подходят практически все крепежи. Поэтому зачастую это часть наиболее широкая из всех, ведь нагрузка будет приходиться постоянно.

В нашем случае «подошва» имеет ширину в 80 мм. Это, разумеется, сравнительно немного. Но для узкой колеи – это оптимальный выбор. Такая ширина позволит обеспечить надежную фиксацию полотна. И при этом не увеличить чрезмерно вес и ценовой параметр продукта.

Ширина верхней части

А это как раз те самые полозья, по которым и будут двигаться вагонетки или иные приспособления, доставляющие продукция, конвейерные механизмы и схожее. На схемах этот элемент можно найти под маркером b1. Ширина всего 40 мм, это ровно вдвое меньше, чем основание.

У этого элемента тоже есть свое обиходное название, «проезжая часть».

Высота

Показатель тоже является исключительно важным для расчета весовых параметров, транспортировки, хранения и, естественно, монтажа. Именно высота — наибольшее значение во всей конструкции (за исключением длины, которая может быть определена произвольно). На схеме обозначается, как H. И равняется по государственному стандарту качеству 90 мм.

Рельс 18: вес 1 метра

На этот вопрос нельзя ответить с точностью. Дело в том, что для расчета необходимо знать плотность стали, из которой произведен товар. Разумеется, существует всего три варианта, о которых мы уже сказали выше. При этом еще и актуальностью пользуется только один из них. Фактически в 99% подразумевается 7830 кг/м3. И исходя из этого показателя и необходимо проводить все расчетные операции.

Выявить этот параметр для целой линии проблематично, неясно какой длины продукция приобретена. Стандарт обычно – 8 м. Но при этом многие производители могут реализовывать и укороченные типы, а также и удлиненные. «ПромПутьСнабжение» сможет подобрать варианты длиной всего от 3 до 12 м. Поэтому если мы обсуждаем рельс Р 18 вес выявляется именно в погонном метре. И это ровно 17.96 кг.

https://promputsnab.ru/relsy-p18-p24.html

Особенности изготовления

Как мы уже отмечали, хороший товар возможен только при качественном производстве. А значит, производственный аспект выходит чуть ли не на лидерскую позицию по важности. В государственном стандарте указаны рекомендации, но методики совершенствуются постоянно. И нормативная документация не может адаптироваться под каждую новинку технического прогресса, которая внедряется на заводах. Поэтому сам процесс производства с нюансами зачастую – это выбор производителя.

Разумеется, есть некоторые базовые аспекты, которые всегда имеют место, как:

  • Обязательная термическая обработка для уплотнения. 

  • Строго перпендикулярные срезы на торцах. Логично, если будет отклонение по оси хоть на десятую долю градуса, то велик шанс, что при стыковке двух рельсов между собой возникнут серьезные сложности. В стандарте устанавливается допуск в 1 миллиметр, но не рекомендуется близко к нему подбираться. 

  • Отверстия для болтов должны размещаться равномерно, чтобы распределить нагрузку. При этом самый первый болт нельзя крепить ближе, чем в 46 миллиметрах от стыка. Иначе при интенсивной эксплуатации может возникнуть деформация стали. 

Чтобы получить действительно качественную продукцию, необходимо грамотно выбрать поставщика. Компания «ПромПутьСнабжение» работает только по проверенным технологиям со строгим контролем производственного процесса. Поэтому любые отклонения вне границ допусков в товарах невозможны по определению. Все рельсы Р 18 ГОСТ 6368 82 вышедшие с производственных площадок – соответствуют не только указанному стандарту, но также и многочисленным международным нормативам.

Маркировка

С помощью тщательного изучения схемы, также самого изделия можно легко понять все его основные характеристики. Так внешний визуальный осмотр поможет определить каленую продукцию. Для этого достаточно посмотреть на рельсовую шейку. Там должна располагаться специальная поперечная полоса, которая явно указывает на то, что изделие было прокалено. Также на метизе стоит поискать специальное кольцо, вдавленное на небольшом углублении.

На схеме же маркировка следующая:

  •  B. Как мы уже отмечали выше, это ширина нижней части метиза. То есть той, что называется подошвой. 

  •  b1. Это уже размер верхней поверхности, по которой движется вагонетка или автоматизированный транспорт. 

  •  H. Общая высота всего изделия вместе с подошвой, поперечной и верхней частью. 

  •  S. Величина нейтральной оси. 

  •  M. Масса, как мы помним, она обозначается в погонных метрах. На некоторых чертежах размещается этот показатель общей линии в совокупности, но конкретно при разборе рельсы, обычно указывается только номинальные значения. 

Схемы

Даже самое точное описание металлического изделия не позволит со 100% точностью уяснить все необходимые аспекты. Для этих целей используются схемы, где наглядно изображаются все размерные ряды участков, изгибы, углы отклонений и иные элементы. Подобного рода изображения входят в общий пакет документации, которая будет нужной для укладки железнодорожных путей. Часть передает сам производитель в качестве сопутствующих документов, а другую — на месте формирует инженерная группа.

Сфера применения

Теперь давайте более детально затронем области, в которых подразумевается эксплуатация Р18 ГОСТ 6368 82. А это, как мы уже поняли, узкоколейные железнодорожные пути.

  • Горнодобывающая промышленность. Соответственно, это рудники, шахты, подземные пути сообщений. В условиях ограниченного пространства нет никакой возможности развернуть полноценное строительство. Тяжелая техника просто не сможет проехать в шахту. Укладывать крупную железную дорогу, асфальтированную площадку невозможно. Также рельсовая решетка не может быть уложена в таких условиях, ведь ни кран, ни трактор просто не пройдет. Соответственно, единственным выходом становится ручной монтаж узкой колеи. 

  •  Размещение кран-балок и крановых мостов.

  •  Поставка товаров, сырья, материалов от складов, сырьевых баз на место производства в условиях их расположения в относительной близости. В этом случае на первую позицию выходит уже экономия. Да, между точками можно развернуть практически любой вид сообщения. Но выгоднее становится узкая колея. 

  •  Транспортировка продукции при освоении целинных земель. 

  •  Военно-полевые дороги, которые распространены при формировании укреплений, фортов, новых гарнизонов. 

  • Внутренние пути на предприятиях, складах, ангарах, сырьевых базах, цеха и заводах. Не секрет, что некоторые из обозначенных строений имеют очень крупный масштаб. И для быстрой передачи нескольких сотен товар сырья от одной точки к другой самым логичным выходом будет использование транспорта по типу вагонеток. 

  • Развлекательная сфера. Все подвиды, так называемых «американских горок» также строятся на этом принципе. Как и колеи, предназначение для детских аттракционов, мини поездов. 

При этом фактически ни одно предприятие не имеет строгих ограничений на использование такого варианта. Перевозка сырья всегда может стать, как говорится, «на рельсы». Единственный разумный довод «против», если объем производства, а с ним и транспортировки сырьевых основ – ничтожно мал. Тогда укладка железной дороги не будет рентабельной. Также аргументов может стать временный характер производства. Ведь демонтировать конструкцию после исполнения задачи – это затратное мероприятие, которое не факт, что себя окупит.

Расчетные значения размеров

Рассмотрим все основные параметры в виде наглядной таблицы.

Тип

S поперечного сечения в квадратных сантиметрах

Дистанция от головки до центра

Сопротивление по верху

По низу

По грани

m

Р 18

22.8

4.6

50.8

55.3

10.1

17.9

Хранение

Изделия из стали нельзя назвать прихотливыми. Но они также при длительном хранении с неправильными условиями могут значительно снизить свой предельный эксплуатационный срок. Основным аспектом, который пагубно влияет на сталь, является климатические условия. Зачастую временно рельсы располагают на открытом воздухе. И даже если предварительно накрыть их тентом, скопления влаги все же может появиться. Чтобы предотвратить этот фактор, необходимо всегда размещать площадку хранения выше по уровню, относительно близлежащего рельефа местности.

Транспортировка

В этом моменте важно обратить свое внимание на два ключевых фактора. Первый заключается в значительном весе товара, если речь идет о крупной поставке. Нужно сразу рассчитать тот факт, что не каждый транспорт с этим справится. И второй момент – длина. Если это более 8 метров, да еще и несколько десятков или сотен тонн одновременно, то автомобильный транспорт сразу исключается. Логично будет использовать доставку железной дорогой или судном.

Мы досконально разобрали рельсы Р 18. И теперь темных пятен не осталось. Остается лишь сверить конкретно ваши требования на производстве с условиями, при которых узкая колея становится актуальной. И если они соответствуют, то перейти к выбору поставщика.

Документация по проекту планировки застройки жилого района “Сармат” – Постановления Администрации г. Новочеркасска – Нормативные правовые акты

Общая часть
Проект планировки застройки жилого района «Сармат» расположенного, в западной части города Новочеркасска разработан на основании и постановления МЭРа города Новочеркасска № 1831 от 30.05.2006 года и другой исходной документации.
Целью данного проекта является определение возможности строительства и параметров проектируемого квартала. Принципиальное решение объемно-планировочной композиции застройки, а также принятие предварительных решений по архитектурно-планировочной организации территории жилого района в соответствии с современными градостроительными принципами. А также для создания социального жилого фонда жилья в количестве 20% от общей площади проектируемых квартир.
Проект планировки застройки жилого района «Сармат» носит предварительный характер. Поэтому детальная проработка зданий: этажность и конфигурация, определяются при рабочем проектировании после проведения конкурса по определению застройщика данной территории.

Генеральный план.

1.Характеристика района и площадки строительства.
Территория отведенная под проектирование и строительство жилого района «Сармат» расположена в западной части города Новочеркасска, в районе действующего городского автовокзала.
Участок общей площадью 18,7828 га в границах красных линий разделяется магистральной улицей Буденова, имеющей общегородское значение, на две части. При этом к северу от ул. Буденова, расположен участок межевания № 10/06 для объекта 287, площадью 11,4191га. Часть проектируемого микрорайона, находящаяся с южной стороны этой же улицы, состоит из четырех частей: № 11/06 для объектов 588 площадью – 1,9804га, 589, площадью – 2,987га 590 – 1,7119 га, и 591 – 1,5724 га. Границы микрорайона определяются магистральными улицами общегородского значения. С Севера микрорайон ограничен улицей Добролюбова, с юга – Баклановским проспектом, с Запада – улицей Сарматской и с Востока переулком Цимлянским.
Рельеф участка сложный с выраженным уклоном с Юга на Север.
Абсолютные отметки колеблются от 93,17 до, 66,45 с. Юга на Север и от 66,45 до 84,14 Перепад отметок составляет 26,72м и 17,69м. Средние уклоны по участку составляют с Юга на Север – 99‰ и с Запада на Восток – 59‰
Район строительства, согласно СНиП 23.01.99 относится к ІІІB климатическому району. Преобладающее направление ветров зимой и летом Восточное. средняя максимальная температура наиболее жаркого месяца 29,1С абсолютная минимальная температура -33С. Годовое количество осадков 555мм, средняя высота снежного покрова – 19см.

2. Решения по генеральному плану.

Архитектурно – планировочная концепция проектирования
жилого квартала.
Проект застройки жилого района «Сармат» выполнен с учетом проекта планировки МКР «Автовокзал» в гор. Новочеркасске разработанного ОАО «РостовГражданПроект»
Наиболее важными градостроительными факторами повлиявшими на решения проекта планировки застройки комплекса жилой застройки «Сармат» являются:
1. Условия зрительного восприятия жилого комплекса со стороны магистралей общегородского значения.
2. Морфологические и архитектурно-художественные особенности и ее функциональная структура.
3. Природно-экологические факторы.
На формирование структуры застройки решающим образом повлияло расположения микрорайона на пересечении магистральных улиц общегородского и районного значения. Исходя из сложившейся градостроительной ситуации, в проекте учтены условия зрительного восприятия с улиц Буденовской и улицы Сарматской, расширение которой до магистрали общегородского значения предусмотрено проектом.
Объект восприятия, проектируемый микрорайон находится на значительном удалении от края проезжей части улицы Сарматской и поэтому практически полностью попадает в поле зрения. Тогда как здания, проектируемые вдоль улицы Буденовской, воспринимаются каждое обособленно по мере продвижения вдоль оси этой улицы. При этом учитывалась возможность наилучшего зрительного восприятия первых этажей проектируемых жилых и общественных зданий. Проектом предусматривается строительство нового жилья с применением различных типов зданий: Как многоэтажных жилых квартирных домов, предназначенных для коммерческой продажи, так и жилья типовой планировки для пополнения социального жилого фонда города. При этом, согласно заданию на проектирование, социальное жилье составляет 20% от всего проектируемого жилья комплекса жилой застройки «Сармат».
Проектируемый комплекс располагается на основном въезде из Ростова в Новочеркасск, что является важным фактором для населенного пункта, часть населения которого работает в городе Ростове. Кроме всего прочего, строительство данного комплекса приближает селитебную территорию к расположенному к западу от него новому терапевтическому комплексу, связанному с проектируемым микрорайоном и существующей застройкой городским транспортом.
Дома группируются, образуя полузамкнутые дворовые пространства, которые служат рекреационной зоной для групп квартир. Живописность застройки подчеркивается строгим рядом высотных точечных домов, легко просматривающихся со стороны улицы Сарматской. Каждая группа домов обеспечивается полным набором площадок отдыха, хозяйственных площадок, а также гостевых автостоянок согласно нормам СНиП2.07.01-89*. Кроме того, при разработке проекта застройки жилого комплекса «Сармат», предполагается строительство под рядом проектируемых зданий подземных гаражей и автостоянок, расположенных в основном в части микрорайона, расположенной к северу от улицы Буденовской.
Одним из принципов при проектировании квартала был признан принцип разделения потоков транспорта и пешеходных потоков. Микрорайон, как структурный элемент жилой застройки, расчленен улицей Буденного, являющейся в перспективе магистралью районного значения, на две, уравновешивающие друг друга части: Северную и Южную. Каждая, из которых, не расчленяется магистральными улицами, и обслуживается только внутриквартальными проездами. Кроме того, по улице Буденовской осуществляется связь проектируемого комплекса жилой застройки с существующей частью города Новочеркасска.
Проектом предусмотрена разбивка улично-дорожной сети с учетом особенностей рельефа в увязке с существующей планировочной структурой города, которая обеспечит наиболее удобное обслуживание жилых и общественных зданий.
Вместе с тем на территории жилого квартала предусмотрено размещение объектов культурно-бытового назначения, торговых учреждений, предприятий общественного питания, помещений для спортивно-оздоровительных занятий и клубной работы с подростками, а так же предприятия по обслуживанию населения: такие как почтовое отделение, сберегательный банк и прочие. Все эти объекты располагаются частично в первых этажах зданий расположенных вдоль улицы Буденовской, а частично в индивидуально проектируемых здания общественного назначения. Необходимые школьные места обеспечиваются двумя школами, проектируемыми в границах комплекса жилой застройки. Для обеспечения детей дошкольного возраста необходимыми местами в детских садах и яслях, проектом предусматривается строительство на территории микрорайона «Сармат» так же детских трех садов. Местоположение проектируемых школ и детских садов обеспечивает радиусы доступности 500 и 300 метров для населения вновь проектируемого района, что соответствует нормам СНиП 2.01-80*
Все здания и сооружения проектируемого квартала связаны между собой системой внутриквартальных проездов, тротуаров и дорожек.
Для обеспечения проезда пожарных вдоль проектируемых зданий предусматривается устройство автомобильных проездов шириной не менее 5,50м. Там где устройство таких проездов функционально не обосновано, возможно устройство тротуаров с усиленным покрытием.

3. Организация рельефа.
Проект организации рельефа выполнен сплошным способом методом красных горизонталей. Проектом учитывались отметки сложившегося рельефа, а также отметки прилегающих улиц Добролюбова, Сарматской, Баклановского проспекта и переулка Цимлянского.
В данных условиях, предлагаемый проект организации рельефа предусматривает минимально возможный объем земляных работ, и создание нормативных продольных и поперечных уклонов внутриплощадочных проездов и тротуаров.
Проектные горизонтали проведены через 0,10м. по участкам магистралей городского и районного значения и через 0,50м по территории жилого района. Продольные уклоны составляют от 65 – 6‰ Поперечные уклоны автодорог приняты в пределах от 15‰ до 20‰, что соответствует требованиям СНиП 2.07.01.89* Детальная разработка проекта плана организации рельефа осуществляется отдельно при рабочем проектировании по очередям строительства.
Отвод ливневых вод принят открытым способом по тротуарам и проездам с твердым покрытием, с последующим отведением в лотки проезжей части магистральных улиц и дорог.

4. Благоустройство и озеленение.
При проектировании предусматривалось развитие непрерывной сети зеленых насаждений жилого района включающая в себя озеленение участков групп жилых домов, озеленение участков проектируемых детских садов и школ а также полосы озеленения вдоль магистральных улиц и дорог, проходящих по территории квартала, или ограничивающих его
Массивы зеленых насаждений объединяются в единую систему внутриквартальными проездами, пешеходными дорожками и тропинками, связывающими между собой группы жилых домов.
Предусмотрено выполнение комплекса работ по благоустройству территории проектируемого жилого района. Все тротуары и проезды имеют твердое асфальтобетонное и плиточное покрытие. Тротуары и отмостки отделены от газонов бортовыми камнями типа. БР100.20.8, проезды – камнями БР100.30.15.

5. Расчет плотности населения квартала.

5.1 Население квартала.
Общая площадь квартир в проектируемом районе «Сармат» составляет – 160663м2.
В том числе: 20% «социального» жилья – 32132 м2
80% жилье предназначенное
для коммерческой продажи –128530
Для « социального» жилья принимается жилищная обеспеченность равная 25м2/чел. Таким образом, количество людей проживающих в жилых домах обычной комфортности составит: 32133:25=1285чел.
Для жилья, предназначенного для коммерческой продажи, жилищная обеспеченность составляет 36м2/чел. Количество людей проживающих в жилых домах повышенной комфортности составит: 128530:36=3570чел.
Общее проектируемое население квартала составляет: 1285 + 3570 = 4855чел

5.2Расчетная нормативная плотность населения Р
Согласно СНиП 2.07.01-89* расчетная нормативная плотность населения для жилого района определяется по формуле: Р = (Р18 х 18):Н
Где 18 – расчетная жилищная обеспеченность равная 18м2/чел.
Р18 – показатель плотности при 18м2/чел Для района Ростова и Ростовской области и средней градостроительной ценности территории составляет 330
Н – расчетная жилищная обеспеченность м2 принимается равной 30 м2
Таким образом нормативная плотность населения квартала составляет:
Рн= 330 х 18 : 30 = 198 чел/га.

5.3 Расчетные площадь и плотность населения жилого района «Сармат».
Расчетная площадь микрорайона составляет S = 246747м2 и включает в себя:
Площадь микрорайона в границах красных линий S1 = 187828м2.
Площадь прилегающих дорог и проездов в границах от красных линий района жилой застройки «Сармат» до осей проезжей части. S2 = 31603м2
Площадь используемого подземного пространства. S3 = 27316м2
Таким образом, расчетная проектная плотность населения жилого района «Сармат» составляет: Р = 4855чел. : 24,6747га = 196чел/га
Что на 1% ниже расчетной и соответствует норме СНиП 2.07.01-89*, допускающей снижение расчетной плотности населения в условиях реконструкции городской застройки до 10%

6. Расчет автостоянок.

6.1. Количество автомобилей
Количество жителей, проживающих в проектируемом жилом районе «Сармат» составляет 4855человек. Согласно СниПу2.07.01-89* п.6.3 на 1000жителей положено от 200 до 250 машин. Проектом принято для расчета 250 машин на 1000 жителей. В это число включены: 4 такси,3 ведомственных автомашины и 40 грузовых. Таким образом, таким образом, количество личных автомобилей граждан составляет: 250-4-3-40=203 единицы на 1000 жителей. Что для данного жилого района составит: 203 х 4,86 = 987 машин,
6.2. места для постоянного хранения автомобилей.
Согласно СниПу 2.07.01-89* п.6.33 на селитебных территориях следует предусматривать гаражи и открытые автостоянки для постоянного хранения не менее чем 90% от расчетного парка автомобилей 987 х 0,9 = 890 мест.
Проектом предусматривается размещение этих автомобилей на закрытых автостоянках и в подземных гаражах, размещаемых под проектируемыми зданиями, квартиры в которых предназначены для коммерческой продажи.

6.3. Места для временного хранения автомобилей.
На селитебных территориях следует предусматривать открытые автостоянки для временного хранения автомобилей в количестве 70% от расчетного парка, в том числе для жилого района 25%. Тогда для данного квартала получим потребное число мест временного хранения автомобилей:
987 х 0,7 х 0,25 = 173 м/места.
Согласно тому же СНиПу приложение 9 для магазинов с площадью торгового зала более 200м2 , на 100 м2 торговой площади положено 5 – 7 м/мест временных стоянок.
По количеству жителей жилого района, общая площадь торговых залов магазинов продовольственных и непродовольственных товаров составляет 486м2. Таким образом количество машино-мест гостевых автостоянок для проектируемого жилого района составит 4,85 х 7 =34 машино-места.
Всего для временного хранения необходимо предусмотреть 173+34=207машино-мест.
На данном этапе проектом предусматривается устройство 50 открытых гостевых автостоянок. Недостающие места для временного хранения автомашин размещены в гаражах, расположенных под проектируемыми зданиями.

7. Расчет потребности в площадках на жилой район населением 4855человек.
№№
п.п
Наименование площадок
Население жилого района «Сармат»
Удельные размеры площадок
м2/чел.
Размеры площадок для населения района по нормативу СНиП
Примечания
1
2
3
4
5
6
1
Для игр детей дошкольного и младшего школьного возраста
4855
0,70
3399
На территории дворовых пространств
2
Для отдыха взрослого населения

0,10
486
На территории дворовых пространств
3
Для занятий физкультурой и спортом

2
9710
На территории дворовых пространств проектируемых жилых домов, спортивные ядра общеобразовательных школ, проектируемых на территории жилого района.
4
Для хозяйственных целей и выгула собак

0,30
1456
На территории дворовых пространств
5
Гостевые автостоянки

0,8
3884
На территории дворовых пространств и подземные автостоянки.

8. Расчет вместимости учреждений культурно-бытового обслуживания
на проектируемый микрорайон населением 4855человек.
№.№.
п.п
Наименовавние
Единица
измерения
Норма
СНиП
По нормам населения квартала
Примечания
1
2
3
4
5
6
1
Детские дошкольные учреждения
Мест/тыс. жит.
100
486
Один детский сад на 140 и два по 140 мест на территории проектируемой застройки
2
Общеобразовательные школы
Мест/тыс. жит.
180
875
Две общеобразовательных школы на территории проектируемой застройки
3
Внешкольные учреждения
мест
10% общего числа школьных мест
88
В первых этажах проектируемых зданий по ул. Буденовской.
4
По заданию на проектирование
По заданию на проектирование

В первых этажах проектируемых зданий по ул. Буденовской.
5
Помещения для физкультурно-оздоровительных занятий в микрорайоне.
м2 пола/ на 1000 жителей
70
340
В проектируемых общественных зданиях
6
Клубы
Мест на 1000 жителей
80
389
В первых этажах проектируемых зданий по ул. Буденовской.
7
Предприятия общественного питания
Мест на 1000 жителей
8
39
В первых этажах проектируемых зданий по ул. Буденовской
8
Магазины кулинарии
м2 торговой площади на 1000 жителей
3
15
В первых этажах проектируемых зданий по ул. Буденовской
9
Магазины продовольственных товаров
м2 торговой площади на 1000 жителей
70
340
В первых этажах проектируемых зданий по ул.Буденовской
10
Магазины непродовольственных товаров
м2 торговой площади на 1000 жителей
30
146
В первых этажах проектируемых зданий по ул. Буденовской и проектируемых общественных зданиях
11
Предприятия бытового обслуживания
Рабочее место/1000 жителей
2
10
В первых этажах проектируемых зданий по ул. Буденовской и проектируемых общественных зданиях
12
Прачечные
Кг. Белья в смену на 1000 жителей
10
49
В первых этажах проектируемых зданий по ул. Буденовской и проектируемых общественных зданиях
13
Химчистки
Кг. Белья в смену на 1000 жителей
4
20
В первых этажах проектируемых зданий по ул. Буденовской и проектируемых общественных зданиях
14
Бани
Место на 1000 жителей
5
24
В проектируемых общественных зданиях
15
Отделения связи
Объект на 10000 жителей
1
1
В первых этажах проектируемых зданий по ул. Буденовской
16
Отделения сберегательного банка Росси.
Операционное место на 2000 жителей
1
3
В первых этажах проектируемых зданий по ул. Буденовской
17
Юридические консультации
объект на 10000 жителей.
1
1
В первых этажах проектируемых зданий по ул. Буденовской
18
ЖЭУ
Объект/микрорайон
1
1
В первых этажах проектируемых зданий

9. Основные технико-экономические показатели проекта планировки.

№№
п.п
Наименование показателей
Единица
измерения
Количество
1
2
3
4

1.Территория

1.1
Площадь проектируемой территории – всего.
га
18,7828

Многоэтажная жилая застройка (площадь застройки)
м2
42680

Школы и детские сады(площадь застройки)
м2
5930
1.2
Площадь автостоянок
м2
3884
1.3
Улицы, дороги, проезды, тротуары
м2
48696
1.4
Площадки различного назначения
м2
15051
1.5
Площадь озеленения
м2
71587
1.6
Процент использования территории
%
62
1.7
Плотность застройки
%
26
1.8
Процент озеленения
%
38

2.Население

2.1
Численность населения
Тыс.чел
4,855
2.2
Плотность населения
Чел/га.
196

3. Жилищный фонд

3.1
Общая площадь жилых домов
Тыс.м2общей площади квартир
160,663
3.2
Средняя этажность застройки
этаж
9

4.Объекты социального и культурно-бытового обслуживания населения
См. пункт 6.

5. Транспортная инфраструктура

5.1
Протяженность улично-дорожной сети
км

Всего
км
6

В том числе:

Магистральные улицы районного значения
км
0,65

Улицы и проезды местного значения
км
5,35
5.2
Протяженность линии пассажирского транспорта (автобус)
км
0,60
5.3
Гаражи и стоянки для хранения легковых автомобилей

В том числе:

-постоянного хранения
маш-мест
890

-временного хранения
маш-мест
207

Сталь Р18 – химический состав

11М5ФТУ 14-1-2678 – 0Feот 85.7%Mo5.2-5.8%Cr3.8-4.2%V1.3-1.6%C1.02-1.1%…
11Р3АМ3Ф2ГОСТ 19265 – 73Feот 82%Cr3.8-4.3%W2.5-3.3%Mo2.5-3%V2.3-2.7%C1.02-1.1%Mn0.2-0.5%Si0.2-0.5%N0.05-1%Nb0.05-0.2%…
9Х4М3Ф2АГСТТУ 14-19-95 – 0Cr4-4.6%Mo2.7-3.2%V1.6-2.1%C0.87-0.9%Mn0.55-0.7%Si0.5-0.7%Ti0.15-0.2%Ni0.04-0.1%…
Р10Ф5К5ГОСТ 19265 – 73, в последней версии материал отсутствуетFeот 68.9%W10-11.5%Co5-6%V4.3-5.1%Cr4-4.6%C1.45-1.5%…
Р12ГОСТ 19265 – 73, в последней версии материал отсутствуетFeот 77.6%W12-13%Cr3.1-3.6%V1.5-1.9%C0.8-0.9%…
Р12Ф3ГОСТ 19265 – 73Feот 75.3%W12-13%Cr3.8-4.3%V2.5-3%C0.95-1%Mn0.2-0.5%Si0.2-0.5%…
Р14Ф4ГОСТ 19265 – 73, в последней версии материал отсутствуетFeот 73.1%W13-14.5%Cr4-4.6%V3.4-4.1%C1.2-1.3%…
Р18ГОСТ 19265 – 73Feот 71.5%W17-18.5%Cr3.8-4.4%V1-1.4%C0.73-0.8%Mn0.2-0.5%Si0.2-0.5%…
Р18К5Ф2ГОСТ 19265 – 73Feот 65.9%W17-18.5%Co4.7-5.2%Cr3.8-4.4%V1.8-2.2%C0.85-0.9%Mn0.2-0.5%Si0.2-0.5%…
Р18Ф2ГОСТ 19265 – 73, в последней версии материал отсутствуетFeот 71.9%W17-18%Cr3.8-4.4%V1.8-2.4%C0.85-0.9%…
Р18Ф2К5ГОСТ 19265 – 73, в последней версии материал отсутствуетFeот 65.4%W17-18.5%Co5-6%Cr3.8-4.4%V1.9-2.4%C0.85-0.9%…
Р2АМ9К5ГОСТ 19265 – 73Feот 72.8%Mo8-9%Co4.7-5.2%Cr3.8-4.4%V1.7-2.3%W1.5-2%C1-1.1%Mn0.2-0.5%Si0.2-0.5%Nb0.1-0.3%N0.05-1%…
Р2М5Feот 84.6%Mo4.8-5.3%Cr3.8-4.3%W1.7-2.3%C0.95-1%V0.9-1.3%Zr0.05-0.1%Ni0.05-0.08%…
Р6АМ5ГОСТ 19265 – 73Feот 78.3%W5.5-6.5%Mo4.8-5.3%Cr3.8-4.4%V1.7-2.1%C0.82-0.9%Mn0.2-0.5%Si0.2-0.5%N0.05-0.1%…
Р6АМ5Ф3ГОСТ 19265 – 73Feот 77.5%W5.7-6.7%Mo4.8-5.3%Cr3.8-4.3%V2.3-2.7%C0.95-1%Mn0.2-0.5%Si0.2-0.5%N0.05-0.1%…
Р6М3ГОСТ 19265 – 73, в последней версии материал отсутствуетFeот 81.5%W5.5-6.5%Cr3-3.6%Mo3-3.6%V2-2.5%C0.85-0.9%…
Р6М5ГОСТ 19265 – 73Feот 78.4%W5.5-6.5%Mo4.8-5.3%Cr3.8-4.4%V1.7-2.1%C0.8-0.9%Mn0.2-0.5%Si0.2-0.5%…
Р6М5К5ГОСТ 19265 – 73Feот 73.6%W5.7-6.7%Mo4.8-5.3%Co4.7-5.2%Cr3.8-4.3%V1.7-2.1%C0.86-0.9%Mn0.2-0.5%Si0.2-0.5%…
Р6М5Ф3ГОСТ 19265 – 73Feот 77.6%W5.7-6.7%Mo4.8-5.3%Cr3.8-4.3%V2.3-2.7%C0.95-1%Mn0.2-0.5%Si0.2-0.5%…
Р9ГОСТ 19265 – 73, в последней версии материал отсутствуетFeот 79.5%W8.5-9.5%Cr3.8-4.4%V2.3-2.7%C0.85-0.9%…
Р9К10ГОСТ 19265 – 73, в последней версии материал отсутствуетFeот 68.6%Co9-10.5%W9-10.5%Cr3.8-4.4%V2-2.6%C0.9-1%…
Р9К5ГОСТ 19265 – 73Feот 73%W9-10%Co5-6%Cr3.8-4.4%V2.3-2.7%C0.9-1%Mn0.2-0.5%Si0.2-0.5%…
Р9М4К8ГОСТ 19265 – 73Feот 68.4%W8.5-9.5%Co7.5-8.5%Mo3.8-4.3%Cr3-3.6%V2.3-2.7%C1-1.1%Mn0.2-0.5%Si0.2-0.5%…
Р9Ф5ГОСТ 19265 – 73, в последней версии материал отсутствуетFeот 76.1%W9-10.5%V4.3-5.1%Cr3.8-4.4%C1.4-1.5%…

Сталь Р18 примененение характеристики, химсостав, свойства

Сталь Р18 примененение характеристики, химсостав, свойства


Заменитель марки: сталь Р12. Р6М5

Вид поставки

Рельсы Р18, круг Р18, полоса сталь Р18, квадрат сталь Р18, сортовой прокат, в том числе фасонный: ГОСТ 19265-73, ГОСТ 2590-71, ГОСТ 2591-71. Калиброванный пруток ГОСТ 19265-73, ГОСТ 7417-75. Шлифованный пруток и серебрянка ГОСТ 19265-73, ГОСТ 14955-77. Лист толстый ТУ 14-1-1408-75. Лист тонкий ТУ 14-1-1408-75, ТУ 14-1-1706-76. Полоса ГОСТ 19265-73, ГОСТ 4405-75. Проволока ТУ 14-1-1096-74. Поковки и кованые заготовки ГОСТ 19265-73, ГОСТ 1133-71.

Применение

фрезцы, сверла, фрезы, резьбовые фрезы, долбяки, развертки, зенкеры, метчики, протяжки для обработки конструкционных сталей с прочностью до 1000 МПа, от которых требуется сохранение режущих свойств при нагревании во время работы до 600°С.

Химический состав сталь Р18

Химический элемент                %

Ванадий (V)                              1.00-1.40

Вольфрам (W)                          17.0-18.5

Кобальт (Co), не более            0.50

Кремний (Si), не более            0.50

Марганец (Mn), не более         0.50

Молибден (Mo), не более        1.00

Никель (Ni), не более               0.40

Сера (S), не более                   0.03

Углерод (C)                               0.73-0.83

Фосфор (P), не более              0.03

Хром (Cr)

Механические свойства сталь Р18

t отпуска,°С    σB, МПа         KCU, Дж/м2           HRCэ

Закалка 1280°С, масло. Отпуск трехкратный по 1 ч.

400                 1370              23                          61

500                 1470              19                          63

550                 2350              17                          66

600                 2210                                          65

Технологические свойства сталь Р18

Температура ковки

Начала 1200, конца 900. Охлаждение в колодцах при 750-800 С.

Свариваемость

при стыковой электросварке со сталью 45 и 40Х хорошая.

Шлифуемость

повышенная (ГОСТ 19265-73)

Температура критических точек стали Р18

Критическая точка     Ас1     Ас3    Ar3     Mn

Температура °С       820       860   770     725

Физические свойства сталь Р18

Плотность стали кг/м3 — 8800

Модуль упругости при сдвиге кручением G,  при 20 °С — 83 ГПа

Температура испытания,°С      20   100   200     300   400   500   600   700   800   900

Модуль нормальной

упругости, Е, Гпа                      228  223  119   210   201   192   181

Коэффициент

теплопроводности Вт/(м ·°С)           26     27     28     29     28     27       27

Уд.сопротивление(p,НОм · м)   419  472   544   627   718   815   922   1037  1152  1173

Красностойкость

Температура,°С           Время, ч   Твердость, HRCэ

620                                4                59

Плотность синапсов увеличивается в поверхностных слоях на P18. A, Средний синапс …

Контекст 1

… исследования показали, что плотность синапсов в неокортексе увеличивается во время постнатального развития, достигая пика примерно в конце постнатальной недели 3 (Micheva and Beaulieu, 1996; De Felipe, 2011). На P18 мы обнаружили, что L1 обнаруживает наивысшее онтогенетическое увеличение синаптической плотности со значительным, почти 50% увеличением по сравнению с P14 (Fig. 3 A, B; Table 1). Слой 2 также показал значительное увеличение плотности на 36% (Таблица 1).Инфрагранулярные слои показали гораздо меньшее увеличение: увеличение L5A на 24% и увеличение L5B на 27% и небольшое уменьшение L6 на 8%, различия, которые не соответствовали статистической значимости (Таблица 1). Различия между животными в плотности синапсов составляли …

Контекст 2

… увеличение L5A и 27% увеличение L5B и небольшое 8% уменьшение L6, различия, которые не соответствовали статистической значимости ( Таблица 1). Изменчивость плотности синапсов среди животных была снижена у животных в возрасте P18, предполагая, что это может иметь компонент развития.Средний коэффициент вариации (CV или SD / среднее) снизился у животных P18 (фиг. 3C). CV для L3 и L4 снизился на 50% с P14 до P18, несмотря на то, что группа P18 состояла из меньшего количества животных (рис. 3C). Эти данные поддерживают цвета hy- (синий) и L4 (голубой). E: идентифицированные вручную значения плотности ЭМ-синапсов совпадают по сечениям одного и того же животного для L2 (красный), L3 (синий) и L4 (голубой). F, как в E, но для …

Контекст 3

… (Таблица 1). Изменчивость плотности синапсов среди животных была снижена у животных в возрасте P18, предполагая, что это может иметь компонент развития.Средний коэффициент вариации (CV или SD / среднее) снизился у животных P18 (фиг. 3C). CV для L3 и L4 снизился на 50% с P14 до P18, несмотря на то, что группа P18 состояла из меньшего количества животных (рис. 3C). Эти данные поддерживают цвета hy- (синий) и L4 (голубой). E: идентифицированные вручную значения плотности ЭМ-синапсов совпадают по сечениям одного и того же животного для L2 (красный), L3 (синий) и L4 (голубой). F, как в E, но для синапсов, идентифицированных алгоритмом, из изображений, окрашенных EPTA. G, Ручная или определенная алгоритмом плотности синапсов для образцов L3…

Синаптогенез и ультраструктурная локализация полисиалированной молекулы адгезии нервных клеток в развивающемся полосатом теле

Полисиалированная молекула адгезии нервных клеток (PSA-NCAM) играет роль в развитии аксонов и синаптической пластичности. Его паттерн экспрессии регулируется во времени и топографически в мозге во время развития. Однако неясно, изменяется ли и его субклеточное расположение.Мы исследовали экспрессию PSA-NCAM в отношении образования синапсов в развивающемся полосатом теле крысы с помощью иммуногистохимии и электронной микроскопии. В начале развития PSA-NCAM присутствовал вдоль цитоплазматических мембран нейронов и в конусах роста. Экспрессия PSA-NCAM постепенно ограничивалась пре- и постсинаптическими элементами по мере морфологического созревания нейронов. Подтверждая предыдущие результаты, заметное увеличение плотности асимметричных синапсов, определенное с помощью метода физического диссектора, наблюдалось в дорсолатеральном полосатом теле между 14-м днем ​​постнатального (P14) и P18.За этим последовало снижение между P18 и P25, когда асимметричная плотность синапсов достигла уровня взрослых. Напротив, плотность симметричных синапсов превысила уровень взрослых на P14. В дорсомедиальном полосатом теле плотность асимметричных и симметричных синапсов была сходной на P18, P25 и у взрослых. PSA-NCAM был связан с большинством асимметричных и симметричных синапсов на P14 и P18 и экспрессировался как в пре-, так и в постсинаптических элементах большинства (P14) или примерно половины (P18) синапсов.Большинство синапсов теряют экспрессию PSA-NCAM между P18 и P25 в дорсолатеральном полосатом теле и между P25 и взрослым в дорсомедиальном полосатом теле. Данные показывают, что экспрессия PSA-NCAM становится ограниченной топографически во время созревания нейронов, но остается стратегически связанной с развивающимися синапсами во время позднего постнатального развития в полосатом теле.

Проект подразделения выставочного комплекса (P18-048)

(1) Проект окажет значительное влияние на окружающую среду

Нет

(2a) Отчет о воздействии на окружающую среду был подготовлен для этого проекта в соответствии с положениями CEQA

Нет

(2b) Декларация о смягчении или отрицании была подготовлена ​​для этого проекта в соответствии с положениями CEQA

да

(2c) Другой тип документа был подготовлен для этого проекта в соответствии с положениями CEQA

Нет

(3) Смягчающие меры явились условием утверждения проекта

да

(4) Для этого проекта был принят план отчетности или мониторинга по смягчению воздействий.

да

(5) Заявление об основных соображениях было принято для этого проекта

Нет

(6) Выводы были сделаны в соответствии с положениями CEQA

да

P18.Инфильтрат опухолевых лейкоцитов является ключевым предиктором терапевтического ответа на терапию катумаксомабом

Предпосылки

Стратификация пациентов для терапевтического ответа в основном сосредоточена на экспрессии биомаркеров на раковых клетках. Напротив, микромиле опухоли менее важно, хотя стромальные клетки и лейкоциты играют решающую роль в прогрессировании опухоли и устойчивости к лекарствам. В настоящем исследовании изучается влияние лимфоцитов, инфильтрирующих опухоль, на эффективность катумаксомаба при CRC.

Пациенты и методы

Свежие образцы опухоли 27 пациентов с CRC были использованы для получения сфероидов опухоли. Аутологичные PBMC выделяли с помощью градиента плотности фиколла. Сфероиды опухоли, культивированные совместно с PBMC или без них, обрабатывали катумаксомабом в течение 96 часов. Клеточный состав сфероидов и терапевтическое воздействие на эпителиальные клетки и лейкоциты измеряли с помощью анализа FACS. Метаболическую активность совместных культур определяли с помощью анализа АТФ.

Результаты

Подобно своим первоначальным раковым опухолям, все модели сфероидов состояли из достаточно высокой фракции EpCAM-положительных опухолевых клеток, что указывает на CRC, соответствующий типу рака для терапии катумаксомабом.Напротив, фракция CD45-положительных лейкоцитов в сфероидах была низкой, имитирующей родительские опухоли. Отношение эффекторной клетки к клетке-мишени (E: T, CD45: EpCAM) варьировалось от 0,05: 1 до 1,92: 1. Лечение этих сфероидов катумаксомабом не выявило значимого терапевтического эффекта. Добавление специфичных для пациента PBMC изменило соотношение E: T до 7: 1 и оказало значительное влияние на эффективность антител. Катумаксомаб вызывает гибель клеток до 52% (p = 0,015) в зависимости от индивидуального соотношения E: T.После лечения катумаксомабом совместные культуры продемонстрировали метаболическую стимуляцию, что подчеркивало функциональность лейкоцитов.

Выводы

Двойная система биомаркеров необходима для выбора подходящих пациентов с CRC для лечения катумаксомабом. Экспрессия EpCAM на раковых клетках необходима, но лейкоцитарный инфильтрат является ключевым предиктором терапевтического ответа катумаксомаба. Как степень, так и функциональность лейкоцитов, инфильтрирующих опухоль, должны быть определены в отдельном образце опухоли для таргетной терапии с использованием трифункциональных моноклональных антител.

Влияние антропометрических параметров на оценку минеральной плотности и минерального содержания костной ткани у детей | ICCBh3013 | 6-я Международная конференция по здоровью костей у детей

1 Государственный университет Райта, Дейтон, Огайо, США; 2 Детская больница, Лос-Анджелес, Калифорния, США; 3 Медицинский центр детской больницы Цинциннати, Цинциннати, Огайо, США; 4 Университет Крейтон, Омаха, Небраска, США; 5 Колумбийский университет, Нью-Йорк, Нью-Йорк, США; 6 Калифорнийский университет, Сан-Франциско, Калифорния, США; 7 Детская больница, Филадельфия, Пенсильвания, США; 8 Юнис Кеннеди Шрайвер Национальный институт детского здоровья и развития человека, Бетесда, Мэриленд, США.

Цели: Создание эталонных кривых для поверхностной минеральной плотности костной ткани (aBMD) и минерального содержания костной ткани (BMC) с учетом соответствующих антропометрических переменных.

Методы: Анализ данных двухэнергетической рентгеновской абсорбциометрии (DXA), собранных в рамках исследования минеральной плотности костной ткани в детстве. 1 , включая 2012 мальчиков и девочек в возрасте 5–22 лет, всего 10 525 посещений, в результате которых наблюдались aBMD и BMC в поясничном отделе позвоночника, бедре (шее и в целом), предплечье и всем теле (в целом и под черепом).Для ранжирования влияния независимых переменных возраста, пола, расы (черный / не черный), роста, веса, процента жира в организме (% жира) и половой зрелости использовалась многомерная статистика. Для каждого параметра aBMD и BMC были созданы две разные модели, практическая модель, содержащая возраст, пол, расу, рост и вес, а также полная модель с добавлением% жира. Мы сравнили количество случаев, которые упали ниже 2 SD .s в наших моделях с теми, которые ниже того же предела текущей стандартной модели LMS 2 , которая основана на возрасте, поле и расе, и скорректированного роста Z – баллы 3 .

Результаты: Для шести параметров aBMD возраст, пол, вес и% жира были наиболее влиятельными предикторами, тогда как рост, раса и зрелость немного улучшили модели. Напротив, для шести параметров BMC главными предикторами были возраст, вес и% жира, но не пол. При сравнении перекрытия субъектов, идентифицированных как ниже нормального предела -2 S.D .s, от 56 до 84% субъектов, идентифицированных как ниже нормы на основе модели LMS, не классифицируются как ниже нормы в нашей практической модели.При использовании полной модели ошибочная классификация увеличивается для всех параметров aBMD и BMC в диапазоне от 61 до 92%. Скорректированные по высоте баллы Z снизили количество ошибок классификации до 41–59% по сравнению с практической моделью и до 55–73% по сравнению с полной моделью.

Заключение. Традиционное сравнение данных BMD и BMC у детей с контрольной группой, соответствующей возрасту, полу и расе, можно уточнить, если принять во внимание антропометрические параметры.

Литература: 1.При поддержке Национального института детского здоровья и человеческого развития.

2. Zemel BS et al . J Clin Endocrinol Metab 2011 96 3160–3169.

3. Zemel BS et al . J Clin Endocrinol Metab 2011 95 1265–1273.

5 Рекомендованные аксессуары для вашей DSLR

Когда фотографы собираются вместе, они часто сравнивают свои полезные аксессуары DSLR. Кому-нибудь, кроме фотографа, такое обсуждение может показаться немного навязчивым.Но когда вы попали под ливень без защиты камеры от дождя, вы скоро будете думать иначе. Бывают случаи, когда вам может быть представлен многообещающий пейзаж, и вам не хватает фотографических фильтров, необходимых, чтобы сделать его великолепным. Если смотреть через окна, закрытые от конденсата, это должно служить визуальным напоминанием о том, что в шкафчик для снаряжения нужно пополнить запас чистящих средств для линз и оптики. Штатив, необходимый для съемки звездной ночи, будет намного проще носить с правильным футляром для штатива. Фотографы будут наполнены радостной вестью благодаря пультам дистанционного управления камерой, которые позволяют спускать ставни, оставаясь при этом комфортно в помещении, вместо того, чтобы получить обморожение или солнечный удар.

Защита от дождя

Такие компактные и доступные по цене, вам будет трудно найти причину, чтобы оставить их дома. Набор из двух дождевых чехлов Ruggard RC-P18 “поможет защитить вашу цифровую зеркальную камеру с объективом до 18 “. LensCoat RainCoats, созданный для скрытой фотосъемки на открытом воздухе, доступен в различных узорах и однотонных цветах, которые помогают фотографам сливаться с окружающей средой. Еще одна марка дождевиков, которую стоит изучить, – это линейка штормовых курток Vortex Media. Эти чехлы бывают разных цветов и размеров, имеют отверстие внизу для штатива и прилагаемый кейс на молнии для переноски.

Дождевик Ruggard RC-P18

Фотографические фильтры

Для этой великолепной пейзажной фотографии, упомянутой ранее, два стандартных фильтра – поляризатор и нейтральная плотность (ND). Поляризатор поможет устранить отражения, уменьшить дымку и улучшить насыщенность цвета. Градуированные фильтры нейтральной плотности ценятся за их способность выборочно снижать экспозицию в таких областях, как яркое небо, песчаные пляжи и снег. Наряду с фильтрами вы захотите рассмотреть аксессуары для фильтров, такие как ключи для линз, ступенчатые кольца и мешочки.

LEE Filters Мягкий фильтр с градуированной нейтральной плотностью

Принадлежности для чистки линз и оптики

Если салфетки из микрофибры изнашиваются и выглядят утомленными, возможно, пришло время пополнить запасы. При использовании по назначению эти салфетки безопасны и эффективны для тонкой оптики. Многие из них многоразовые и могут использоваться в сочетании с избранными жидкостями для чистки линз. Один из отличных способов чистки линз – это приобрести комплект для чистки линз Giottos с малым ракетным нагнетателем воздуха, который включает выдвижную щетку из козьей шерсти, распылитель чистящего раствора, ткань из микрофибры, тампоны и резиновую грушу.

Салфетка для чистки из микрофибры Pearstone

Чемоданы для штатива

Фотографы, снимающие с длинной выдержкой, ночные сцены, спорт и телефото, скорее всего, уже имеют штатив. Из-за их размера и габаритов штативы трудно переносить и защищать без подходящего футляра или сумки. Следует обратить внимание на набивку, материалы, карманы для аксессуаров, ручки и лямки. Также важен способ открытия футляра или сумки штатива. Один из лучших футляров – жесткий футляр на колесиках HPRC 6300TRIB для штатива с мягким внутренним комплектом.Этот прочный корпус из пластмассы, воздух и водонепроницаемый, небьющийся, соответствует спецификациям ATA 300 и оснащен гладкими скользящими колесами.

HPRC 6300TRIB Жесткий футляр на колесиках для штатива

Пульт дистанционного управления камерой

Одним из самых крутых аксессуаров для камеры является пульт дистанционного управления, который предлагает гораздо больше, чем просто спусковой тросик. Vello производит прекрасную линейку пультов дистанционного управления, которая предлагает запуск беспроводной камеры, функции задержки, включение / выключение видео, фотосъемку во время видео, совместимость с большинством производителей, групп, каналов, высокую скорость синхронизации вспышки, TTL, светодиодные индикаторы, установку на горячий башмак. , и больше.Стрелкам понравится беспроводной триггер и пульт дистанционного управления Vello FreeWave Fusion Pro для цифровых зеркальных фотоаппаратов Nikon и Canon. В эти комплекты входят передатчик, до двух приемников, кабель для спуска затвора 3,5 мм, мини-кабели и 4 батарейки AAA.

Vello FreeWave Plus Wireless Remote Shutter Release

B&H имеет практически все аксессуары для камеры, которые только может пожелать фотограф. Помните: лучше, чем один идеальный аксессуар, – это пять или более идеальных аксессуаров. Пожалуйста, поделитесь своими мыслями и дополнительными рекомендациями с другими читателями в разделе комментариев ниже.

Пептид P18, функциональный фрагмент фактора пигментного эпителия, ингибирует ангиогенез при гепатоцеллюлярной карциноме посредством модуляции сигнального пути VEGF / VEGFR2

Введение

Ангиогенез относится к образованию новой крови. сосуды из существующих капилляров или через внутривенное развитие. Полный процесс ангиогенеза включает в себя множество клеток. и молекулы, которые играют роль в базальной мембране сосудов деградации, а также в последующих клетках эндотелия сосудов активация, пролиферация, миграция и реконструкция (1).В процессе развития опухоли, ангиогенез является необходимым условием и регулируется баланс между проангиогенными факторами, такими как сосудистые фактор роста эндотелиальных клеток (VEGF), рост основных фибробластов фактор (bFGF) и ангиопоэтин, а также антиангиогенные факторы, такие как как тумстатин, эндостатин и тромбоспондин-1 (2–4). Гепатоцеллюлярная карцинома (ГЦК) – один из наиболее распространенных типов карцинома и характеризуется повышенным кровоснабжением. В прогрессирование ангиогенеза жизненно важно для возникновения опухоли и развитие и тесно связано с метастазами HCC, инвазией и устойчивость к терапии (5,6).Таким образом, несколько антиангиогенных препаратов (таких как сорафениб) были рекомендуется для клинического применения в качестве вариантов лечения пациенты с запущенной стадией ГЦК (7,8).

Фактор пигментного эпителиального происхождения (PEDF) представляет собой многофункциональный гликопротеин, принадлежащий к семейству неингибирующие серпины. Среди встречающихся в природе антиангиогенных факторов, PEDF считается эффективным ингибитором ангиогенеза (9,10). Однако PEDF состоит из нескольких функциональные фрагменты, отвечающие за несколько функций, такие как ингибирование ангиогенеза и содействие выживанию и нейродифференциация.Предыдущие исследования показали, что антиангиогенный функциональный фрагмент PEDF расположен в Nh3-концевой поверхностный эпитоп (34-членные аминокислотные остатки 24–57, PEDF-34mer), в то время как способствующие выживанию и нейродифференцирующие функциональные фрагменты расположены на соседнем эпитопе (44-мерный остатки 58–101, PEDF 44-мер) (11–13). Исследования показали, что PEDF подавляет развитие нескольких злокачественные опухоли, такие как карцинома легких, остеосаркома и карцинома поджелудочной железы (14–16). Однако, хотя in vivo сверхэкспрессия полноразмерного PEDF полезна для ингибирования рост опухоли, ее применение в клинической практике ограничено из-за низкой стабильности и иммунной антигенности.Поэтому коротко но стабильные пептиды, полученные из PEDF, которые столь же эффективны при ингибирование ангиогенеза, поскольку полноразмерные фрагменты PEDF могут имеют большее практическое значение в клинической практике. Пептид P18 – это ангиоингибиторный эпитоп 34-мерного PEDF (18-мерные остатки 40–57) предполагалось, что это биоактивный антиангиогенный фрагмент. Предыдущее исследование продемонстрировало, что пептид P18 проявляет активность аналогично полноразмерному PEDF в простате и почках карцинома (17). Тем не менее эффекты пептида P18 на ангиогенез при ГЦК и его возможность применения в терапии опухолей остается неясной.

VEGF представляет собой мощный проангиогенный цитокин, который также известно, что способствует пролиферации и выживанию эндотелиальных клетки (ЭК), а также проницаемость сосудов (18,19). VEGF экспрессируется в васкуляризированных тканях и имеет решающее значение для нормальный и патологический ангиогенез. Имеются веские доказательства участвует VEGF в индукции пролиферации опухолей, метастазирование и ангиогенез (3,20,21). VEGF165, преобладающая изоформа VEGF у человека, передает сигналы через три рецептора: fms-подобная тирозинкиназа (flt-1, также VEGFR1), KDR продукт гена (KDR, также VEGFR2) и продукт гена flt4 (flt-4, также VEGFR3).Среди этих трех рецепторов VEGFR2 является основным рецептор для VEGF-индуцированной передачи сигналов в эндотелиальных клетках (3,22–24). Предыдущие исследования выявили VEGFR2 не только в сосудистых тканях. эндотелиальных клеток, но также его сверхэкспрессия во многих типах злокачественные солидные опухоли (25). На связываясь с VEGF, VEGFR2 подвергается аутофосфорилированию и становится активирован. Фосфорилирование Tyr1175 позволяет связываться с p85 субъединицы киназы PI-3 (PI3K), что приводит к активации Сигнальный путь PI3K / Akt (26).Эта сигнализация VEGFR2 необходима для выполнения VEGF-стимулированная пролиферация, хемотаксис и прорастание, а также для выживания культивируемых эндотелиальных клеток in vitro и ангиогенез in vivo (20,24).

Существующие свидетельства указывают на то, что VEGFR2 является цель PEDF (9,27). Однако может ли пептид P18 блокируют передачу сигнала VEGF / VEGFR2 и в конечном итоге приводят к ингибирование ангиогенеза при ГЦК остается неясным. Таким образом, мы разработали настоящее исследование, чтобы определить механизм, с помощью которого Пептид P18 подавляет ангиогенез при ГЦК.Мы заметили, что P18 пептид противодействовал биоактивности VEGF и подавлял клеточную активность за счет снижения секреции кадгеринов (VE-кадгерин и E-кадгерин) и матриксные металлопротеиназы (матрикс металлопротеиназа-2, ММР-2 и ММП-9) в пупочной вене человека и эндотелиальные клетки микрососудов (HUVEC) и гепатома HepG2 клетки in vitro, что привело к подавлению инвазивность и проангиогенез эндотелиальных клеток. Кроме того, наша модель опухоли ксенотрансплантата также предоставила доказательства того, что P18 пептид подавляет фосфорилирование VEGFR2 и ингибирует ангиогенез ГЦК in vivo.Мы продемонстрировали, что P18 пептид может действовать на ЭК, модулируя передачу сигналов VEGF / VEGFR2. пути и индуцировал каскады PI3K / Akt, которые могли бы привести к апоптоз ЭК и снижение неоваскуляризации.

Материалы и методы
Клеточные линии и культуры

Пупочная вена человека и эндотелий микрососудов клетки (HUVEC) и клетки линии клеток HCC человека HepG2 были приобретены. из Типичного культурного заповедника Китая (Шанхай, Китай) и культивировали при 5% CO2 в среде ECM-2 (ScienCell Research Laboratories, Карлсбад, Калифорния, США) с добавлением 5% фетальная бычья сыворотка (FBS, Gibco, Grand Island, NY, USA), 100 Ед / мл пенициллин, 100 мкг / мл стрептомицина и 1% рост эндотелиальных клеток добавка (ECGS, ScienCell Research Laboratories).ГЦК человека линия клеток HepG2 была получена из американской типовой культуры Коллекция (Роквилл, Мэриленд, США) и культивирование в модифицированной среде Дульбекко. Среда Игла (DMEM, Hyclone, Thermo Fisher Scientific Inc., Logan, UT, USA) с добавлением 10% FBS (Gibco), 100 Ед / мл. пенициллин и 100 мкг / мл стрептомицина. Использовали инкубатор для гипоксии. для моделирования условий гипоксии (1% O2, 5% CO2 и 94% N2).

Антитела и реагенты

Антитела против VEGFR2, фосфорилированные (p) -VEGFR2 (Tyr1175), PI3K, p-PI3K p85 (Tyr458) / p55 (Tyr199), Akt, p-Akt (Ser473), Bax, Bcl-2, каспаза-3, расщепленная каспаза-3, MMP-2, MMP-9 и CD31 были приобретены у Cell Signaling Technology (Danvers, Массачусетс, США).Антитела против VEGF, VE-кадгерина, E-кадгерина, Ki67, GAPDH и β-актин были приобретены в Abcam (Кембридж, Великобритания). Конъюгированные с пероксидазой хрена (HRP) козьи антикроличьи IgG и Конъюгированные с HRP мышиные IgG были приобретены в Beyotime Institute of Биотехнология (Цзянсу, Китай). Рекомбинантный пептид P18 (> 95% чистота) был приобретен у GL Biochem Ltd. (Шанхай, Китай) и характеризуется масс-спектрометрией. Пептиды ацетилировали при их концы Nh3 и амидированы на их концах COOH для стабильности.SU1498, селективный ингибитор VEGFR2, был приобретен у Abcam. Рекомбинантный человеческий VEGF (VEGF165) и рекомбинантный человеческий IGF-1 были получено от PeproTech (Роки-Хилл, Нью-Джерси, США). Матригель была приобретено у BD Biosciences (Сан-Хосе, Калифорния, США).

Анализ жизнеспособности клеток

HUVEC (5 × 103 на лунку) или клеток HepG2 (5 × 103 / лунку) высевали в три 96-луночных планшета. После прикрепления клеток супернатанты в планшетах заменяли на ECM, содержащий градиентные концентрации пептида P18 (10, 20, 40, 80, 160, 320, 640 и 1280 нМ).Таблички были пронумерованы как планшет 1, планшет 2 и планшет 3 и инкубировали при 37 ° C ниже 5% СО2. Количество жизнеспособных клеток определяли с помощью набора для подсчета клеток-8. (CCK-8, Dojindo Molecular Technologies, Кумамото, Япония) анализ в различные временные точки (пластина 1:24 ч, пластина 24: 8 часов и пластина 3:72 часа). Оптическую плотность (OD) при 450 нм измеряли с помощью Spectra Max. 190 (Molecular Devices, Саннивейл, Калифорния, США).

Вестерн-блоттинг

Клетки или замороженные образцы опухоли лизировали в холодный буфер для лизиса RIPA (Beyotime, Пекин, Китай) с 1 нМ фенилметилсуфонилфторид.Набор для анализа белков BCA (Beyotime) был использован для измерения концентрации образцов белка. Всего белок (20-25 мкг) отделяли с помощью гелей SDS-PAGE и переносили к мембранам из ПВДФ (Millipore, Биллерика, Массачусетс, США). Мембраны блокировали 5% обезжиренным молоком в течение 2 ч при комнатной температуре и затем инкубировали с первичными антителами при 4 ° C в течение ночи в соответствии с согласно инструкции производителя. Затем мембраны были инкубировали с конъюгированным с HRP вторичным антимышиным или кроличьим IgG антитела (Beyotime) в течение 2 ч при комнатной температуре, затем обнаружение с использованием иммуноблоттинга с усиленной хемилюминесценцией (ECL) реагенты для обнаружения (Millipore).Интенсивности белковых полос были количественно определено с помощью денситометрического анализа с использованием программного обеспечения ImageJ (Национальные институты здоровья, Бетесда, Мэриленд, США).

Анализ роста опухоли ксенотрансплантатом

клеток HepG2 (5 × 10 6 / 0,1 мл) в PBS были привит в дорсальную область возле передней лапы 4-недельного BALB / c голые мыши (Shanghai Laboratory Animal Company, Шанхай, Китай). За мышами наблюдали, пока опухоли не достигли объема 100. мм3. Затем мышей случайным образом разделили на три группы (5 в каждой группе) и отмечены.Две экспериментальные группы были вводили внутрибрюшинную инъекцию пептида P18 (растворенного с 0,9% физиологическим раствором) в дозах 0,1 мг / кг (доза / тело мыши вес) или 0,5 мг / кг. Контрольную группу лечили тем же объем 0,9% физиологического раствора (0,9% НС). Наблюдали за ростом опухоли. по длине и ширине опухоли, полученной из наружного замеры каждые 2 дня. Объем опухоли определяли по в следующее уравнение: объем (мм3) = (длина × ширина3) / 2. Через четырнадцать дней после первой инъекции мышей умерщвляли, опухоли вырезали и взвешивали.Все эксперименты проводились после одобрения этики комитет больницы Цяньфошань.

Иммунофлуоресцентный анализ (IF)

Ксеногенные опухоли замораживали в жидкости. азот сразу после того, как мышей умерщвляли и затем замораживали в сечениях 5 мкм. Срезы фиксировали в 4% параформальдегиде. на 20 мин. После блокировки в 5% BSA в течение 1 ч срезы были инкубировали при 4 ° C в течение ночи с козьими поликлональными анти-VEGF (Novus, Сан-Диего, США) и кроличий моноклональный антифосфорилированный VEGFR2.Затем клетки или мышиные срезы инкубировали с ослиным анти-козьим Меченый FITC (Abcam) и ослиный антикроличий TRITC-меченный (Abcam) вторичные антитела в течение 2 ч и окрашивали DAPI (Abcam). Флуоресцентные изображения тканей фотографировали с использованием светового микроскоп и двойное иммунофлуоресцентное окрашивание были объединены с использованием Программное обеспечение Image-Pro Plus.

Иммуногистохимический анализ (ИГХ)

Простые опухоли фиксировали 10% формалином, заливали в парафине, а затем обработали для иммуногистохимии.В срезы депарафинизировали в градуированном ксилоле и регидратировали в градуированный этанол, а затем промывали PBS 3 раза. После извлечение антигена, индуцированное нагреванием, в цитратном буфере, эндогенное пероксидаза ингибировалась обработкой 3% перекисью водорода при при комнатной температуре в течение 10 мин с последующей 3-кратной промывкой PBS. Затем срезы инкубировали с первичным кадгерином против VE, антитела к CD31 и Ki67 в течение ночи. После стирки PBS, срезы обрабатывали пероксидазой хрена. (HRP) -конъюгированные козьи антикроличьи IgG в течение 1 ч при 37 ° C.Отрицательный контрольные срезы инкубировали с PBS вместо первичного антитело.

Ранозаживляющая проба

HUVEC засевали в 6-луночные планшеты. Когда клетки были на 90% сливными, линия раны была сделана с использованием 10-мкл пластика. наконечник пипетки. Затем клетки инкубировали в бессывороточном ЕСМ-2. среда с VEGF (8 нг / мл) с пептидом P18 (0,2 мкМ) или без него. Процессы заживления ран фотографировали в моменты времени 0, 12. и 24 часа, а расстояние миграции клеток определяли по формуле анализ изображений.

Анализ миграции и инвазии

Система миграции клеток Transwell (8 мкм, Corning Inc., Корнинг, Массачусетс, США), покрытый матригелем. анализы миграции и инвазии клеток. HUVEC (1 × 105 на лунку) или клетки HepG2 (5 × 104 на лунку) были добавлен в верхнюю камеру планшета Transwell и 500 мкл бессывороточная среда с или без VEGF (8 нг / мл) и P18 пептид (0,2 мкМ) добавляли в нижнюю камеру. Через 48 часов инкубации мигрировавшие клетки фиксировали 95% метанолом и окрашены 0.1% кристаллический фиолетовый в течение 30 мин с последующей промывкой 5 раз с PBS.

Анализ образования трубок

Каждая лунка 96-луночного планшета была покрыта 50 мкл Матригель. HUVEC (1 × 104 / лунку) засевали в лунки. после затвердевания Матригеля. Ячейки в экспериментальные группы получали пептид P18 (0,2 мкМ), а контрольные группы получали равный объем PBS. Клетки инкубировали при 37 ° C с 5% CO2 в течение 6 часов, а затем сфотографирован с помощью светового микроскопа (Olympus, Токио, Япония).

Анализ апоптоза клеток

HUVEC (4 × 105 на лунку) или клеток HepG2 (4 × 105 / лунку) обрабатывали с P18 или без него. пептид и инкубировали в течение 24 ч. Затем культивированные клетки были суспендировали в PBS, подсчитывали и ресуспендировали в связывающем буфере. Аннексин V-FITC и йодид пропидия (PI; NeoBioscience Ltd., Шэньчжэнь, Китай) были использованы для определения скорости апоптоза клеток с помощью анализа проточной цитометрии.

Статистический анализ

Данные были проанализированы с помощью программного обеспечения SPSS (версия 17.0, SPSS China, Шанхай, Китай) и выражается как среднее ± стандартное отклонение (SD). T-критерии Стьюдента использовались для сравнения между 2 группами, и был проведен однофакторный дисперсионный анализ. используется для сравнения между несколькими группами. P-значения <0,05 считались показывающими статистически значимые результаты.

Результаты
Пептид
P18 ингибирует пролиферацию ЭК in vitro

Пептид P18 синтезирован согласно аминокислотная последовательность, показанная на рис. 1А.Анализ доза-ответ, достигнутый с помощью анализа CCK-8, подтвердил IC50 ~ 320 нмоль / л для пептида P18 in vitro (Рис. 1B). В качестве биомаркера уровень апоптоза, Bcl-2 и Bax были обнаружены западным промокание. Мы лечили HUVEC с различными концентрациями P18 пептид и наблюдали дозозависимое подавление Bcl-2, но активация Bax (рис. 1C).

Пептид
P18 подавляет рост опухоли и ангиогенез ГЦК in vivo

Для оценки действия пептида P18 на опухоль. рост in vivo, мы разработали анализ роста опухоли ксенотрансплантата с клетками HepG2 у мышей nude.Две экспериментальные группы получили Пептид Р18 в дозе 0,1 мг / кг или 0,5 мг / кг, в то время как контроль группа получала такой же объем 0,9% физиологического раствора (0,9% NS). В средний объем опухоли составил 47,4% у пациентов, получавших P18 (0,1 мг / кг) группе и 20,64% в группе, получавшей P18 (0,5 мг / кг), нормализованные до контрольная группа (рис. 2А и Б). Как отличительные признаки ангиогенеза, уровни экспрессии CD31 и VE-кадгерин в опухолевых тканях был обнаружен с помощью анализа IHC, который выявили постепенное снижение CD31 и VE-кадгерина с увеличением дозировка пептида Р18 (рис.2C-E). Кроме того, вестерн-блоттинг показал значительную подавление уровня экспрессии CD31 и VE-кадгерина (Рис. 2F и G).

Рисунок 2.

Пептид P18 подавляет опухоль рост и ангиогенез ГЦК in vivo. (A) Ткань опухоли на на 14-й день после введения 0,9% НС или различных доз Р18. (В) Кривая подавления роста опухоли представлена ​​как объем опухоли после лечение 0,9% NS или различными дозами P18 (среднее ± стандартное отклонение).(С) Результаты ИГХ окрашивания на CD31 и VE-кадгерин в опухолевых тканях (увеличение × 200). (D) Данные представляют собой MVD в опухолевых тканях. (среднее ± стандартное отклонение, * P <0,05, *** P <0,01). MVD был определен с помощью IHC. окрашивание эндотелиально-специфическим антителом против CD31 (увеличение × 200). (E) Пептид P18 ингибировал экспрессию VE-кадгерин, молекулярный маркер ангиогенеза при опухоли HCC ткань (увеличение × 200). Данные представляют собой IOD / площадь (среднее ± SD, * P <0,05, *** P <0,01). (F) Экспрессия CD31 и VE-кадгерин обнаруживали с помощью вестерн-блоттинга.(G) Плотность каждой полосы в Вестерн-блоттинге количественно определяли и нормализовали до значение GAPDH (среднее ± стандартное отклонение, * P <0,05, *** P <0,01).

Пептид
P18 ингибирует фосфорилирование VEGFR2 in vivo

Уровни экспрессии VEGF и p-VEGFR2 в опухоли ткани были обнаружены с помощью анализа IF. Результаты показали, что наблюдалось дозозависимое подавление экспрессии VEGF с последующим снижением уровня фосфорилирования VEGFR2 в Группы, получавшие P18 (рис.3А). Вестерн-блоттинг также продемонстрировал, что пептид P18 подавляли экспрессию VEGF и подавляли фосфорилирование VEGFR2 в опухолевых тканях HCC (рис. 3B и C).

Пептид
P18 подавляет жизнеспособность ЭК за счет противодействие биологической активности VEGF in vitro

Анализы заживления ран и Transwell были выполнено для исследования влияния пептида P18 на миграция и инвазивная способность ЭК в присутствии VEGF, и результаты показали, что пептид P18 значительно ингибирует Миграция и инвазия HUVEC при концентрации 0.2 мкМ (рис. 4A-D). Результаты вестерн-блоттинга предположили, что пептид P18 достиг этой биоактивности в первую очередь посредством подавления уровней экспрессии ММР-2 и ММР-9 в HUVEC (рис. 4E и F). Для дальнейшего изучить антиангиогенную активность пептида P18 в vitro мы высевали HUVEC на 96-луночные планшеты, покрытые матригелем, на 8 ч с использованием дополнительного VEGF (8 нг / мл) в качестве положительного контроля. В результаты показали, что VEGF может усиливать ангиогенез HUVEC. но пептид P18 обращает этот эффект и ингибирует ангиогенез. in vitro (рис.5А и В). В в то же время вестерн-блоттинг подтвердил, что дополнительный VEGF может повышать уровень экспрессии VE-кадгерина и E-кадгерина в HUVEC, в то время как пептид P18 противодействовал этой биоактивности (Рис. 5C и D).

Пептид
P18 индуцирует апоптоз ЭК in vitro

Поскольку текущее исследование предварительно определило IC50 ~ 320 нмоль / л для пептида P18 in vitro, мы далее культивировали HUVEC в среде DMEM с VEGF или без него. Через 12 ч пептид P18, растворенный в PBS (0.32 мкМ) добавляли к экспериментальной группы, и клетки культивировали еще 24 ч. Использовали проточную цитометрию с аннексином V-FITC / PI и вестерн-блоттинг. для определения уровней апоптоза HUVEC. Результаты постоянно указывает на то, что дополнительный VEGF может подавлять апоптоз HUVEC, и этот процесс может быть обращен вспять с помощью P18 пептид (фиг. 6A-D).

Пептид
P18 подавляет клетку HepG2 жизнеспособность за счет подавления миграции клеток, а не ингибирования клеток апоптоз, вызывающий пролиферацию
Было проведено

анализов Transwell для исследования влияние пептида P18 на миграционную способность клеток HepG2 в присутствии VEGF.Результаты показали, что пептид P18 ингибировал миграцию опухолевых клеток и противодействовал биоактивность VEGF in vitro (фиг. 7A и B). Уровни экспрессии MMP-2, MMP-9 и E-кадгерин в клетках HepG2, обработанных VEGF (8 нг / мл) и пептид P18 (0,32 мкМ) определяли с помощью вестерн-блоттинга. Высокие уровни экспрессии MMP-2 и MMP-9, стимулированные VEGF в Клетки HepG2 подавлялись пептидом P18, в то время как экспрессия E-кадгерина была слегка повышена в P18 группы, обработанные пептидом, которые способствуют подавлению клеточного миграция (рис.7C и D). Тем не мение, после лечения различными концентрациями пептида P18 для разного времени достоверных различий в пролиферация клеток HepG2 в анализах CCK-8 (фиг. 7E). Кроме того, результаты Проточная цитометрия с аннексином V-FITC / PI и вестерн-блоттинг не показали значительная разница в апоптозе клеток HepG2 между контролем и группы, обработанные пептидом P18 (фиг. 7F и G). Следует отметить, что эксперименты на рис. 7E-G проводились в отсутствие VEGF, но клетки HepG2 культивировали в среде DMEM с 10% FBS.Поскольку клетки HepG2 могут поддерживать высокий уровень пролиферации при это условие без необходимости в дополнительном VEGF, мы рассматриваем что клеток в нормальной сывороточной среде достаточно в качестве контрольной группы (28,29). Приведенные выше результаты предполагают, что Пептид P18 подавляет жизнеспособность клеток HepG2 путем подавления клеточного миграции, а не за счет ингибирования пролиферации клеток и индукции апоптоз.

Пептид
P18 индуцирует апоптоз ЭК через блокирует VEGF / VEGFR2 и индуцирует передачу сигналов PI3K / Akt путь

SU1498 – селективный ингибитор VEGFR2, который главный рецептор VEGF-индуцированной биоактивности в эндотелиальном клетки (23,30).В этом исследовании мы культивировали HUVEC в бессывороточная среда с дополнительным VEGF и использованный SU1498 в качестве положительный контроль для пептида P18. HUVEC, культивируемые в среде с 10% FBS или VEGF служил отрицательным контролем. Вестерн-блот результаты показали, что пептид P18 ингибирует VEGF-индуцированный фосфорилирование VEGFR2 аналогично SU1498 (Рис. 8A). Для дальнейшей демонстрации механизм, с помощью которого P18 ингибирует ангиогенез, мы лечили HUVEC в бессывороточной среде в течение 24 ч, а затем заменили среду на дополнительный VEGF с пептидом P18 или без него (0.2 мкМ). ИФР-1, ан активатор пути PI3K / Akt, использовали в качестве отрицательного контроля (31). Как сигнализация в нисходящем направлении оси VEGFR2, активация PI3K и Akt через фосфорилирование в HUVEC значительно подавлялось после обработка пептидом P18 в течение 90 мин, которая может быть отменена в присутствии IGF-1 (0,2 нг / мл) (фиг. 8B и C). После культивирования с Пептид P18 или IGF-1 в течение 4 часов, Bcl-2 / Bax, как биомаркеры для степень апоптоза и их последующие молекулы-мишени, расщепленные каспаза-3 / каспаза-3 также были обнаружены с помощью вестерн-блоттинга.В результаты показали, что пептид P18 подавляет экспрессию Bcl-2, индуцировал экспрессию Bax и усиливал протеолитический процессинг неактивной каспазы-3 в расщепленную каспазу-3. Тем не мение, этим эффектам противодействовал IGF-1 (рис. 8D и E). Эти результаты показали что дезактивация сигнального пути VEGF / VEGFR2 и индуцированные каскады PI3K / Akt могут быть защитным механизмом, участвующим в индуцированный пептидом P18 апоптоз HUVEC и его антиангиогенный Мероприятия.

Обсуждение

Как тип солидной опухоли с высоким уровнем васкуляризации, возникновение и развитие ГЦК сильно зависит от ангиогенез (5).Следовательно, антиангиогенное лечение стало клинически значимым терапевтические возможности лечения пациентов с ГЦК (7). Ангиогенез в первую очередь зависит от проангиогенные и антиангиогенные факторы. PEDF, разновидность ингибитор эндогенного ангиогенеза, был подтвержден как многофункциональный противоопухолевый фактор. Сообщается, что PEDF подавляет ангиогенез, вызывая апоптоз ЭК и некоторых типы опухолевых клеток (10,16). Полноразмерный PEDF имеет несколько функциональные секции, а антиангиогенный функциональный фрагмент расположен от остатков с 24 по 57 (известный как PEDF-34mer) (13,32).В текущем исследовании наши данные показали, что пептид P18, a картирование функционального фрагмента до остатков от 40 до 57 полной длины PEDF, проявляет антиангиогенную активность как in vitro, так и in vivo. По сравнению с полноразмерным PEDF пептид P18 более стабильный и биосовместимый, но обладает низкой антигенностью, что указывает на потенциал пептида P18 для применения в антиангиогенная терапия у пациентов с ГЦК.

В текущем исследовании пептид P18 был подтвержден оказывать антиангиогенное действие на ГЦК in vivo.CD31 – это в основном сосредоточены на границах между эндотелиальными клетками и можно рассматривать как биомаркер ангиогенеза. Исследования продемонстрировали, что в эндотелиальных клетках передача сигналов VE-кадгерина, экспрессия и локализация коррелируют с проницаемостью сосудов и ангиогенез опухоли (33). IHC окрашивание CD31 и VE-кадгерина в опухолевых тканях позволило предположить, что пептид P18 действует как мощный ингибитор ангиогенеза in vivo. Более того, изображения окрашивания IF показали, что подавление фосфорилирования VEGFR2 может быть механизмом благодаря которому пептид P18 выполняет свои функции.

Ангиогенез основан на дестабилизации ЭК, диссоциация и миграция. При быстром росте солидных опухолей, гипоксическая среда внутри опухолевых тканей стимулирует экспрессия матриксных металлопротеиназ и проангиогенных цитокины, такие как MMP-2, MMP-9, VE-кадгерин и E-кадгерин (34). ММП-2 и ММП-9 являются доступен от HUVEC и отвечает за ремоделирование тканей во время канцерогенеза, метастазирования опухолей и ангиогенеза (35,36). Наше исследование показало, что дополнительный VEGF может активировать секрецию ММП-2 и ММП-9 в HUVEC, что соответствует результатам Анализ миграции и инвазии HUVEC.Однако HUVEC, обработанные Пептид P18 не реагирует на дополнительный VEGF. Более того, мы наблюдали аналогичные результаты в уровнях экспрессии MMP-2 и MMP-9 в Клетки HepG2, обработанные пептидом P18. Результаты выше конечно предполагают, что пептид P18 может выполнять свои антиангиогенные функционируют путем ингибирования биологической активности VEGF. Тем не мение, противоположные результаты были показаны в эффектах пептида P18 на Экспрессия E-кадгерина в клетках HUVEC и HepG2. Повышение регуляции E-кадгерина в клетках HepG2 отвечает за подавление миграция клеток (37,38).Выражение E-кадгерина в HUVECs показали тенденцию к снижению. Считаем, что снижение активность клеток после обработки пептидом P18 может быть связана к этому явлению. Как белок адгезии между клетками, снижение экспрессии E-кадгерина может привести к нестабильности и распад сосудистых структур. Однако точный механизм за счет чего пептид P18 подавлял экспрессию E-кадгерина в HUVEC нуждаются в дальнейшем изучении, которое станет следующим шагом нашей исследовательская работа.

Подобно родительскому PEDF и PEDF-34mer, P18 пептид подавляет пролиферацию и индуцирует апоптоз HUVEC in vitro и имеет IC50 320 нМ.Bcl-2 семейство состоит из многих эволюционно консервативных белков, которые могут регулируют апоптоз клеток через классический митохондриальный путь апоптоза (39). Bcl-2 – это антиапоптотический белок в этом семействе, тогда как Bax является проапоптотический белок. Взаимодействие между способствующими смерти и факторы, подавляющие смерть, регулируют динамическое равновесие, в котором соотношение антиапоптотических и проапоптотических белков контролирует апоптоз клеток (40). По нашим результатам, HUVEC поддерживают низкий уровень апоптоза. при определенной концентрации VEGF (8 нг / мл).Пептид P18 значительно увеличивает скорость апоптоза, сопровождающегося подавление как экспрессии Bcl-2, так и соотношения Bcl-2 / Bax. Однако, согласно нашим результатам, лечение Пептид P18 не изменяет скорость апоптоза клеток HepG2.

На основании этих результатов мы предполагаем, что P18 пептид подавляет ангиогенез, блокируя ось VEGF / VEGFR2 и индуцирование апоптоза эндотелиальных клеток. VEGF, который производится ряд клеток, включая эндотелиальные клетки, макрофаги и различные типы опухолевых клеток, участвует в ангиогенезе, выживаемость эндотелиальных клеток сосудов, пролиферация и сосудистые проницаемость (3,20).Результаты миграции и Анализы трубкообразования показали, что пептид P18 может ингибировать ЭК миграция и ангиогенная способность, индуцированные обработкой VEGF. К дополнительно объясняют эти явления, фосфорилирование VEGFR2 в HUVEC. Как главный рецептор VEGF, индуцированный VEGFR2 сигнализация необходима для выполнения стимулированного VEGF выживаемость, миграция ЭК и ангиогенез в развитии опухолей (18,22). Фосфорилирование VEGFR2 приводит к активация нижестоящих сигнальных путей, включая Пути MAPK / Erk и PI3K / Akt (22,26).

По нашим данным, более низкий уровень фосфорилирования VEGFR2 в HUVEC наблюдались после культивирования в бессывороточной среде. среды в течение 24 часов, и эти изменения были быстро обращены вспять в наличие сыворотки или дополнительного VEGF. Однако этот разворот был отменяется при одновременном добавлении пептида P18 к средний. Такой же результат наблюдался и при добавлении SU1498. вместо пептида P18. Мы отметили, что лечение с помощью P18 пептид также подавлял уровни фосфорилирования PI3K и Akt, индуцированный VEGF, тогда как соотношение p-PI3K / PI3K и p-Akt / Akt может усиливаться при лечении IGF-1, активатором Путь PI3K / Akt.Кроме того, мы исследовали вариации экспрессия Bcl-2 / Bax среди HUVEC, обработанных пептидом P18, контрольная группа и группа, обработанная IGF-1. С предыдущей исследования показали, что снижение Bcl-2 / Bax приводит к расщепление членов каспазы и запускает каскад каспаз, что приводит к активации и усилению апоптоза клеток. ответов (41–43), мы обнаружили расщепленную каспазу-3 и общая каспаза-3 как показатели для оценки апоптоза. В соответствии с Результаты вестерн-блоттинга подтвердили, что пептид P18 подавляет экспрессию Bcl-2 и соотношение Bcl-2 / Bax, сопровождается усиленным расщеплением каспазы-3 синхронно с ингибирование пути PI3K / Akt.Следовательно, лечение Пептид P18 был связан с усилением опосредованного митохондриями апоптоз.

Таким образом, пептид P18 оказывает свое антиангиогенная биоактивность за счет ингибирования эндотелиальных клеток жизнеспособность и индукция апоптоза. Одновременно пептид P18 подавляет жизнеспособность опухолевых клеток, подавляя миграцию клеток вместо того, чтобы вызывать апоптоз при ГЦК. VEGFR2 – основная цель пептида P18, действующего в ЭК. Путем модуляции VEGF / VEGFR2 и его индуцированный сигнальный путь PI3K / Akt, пептид P18 усиливает митохондриально-опосредованный апоптоз ЭК и подавление сосудов образование в опухолевых тканях.Эта антиангиогенная активность Пептид P18 предполагает, что он может быть потенциальным агентом для лечение ГЦК.

Благодарности

Это исследование было поддержано National Major Программа исследований и разработок Китая (2016YFC0106004), Планирование развития науки и технологий провинции Шаньдун, Китай (2015GGB14168) и естественные науки провинции Шаньдун Фонд, Китай (ZR2015HL080).

Список литературы

1

Кармелиет П: ангиогенез при жизни, болезни и медицина.Природа. 438: 932–936. 2005. Просмотр статьи: Google Scholar: PubMed / NCBI

2

Ханахан Д. и Фолкман Дж .: Паттерны и новые механизмы ангиогенного переключения во время туморогенеза. Клетка. 86: 353–364. 1996. Просмотр статьи: Google Scholar: PubMed / NCBI

3

Schlieve CR, Mojica SG, Holoyda KA, Hou X, Fowler KL и Grikscheit TC: Фактор роста эндотелия сосудов (VEGF) биодоступность регулирует ангиогенез и кишечник. и пролиферация клеток-предшественников во время постнатального развития тонкой кишки. разработка.PLoS One. 11: e01513962016. Просмотр статьи: Google Scholar: PubMed / NCBI

4

Ли И, Турпин С.П. и Ван С.: роль тромбоспондин 1 при заболеваниях печени. Hepatol Res. 4 августа 2016 г. (Epub впереди печати).

5

Чжу А.Х., Дуда Д.Г., Сахани Д.В. и Джайн Р.К.: ГЦК и ангиогенез: возможные цели и направления на будущее. Нат Преподобный Клин Онкол. 8: 292–301. 2011. Просмотр статьи: Google Scholar: PubMed / NCBI

6

Атта М.М., Атта Х.М., Гад М.А., Рашед Л.А., Саид EM, Hassanien Sel-S и Kaseb AO: Клиническое значение сосудистой фактор роста эндотелия при гепатоклеточном карцинома у пациентов из Египта.J Hepatocell Carcinoma. 3: 19–24. 2016. Просмотр статьи: Google Scholar: PubMed / NCBI

7

Велкер М.В. и Троян Дж .: Антиангиогенез в лечении гепатоцеллюлярной карциномы: текущие данные и будущее перспективы. Мир Дж. Гастроэнтерол. 17: 3075–3081. 2011.PubMed / NCBI

8

Эделин Дж., Буше Э, Роллан И., Ваулеон E, Pracht M, Perrin C, Le Roux C и Raoul JL: Сравнение опухолей Ответ по критериям оценки ответа при солидных опухолях (RECIST) и модифицированный RECIST у пациентов, получавших сорафениб от гепатоцеллюлярная карцинома.Рак. 118: 147–156. 2012. Просмотр статьи: Google Scholar: PubMed / NCBI

9

Доусон Д. В., Вольперт О. В., Гиллис П., Кроуфорд SE, Xu H, Benedict W. и Bouck NP: Пигментное происхождение эпителия Фактор: мощный ингибитор ангиогенеза. Наука. 285: 245–248. 1999. Просмотр статьи: Google Scholar: PubMed / NCBI

10

He X, Cheng R, Benyajati S и Ma JX: PEDF и его роль в физиологических и патологических состояниях: Участие в диабетических и ангиогенных заболеваниях, вызванных гипоксией.Clin Sci (Лондон). 128: 805–823. 2015. Просмотр статьи: Google Scholar: PubMed / NCBI

11

Belkacemi L и Zhang SX: противоопухолевые Эффекты фактора пигментного эпителия (PEDF): значение для лечения рака. Мини-обзор. J Exp Clin Cancer Res. 35: 42016. Просмотр статьи: Google Scholar: PubMed / NCBI

12

Смит Н.Д., Шульце-Хёпфнер Ф.Т., Величеаса D, Filleur S, Shareef S, Huang L, Huang XM и Volpert OV: пигмент фактор, производный от эпителия, и интерлейкин-6 контролируют простату нейроэндокринная дифференцировка по механизму прямой связи.J Urol. 179: 2427–2434. 2008. Просмотр статьи: Google Scholar: PubMed / NCBI

13

Filleur S, Volz K, Nelius T, Mirochnik Y, Хуанг Х., Зайчук Т.А., Аймерич М.С., Бесерра С.П., Яп Р., Величеаса Д., и др.: Два функциональных эпитопа фактора пигментного эпителия. блокируют ангиогенез и вызывают дифференцировку рака простаты. Cancer Res. 65: 5144–5152. 2005. Просмотр статьи: Google Scholar: PubMed / NCBI

14

Он СС, Ши ХС, Инь Т, Ли YX, Ло СТ, Ву QJ, Lu L, Wei YQ и Yang L: AAV-опосредованный перенос генов человека фактор пигментного эпителия ингибирует карциному легких Льюиса рост у мышей.Oncol Rep. 27: 1142–1148. 2012.PubMed / NCBI

15

Бродхед М.Л., Дасс Ч.Р. и Чунг П.Ф .: Системно применяемые PEDF против первичных и вторичных опухоли в клинически значимой модели остеосаркомы. Br J Рак. 105: 1503–1511. 2011. Просмотр статьи: Google Scholar: PubMed / NCBI

16

Хасэ Р., Миямото М., Уэхара Х., Кадоя М., Эбихара Ю., Мураками Ю., Такахаши Р., Мега С., Ли Л., Шичинохе Т. и др. al: Генная терапия факторами пигментного эпителия подавляет человеческие рак поджелудочной железы у мышей.Clin Cancer Res. 11: 8737–8744. 2005 г. Просмотр статьи: Google Scholar: PubMed / NCBI

17

Мирошник Ю., Аврора А., Шульце-Хёпфнер FT, Deabes A, Shifrin V, Beckmann R, Polsky C и Volpert OV: Коротко пептид, производный от фактора пигментного эпителия, ингибирует ангиогенез и рост опухоли. Clin Cancer Res. 15: 1655–1663. 2009 г. Просмотр статьи: Google Scholar: PubMed / NCBI

18

Hicklin DJ и Эллис LM: роль путь фактора роста эндотелия сосудов в рост опухоли и ангиогенез.J Clin Oncol. 23: 1011–1027. 2005. Просмотр статьи: Google Scholar: PubMed / NCBI

19

Жебик Б, Симонович К, Салех Y, Циолковский П., Бронович А. и Вереб Г.: Фотодинамическая терапия в сочетании с ингибитором цистеиновых протеиназ синергетически снижает продукцию VEGF и способствует некрозу опухоли у крыс карцинома молочной железы. Cell Prolif. 40: 38–49. 2007. Просмотр статьи: Google Scholar: PubMed / NCBI

20

Каземи М., Каррер А., Моймас С., Зандона Л., Bussani R, Casagranda B, Palmisano S, Prelazzi P, Giacca M, Зентилин Л. и др.: VEGF121 и VEGF165 по-разному продвигают созревание сосудов и рост опухоли у мышей и людей.Раковый ген Ther. 23: 125–132. 2016. Просмотр статьи: Google Scholar: PubMed / NCBI

21

Фрезетти Д, Галло М, Рома С, Д’Алессио А, Maiello MR, Bevilacqua S, Normanno N и De Luca A: сосудистые фактор роста эндотелия регулирует секрецию различных ангиогенные факторы в клетках рака легких. J. Cell Physiol. 231: 1514–1521. 2016. Просмотр статьи: Google Scholar: PubMed / NCBI

22

Олссон А.К., Димберг А., Крюгер Дж. И Клаессон-Уэлш L: передача сигналов рецептора VEGF – контроль сосудов функция.Nat Rev Mol Cell Biol. 7: 359–371. 2006. Просмотр статьи: Google Scholar: PubMed / NCBI

23

Робинсон CJ и Стрингер SE: соединение варианты фактора роста эндотелия сосудов (VEGF) и их рецепторы. J Cell Sci. 114: 853–865. 2001.PubMed / NCBI

24

Домиган С.К., Зияд С. и Ируэла-Ариспе М.Л .: Канонический и неканонический фактор роста эндотелия сосудов пути: новые разработки в биологии и передаче сигналов.Артериосклер Thromb Vasc Biol. 35: 30–39. 2015. Просмотр статьи: Google Scholar: PubMed / NCBI

25

Смит Н.Р., Бейкер Д., Джеймс Н.Х., Рэтклифф К., Дженкинс М., Эштон С.Е., Спроут Дж., Суонн Р., Грей Н., Райан А. и др.: Рецепторы фактора роста эндотелия сосудов VEGFR-2 и VEGFR-3 локализуются в основном в сосудистой сети первичного твердого тела человека. раки. Clin Cancer Res. 16: 3548–3561. 2010. Просмотр статьи: Google Scholar: PubMed / NCBI

26

Holmqvist K, Cross MJ, Rolny C, Hägerkvist R, Rahimi N, Matsumoto T., Claesson-Welsh L и Welsh M: адаптер белок shb связывается с тирозином 1175 при росте эндотелия сосудов фактора (VEGF) рецептора-2 и регулирует VEGF-зависимую клеточную миграция.J Biol Chem. 279: 22267–22275. 2004. Просмотр статьи: Google Scholar: PubMed / NCBI

27

Джонстон Э. К., Фрэнсис М. К. и Неппер Дж. Э .: Рекомбинантный фактор пигментного эпителия PEDF связывает сосуды. рецепторы эндотелиального фактора роста 1 и 2. In Vitro Cell Dev Biol Anim. 51: 730–738. 2015. Просмотр статьи: Google Scholar: PubMed / NCBI

28

Ву Л.Ф., Йе YQ, Хуан Г.Й., Ли ХВ, Ли ГП, Пу ZJ, Wei BL и Feng JL: Вовлечение стресса эндоплазматического ретикулума при аденозин-индуцированном апоптозе клеток гепатомы человека HepG2.Онкол Реп. 26: 73–79. 2011.PubMed / NCBI

29

Донато МТТЛ, Толоса Л. и Гомес-Лечон М.Дж.: Культура и функциональная характеристика гепатомы человека HepG2 клетки. Методы Мол биол. 1250: 77–93. 2015. Просмотр статьи: Google Scholar: PubMed / NCBI

30

Киселевская Дж., Лигеза Дж. И Кляйн А. действие ингибиторов тирозинкиназы, тирфостинов: AG1024 и SU1498, об аутокринном росте клеток рака простаты (DU145).Folia Histochem Cytobiol. 46: 185–191. 2008. Просмотр статьи: Google Scholar: PubMed / NCBI

31

Лаурино Л., Ван ХХ, де ла Уссе Б.А., Соса Л., Дюпраз С., Касерес А., Пфеннингер К. Х. и Кирога С.: PI3K активация IGF-1 необходима для регуляции мембранной расширение конуса роста нервов. J Cell Sci. 118: 3653–3662. 2005. Просмотр статьи: Google Scholar: PubMed / NCBI

32

Гун Цюй, Цю С, Ли С, Ма И, Чен М, Яо И, Че Д., Фенг Дж., Цай В., Ма Дж. И др .: Проапоптотический функционал PEDF пептиды подавляют рост опухоли простаты – механистическое исследование.Biochem Pharmacol. 92: 425–437. 2014. Просмотр статьи: Google Scholar: PubMed / NCBI

33

Кун BG, Baeyens N, Han J, Budatha M, Ross Т.Д., Фанг Дж. С., Юн С., Томас Дж. Л. и Шварц М. А.: Интрамембрана. связывание VE-кадгерина с VEGFR2 и VEGFR3 собирает эндотелиальный механосенсорный комплекс. J Cell Biol. 208: 975–986. 2015 г. Просмотр статьи: Google Scholar: PubMed / NCBI

34

Ляо Д. и Джонсон RS: Гипоксия: ключ регулятор ангиогенеза при раке.Раковые метастазы Rev. 26: 281–290. 2007. Просмотр статьи: Google Scholar: PubMed / NCBI

35

Sternlicht MD и Werb Z: Как матрица металлопротеиназы регулируют поведение клеток. Annu Rev Cell Dev Biol. 17: 463–516. 2001. Просмотр статьи: Google Scholar: PubMed / NCBI

36

Ли Х, Дакульси Р., Барейл Р., Бурже С. и Amedee J: uPA и MMP-2 были вовлечены в самосборную сеть формирование в двумерной модели совместного культивирования костного мозга стромальные клетки и эндотелиальные клетки.J Cell Biochem. 114: 650–657. 2013. Просмотр статьи: Google Scholar: PubMed / NCBI

37

Чжао И, Пэн С., Цзя Ц, Сюй Ф, Сюй И и Дай C: Armc8 регулирует инвазивную способность гепатоцеллюлярной карциномы через комплекс E-кадгерин / катенин. Tumor Biol. 37: 11219–11224. 2016. Просмотр статьи: Google Scholar: PubMed / NCBI

38

Yu AQ, Ding Y, Li CL, Yang Y, Yan SR и Ли Д.С.: TALEN-индуцированное нарушение экспрессии Nanog приводит к снижение распространения, инвазивности и миграции, увеличение химиочувствительность и обращение ЭМП в клетках HepG2.Oncol Rep. 35: 1657–1663. 2016.PubMed / NCBI

39

Кори С., Хуанг Д.К. и Адамс Дж. М.: Bcl-2 семья: роль в выживании клеток и онкогенезе. Онкоген. 22: 8590–8607. 2003. Просмотр статьи: Google Scholar: PubMed / NCBI

40

Кори С. и Адамс Дж. М.: Семейство Bcl2: Регуляторы клеточного переключателя “жизнь или смерть”. Нат Рев Рак. 2: 647–656. 2002. Просмотр Статья: Google Scholar: PubMed / NCBI

41

Li LY, Luo X и Wang X: эндонуклеаза G апоптотическая ДНКаза при высвобождении из митохондрий.Природа. 412: 95–99. 2001. Просмотр статьи: Google Scholar: PubMed / NCBI

42

Тиан Икс, Ши И, Лю Н, Янь И, Ли Т, Хуа П и Лю Б.

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *