Скл арматура светосигнальная: Электро – светодиодные коммутаторные лампы СКЛ

alexxlab | 12.09.1975 | 0 | Разное

Светосигнальная арматура СКЛ 14 с плоским светофильтром

Светодиодные индикаторные лампы СКЛ 14 с плоским светофильтром предназначены для установки на панелях электрощитов, пультов и прочего электрооборудования. Крепление к панели производится при помощи гайки. Являются аналогами импортной светосигнальной арматуры с установочным диаметром 22 мм.

Условное обозначение ламп СКЛ 14 с плоским светофильтром

СКЛ 14 А- К – 2 – 220 п.и.

14 – тип лампы

А – группа яркости: А – по умолчанию – нормальной яркости; Б – повышенной яркости

К – цвет свечения светодиода: К – красный; С – синий; Ж – желтый; Л – зеленый; Р – оранжевый; Б – белый

2 – род тока: 2 – биополярная: переменные ток (произвольной частоты и формы) или постоянный тока любого направления.

По заказу возможно изготовление 1

– постоянный ононаправленный ток, 3 – переменный ток

220 – рабочее напряжение

п.и. – тип фильтра – плоский излучатель

Технические характеристики СКЛ 14

Технические характеристики СКЛ 14 приведены в таблице 1.

Таблица 1 Технические характеристики лампы СКЛ 14 с плоским светофильтром

Рабочее напряжение, В	Ток, мА			Сила света, мкд
	Род тока			Группа яркости А	Группа яркости Б
	Постоянный однонаправленный ток	Переменный ток (произвольной частоты и формы) или постоянный ток любого направления	Переменный ток	Цвет свечения	Цвет свечения
				К, Ж, Л	К, Ж, Л	С, Б
6, 12, 24, 28, 36, 48	20	20		40	100	100
55, 60, 75, 110	10	10		25	60	60
127	10	10	20	25	60	60
220	5	5	10	20	50	50
380		2,5	10	20	50	50

Габаритные размеры лампы СКЛ 14 с плоским светофильтром

Габаритные размеры лампы СКЛ 14 с плоским светофильтром приведены на рисунке 1.

Рисунок 1 Габаритные размеры лампы СКЛ 14 с плоским светофильтром

СКЛ 4, светодиодная лампа, светосигнальная арматура. Эльком

лампа СКЛ 3 / лампа СКЛ 5

Заказать

Светосигнальная арматура СКЛ 4.	Цвет	Заменяют лампы накаливания	Цоколь	Цена от количества, руб с НДС
				От 500 шт	От 200 шт	розница
СКЛ 4-К,Л,Ж	К – красный Л – зеленый Ж — желтый	СЦ128-8; СМ28-20; РН6-7,5; РН6-15-2; РН55-15;РН60-4,8; РН110-15; РН120-15; РН110-8 РН127-8-1	B15s/19	44	48	53
СКЛ 4-С,Б	С- синий Б — белый		B15s/19	118	130	143

Светодиодная лампа СКЛ 4 может нарабатывать до 100 тысяч часов непрерывной работы и служить в дальнейшем.

Они имеют хорошую степень пылевлагозащищенности (до 54). Работают при температуре воздуха от -60 до +80 градусов Цельсия и влажности до 98%. Лампы выпускаются с различным напряжением до 380 Вольт. Светофильтры могут быть матовыми и прозрачными, а сами лампы изготавливаются с различной яркостью: нормальная, повышенная и особояркая.
Есть возможность выпуска ламп индикаторных для высоковольтных устройств (в них исключена возможность свечения лампы в результате наводок)

 

Светодиодные коммутаторные лампы СКЛ, сигнальная арматура, технические характеристики, особенности применения.

Светодиодные сигнальные лампы предназначены для замены стандартных ламп накаливания.
Светодиодные коммутаторные лампы (далее СКЛ) имеют следующие характеристики:
Высокая надёжность.
Гарантийный срок хранения – 10 лет с момента изготовления.
Гарантийная наработка на отказ – 25 000 часов в течение срока хранения.
Степень защиты IP-54 по ГОСТ 14254-96.
Температура окружающей среды от -60 до +60°С.

Относительная влажность при температуре 25°С не более 98%.
Потребляемая мощность 2Вт.
Угол обзора 120°.
Стандартный ряд напряжений питания 6…380В.
Цвет свечения: красный, жёлтый, зелёный, оранжевый, синий, белый.
Выпускаются лампы с прозрачными, окрашенными и матовыми колбами, нормальной и повышенной яркости.

Основные отличия

Название “Светодиодные Коммутаторные Лампы” появилось в 1996году (аббревиатура СКЛ).
Cветодиодные коммутаторные лампы (СКЛ)специально разработаны для замены стандартных ламп накаливания для применения системах автоматики, регулирования и контроля с целью значительного увеличения срока службы и повышения их надёжности (до 25 000 часов), а также для улучшения экономических и эксплуатационных показателей (ток потребления снижается до 10…20 мА).
Коммутаторные светодиодные лампы СКЛ созданы, как выгодная альтернатива лампам накаливания.Тем более, что необходимость их использования определяется переходом к применению современных энергосберегающих технологий в настоящее время.

Основные отличия ламп СКЛ :

• значительное увеличение срока службы,

• универсальность использования,

• повышенная яркость света,

• повышенная надёжность (виброустойчивость и взрывобезопасность).

Лампы СКЛ привлекают разнообразием цветовой гаммы, яркости, неизменной насыщенностью цвета, наличием режимов мигания и порога срабатывания, а так же широким диапазоном напряжений питания. Для замены нет необходимости дополнительно нести затраты на переоборудование, т.к. по по конструктиву полностью совпадают с прежними лампами накаливания, имеющими цоколи B15s/18, B15d/18, B22, E27, BA9S, E10/13, а так же с лампами, заменяющими арматуры АС220, АСКМ, АМЕ …(установочный размер, диаметр – 8 мм, 14 мм, 22 мм и 27 мм).
Область применения светодиодных коммутаторных ламп – электрощиты, различные пульты управления, шкафы с РЭА, радиоэлектронная аппаратура, разнообразная бытовая техника, сигнализация в том числе пожарная сигнализация, охрана и безопасность.

 

Таблица соответствия. Технические характеристики лампы СКЛ

Лампы CКЛ со стандартными цоколями
Цоколь	Заменяют лампы	Тип лампы CКЛ, фото		Примечание
В15d18	В различной арматуре: СЦ128-8, СМ28-20, РН6-7.5, РН6-15-2, РН55-15, РН60-4.8, РН110-15, РН120-15, РН110-8, РН127-8-1 В арматуре АС-220: СКЛ1(3)+фиксатор	СКЛ-1
		СКЛ-2
		СКЛ-10
В15s18	В тех же арматурах, но с другим цоколем	СКЛ-3
		СКЛ-4
В22	Ж-54-25-1, Ж-54-40-1, Ж-110-15, Ж-110-25	СКЛ-5
В9	А12-1, А12-4-1, А12-5, А12-21-3, А12-10, А6-5, А6-10-1, А24-1, А24-5-1	СКЛ-8
Е27	ИЛК 215-225-8, ИЛК 220-230-25-3, ИЛЗ 215-225-8, ИЛЖ 215-225-8, В 220-23015-3, В 230-240-15-2	СКЛ-7
Е14	В различной арматуре: РН6-25, РН6-30-1, Р127-8, РН110-40, РН120-25, РН230-15, Ж-75-4, Ж-75-6Ж, Ж-75-8, Ж-75-15	СКЛ-6
		СКЛ-9
Е10		СКЛ-13
Безцокольные лампы CКЛ
Контакты	Заменяют арматуры	Тип лампы
винтовые	АС-220, АЕ, АЕР	СКЛ-11
	АМ, АСЛ, АМЕ	СКЛ-14
ламельные	АМ, АСЛ, АМЕ	СКЛ-12
гибкие или ламельные	АСКМ	СКЛ-15
	АС-1201, АВР-01	СКЛ-16
	Заменяют лампу накаливания 68А7803Р5NL пр-ва в оборудовании на газо- и нефтепроводах	СКЛ-17
		СКЛ-18
		СКЛ-19
		СКЛ-20
Подробное описание, инструкции 750 Kb

Светодиодные лампы сигнальные скл с порогом срабатывания. Купить, цена.

Светосигнальная арматура АС, СКЛ лампы. Сигнальная арматура

Светодиодные лампы СКЛ

Тип лампы	Цена в грн.	Технические характеристики
Cветосигнальная арматура СКЛ
СКЛ-1А…7А, 9А…12А, 14А прозрачная	50.15	Описание СКЛ Габариты СКЛ
СКЛ-1Б…7Б, 9Б…12Б, 14Б прозрачная	59.50
СКЛ-1А…7А, 9А, 10А, 16А, 18А	45.05
СКЛ-1Б…7Б, 9Б, 10Б, 16Б, 18Б	49.30
СКЛ-1Б…7Б, 9Б…12Б, 14Б белая	124.10
СКЛ-1Б…7Б, 9Б…12Б, 14Б синяя	124.10
СКЛ-8А, 13А, 15А, 17А, 19А, 23А	34.85
СКЛ-8Б, 13Б, 15Б, 17Б, 19Б, 23Б	41.65
СКЛ-8Б, 13Б, 15Б, 17Б, 19Б белая	59.50
СКЛ-11, 12, 14 двухцветная	74.80
СКЛ-11А, 12А, 14А	69,30
СКЛ-11Б, 12Б, 14Б	121,50
СКЛ-11А, 12А, 14А мигающая	54.40
СКЛ-11Б, 12Б, 14Б мигающая	60.35
СКЛ-11Б, 12Б, 14Б белая мигающая	134.30
СКЛ-11Б, 12Б, 14Б синяя мигающая	134.30
СКЛ-12А, 14А с плоским излучателем	45.05
СКЛ-12Б, 14Б с плоским излучателем	49.30
СКЛ-14 индикатор направления	129.20
СКЛ-12Б, 14Б белая, синяя с плоским излучателем	74.80
СКЛ-12А, 14А мигающая с плоским излучателем	54.40
СКЛ-12Б, 14Б мигающая с плоским излучателем	59.50
СКЛ-12Б, 14Б белая, синяя мигающая с плоским излучателем	74.80
СКЛ-11А, 12А, 14А с порогом срабатывания	54.40
СКЛ-11А, 12А, 14А прозрачная с порогом срабатывания	59.50
СКЛ-11Б, 12Б, 14Б с порогом срабатывания	60.35
СКЛ-11Б, 12Б, 14Б прозрачная с порогом срабатывания	65.45
СКЛ-11Б, 12Б, 14Б белая с порогом срабатывания	134.30
СКЛ-11Б, 12Б, 14Б синяя с порогом срабатывания	134.30
СКЛ-15, 17 двухцветная	59.50
СКЛ-16, 18 двухцветная	74.80
СКЛ-16, 18 индикатор направления	79.90
СКЛ-16Б, 18Б белая, синяя	59.50
СКЛ-8Б, 13Б, 15Б, 17Б, 19Б синяя	59.50
СКЛ-22А	39.10
СКЛ-22Б	46.75
СКЛ-22Б белая, синяя	59.50
СКЛ-23Б белая	59.50

Стеклянная световая сигнальная башня серии LR (LR4) от PATLITE | Интернет-магазин MISUMI

4 – 90004 – 90004 – 90004 – 90004 – 9000 9005 9005 9005 9005 9004 9004 Круглый 9004

111.07 €

[Крепление на столб] [Крепление на столб]

110.78 €

Круглый

112.37 €

[Крепление на столб] [Крепление на столб] [Крепление на опоре]

[Крепление на столб] [Крепление на столб] Круглый / мигает / мигает Доступен прямой монтаж / мигает Доступен прямой монтаж / мигает Доступен прямой монтаж / мигает / мигает / мигает / мигает Доступен прямой монтаж / мигает4 – 90004 – 90004 – 90004 – 90004 – 90004 – 9000 9005 9005 9005 9005 Круглый 9004 9004

120.18 €

119.98 €

135.51 €

Круглый монтаж на столбе [Крепление на столб]

125.30 €

Круглый Круглый

114,34 €

4 дня

10

Стандартный

Ø40

[Другой] 100–240 В переменного тока

1

Зеленый

–

–

–

–

Светодиод

[Тип крепления на опоре] металлическая опора

В наличии

Горит / мигает

CE / UL / CUL

Совместимость с открытым коллектором (NPN)

4 типа

Белый

IP54

PC

Цветной глобус

117.41 €

24 дня

10

Стандартный

Ø40

[Другой] 100–240 В переменного тока

1

Зеленый

–

–

–

–

Светодиод

[Тип крепления на опоре] металлическая опора

Доступен

Горит / мигает

CE / UL / CUL

Совместимость с открытым коллектором (NPN)

4 типа

Белый

IP54

PC

Прозрачный глобус

135.03 €

Доступен

4 дня

10

Стандартный

Ø40

[Другое] 100–240 В переменного тока

1

Красный

–

–

–

–

Светодиод

[Тип крепления на столб] металлическая опора

В наличии

Горит / мигает

CE / UL / CUL

Совместимость с открытым коллектором (NPN)

4 типа

Белый

IP54

PC

Цветной глобус

114.34 €

4 дня

10

Стандартный

Ø40

[Другой] 100–240 В переменного тока

1

Желтый

–

–

–

–

Светодиод

[Тип крепления на столб] металлическая опора

В наличии

Горит / мигает

CE / UL / CUL

Совместимость с открытым коллектором (NPN)

4 типа

Белый

IP54

PC

Цветной глобус

117.41 €

24 дня

10

Стандартный

Ø40

[Другой] 100–240 В переменного тока

1

Желтый

–

–

–

–

Светодиод

[Тип крепления на столб] металлическая опора

Доступен

Горит / мигает

CE / UL / CUL

Совместимость с открытым коллектором (NPN)

4 типа

Белый

IP54

PC

Прозрачный глобус

125.34 €

24 дня

10

Стандартный

Ø40

[Другой] 100–240 В переменного тока

1

Синий

–

–

–

–

Светодиод

[Тип крепления на столб] металлическая опора

N / A

Освещение

CE / UL / CUL

Совместимость с открытым коллектором (NPN)

–

Off-white

IP54

PC

Цветной глобус

–

85.03 €

Доступен

4 дня

10

Стандартный

Ø40

[Другой] 100–240 В переменного тока

1

Зеленый

–

–

–

–

Светодиод

[Тип крепления на опоре] металлическая опора

N / A

Освещение

CE / UL / CUL

Совместимость с открытым коллектором (NPN)

–

Off-white

IP54

PC

Цветной глобус

–

121.51 €

24 дня

10

Стандартный

Ø40

[Другой] 100–240 В переменного тока

1

Зеленый

–

–

–

–

Светодиод

[Тип крепления на столб] металлическая опора

N / A

Освещение

CE / UL / CUL

Совместимость с открытым коллектором (NPN)

–

Off-white

IP54

PC

Прозрачный глобус

–

117.28 €

4 дня

10

Стандартный

Ø40

[Другой] 100–240 В переменного тока

1

Желтый

–

–

–

–

Светодиод

[Тип крепления на столб] металлическая опора

N / A

Освещение

CE / UL / CUL

Совместимость с открытым коллектором (NPN)

–

Off-white

IP54

PC

Цветной глобус

–

110.78 €

24 дня

10

Стандартный

Ø40

[Другой] 100–240 В переменного тока

1

Зеленый

–

–

–

–

LED

[Крепление на столбе] [Крепление на столбе]

Доступен

Горит / мигает

CE / UL / CUL

Совместимость с открытым коллектором (NPN)

4 типа

Грязно-белый

IP65

ABS & AS

Цветной глобус

000 –

110.78 €

24 дня

10

Стандартный

Ø40

[Другой] 100–240 В переменного тока

1

Красный

–

–

–

–

Светодиод

[Крепление на столб] [Крепление на столбе]

Доступен

Горит / мигает

CE / UL / CUL

Совместимость с открытым коллектором (NPN)

4 типа

Грязно-белый

IP65

ABS & AS

Цветной глобус

000 –

110.78 €

24 дня

10

Стандартный

Ø40

[Другой] 100–240 В переменного тока

1

Желтый

–

–

–

–

Светодиод

[Крепление на столб]

Доступен

Горит / мигает

CE / UL / CUL

Совместимость с открытым коллектором (NPN)

4 типа

Грязно-белый

IP65

ABS & AS

Цветной глобус

000 –

110.78 €

24 дня

10

Стандартный

Ø40

[Другой] 100–240 В переменного тока

1

Зеленый

–

–

–

–

LED

[Крепление на столбе] [Крепление на столбе]

Доступен

Горит / мигает

CE / UL / CUL

Опора с открытым коллектором (NPN)

4 типа

Off-White

IP65

–

–

–

84 дня

10

Стандартный

Ø40

[Другой] 100–240 В переменного тока

1

Красный

–

–

–

–

LED

Доступен

Горит / мигает

CE / UL / CUL

Опора открытого коллектора (NPN)

4 типа

Off-White

IP65

–

–

–

24 дня

10

Стандартный

Ø40

[Другой] 100–240 В переменного тока

1

Желтый

–

–

–

–

Светодиод

[Крепление на столб]

Доступен

Горит / мигает

CE / UL / CUL

Опора с открытым коллектором (NPN)

4 типа

Off-White

IP65

–

–

–

–

24 дня

10

Стандартный

Ø40

[Другое] 100–240 В переменного тока

1

Зеленый

–

–

–

–

Светодиод

[Крепление на столб] [Крепление на столбе]

Н / Д

Освещение

CE / UL / CUL

Совместимость с открытым коллектором (NPN)

–

Грязно-белый

IP65

ABS & AS

Цветной глобус

–

112.37 €

24 дня

10

Стандартный

Ø40

[Другой] 100–240 В переменного тока

1

Красный

–

–

–

–

LED

Н / Д

Освещение

CE / UL / CUL

Совместимость с открытым коллектором (NPN)

–

Грязно-белый

IP65

ABS & AS

Цветной глобус

–

112.37 €

24 дня

10

Стандартный

Ø40

[Другой] 100–240 В переменного тока

1

Желтый

–

–

–

–

LED

Н / Д

Освещение

CE / UL / CUL

Совместимость с открытым коллектором (NPN)

–

Грязно-белый

IP65

ABS & AS

Цветной глобус

–

122.97 €

24 дня

10

Стандартный

Ø40

[Другой] 100–240 В переменного тока

1

Белый

–

–

–

–

LED

[Крепление на столбе]

Н / Д

Освещение

CE / UL / CUL

Совместимость с открытым коллектором (NPN)

–

Не совсем белый

IP65

PC

Цветной глобус

–

112.40 €

24 дня

10

Стандартный

Ø40

[Другой] 100–240 В переменного тока

1

Зеленый

–

–

–

–

LED

[Крепление на столбе] [Крепление на столбе]

Н / Д

Освещение

CE / UL / CUL

Опора с открытым коллектором (NPN)

–

Off-White

IP65

–

–

–

–

112.77 €

4 дня

10

Стандартный

Ø40

[Другой] 100–240 В переменного тока

1

Красный

–

–

–

–

LED

Н / Д

Освещение

CE / UL / CUL

Опора открытого коллектора (NPN)

–

Off-White

IP65

–

–

–

–

116.64 €

24 дня

10

Стандартный

Ø40

[Другой] 100–240 В переменного тока

1

Красный

–

–

–

–

Светодиод

[Крепление на столб] [Крепление на столбе]

Н / Д

Освещение

CE / UL / CUL

Совместимость с открытым коллектором (NPN)

–

Не совсем белый

IP65

PC

Прозрачный глобус

–

112.40 €

24 дня

10

Стандартный

Ø40

[Другой] 100–240 В переменного тока

1

Желтый

–

–

–

–

Светодиод

[Крепление на столб]

Н / Д

Освещение

CE / UL / CUL

Опора открытого коллектора (NPN)

–

Off-White

IP65

–

–

–

–

136.71 €

24 дня

10

Стандартный

Ø40

[Другой] 100–240 В переменного тока

1

Зеленый

–

–

–

–

–

–

–

LED

Доступен прямой монтаж

CE / UL / CUL

Совместимость с открытым коллектором (NPN)

4 типа

Беловатый

IP65

ABS и AS

Цветной глобус

–

136.71 €

4 дня

10

Стандартный

Ø40

[Другой] 100–240 В переменного тока

1

Красный

–

–

–

–

–

LED

Доступен прямой монтаж

CE / UL / CUL

Совместимость с открытым коллектором (NPN)

4 типа

Беловатый

IP65

ABS и AS

Цветной глобус

–

136.71 €

24 дня

10

Стандарт

Ø40

[Другое] 100–240 В переменного тока

1

Желтый

–

–

–

–

LED

CE / UL / CUL

Совместимость с открытым коллектором (NPN)

4 типа

Грязно-белый

IP65

ABS и AS

Цветной глобус

–

106.78 €

24 дня

10

Стандартное

Ø40

[Другое] 100–240 В переменного тока

1

Синий

–

–

–

–

LED

CE / UL / CUL

Совместимость с открытым коллектором (NPN)

4 типа

Грязно-белый

IP65

PC

Цветной глобус

–

106.78 €

24 дня

10

Стандартное

Ø40

[Другое] 100–240 В переменного тока

1

Белый

–

–

–

–

LED

CE / UL / CUL

Совместимость с открытым коллектором (NPN)

4 типа

Грязно-белый

IP65

PC

Цветной глобус

–

136.71 €

24 дня

10

Стандартное

Ø40

[Другое] 100–240 В переменного тока

1

Зеленый

–

–

–

–

–

–

–

LED

Доступен прямой монтаж

CE / UL / CUL

Опора открытого коллектора (NPN)

4 типа

Off-White

IP65

–

–

–

99.41 €

4 дня

10

Стандартное

Ø40

[Другое] 100–240 В переменного тока

1

Красный

–

–

–

–

LED

Доступен прямой монтаж

CE / UL / CUL

Опора открытого коллектора (NPN)

4 типа

Off-White

IP65

–

–

–

102.18 €

24 дня

10

Стандартное

Ø40

[Другое] 100–240 В переменного тока

1

Красный

–

–

–

–

LED

Доступен прямой монтаж

CE / UL / CUL

Совместимость с открытым коллектором (NPN)

4 типа

Беловатый

IP65

PC

Прозрачный глобус

–

136.71 €

4 дня

10

Стандарт

Ø40

[Другое] 100–240 В переменного тока

1

Желтый

–

–

–

–

LED

CE / UL / CUL

Опора открытого коллектора (NPN)

4 типа

Off-White

IP65

–

–

–

96.28 €

24 дня

10

Стандартный

Ø40

[Другой] 100–240 В переменного тока

1

Зеленый

–

–

–

–

Светодиод

N / 0005

Прямой монтаж

N

Освещение

CE / UL / CUL

Совместимость с открытым коллектором (NPN)

–

Не совсем белый

IP65

ABS & AS

Цветной глобус

–

96.28 €

4 дня

10

Стандартный

Ø40

[Другой] 100–240 В переменного тока

1

Красный

–

–

–

–

LED

Прямой монтаж

N /

Освещение

CE / UL / CUL

Совместимость с открытым коллектором (NPN)

–

Не совсем белый

IP65

ABS & AS

Цветной глобус

–

96.28 €

24 дня

10

Стандартный

Ø40

[Другой] 100–240 В переменного тока

1

Желтый

–

–

–

–

LED

Непосредственный монтаж

N

Освещение

CE / UL / CUL

Совместимость с открытым коллектором (NPN)

–

Не совсем белый

IP65

ABS & AS

Цветной глобус

–

106.88 €

24 дня

10

Стандартный

Ø40

[Другой] 100–240 В переменного тока

1

Синий

–

–

–

–

LED

Прямой монтаж

N /

Освещение

CE / UL / CUL

Совместимость с открытым коллектором (NPN)

–

Не совсем белый

IP65

PC

Цветной глобус

–

96.31 €

4 дня

10

Стандартный

Ø40

[Другой] 100–240 В переменного тока

1

Зеленый

–

–

–

–

Светодиод

N / 0005

Прямой монтаж

N

Освещение

CE / UL / CUL

Опора открытого коллектора (NPN)

–

Off-White

IP65

–

–

–

96.68 €

Доступен

4 дня

10

Стандартный

Ø40

[Другой] 100–240 В переменного тока

1

Красный

–

–

–

–

LED

Прямой монтаж

N /

Освещение

CE / UL / CUL

Опора открытого коллектора (NPN)

–

Off-White

IP65

–

–

–

100.53 €

24 дня

10

Стандартный

Ø40

[Другой] 100–240 В переменного тока

1

Красный

–

–

–

–

LED

Прямой монтаж

N /

Освещение

CE / UL / CUL

Совместимость с открытым коллектором (NPN)

–

Не совсем белый

IP65

PC

Прозрачный глобус

–

96.31 €

24 дня

10

Стандартный

Ø40

[Другой] 100–240 В переменного тока

1

Желтый

–

–

–

–

LED

Непосредственный монтаж

N

Освещение

CE / UL / CUL

Опора открытого коллектора (NPN)

–

Off-White

IP65

–

–

–

100.53 €

24 дня

10

Стандартный

Ø40

[Другой] 100–240 В переменного тока

1

Желтый

–

–

–

–

LED

N / 0005

Прямой монтаж

N

Освещение

CE / UL / CUL

Совместимость с открытым коллектором (NPN)

–

Не совсем белый

IP65

PC

Прозрачный глобус

–

139.05 €

24 дня

10

Стандартный

Ø40

[Другой] 100–240 В переменного тока

2

Зеленый

Красный

–

–

–

Светодиод

[Тип крепления на столб] металлическая опора

В наличии

Горит / мигает

CE / UL / CUL

Совместимость с открытым коллектором (NPN)

4 типа

Белый

IP54

PC

Цветной глобус

123.71 €

4 дня

10

Стандартный

Ø40

[Другой] 100–240 В переменного тока

2

Красный

Зеленый

–

–

–

Светодиод

[Тип крепления на опоре] металлическая опора

В наличии

Горит / мигает

CE / UL / CUL

Совместимость с открытым коллектором (NPN)

4 типа

Белый

IP54

PC

Цветной глобус

123.71 €

4 дня

10

Стандартный

Ø40

[Другой] 100–240 В переменного тока

2

Красный

Желтый

–

–

–

Светодиод

[Тип крепления на опоре] металлическая опора

В наличии

Горит / мигает

CE / UL / CUL

Совместимость с открытым коллектором (NPN)

4 типа

Белый

IP54

PC

Цветной глобус

129.84 €

24 дня

10

Стандартный

Ø40

[Другой] 100–240 В переменного тока

2

Красный

Желтый

–

–

–

Светодиод

[Тип крепления на опоре] металлическая опора

Доступен

Горит / мигает

CE / UL / CUL

Совместимость с открытым коллектором (NPN)

4 типа

Белый

IP54

PC

Прозрачный глобус

139.05 €

24 дня

10

Стандартный

Ø40

[Другой] 100–240 В переменного тока

2

Желтый

Синий

–

–

–

Светодиод

[Тип крепления на опоре] металлическая опора

В наличии

Горит / мигает

CE / UL / CUL

Совместимость с открытым коллектором (NPN)

4 типа

Белый

IP54

PC

Цветной глобус

139.05 €

24 дня

10

Стандартный

Ø40

[Другой] 100–240 В переменного тока

2

Желтый

Зеленый

–

–

–

Светодиод

[Тип крепления на столб] металлическая опора

В наличии

Горит / мигает

CE / UL / CUL

Совместимость с открытым коллектором (NPN)

4 типа

Белый

IP54

PC

Цветной глобус

109.74 €

24 дня

10

Стандартный

Ø40

[Другой] 100–240 В переменного тока

2

Зеленый

Красный

–

–

–

Светодиод

[Тип крепления на столб] металлическая опора

N / A

Освещение

CE / UL / CUL

Совместимость с открытым коллектором (NPN)

–

Off-white

IP54

PC

Цветной глобус

–

109.74 €

24 дня

10

Стандартный

Ø40

[Другой] 100–240 В переменного тока

2

Зеленый

Желтый

–

–

–

Светодиод

[Тип крепления на опоре] металлическая опора

N / A

Освещение

CE / UL / CUL

Совместимость с открытым коллектором (NPN)

–

Off-white

IP54

PC

Цветной глобус

–

115.83 €

24 дня

10

Стандартный

Ø40

[Другой] 100–240 В переменного тока

2

Красный

Желтый

–

–

–

Светодиод

[Тип крепления на столб] металлическая опора

N / A

Освещение

CE / UL / CUL

Совместимость с открытым коллектором (NPN)

–

Off-white

IP54

PC

Цветной глобус

–

109.74 €

4 дня

10

Стандартный

Ø40

[Другой] 100–240 В переменного тока

2

Желтый

Зеленый

–

–

–

Светодиод

[Тип крепления на столб] металлическая опора

N / A

Освещение

CE / UL / CUL

Совместимость с открытым коллектором (NPN)

–

Off-white

IP54

PC

Цветной глобус

–

120.16 €

24 дня

10

Стандартный

Ø40

[Другой] 100–240 В переменного тока

2

Красный

Зеленый

–

–

–

Светодиодный

[Крепление на столб]

Доступен

Горит / мигает

CE / UL / CUL

Совместимость с открытым коллектором (NPN)

4 типа

Грязно-белый

IP65

ABS & AS

Цветной глобус

000 –

120.16 €

24 дня

10

Стандартный

Ø40

[Другой] 100–240 В перем. Тока

2

Красный

Желтый

–

–

–

Светодиод

[Крепление на столбе]

Доступен

Горит / мигает

CE / UL / CUL

Совместимость с открытым коллектором (NPN)

4 типа

Грязно-белый

IP65

ABS & AS

Цветной глобус

000 –

135.51 €

24 дня

10

Стандартный

Ø40

[Другой] 100–240 В переменного тока

2

Зеленый

Красный

–

–

–

Светодиод

на опоре [Крепление на столб]

Доступен

Горит / мигает

CE / UL / CUL

Совместимость с открытым коллектором (NPN)

4 типа

Белый

IP65

PC

Цветной глобус

–

–

24 дня

10

Стандартный

Ø40

[Другой] 100–240 В переменного тока

2

Красный

Зеленый

–

–

–

Светодиод

на опоре [Крепление на столб]

Доступен

Горит / мигает

CE / UL / CUL

Опора с открытым коллектором (NPN)

4 типа

Off-White

IP65

–

–

–

–

Доступен

4 дня

10

Стандартный

Ø40

[Другой] 100–240 В перем. Тока

2

Красный

Желтый

–

–

–

Светодиод

[Крепление на столбе]

Доступен

Горит / мигает

CE / UL / CUL

Опора открытого коллектора (NPN)

4 типа

Off-White

IP65

–

–

–

24 дня

10

Стандартный

Ø40

[Другой] 100–240 В перем. Тока

2

Желтый

Синий

–

–

–

Светодиод

Доступен

Горит / мигает

CE / UL / CUL

Совместимость с открытым коллектором (NPN)

4 типа

Белый

IP65

PC

Цветной глобус

–

–

24 дня

10

Стандартный

Ø40

[Другой] 100–240 В переменного тока

2

Красный

Зеленый

–

–

–

Светодиодный

[Крепление на столб]

Н / Д

Освещение

CE / UL / CUL

Совместимость с открытым коллектором (NPN)

–

Не совсем белый

IP65

ABS & AS

Цветной глобус

–

125.30 €

24 дня

10

Стандартный

Ø40

[Другой] 100–240 В перем. Тока

2

Красный

Желтый

–

–

–

Светодиод

[Крепление на опоре]

Н / Д

Освещение

CE / UL / CUL

Совместимость с открытым коллектором (NPN)

–

Грязно-белый

IP65

ABS & AS

Цветной глобус

–

106.18 €

24 дня

10

Стандартное

Ø40

[Другое] 100–240 В переменного тока

2

Синий

Красный

–

–

–

Светодиод

[Крепление на столбе]

Н / Д

Освещение

CE / UL / CUL

Совместимость с открытым коллектором (NPN)

–

Не совсем белый

IP65

PC

Цветной глобус

–

Can 9000aro1 Меню

• Портфолио
• О компании / Контакт
• Блог
• Соединять
  • Твиттер
  • Behance
  • Instagram
  • Facebook
  • Pinterest

Кибервойна

Кибервойна

Новая линия товаров для ухода за мужчинами

Риск новых лекарств

Пивоварни на солнечных батареях

Rolling Stones Обзорный портрет: Майли Сайрус

Курение марихуаны в офисе

Курение марихуаны в офисе

Политическая сатира: Митт Ромни

Политическая сатира: Криминальное чтиво

Увлажнение перед большой гонкой

Плакат для Британского музея газонокосилок

Съедобные спицы Персонаж

Кибер-издевательства и подростковые самоубийства

Кибервойна

Кибервойна

Новая линия товаров для ухода за мужчинами

Риск новых лекарств

Пивоварни на солнечных батареях

Rolling Stones Обзорный портрет: Майли Сайрус

Курение марихуаны в офисе

Курение марихуаны в офисе

Политическая сатира: Митт Ромни

Политическая сатира: Криминальное чтиво

Увлажнение перед большой гонкой

Плакат для Британского музея газонокосилок

Съедобные спицы Персонаж

Кибер-издевательства и подростковые самоубийства

© Люк Каннароцци, 2014

Бактериофитохром опосредует взаимодействие между светочувствительностью и циклическим Di-GMP второго мессенджера для управления социальным поведением и вирулентностью

Основные моменты

•

BphP – это бактериофитохром батистического типа, участвующий в обнаружении света4 Xanis •

BphP расщепляет вездесущий бактериальный вторичный мессенджер c-di-GMP в ответ на свет

•

BphP регулирует связанные с вирулентностью функции светозависимым образом

•

Светозависимая модуляция c-di-GMP запускает переход от сидячего состояния к подвижному

Резюме

Бактериофитохромы являются наиболее распространенными и повсеместно распространенными светочувствительными рецепторами у бактерий и участвуют в поведении или ответах на время суток.Однако их биологическая и регулирующая роль в нефотосинтезирующих бактериях плохо изучена, и еще меньше известно о том, как они регулируют различные клеточные процессы. Здесь мы показываем, что бактериофитохром ( Xoo BphP) из патогена растений Xanthomonas oryzae pv. oryzae воспринимает световые сигналы и преобразует сигнал через свою EAL-опосредованную активность фосфодиэстеразы, модулируя внутриклеточный уровень повсеместно распространенного бактериального вторичного мессенджера c-di-GMP.Мы обнаружили, что опосредованная светом тонкая настройка внутриклеточных уровней c-di-GMP с помощью Xoo BphP регулирует выработку функций вирулентности, метаболизм железа и переход от сидячего к свободноплавающему подвижному образу жизни, способствуя его заселению хозяин и вирулентность. Xoo BphP, таким образом, играет решающую роль в интеграции светочувствительности с внутриклеточной передачей сигналов для контроля патогенного образа жизни и социального поведения.

Ключевые слова

Бактериофитохром

фото-зондирование

фосфодиэстераза

циклический ди-GMP

вирулентность

подвижность

хемотаксис

статьи

биопленка

биопленка

метаболизм (s).

Рекомендуемые статьи

Ссылки на статьи

h210-PLUS ｜ Материнские платы ｜ ASUS Global

Расширенная защита оборудования

Лучшая в отрасли система 5X Protection II использует лучшие компоненты, отличную схему проектирования и строгие стандарты, чтобы гарантировать качество и долговечность вашей материнской платы со всесторонней защитой.Для вас это означает исключительную защиту и стабильность вашей сборки – результат десятилетий инженерного опыта ведущего мирового производителя материнских плат.

Защита от электростатического разряда

Электростатический разряд (ESD) может произойти внезапно, и его повреждающие эффекты легко недооценить. Защита от электростатических разрядов ASUS протестирована в соответствии с очень высокими стандартами и выдерживает напряжение до +/- 10 кВ для воздушного разряда и +/- 6 кВ для контактного разряда.Мы используем конструкцию активной защитной схемы, чтобы защитить вашу систему от электростатических помех и повреждений, обеспечивая больший срок службы компонентов.

1

Порт LAN

ESD TVS диодная защита в цепи LAN. 2

Разъемы USB

TVS-диоды для поверхностного монтажа и двухрядных корпусов. 3

Разъемы VGA

Дополнительные встроенные диоды ESD TVS для защиты функциональности D-Sub. 4

Разъемы для клавиатуры и мыши

Дополнительные встроенные диоды для подавления переходных процессов напряжения (TVS) от электростатических разрядов.

Автозапчасти и транспортные средства указатель поворота для 2003-2018 Chevy Express GMC Savana со стороны водителя 20772637 Повороты для легковых и грузовых автомобилей

Автозапчасти и транспортные средства указатель поворота для 2003-2018 Chevy Express GMC Savana со стороны водителя 20772637 Сигналы поворота для легковых и грузовых автомобилей

• Главная
• Автозапчасти и транспортные средства
• Автозапчасти и аксессуары
• Запчасти для автомобилей и грузовиков
• Освещение для легковых и грузовых автомобилей И фонари
• Повороты для легковых и грузовых автомобилей
• Указатели поворота для 2003-2018 гг. Chevy Express GMC Savana со стороны водителя 20772637

Для 2003-2018 гг. Chevy Express GMC Savana со стороны водителя 20772637 Указатель поворота, водитель, левый указатель поворота , Подходит для этой парковочной / поворотной сигнальной лампы. Специальное покрытие на поверхности линз предотвращает матовость и выцветание, обеспечивая надлежащее освещение и безопасность эксплуатации. Эксклюзивно онлайн, доставка по всему миру, новые стили каждую неделю, БЕСПЛАТНАЯ ДОСТАВКА ВСЕХ НАШИХ ПРОДУКТОВ! Express GMC Savana со стороны водителя 20772637 Указатель поворота для 2003-2018 Chevy, указатель поворота для 2003-2018 Chevy Express GMC Savana со стороны водителя 20772637.

Страна / регион производства: Тайвань: Развязка Номер детали:: GM2520188. Левый указатель поворота, Тип:: парковочный указатель поворота: Цвет линзы:: Янтарный, Состояние :: Новое: Номер детали производителя:: 20772637. Гарантия:: 1 Год: Другой номер детали:: 18-5970-01B, гарантируя надлежащее освещение и эксплуатационная безопасность. Подходит для этой парковочной сигнальной лампы. Специальное покрытие на поверхности линз предотвращает появление матовости и выцветания. Указатель поворота для 2003-2018 Chevy Express GMC Savana со стороны водителя 20772637, водитель, слева, Сертификаты:: DOT, SAE: Размещение на транспортном средстве:: Сторона водителя, Тип установки:: Прямая замена: Бренд:: DEPO, Front.

Указатель поворота для 2003-2018 Chevy Express GMC Savana со стороны водителя 20772637

указатель поворота для 2003-2018 Chevy Express GMC Savana со стороны водителя 20772637

Наш широкий выбор предлагает бесплатную доставку и бесплатный возврат. Эта Race Hat обеспечивает превосходную посадку, что делает ее самой удобной и эффективной беговой шапкой, которую вы когда-либо носили. Купить Зимняя куртка Пальто Повседневная ветровка Куртки Мужская парка Хип-хоп Теплые пальто из овечьей шерсти Мужчина.Пожалуйста, дважды проверьте измерения продукта перед заказом, чтобы обеспечить точную подгонку, наслаждайтесь временем этих повседневных рубашек в своей повседневной жизни. Если у вас есть какие-либо проблемы с нашими продуктами, обратите внимание: разница в 2-3% в соответствии с ручным измерением, избегайте грубого обращения со всеми драгоценными камнями и органическими веществами, номер модели: Jewels-AZ6205-RGPSS. контрастная строчка на верхней части и износостойкая резиновая подошва. Инструкции по стирке: не использовать отбеливатель. Ford E-50 Econoline Super Duty – V8 5. Указатель поворота для 2003-2018 Chevy Express GMC Savana со стороны водителя 20772637 . MECHCOS Совместимость с приспособлением для Chevrolet Camaro Cruze Equinox Impala Malibu SS Sonic Buick Encore Lacrosse Regal Verano GMC Terrain Черная кожаная крышка держателя брелка с дистанционным управлением Чехол Fob. Модель Funny Chef Wear: Home Improvement из цельной древесины с просверленными отверстиями для удобного настенного монтажа. Зажимная ручка ALHA-8 Зажимная ручка со шпилькой – -. Мировой лидер в производстве режущего инструмента, соответствующего строению человеческой головы.разгладьте его и измерьте с помощью рулетки прямо поперек. ВНИМАНИЕ: это брендовый товар. Наш широкий выбор предлагает бесплатную доставку и бесплатный возврат. ** Защищенные от ультрафиолета и воды на долгие годы, все кольца будут включать в себя бесплатную коробку для колец и гарантийный талон. Снимайте и наклеивайте столько раз, сколько захотите. Указатель поворота для 2003-2018 Chevy Express GMC Savana со стороны водителя 20772637 , купите два тонированных зажима для галстука в виде рыбьей кости и другие зажимы для галстука по адресу. промышленный блок управления и корпус камеры.Пожалуйста, обращайтесь в Roy Rose Jewelry для получения дополнительной информации о настройке. так что бесперебойная работа оборудования. 18-дюймовое колье с родиевым покрытием, бусинами из светлого сапфира диаметром 6 мм и подвеской Saint Sebastian / Rodeo. Покупайте женские кроссовки PUMA Ignite Flash Geo и другие модные кроссовки на. В комплекте босоножки из прозрачного мюла с открытым носком, подходят к любому случаю и любому стилю одежды. Купите вешалку для кошелька «Будка поцелуев» с брелком и другими вешалками для сумочек в «Уникальный день матери / день рождения / рождественский подарок для мам-собак».Сделано вручную в США – произведено в Vero Beach и отправляется из него. Номер модели: SE211332CURB16. Указатель поворота для 2003-2018 Chevy Express GMC Savana со стороны водителя 20772637 . Нескользящая резиновая подошва имеет специальное сцепление, которое удерживает вас на ногах на скользком полу. Отличная идея подарка для 6-летнего мальчика / девочки: серьги с синей хрустальной звездой и луной с кисточкой изготовлены из настоящего серебра 925 пробы. Регулируемая застежка на спине: используйте удобную застежку на спине, чтобы индивидуально подогнать бейсболку к голове и обеспечить максимальный комфорт и надежную посадку в любое время. Вы можете использовать фен для нагрева наклейки. Каждый комплект тормозной линии Yana Shiki собран в – корпус от фитингов из нержавеющей стали высшего качества, обжатых непосредственно до жестко вытянутого гибкого шланга с оплеткой из нержавеющей стали.Беруши с лентой QB1HYG от производителя – отличное решение для тех, кто работает в условиях прерывистого шума, чая и детских смесей; обслуживает гостей. Accuform Signs RAT221J Маркер для аммиачных труб Cling-Tite Iiar, покупка SKL Home от компании Saturday Knight Ltd, передовые технологии и экологически чистый материал с безопасным производственным процессом для здорового использования. Нескользящие салфетки 18×12 дюймов, Указатель поворота Для 2003-2018 Chevy Express GMC Savana со стороны водителя 20772637 , но все же легко управляемы без процесса выравнивания.Наши радужные вечеринки с единорогом включают воздушные шары С Днем Рождения с милым лицом единорога для вечеринки.

Здесь, в Mission Road Electrical, репутация имеет значение. Взгляните на наши независимые проверенные обзоры на Checkatrade и Facebook.

MissionRoadElectrical

9 Mission Rd, Broadstone Bh28 8JJ, Великобритания

Позвоните нам

Режиссер – Роберт Бест 01202283643

Напишите нам

info @ missionroad.co.uk

указатель поворота для 2003-2018 Chevy Express GMC Savana со стороны водителя 20772637

2012-2014 MV AGUSTA F3 675 F3 675 SERIE ORO EBC HH ЗАДНИЕ ТОРМОЗНЫЕ КОЛОДКИ. GM 173 PT2203 Подлинный OEM-разъем для жгута проводов IAC с регулировкой холостого хода. Подлинный бампер Ford 7C3Z-4730-A, опора двигателя и комплект опор Auto Trans 6PCS для DODGE W150 V6 3.9L 239cid 1989-1993 годов, OLDSMOBILE BLACK ВЫСОКОПРОИЗВОДИТЕЛЬНЫЙ МЕХАНИЧЕСКИЙ ТОПЛИВНЫЙ НАСОС 350,403,400,425,455. Пара заднего бампера, отражатель, лампа, световая линза для Mitsubishi Pajero V97 V98 2007-15, для Honda CR / F Early 92-03 RFX Sport Series Silver Clutch Lever, 2x T10 194 168 Wedge Inverted LED Parkers Dash Bulb Red.Комплект уплотнений для шариковых подшипников заднего колеса подходит для YAMAHA BIG BEAR 350 YFM350 2WD 1996-1999. Dodge Ram Truck Cummins Diesel Computer ECM Ремонт и возврат ЭБУ. 2шт 4-ДЮЙМОВЫЙ 18W CREE LED РАБОЧИЙ ФОНАРЬ ДВИГАТЕЛЬ ВНЕДОРОЖНИК ВНЕДОРОЖНИК ATV UTE JEEP TRUCK. Метрические мелкие Mf M 20 x 1,5 20 мм Ручные метчики Серийная форма HSS-E Деталь Кобальт. 37-3925 / 6 37-3875 / 4018 Пара тормозных колодок New Triumph или BSA с конической втулкой, комплект противотуманных фар Rugged Ridge, круглые 6 дюймов, 100 Вт для Jeep Wrangler CJ YJ TJ JK.

указатель поворота для 2003-2018 Chevy Express GMC Savana со стороны водителя 20772637

missionroad.co.uk Driver, левый указатель поворота, эта лампа указателя поворота / парковки подходит для специального покрытия поверхности линз, предотвращающего помутнение и выцветание, обеспечивая надлежащее освещение и безопасность эксплуатации, эксклюзивно онлайн, доставка по всему миру, новые стили каждую неделю, БЕСПЛАТНАЯ ДОСТАВКА ВСЕ НАШИ ПРОДУКТЫ!

Структурные исследования распознавания груза дрожжевым рецептором PTS1

Восстановление комплекса Pcs60p-Pex5p in vitro

Pcs60p представляет собой пероксисомальную оксалил-КоА-синтетазу, которая принадлежит к семейству AMP-связывающих белков и связана с просветной стороной пероксисомальная мембрана (23, 44).В соответствии с внутрипероксисомной локализацией, Pcs60p содержит консенсусную последовательность для PTS1 на своем крайнем С-конце (23). Было продемонстрировано, что PTS1 имеет решающее значение для пероксисомного нацеливания на Pcs60p и, таким образом, предполагается, что он связывает рецептор PTS1 Pex5p.

Исследования связывания in vitro были выполнены для понимания способа взаимодействия между Pcs60p и рецептором импорта PTS1 Pex5p. С этой целью Pex5p был слит с N-концевой гексагистидильной меткой (His ₆ ), а Pcs60p был украшен N-концевой меткой GST и сайтом расщепления тромбином между меткой и белком.Гены, кодирующие два слитых белка, экспрессировались отдельно в E. coli, , и растворимые фракции подвергали очистке белков с помощью аффинной хроматографии. С этой целью His ₆ -Pex5p был связан с никель-NTA-агарозой и элюирован градиентом имидазола ( A , верхняя панель ). GST-Pcs60p был связан с глутатион-агарозой и протеолитически высвобождался из домена GST путем расщепления тромбином ( A , нижняя панель ).Экспрессию и очистку обоих белков анализировали с помощью SDS-PAGE и окрашивания Кумасси. Анализ показал, что оба белка были очищены до очевидной гомогенности с выходом ~ 4 мг и 2,4 мг / г клеток для His ₆ -Pex5p и Pcs60p, соответственно.

Образование рекомбинантного комплекса His ₆ -Pex5p · Pcs60p. A, профиль очистки рекомбинантного His _6, -Pex5p (, верхняя панель, ) и GST-Pcs60p (, нижняя панель, ) с помощью аффинной хроматографии.Показанные белковые профили получены из равных частей клеток до индукции ( T ₀ ) и клеток, индуцированных изопропил-1-тио-β-d-галактопиранозидом ( T ₄ ). Образцы гомогената ( H ), осадка ( P ) и супернатанта ( S ) после дифференциального центрифугирования, промывная фракция ( W ) и полученные фракции после элюирования связанных белков из никелевых частиц. Колонку с NTA-агарозой или GSH-агарозой с возрастающими концентрациями имидазола ( E1 – E21 , как для His ₆ -Pex5p) или расщепление тромбином ( E для Pcs60p) подвергали SDS-PAGE и окрашивали кумасси синим.По сравнению с исходным материалом загруженные элюаты His ₆ -Pex5p и Pcs60p были сконцентрированы в 70 или 50 раз соответственно. B, эксклюзионная хроматография рекомбинантного His ₆ -Pex5p · Pcs60p комплекса. Показаны профили абсорбции, полученные с помощью программного обеспечения Unicorn (GE Healthcare) и гелей, окрашенных кумасси. Как указано, рекомбинантный Pcs60p, His ₆ -Pex5p или предварительно образованный комплекс обоих подвергали эксклюзионной хроматографии (Superose 6 10/300 GL).Фракции собирали и анализировали с помощью SDS-PAGE и окрашивания Кумасси. Его ₆ -Pex5p достигал максимума при размере ~ 160 кДа, а Pcs60p – при 160 и 40 кДа, что указывает на то, что он образует олигомер и мономер. Комбинированные и предварительно инкубированные белки образуют комплекс с максимальным размером ~ 440 кДа при соотношении Pcs60p и Pex5p 1: 1. Указаны маркеры молекулярной массы.

Для оценки олигомерного состояния рекомбинантных белков Pex5p и Pcs60p индивидуально подвергали SEC. Полученные фракции колонки разделяли на SDS-PAGE, и белки визуализировали окрашиванием Кумасси ( B , нижняя панель ).Pex5p имеет пики, соответствующие размеру ~ 160 кДа. Анализ фракции пика методом многоуглового светорассеяния показал молекулярную массу 79 кДа (). Таким образом, мономерный Pex5p демонстрирует более высокую подвижность, как и ожидалось для белка массой 69 кДа (45). SEC Pcs60p выявил два пика при 160 и 40 кДа ( B ). Таким образом, расчетная подвижность пика 40 кДа близка к расчетному размеру 60 кДа для мономерного Pcs60p (23), а второй пик представляет собой димер или тример белка.Этот вывод был подтвержден рассеянием света, выявившим 85 кДа для первого и 181 кДа для второго пика (). Дальнейшие анализы, включая ITC, SPR и малоугловое рассеяние рентгеновских лучей, подтвердили тенденцию Pcs60p к олигомеризации при более высоких концентрациях белка (данные не показаны). Для анализа образования комплекса Pex5p · Pcs60p оба белка инкубировали вместе в определенных количествах в течение 1 ч на льду. Впоследствии образцы подвергали SEC и анализировали с помощью SDS-PAGE. По сравнению с отдельными белками, Pcs60p и Pex5p вместе демонстрируют явный сдвиг подвижности до фракций примерно 440 кДа ( B , SEC ) или 384 кДа (многоугловое рассеяние света), показывая образование гетеромерного комплекса.Измерение интенсивности сигнала фракции пика выявило соотношение груза и рецептора ~ 1: 1 ( B ).

ТАБЛИЦА 3

Оценка молекулярных масс отдельных и комплексных белков с помощью многоуглового светорассеяния

Рекомбинантный Pcs60p, His ₆ -Pex5p или предварительно сформированный комплекс обоих подвергали эксклюзионной хроматографии (Superose 6 30 / 100 GL, GE Healthcare, Мюнхен, Германия) с последующим многоугловым рассеянием света (MALS) (MiniDawn Treos, Wyatt, Dernbach, Германия).

0000 937

000000000 ± 0,2%

2 из домена TPR7 Pex5p на основе его точной массы предшественника, наблюдаемой в MS1. спектр ( A , верхний левый график ) и совпадения масс фрагментов в спектре MS2 ( A , нижний график ).В результате этого анализа сайт перекрестной связи был сопоставлен с Met-536 ( A , верхняя правая схема ). Кроме того, Met-536 был также идентифицирован как сайт перекрестного связывания для вариантов Pcs60p, несущих p Bpa в положениях Ser-537, Arg-538, Asn-539 и N539ΔSKL, тогда как только p Bpa в положении Ser-541 сшитый с Val-533 Pex5p ( B ). Полученные данные МС с поперечными связями суммированы и проиллюстрированы на.

Идентификация основного сайта-мишени фото-перекрестного связывания в Pex5p с помощью масс-спектрометрии высокого разрешения. A, MS ( верхняя левая панель, ) и спектр MS / MS ( нижняя панель ) фото-сшитой пары пептидов, образованной между вариантом Pcs60p Asn-539 и Pex5p. Фрагментные ионы (y- и b-ионы, y _o и b _o указывают на нейтральную потерю H ₂ O), образованные в результате диссоциации, вызванной столкновением, подтверждают последовательности сшитой пары пептидов (, верхняя правая панель ). B, идентификация сайта-мишени в основном пептиде Pex5p, с которым был связан фотоактивированный p Bpa.Вычисленное значение p совпадения пептидного спектра показано как функция остатка, идентифицированного как сшитый. Данные приведены для Pcs60p-варианта Ser-537 ( зеленых ромбов, ), Arg-538 ( голубых квадратов, ), Asn-539 ( темно-синих треугольников вверх ), N539ΔSKL ( розовых треугольников вниз ), как а также Сер-541 ( красных кружков ).

ТАБЛИЦА 4

Сайты перекрестного сшивания, идентифицированные масс-спектрометрией

Варианты Pcs60p инкубировали с His ₆ -Pex5p или His ₆ -Pex5p-M536A и обрабатывали УФ-облучением.Белки разделяли с помощью SDS-PAGE и визуализировали окрашиванием Кумасси (). Продукты поперечного сшивания вырезали из геля с последующим расщеплением в геле трипсином и масс-спектрометрическим анализом. Связанные пептиды Pcs60p с Pex5p / Pex5p-M536A обозначены целевыми остатками, подчеркнутыми. Окисленный метионин обозначен звездочкой, U означает pBpa. Сшивающие пептиды локализованы в доменах TPR 6 и 7 и в петле 7C Pex5p. Подробная локализация областей взаимодействия показана на и.ND означает не обнаруживаемый.

Белок	Масса	Молекулярная масса, рассчитанная с помощью MALS	Олигомеризация
Pcs60p	60 кДа	85 кДа30005000 937 935 935 937 0	Димер / тример
Pex5p	69 кДа	79 кДа ± 0,2%	Мономер
Pex5p / Pcs60p		82 кДа.2%	Pcs60p
		135 кДа ± 0,4%	Несвязанные Pex5p и Pcs60p
		384 kDaome ± 2%	r специфическое перекрестное связывание in vitro комплекса Pex5p · Pcs60p Для анализа сайтов контакта между рецептором PTS1 Pex5p и его грузом Pcs60p мы применили сайт-специфическое перекрестное связывание in vitro (46). В частности, мы генетически включили фото-перекрестно-сшивающую аминокислоту p Bpa в рекомбинантный Pcs60p. p Включение Bpa происходит в положении янтарного кодона TAG с использованием ортогональной пары тРНК / аминоацил-тРНК синтетазы. Белки, содержащие p, Bpa, эффективно образуют стабильные комплексы со своими партнерами при УФ-облучении (46, 47). Чтобы подготовить Pcs60p в качестве подходящей мишени для этого подхода, мы сначала мутировали нативный кодон TAG Pcs60p в TAA посредством сайт-направленного мутагенеза, чтобы предотвратить считывание стоп-кодона и нежелательное включение p Bpa в это положение белка. ().Затем триплеты оснований, кодирующие C-концевые аминокислотные остатки 536–543 Pcs60p, были индивидуально заменены на янтарные кодоны (TAG,). Таким образом, перекрестное связывание p Bpa было введено в C-концевой PTS1 Pcs60p и в области в непосредственной близости от PTS1. Варианты Pcs60p для исследований сшивания. Схема Pcs60p дикого типа и кодирующей последовательности с акцентом на C-концевую область, содержащую PTS1. Варианты Pcs60p, используемые в этом исследовании, показаны с их 3′-кодирующей областью (пары оснований) и выведенной аминокислотной последовательностью (аминокислоты).Введенные кодоны TAG amber , которые допускают включение p Bpa, подчеркнуты . Звездочки указывают положение p, Bpa на уровне белка. Экспрессию вариантов Pcs60p проводили в присутствии эволюционировавшей пары тРНК / аминоацил-тРНК синтетазы Methanococcus jannaschii , 2% арабинозы и 1 мМ p Bpa в штамме E. coli BL21 (DE3). Pcs60p дикого типа и мутантный белок Pcs60p экспрессировали как слитые белки GST и выделяли с помощью аффинной хроматографии на глутатион-агарозе с расщеплением тромбином.Анализ SDS-PAGE не показал различий между очищенным мутантом амбер Pcs60p и белком дикого типа ( A , верхняя левая панель ). In vitro фото-сшивание Pcs60p и His 6 -Pex5p, а также His 6 -Pex5p-M536A. A, очищенных рекомбинантных вариантов Pcs60p подвергали УФ-облучению в отсутствие ( левая панель, ) или в присутствии ( правая панель ) очищенных эквимолярных количеств His 6 -Pex5p.Образцы отбирали до (0 мин) и 60 мин после УФ-обработки и подвергали SDS-PAGE. Белки визуализировали окрашиванием Кумасси. Указаны сшивающие продукты Pex5p / Pcs60p ( шт, комплекс ). B, проверка полученных полос перекрестного сшивания с помощью иммуноблот-анализа с использованием специфической антисыворотки против Pex5p и Pcs60p. C, очищенный рекомбинантный His 6 -Pex5p-M536A подвергали УФ-облучению в отсутствие ( левая панель ) или в присутствии ( правая панель ) очищенных эквимолярных количеств вариантов Pcs60p.Образцы отбирали до (0 мин) и 60 мин после УФ-облучения и подвергали SDS-PAGE. Белки визуализировали окрашиванием Кумасси. Указаны сшивающие продукты Pex5p-M536A / Pcs60p ( шт, комплекс ). Выделенные варианты Pcs60p инкубировали с очищенным рекомбинантным His 6 -меченным Pex5p и подвергали УФ-облучению в течение 0 минут в качестве отрицательного контроля или в течение 60 минут. После УФ-обработки ни варианты Pcs60p дикого типа, ни мутировавшие варианты Pcs60p не проявляли значительных изменений подвижности в отсутствие Pex5p, что указывает на то, что белки не образуют внутримолекулярных поперечных связей ( A , нижняя левая панель ).Напротив, продукты сшивания образовывались, когда Pcs60p инкубировали с Pex5p. Предшествующая УФ-обработка как для Pex5p, так и для Pcs60p проявлялась в виде отдельных полос примерно 70 и 60 кДа, соответственно ( A , верхняя правая панель ). Дополнительная полоса около 130 кДа была обнаружена после УФ-обработки для некоторых вариантов Pcs60p ( A , правая нижняя панель ). Размер 130 кДа хорошо соответствует предполагаемому размеру димера Pex5p и Pcs60p, указывая на то, что эти полосы представляют собой сшитые комплексы рецептор-груз.Это было подтверждено иммуноблот-анализом с использованием специфических антисывороток против Pex5p и Pcs60p ( B ). Таким образом, включение фото-перекрестно-сшивающей аминокислоты p Bpa в определенные положения Pcs60p позволяет эффективно сшивать белок с его рецептором Pex5p при УФ-обработке. В частности, эффективное фото-перекрестное связывание наблюдали, когда p Bpa вводили в положения, смежные с C-концевым PTS1 Pcs60p ( S537, R538, N539 ; A ).Значительное снижение ( S541, A ) или отсутствие ( K542, L543, A ) поперечных сшивок Pex5p / Pcs60p наблюдали, когда эти важные остатки PTS1 были заменены на p Bpa. В этом отношении следует учитывать, что фото-сшивание двух белков требует, чтобы взаимодействующие области проявляли определенную пространственную близость. Однако, если исходный интервал слишком мал, как ожидалось для связывания PTS1, связывание и перекрестное связывание могут быть стерически затруднены.Мы наблюдали, что позиционирование p Bpa в Asn-539 Pcs60p действительно приводило к наиболее эффективному сшиванию с Pex5p. Неожиданно оказалось, что конструкция Pcs60p, лишенная PTS1 на фоне Asn-539 (N539ΔSKL), была сшита с Pex5p в большей степени по сравнению с версией, несущей его PTS1 ( A ). Идентификация контактных площадок Pcs60p / Pex5p Для определения взаимосвязей между Pex5p и его PTS1 грузовой Pcs60p, сшитые продукты вариантов Pcs60p Ser-537, Arg-538, Asn-539, Ser-541 и N539ΔSKL как а также соответствующие полосы мономерных белков были проанализированы масс-спектрометрией (МС).С этой целью полосы вырезали из геля SDS ( A , правая нижняя панель ), и белки подвергали триптическому расщеплению в геле перед анализом MS. A изображает идентификацию сшитого продукта между p Bpa в положении Asn-539 Pcs60p и пептидом 529 YNLAVSSMNIGCFK 93

000 SIGC 9371 9375 9375 9375 9375 9375 9375 9375 9375 9375 9375 937 9375 937500

Пептид Pcs60p		Пептид последовательности Pex5p	Пептид последовательности Pex5p-M536A
Вариант

00 9375 9392 2

ND
R538	SSUNK	529 YNLAVSSMNIGCFK 542	583 RVFIAM * NR 590
	SSUNK	564 GDVGSLLNTYNDTVIETLKR 583	564 GDVGSLLNTYNDTVIETLKR 583
N539	UK	529 YNLAVSSMNIGCFK 542	564 GDVGSLLNTYNDTVIETLKR 583
	UK	583 RVFIAM * NR 590	583 939 10 RVFIAMNR 93 0
S541	UK	93	9 YNLAVSSM * NIGCFK 93
Нет видимой полосы
	UK	N539	Великобритания	93	9 YNLAVSSMNIGCFK 93
(ΔSKL)	Великобритания	93	3 9393 RV10909AM	93	3 9393 RV10909AM	93	3 RV10909 9909
	UK	564 GDVGSLLNTYNDTVIETLKR 93	3

Иллюстрация межлинков Pex5p / Pcs60p. A, схематическое изображение доменной структуры Pex5p дрожжей. С-концевая половина рецептора PTS1 содержит два триплета TPR, TPR-D1 и TPD-D2, которые состоят из TPR1–3 и -5–7, соответственно, и связаны посредством TPR4. На крайнем конце C находится 7C-петля, довольно укороченный и неполный домен TPR. Указаны B, масс-спектрометрическая идентификация пептидов Pex5p, связанных с вариантами Pcs60p. Числа отображают диапазон пептидов, а подчеркнутые символов идентифицируют целевые остатки.

Хотя только один пептид Pex5p, связанный с Pcs60p, был обнаружен для p Bpa мутанта Ser-537, а дополнительные пептиды были идентифицированы для других вариантов Pcs60p. Вариант Arg-538 связывался со вторым пептидом, который является частью 7C-петли и С-концевого спирального пучка ( ⁵⁶⁴ GDVGSLLNTYNDTVIETLKR ⁵⁸³ ) Pex5p. Соответствующая связывающая область содержала Leu-569-Leu-570 или Asp-575-Thr-580. Кроме того, вариант Asn-539 связывается с пептидом первой спирали С-концевого спирального пучка (933 RVFIAMNR 93

0 , сайт-мишень Arg-583), тогда как вариант Ser-541 связан с областью TPR6 ( ⁴⁹⁷ LGASLANSNR ⁵⁰⁶ , целевой сайт Ala-502) (и).Вариант Asn-539, в котором отсутствует C-концевой трипептид SKL, связан с той же областью первой спирали C-концевого спирального пучка (сайты-мишени Arg-583 и Glu-579), что и вариант Asn-539, содержащий PTS1 () .

Интересно, что многие варианты действительно взаимодействовали с Met-536 из TPR7. Постулируемый реакционный радиус для бензофенонов, таких как p Bpa, составляет около 3,1 Å (48), и было предложено проявлять преимущественное сродство к метионину в диапазоне 8–11 аминокислот (49). Действительно, мы наблюдали с помощью измерений ITC и SPR, что сшивающий агент p Bpa усиливает взаимодействие между Pcs60p и Pex5p.Чтобы избежать ложноположительных взаимодействий в нашем исследовании перекрестного связывания, вызванного связыванием p Bpa с метионином, мы создали точечный мутант Pex5p-M536A, в котором метионин был заменен аланином. Эксперименты по сшиванию проводились со всеми вариантами Pcs60p. За исключением Ser-541, который не обнаружил поперечной сшивки, те же результаты, что и для Pex5p дикого типа, были получены с вариантом Pex5p-M536A ( B ). Эти данные позволяют предположить, что нет значительного влияния M536A на сродство p Bpa мутантов Pcs60p к рецепторному белку PTS1 Pex5p.Анализ сайтов взаимодействия с помощью измерений MS показал, что, за исключением пептида ⁵²⁹ YNLAVSSMNIGCFK ⁵⁴² , все поперечные связи по существу остались неизменными ().

На основе данных комбинированного подхода фото-кросслинкинга и МС была создана модель нагруженного грузом рецептора PTS1 (). В качестве отправной точки были взяты известные трехмерные структуры Pex5p человека и трипаносомы (17, 50), а также известные структуры сигналов PTS1 человеческого SCP2 и AGT в сравнении с пекарскими дрожжами Pcs60p ( A ).Наша модель взаимодействия между C-концевой областью Pcs60p с Pex5p показывает Met-536 из Pex5p в центральном положении внутри полости субстрата и обращен к Arg-538 из Pcs60p на расстоянии Cα 5,8 Å ( B ). Напротив, Ser-541 из Pcs60p расположен в непосредственной близости от Val-533 из Pex5p (расстояние Cα 6,0 Å), который расположен на один виток спирали внутрь полости. Это согласуется с идентификацией перекрестной связи от Ser-541 к Val-533, а не Met-536 (см. B, и).Также важно отметить, что другой метионин (Met-588) расположен на расстоянии ~ 1,5 витка спирали от Arg-583 Pex5p, который составляет основной сайт-мишень перекрестного связывания в мутанте M536A. Met-588 не сшивается с фотоактивированным p Bpa, что согласуется с моделью. Ориентация и основной способ связывания пептида Pcs60p аналогичны таковым для других известных мотивов PTS1 ( B ).

Модель Sc Pex5p, взаимодействующего с его грузовым белком PTS1 Pcs60p. A, модель Sc Pex5p (301–612). Области трех пептидов Pex5p, идентифицированные в экспериментах по сшиванию ( cf ), выделены фиолетовым, синим, и голубым цветом. B, модель гомологии С-концевой части Pcs60p, связанной с Pex5p. Сайты контактных остатков Pcs60p ( подчеркнуты, в A ) на трех пептидах Pex5p выделены красным цветом . Для метионина в положении 536 также показана боковая цепь.Остатки Pcs60p, которые были положительными в экспериментах по фото-перекрестному связыванию in vitro , выделены оранжевым цветом и помечены. Asn-539 от Pcs60p, который обеспечил самый сильный сигнал взаимодействия, окрашен в голубой цвет . Остальные остатки Pcs60p показаны в зеленом .

Анализ равновесных связывающих свойств Pex5p, взаимодействующих с Pcs60p дикого типа и мутантом Pcs60pΔSKL

Для более подробного анализа взаимодействия Pex5p с грузовым белком Pcs60p были выполнены измерения ITC.С этой целью Pex5p, Pcs60p и Pcs60pΔSKL очищали, как описано выше, и диализовали против буфера HEPES, фильтровали и дегазировали. Рецептор Pex5p использовали в качестве образца, а Pcs60p дикого типа и мутантную форму в качестве лиганда для титрования.

Данные ITC показывают, что Pex5p связывается с Pcs60p дикого типа с константой равновесной диссоциации ( K _D ) 0,19 мкм ( A ), что свидетельствует о высокой аффинности связывания. Таким образом, аффинность связывания дрожжевого Pex5p с его грузом PTS1 Pcs60p находится в том же диапазоне, что и у Pex5p человека с последовательностями PTS1 его карго-пипеколиновой кислоты оксидазы (240 нм) или ацил-CoA оксидазы 2 (257 нм) (51 ).После удаления сигнала PTS1 усеченный Pcs60p все еще взаимодействовал с Pex5p с рассчитанным K _D 7,7 мкм ( B ).

ITC-анализ Pex5p, взаимодействующего с Pcs60p дикого типа ( A ) и Pcs60pΔSKL ( B ). Измерения ITC проводили в буфере, содержащем 50 мМ HEPES, 300 мМ NaCl при 25 ° C на MicroCal VP-ITC с полноразмерным Pex5p 41–42 мкм в качестве образца и 340–400 мкм Pcs60p и 20–4 дикого типа. 30 мкм полноразмерный Pex5p и 300–622 мкм Pcs60pΔSKL, соответственно.Верхние панели представляют собой термограмму, показывающую количество тепла, выделяемого после каждой инъекции объема 10 мкл. Нижние панели представляют теплоту реакции на впрыск как функцию отношения груз / Pex5p.

Анализ взаимодействия Pex5p и Pcs60p с помощью измерений поверхностного плазмонного резонанса

Для более детального анализа кинетики связывания рецептор-груз были выполнены измерения SPR. Меченный His Pex5p был иммобилизован на поверхности сенсорного чипа CM5 или NTA, и были применены Pcs60p дикого типа или мутанты с различными концентрациями ().

Анализ режима связывания His ₆ -Pex5p и Pcs60p и важность сигнальной последовательности Pcs60p с помощью спектроскопии SPR. His-меченный Pex5p был ковалентно иммобилизован на сенсорных чипах NTA, а очищенные Pcs60p и Pcs60pΔSKL применялись в качестве аналита в растворе (последовательные 2-кратные разведения от 2048 до 0,13 нм соответственно). Показаны сенсограммы для Pex5p, взаимодействующего с Pcs60p и Pcs60pΔSKL ( A ), а также Pcs60p и Pcs60pΔ8 ( B ) при равных концентрациях (2048 нм).Полученные кривые связывания оценивали с использованием программного обеспечения BIAevaluation 4.1.1.

Анализируемые варианты включали Pcs60p дикого типа с C-концевым концом K-SSRNK-SKL, белок, лишенный его C-концевого трипептида SKL (Pcs60pΔSKL). Кинетический анализ глобального соответствия был выполнен с использованием программного обеспечения BIAevaluation 4.1.1. Для Pcs60p дикого типа были зарегистрированы два различных события связывания ( A , Pcs60p, левая панель ). При низкой концентрации (0,13–16 нм) был обнаружен сайт связывания с высоким сродством (насыщающийся), что лучше всего объяснялось моделью реакции с двумя состояниями с расчетным K _D из 2.4 нм (, Pcs60p, правая панель ). При более высокой концентрации был обнаружен сайт связывания с низким сродством, который не был насыщаемым, и расчетное значение K _D этого сайта находилось в низком микромолярном диапазоне ( A , Pcs60p, левая панель ). Делеция С-концевого трипептида SKL действительно привела к исчезновению сайта с высоким сродством, и сайт с низким сродством все еще присутствовал, с оценкой K _D около 2 мкм ( A , Pcs60p Δ СКЛ, панель левая ).Делеция С-концевых восьми аминокислот Pcs60p и, таким образом, делеция трипептидной последовательности и прилегающих пяти аминокислот фактически полностью отменяет связывание Pcs60p с Pex5p. Сравнение Pcs60p дикого типа и мутанта Pcs60pΔ8 показано в B . Этот результат указывает на существование двух сайтов связывания, сайта с высоким сродством, включающего трипептид SKL, и сайта с низким сродством, который зависит от пяти соседних аминокислот. Взаимодействие этих сайтов связывания может способствовать равновесию K _D 190 нм, как определено измерениями ITC.

Для дальнейшей характеристики границы связывания между Pex5p и Pcs60p мы более подробно проанализировали область, прилегающую к трипептиду SKL (). С этой целью С-концевая последовательность дикого типа была модифицирована вставкой дополнительных трех аминокислот перед последовательностью SKL в K-SSRNK-ASA-SKL (вставка Pcs60p) и заменой пяти аминокислот в перед последовательностью SKL к K-AAEAE-SKL (замена Pcs60p). Связывающие свойства мутантных вариантов сравнивали с мутантами дикого типа и делеционными мутантами.Полученные кривые связывания оценивали с использованием программы 3.1 BIAevaluation. Наилучшее соответствие для Pcs60p дикого типа, взаимодействующего с Pex5p, было получено с использованием двухвалентного аналита, подтверждающего двухэтапный процесс связывания Pex5p и Pcs60p дикого типа (). Примечательно, что замена пяти аминокислотных остатков, смежных с PTS1 Pcs60p (замена Pcs60p), привела к более низкому сродству связывания ( K _D 2,8 мкм) и указанному взаимодействию 1: 1 с Pex5p. Это подчеркивает важность этой области для взаимодействия Pcs60p и Pex5p.Результат для вставки трех аминокислот перед SKL (вставка Pcs60p) показал дифференцированную картину. Хотя режим взаимодействия не может быть окончательно определен как одновалентный или двухвалентный, эффективное связывание ( K _D 160 нм) все же наблюдалось. Это говорит о том, что пространственное разделение этой области от трипептида SKL не нарушает его распознавание Pex5p. И снова не наблюдали взаимодействия для варианта Pcs60p с делецией крайних восьми С-концевых аминокислотных остатков (Pcs60pΔ8).

Анализ с помощью спектроскопии поверхностного плазмонного резонанса связывающих свойств взаимодействия между His ₆ -Pex5p и Pcs60p дикого типа, Pcs60pΔSKL, заменой Pcs60p, вставкой Pcs60p и Pcs60pΔ8. 0,005 мг / мл His-меченный Pex5p был иммобилизован на поверхности сенсорного чипа CM5 и были применены различные концентрации очищенных Pcs60p, Pcs60pΔSKL, замены Pcs60p, вставки Pcs60p, а также Pcs60pΔ8. Используемые концентрации аналита были следующими: 0, 1, 2, 3, 5, 7, 9 и 10 нм для дикого типа и 0, 10, 20, 30, 50, 70, 90 и 100 для варианты Pcs60p.Кривые связывания показаны для Pex5p, взаимодействующего с Pcs60p ( A ), Pcs60pΔSKL ( B ), замещения Pcs60p ( C ), вставки Pcs60p ( D ) и Pcs60pΔ8 ( E ). Полученные кривые связывания оценивали с использованием программного обеспечения BIAevaluation 3.1 (, верхняя панель, ; GE Healthcare). В каждом случае показано наилучшее соответствие, в цвете – кривые переплета, а в черном цвете – соответствие. Панели Средний ( 1 к 1 Ленгмюра ) и нижний ( двухвалентный аналит ) показывают остаточные графики наилучших совпадений, что указывает на близость совпадения к полученным данным.

Исследования локализации Pcs60p in vivo

Чтобы оценить влияние изменений сигнальной последовательности на пероксисомное нацеливание Pcs60p (), закодированные плазмидой варианты Pcs60p были исследованы в мутантном штамме Δ pcs60 (). Различные штаммы, включая нетрансформированный дикий тип в качестве положительного контроля, выращивали на олеиновой кислоте. ПНС получали и подвергали субклеточному фракционированию, в результате чего получали органелларный осадок, обогащенный пероксисомами и митохондриями, и супернатант, обогащенный цитозольными белками.По данным иммуноблоттинга, Pcs60p дикого типа преимущественно обнаруживался во фракции осадка ( A ). Делеция C-концевого SKL (Pcs60pΔSKL) приводит к четкой цитозольной неправильной локализации Pcs60p, демонстрируя хорошо известную потребность в C-концевом трипептиде для правильной пероксисомальной локализации. Замена пяти аминокислот, смежных с SKL (замена Pcs60p), также устраняет пероксисомное нацеливание на Pcs60p, тем самым подчеркивая важность также этой области для пероксисомного нацеливания.Этот результат согласуется с пониженным сродством этого варианта к Pex5p ( C ). В соответствии с исследованиями связывания in vitro , вставка аминокислоты между C-концевым SKL и прилегающей областью (вставка Pcs60p) по-прежнему эффективно нацелена на Pcs60p в пероксисомы.

Анализ пероксисомного импорта вариантов Pcs60p путем фракционирования клеток и анализа протеазной защиты. Плазмиды, кодирующие указанные варианты Pcs60p, экспрессировались в клетках Δ pcs60 .Клетки дикого типа и Δ pcs60 , трансформированные Pcs60p дикого типа, служили контролем. A, тест на пероксисомное нацеливание вариантов Pcs60p с помощью дифференциального центрифугирования. Цитозольные белки в супернатанте и белки, связанные с органеллярными осадками, анализировали с помощью иммуноблоттинга. Митохондриальный порин и цитозольная фруктозо-1,6-бисфосфатаза ( Fbp1p ) служили контролем для правильного разделения. Т , всего; S , супернатант; П , гранулы. B, анализ пероксисомного импорта вариантов Pcs60p с помощью анализа протеазной защиты. Постнуклеарные супернатанты указанных штаммов дрожжей инкубировали с протеиназой К в отсутствие или в присутствии Triton X-100, и образцы анализировали в указанные моменты времени с помощью иммуноблоттинга.

Чтобы определить, является ли осажденный Pcs60p не только нацеленным на пероксисомы, но и действительно ли он перемещается через мембрану, мы проанализировали его доступность для экзогенно добавленной протеиназы К в анализе протеазной защиты ( B ).Соответственно, PNS инкубировали с протеиназой K в отсутствие и в присутствии детергента, а образцы подвергали SDS-PAGE и иммуноблот-анализу в различные моменты времени. Pcs60p дикого типа, а также Pcs60p, несущие вставку (вставку Pcs60p), не разлагались в отсутствие детергента, что указывает на его локализацию в пероксисомном матриксе и, таким образом, на защиту мембраной. Соответственно, оба белка разлагались только в присутствии детергента, который нарушает целостность мембраны ( B ).Небольшое осажденное количество варианта, лишенного С-концевого трипептида (Pcs60pΔSKL), а также варианта с заменой (замена Pcs60p) не были защищены от протеазы, что указывает на то, что они не были импортированы в пероксисомы. Результаты подтверждают потребность как в C-концевом SKL, так и в прилегающей к нему области для правильного пероксисомного импорта Pcs60p.

Жизненно важная роль магнитокристаллической анизотропии в кубических хиральных скирмионах

Магнитокристаллическая анизотропия

На рисунке 2 представлена ​​температурная зависимость, определенная из угловой зависимости ФМР параметров кубической анизотропии для всех четырех соединений, как подробно описано в Методах.Как правило, энергия анизотропии уменьшается с повышением температуры и плавно обращается в нуль около температуры Кюри, за исключением Co ₁₀ Zn ₁₀ , где температурная зависимость более сложная. Важно отметить, что температурная зависимость плотности энергии анизотропии определяется двумя факторами: температурной зависимостью голых микроскопических анизотропий, возникающих из-за спин-орбитальной связи, и температурной зависимостью упорядоченного магнитного момента.Поскольку последний насыщен этими соединениями, как правило, ниже 0,6–0,8 T _C , при более низких температурах изменения K ₁ и K ₂ определяются изменением голых констант анизотропии.

Рис. 2: Константы анизотропии и длина модуляции.

Температурная зависимость констант кубической анизотропии для Co ₁₀ Zn ₁₀ (зеленый), Co ₉ Zn ₉ Mn ₂ (синий), Co ₈ Zn ₈ Mn ₄ (красный) и Co ₇ Zn ₇ Mn ₆ (коричневый).Соответствующие критические температуры порядка Кюри указаны стрелками. Константа анизотропии четвертого порядка K ₁ (левая шкала) обозначена полными символами и сплошными линиями в качестве ориентиров. Обратные значения полной ширины на полувысоте (FWHM) для пиков интенсивности МУРН (правая шкала) показаны пустыми символами, соединенными пунктирными линиями для Co ₁₀ Zn ₁₀ (зеленый) и Co ₈ Zn ₈ Mn ₄ (красный).На вставке показана константа анизотропии шестого порядка K ₂ для Co ₁₀ Zn ₁₀ (зеленый) и Co ₉ Zn ₉ Mn ₂ (синий).

Помимо сильного изменения температуры, анизотропия чувствительна к соотношению Co / Mn и резко усиливается с увеличением содержания Co. При низких температурах Co ₈ Zn ₈ Mn ₄ и Co ₉ Zn ₉ Mn ₂ соответственно характеризуются в ~ 10 и ~ 30 раз большей кубической анизотропией четвертого порядка ( K ₁ ), чем Co ₇ Zn ₇ Mn ₆ .Co ₁₀ Zn ₁₀ , однако, не следует этой тенденции, вместо этого член анизотропии K ₁ становится сравнительно небольшим в этом соединении. Увеличение содержания Co также усиливает кубическую анизотропию шестого порядка ( K ₂ ). Уменьшенный χ ^{2 Статистика} показывает, что включение K ₂ не улучшает качество подгонки в Co ₇ Zn ₇ Mn ₆ и Co ₈ Zn ₈ Mn ₄ , с другой стороны, K ₂ сравнимо с K ₁ в Co ₉ Zn ₉ Mn ₂ и даже становится доминирующим термином в Co ₁₀ Zn ₁₀ при низких температурах.В отличие от сильной зависимости анизотропии от состава, намагниченность насыщения на магнитный ион варьируется не более чем на 20% среди четырех соединений. Что касается температурной зависимости анизотропии, Co ₁₀ Zn ₁₀ снова является выбросом: K ₁ приближается к нулю около 250 K, то есть значительно ниже температуры Кюри, где K ₂ срок меняет знак.

Когда состояние FM возникает в кубическом кристалле, предпочтительное направление магнитного момента определяется членами кубической анизотропии, приведенными в формуле.(5), предполагая, что структурное искажение, вызванное магнитным полем, незначительно. Когда K ₁ и K ₂ одновременно положительны и отрицательны, легкие оси представляют собой направления 〈100〉 или 〈111〉 соответственно. Первый соответствует случаю Co ₇ Zn ₇ Mn ₆ и Co ₈ Zn ₈ Mn ₄ , а второй реализуется в Co ₁₀ Zn ₁₀ . Когда они имеют противоположный знак, как в Co ₉ Zn ₉ Mn ₂ , легкие оси определяются их соотношением.Соответственно Co ₇ Zn ₇ Mn ₆ , Co ₈ Zn ₈ Mn ₄ и Co ₉ Zn ₉ Mn ₂ характеризуются легким намагничиванием по осям намагничивания. 〈100〉 направлений при всех температурах, хотя энергия анизотропии значительно уменьшается при приближении к температуре Кюри. В качестве примера на рис.3d, рассчитанный с использованием констант магнитокристаллической анизотропии, полученных из подгонки \ ({H} _ {{\ rm {res}}} (\ phi) \) на рис. 3a. Эта энергетическая поверхность, \ ({\ mathcal {E}} ({\ bf {m}}) \), представляет собой анизотропию FM-состояния или, что эквивалентно, анизотропию, испытываемую отдельным спином.

Рис. 3: Поверхности анизотропии.

Угловая зависимость поля ферромагнитного резонанса, H _{r e s} , в плоскости \ ((1 \ bar {1} 0) \) показана в a для Co _{. 8} Zn ₈ Mn ₄ при 25 K и b и c для Co ₁₀ Zn ₁₀ при 25 и 250 K соответственно.Черные точки – это точки экспериментальных данных, представляющие резонансные поля, подобранные из отдельных спектров, которые были записаны с шагом 5 ^∘ во время вращения магнитного поля в пределах \ ((1 \ bar {1} 0) \) – плоскости, как показано на рис. 6. Красные линии показывают соответствие магнитокристаллической анизотропии с использованием формул. (4) и (5). Погрешность резонансного поля (область серого цвета) оценивается в 5% от ширины линии резонансного пика. d – f отображает поверхность энергии анизотропии ферромагнитного состояния, \ ({\ mathcal {E}} ({\ bf {m}}) \), рассчитанную на основе K ₁ , K ₂ и K ₃ значений, полученных из подгонок на соответствующих панелях выше. g – i показывают зависимость энергии анизотропии спирального состояния от ориентации вектора q , \ ({\ mathcal {E}} ({\ bf {q}}) \), снова рассчитанного с использованием параметры, полученные в соответствующих верхних панелях. Стрелки на панелях d – и указывают оси 〈100〉. В плоскости вращения магнитного поля также показаны серая плоскость \ ((1 \ bar {1} 0) \), оси 〈111〉 и 〈110〉.

Для более сложной магнитной текстуры, такой как спиральный порядок спина, энергия магнитной анизотропии должна оцениваться для всей магнитной элементарной ячейки, т.е.е. суммированием всех спинов за один период спирали. Соответственно, для спирали, где вектор q перпендикулярен плоскости вращения спина, зависимость магнитной энергии от ориентации вектора q , \ ({\ mathcal {E}} ({\ bf {q}}) \), можно получить усреднением энергии анизотропии одиночного спина для всех направлений m в плоскости, перпендикулярной вектору q . (В этом простом подходе мы рассматриваем магнитные модуляции как полностью гармонические спиновые спирали и игнорируем возможные эффекты ангармонизма.) Когда легкие магнитные оси представляют собой направления 〈100〉, как в случае Co ₈ Zn ₈ Mn ₄ , предпочтительные векторы q также указывают вдоль осей 〈100〉. Фактически, формы двух энергетических поверхностей, \ ({\ mathcal {E}} ({\ bf {m}}) \) и \ ({\ mathcal {E}} ({\ bf {q}}) \), довольно похожи, как видно из рис. 3г, ж. Качественно тот же сценарий применим и для Co ₇ Zn ₇ Mn ₆ и Co ₉ Zn ₉ Mn ₂ , хотя более слабая / более сильная анизотропия в первом / последнем случае приводит к более сферической / прямоугольные энергетические поверхности по сравнению с Co ₈ Zn ₈ Mn ₄ .

Напротив, легкие магнитные оси указывают вдоль направлений 〈111〉 в Co ₁₀ Zn ₁₀ при низких температурах, как видно из рис. 3e. Хотя спиральные векторы модуляции также благоприятствуют направлениям 〈111〉, две энергетические поверхности, \ ({\ mathcal {E}} ({\ bf {m}}) \) и \ ({\ mathcal {E}} ({ \ bf {q}}) \), совершенно разные, и q -векторы между осями 〈111〉 и 〈110〉 имеют примерно одинаковую энергию. Только оси 〈100〉 четко выделяются как неблагоприятные направления, что можно проследить на рис.3ч. Более того, с повышением температуры оба члена анизотропии сильно ослабевают, и K ₂ даже меняет знак при ~ 250 К. Следовательно, направления 〈100〉, являющиеся жесткими осями намагничивания при низких температурах, почти становятся легкими осями [Инжир. 3f]. В этом диапазоне температур константа анизотропии восьмого порядка K ₃ ( K ₃ ≈ 23 керг) становится доминирующим членом анизотропии и определяет положение минимумов мелкой энергии в окрестности 〈100〉 топоры.Интересно, что при этих температурах предпочтительные векторы q не указывают ни на одно из направлений высокой симметрии, вместо этого они расположены вокруг окружностей с центром на осях 〈100〉. В этих регионах мексиканская шляпообразная форма \ ({\ mathcal {E}} ({\ bf {q}}) \) можно увидеть на рис. 3i.

Магнитные модуляции и анизотропия

Ниже мы проведем сравнительный анализ данных FMR и SANS, чтобы показать, как изменение кубической анизотропии в зависимости от температуры и состава влияет на магнитные модуляции в этой серии (Co _0.5 Zn _0,5 ) _{20− x} Mn _x соединения. Данные SANS воспроизведены из работ. ^37,54 и повторно проанализированы здесь, чтобы лучше понять угловое распределение векторов q . При низких температурах интенсивность МУРН ограничена направлениями 〈100〉 в Co ₉ Zn ₉ Mn ₂ , Co ₈ Zn ₈ Mn ₄ и Co ₇ Zn ₇ Mn ₆ , i.е., спиральные векторы q благоприятствуют этим направлениям, как показано на изображении SANS на фиг. 4a, записанном в плоскости (001) для Co ₈ Zn ₈ Mn ₄ . Напротив, в интенсивности МУРН Co ₁₀ Zn ₁₀ , отображаемой над плоскостью (110) на рис. 4b, максимумы расположены в направлениях 〈111〉 при низких температурах. (В обоих материалах различие в интенсивности симметрично эквивалентных q -векторов происходит из-за неодинаковой заселенности соответствующих спиральных доменов.)

Рис.4: q – векторная анизотропия.

a Интенсивность SANS Co ₈ Zn ₈ Mn ₄ , зарегистрированных в плоскости (001) при 40 К. и Co ₁₀ Zn ₁₀ в плоскости (110) при b 50 K и c 250 и 410 K. Прямое сравнение зависимости энергии магнитокристаллической анизотропии спирали (черные кривые) и интенсивности МУРН (красные кривые) при вращении в плоскости (100) для Co ₈ Zn ₈ Mn ₄ при 40 K ( d ) и для Co ₁₀ Zn ₁₀ при вращении в плоскости (110) при 50 K ( e ), а также 250 K (штриховая кривая) и 410 K (сплошная кривая) ( f ).На панелях d – f кривые энергии анизотропии представляют собой соответствующие сечения поверхностей энергии анизотропии на рис. 3g – i, в то время как кривые интенсивности SANS, зависящие от угла, получены путем радиального усреднения интенсивностей SANS в панели a – c .

Угловое распределение векторов q становится шире с повышением температуры в обоих материалах, что видно из увеличения полной ширины на полувысоте (FWHM) для максимумов интенсивности МУРН, представленных на рис.2. В то время как в Co ₁₀ Zn ₁₀ , FWHM более чем удваивается (31 ^∘ → 71 ) между 5 и 370 K, но увеличивается только примерно на 20% (23 → 29 ^∘ ) в Co ₈ Zn ₈ Mn ₄ между 50 и 200 К. Фактически, обратная величина FWHM следует температурной зависимости, аналогичной зависимости значений K ₁ . Это показывает, что анизотропия не только выбирает предпочтительную ориентацию векторов q , но также контролирует их разброс вокруг предпочтительных направлений.В дополнение к усиленному ориентационному беспорядку векторов q по направлению к более высоким температурам, в Co ₁₀ Zn ₁₀ между 250 и 410 K, предпочтительные векторы q перемещаются от 〈111〉 к 〈100 〉 Направления, как и ожидалось из-за температурных изменений в \ ({\ mathcal {E}} ({\ bf {q}}) \), которые хорошо прослеживаются на рис. 4c.

Поскольку очевидно, что спиральные q -векторы расположены таким образом, чтобы минимизировать энергию анизотропии, на рис. 4d – f мы непосредственно сравниваем угловую зависимость интенсивности МУРН и \ ({\ mathcal {E}} ({ \ bf {q}}) \).В Co ₈ Zn ₈ Mn ₄ , \ ({\ mathcal {E}} ({\ bf {q}}) \) имеет минимумы по осям 〈100〉, совпадающие с максимумами интенсивности МУРН [ Инжир. 3d]. В Co ₁₀ Zn ₁₀ аналогичное ограничение анизотропией векторов q наблюдается вокруг осей 〈111〉 при низкой температуре, хотя ширина максимумов интенсивности МУРН значительно шире из-за более слабой анизотропии. в этом соединении [рис. 4д]. Обратите внимание, что \ ({\ mathcal {E}} ({\ bf {q}}) \) показывает небольшую зависимость только в диапазоне \ ([1 \ bar {1} \ bar {1}] \) – \ ( [1 \ bar {1} 0] \) – \ ([1 \ bar {1} 1] \).При более высоких температурах эта зависимость становится еще слабее с общим изменением \ ({\ mathcal {E}} ({\ bf {q}}) \) примерно при 250 K. 2 керг ⋅ см ⁻³ , по сравнению с 15 керг см ⁻³ при 50 К. Следовательно, хотя глобальные минимумы расположены вокруг кругов с центрами на осях 〈100〉, как показано на рис. 3i, из-за Из-за слабой анизотропии спиральные q -векторы могут быть закреплены вдоль произвольных направлений, как видно из данных 250 K на рис. 4f. Тесная корреляция между минимумами \ ({\ mathcal {E}} ({\ bf {q}}) \) и максимумами интенсивности МУРН наблюдается при 410 К.

Магнитные модуляции и затухание Гильберта

При температуре Кюри параметр затухания Гильберта α этих соединений находится в диапазоне от 0,04 до 0,05, что типично для ферромагнитного кобальта. При охлаждении α усиливается во всех четырех соединениях; однако сила увеличения сильно зависит от отношения Co / Mn, как видно из рис. 5. В Co ₇ Zn ₇ Mn ₆ оно увеличивается почти втрое, в то время как в Co ₁₀ Zn ₁₀ .Удивительно, но α и длина q -векторов демонстрируют количественно одинаковые тепловые вариации во всех соединениях, за исключением Co ₁₀ Zn ₁₀ : они оба постоянны как в термодинамически стабильной, так и в метастабильной гексагональной фазе SkL. , но демонстрируют внезапный подъем, связанный с переходом от метастабильной гексагональной к квадратной фазе решетки. С другой стороны, α и FWHM векторов q не показывают подобной температурной зависимости.Напротив, температурная зависимость последнего напоминает зависимость K ₁ , как видно на рис. 2 и обсуждалось ранее.

Рис. 5: Магнитная модуляция и затухание.

Сравнение температурной зависимости длины векторов q (левая шкала) и параметра затухания Гильберта α (правая шкала) в метастабильных SkL a Co ₇ Zn ₇ Mn ₆ , b Co ₈ Zn ₈ Mn ₄ , c Co ₉ Zn ₉ Mn ₂ и d Co _{10923 1024.Синие кружки показывают длину вектора q в состояниях SkL, полученные при полевом охлаждении, а красные квадраты – в спиральной фазе, а зелеными треугольниками обозначено α . Зеленая область представляет собой равновесное состояние SkL чуть ниже температуры Кюри (синяя линия). Зеленая заштрихованная область представляет режим, в котором метастабильный SkL сохраняет гексагональную симметрию, в то время как красные и фиолетовые заштрихованные области указывают квадратное и ромбическое состояния SkL, соответственно. Светло-синяя заштрихованная область обозначает фазу спинового стекла (см.также рис.1).}

Поразительно похожие температурные зависимости длины вектора q и затухания Гильберта подразумевают общий микроскопический механизм, лежащий в основе. Возможный сценарий состоит в том, что антиферромагнитные корреляции спинов Mn, развивающиеся в сторону низких температур, ослабляют ферромагнитный обмен ( J ) без значительного влияния на взаимодействие Дзялошинского – Мория ( D ) между спинами Co и, следовательно, увеличивают длину q -векторы согласно ∣ q ∣ ∝ D / J .Это также объясняет, почему увеличение ∣ q ∣ начинается при более низкой температуре в Co ₉ Zn ₉ Mn ₂ с более высоким содержанием Co, чем в Co ₈ Zn ₈ Mn ₄ и Co ₇ Zn ₇ Mn ₆ , несмотря на то, что K ₁ больше в Co ₉ Zn ₉ Mn ₂ , чем в Co ₈ Zn ₈ Mn и Co ₇ Zn ₇ Mn ₆ .На этом изображении низкотемпературное усиление затухания Гилберта определяется статическим или динамическим беспорядком спинов Mn, поскольку спины Co полностью поляризованы по спину в магнитных полях выше 1 Тл, где α было определено из спектров ФМР. Таким образом, наблюдаемое параллельное увеличение ∣ q ∣ и α в сторону низких температур естественным образом можно объяснить подавлением Дж из-за усиления антиферромагнитных корреляций между спинами Mn. Сообщалось, что геометрическое нарушение спинов Mn, занимающих 8 c позиций Вайкоффа при концентрациях Mn выше x = 4, приводит к образованию основного состояния SG ⁶¹ .Падение α обнаруживается ниже начала фазы SG [см. Рис. 5a, b], как это наблюдается в канонических материалах SG ⁶² . Опять же, Co ₁₀ Zn ₁₀ является выбросом, где и α , и ∣ q демонстрируют слабую температурную зависимость без четкой корреляции между ними.