Fu 250 f2: Автосабвуфер FLI FU 250-F2 – купить в Москве, цена 5 500 руб., продано 14 марта 2018 – Аудио и видео

alexxlab | 24.07.1971 | 0 | Разное

Fli fu 250 f2

Инструкции и файлы

Файл	Страниц	Формат	Размер	Действие

13pdf816.04KB

Чтобы ознакомиться с инструкцией выберите файл в списке, который вы хотите скачать, нажмите на кнопку “Загрузить” и вы перейдете на страницу, где необходимо будет ввести код с картинки. При правильном ответе на месте картинки появится кнопка для получения файла.

Если в поле с файлом есть кнопка “Просмотр”, это значит, что можно просмотреть инструкцию онлайн, без необходимости скачивать ее на компьютер.

В случае если материал по вашему не полный или нужна дополнительная информация по этому устройству, например драйвер, дополнительные файлы например, прошивка или микропрограмма, то вы можете задать вопрос модераторм и участникам нашего сообщества, которые постараются оперативно отреагировать на ваш вопрос.

Также вы можете просмотривать инструкции на своем устройстве Android

Caбвуфер aвтoмобильный FLI fu250-f2 Арт.359254 Состoяние: Xорошеe Основныe xapaктeристики: Макcимaльнaя мoщность (Вт): 800, Номинальная мoщнoсть: 300, Aктивный: Да Устрoйcтвo пpошлo прoверку Cпециалистами и полноcтью иcправно! Bозникли дoпoлнительные вoпрocы? – пишите в личныe соoбщeния. Звонитe. Bcё рaсскажем, Всё покажем. Приходите в магазин по адресу: Нижний Новгород, Кораблестроителей пр., 4 Много товаров в нашем АВИТО магазине – Кликайте справа >>> В магазине АВИТО представлен не весь ассортимент, Ещё 20 000 товаров, с выгодой от -30 до -70%. Посетите наш сайт.. ✔ Гарантия ✔ Доставка по РФ Наши услуги: ➡ Рассрочка 0% ➡ ТRАDЕ-IN (обмен) любое Ваше имущество на наше ➡ Скупка 24 часа ➡ Хранение от 0.1% в день ➡ Помощь в реализации – размещайте у нас, быстро продадим за Вас ➡ Сервисный центр Приходите в магазин по адресу: Нижний Новгород, Кораблестроителей пр., 4 ☎ Работаем 24/7 без выходных и праздников.

К сожалению, вы попали на несуществующую веб-страницу.

Не паникуйте! Нет ничего страшного в том, чтобы попасть не на ту страницу веб-сайта.

Для того, чтобы продолжить навигацию по сайту, вам достаточно перейти по одному из пунктов меню.
Если вы не уверены, что делать, пройдите по этой ссылке, чтобы попасть на главную страницу сайта.

Вы будете перенаправлены на главную страницу через 3 секунды.

Fli – Автозвук – OLX.ua

2 300 грн. Договорная Новоград-Волынский Вчера 18:36

Запорожье, Днепровский 22 июль

450 грн. Договорная Хмельницкий 19 июль

1 280 грн. Договорная

Николаев, Ингульский 9 июль

Сварычев 7 июль

Винница, Замостянский 2 июль

Ошибки Viessmann (Висман) | Коды ошибок газовых котлов Viessmann

Код неисправности на дисплее	Поведение установки	Причина неисправности
F.7	Нет приготовления горячей воды	Обрыв датчика температуры емкостного водонагревателя
F.8	Нет приготовления горячей воды	Короткое замыкание датчика температуры емкостного водонагревателя
F.9	Нет приготовления горячей воды	Обрыв датчика температуры горячей воды на выходе
F.10	Нет приготовления горячей воды	Короткое замыкание датчика температуры горячей воды на выходе
F.11	Без приготовления горячей воды или поддержки отопления гелиоустановкой	Обрыв датчика температуры коллектора
F.12	Без приготовления горячей воды или поддержки отопления гелиоустановкой	Короткое замыкание датчика температуры коллектора
F.13	Регулировка по наружной температуре 0 °C.	Обрыв датчика наружной температуры
F.14	Регулировка по наружной температуре 0 °C.	Короткое замыкание датчика наружной температуры
F.15	Без приготовления горячей воды или поддержки отопления гелиоустановкой	Обрыв датчика температуры емкостного водонагревателя
F.16	Без приготовления горячей воды или поддержки отопления гелиоустановкой	Короткое замыкание датчика температуры емкостного водонагревателя
F.29	Регулировка без датчика температуры подачи гидравлического разделителя.	Обрыв датчика гидравлического разделителя
F.30	Регулировка без датчика температуры подачи гидравлического разделителя.	Короткое замыкание датчика гидравлического разделителя
F.37	Горелка блокирована Внутренний насос выключен. Без отопления помещений и приготовления горячей воды	Обрыв датчика температуры давления в установке
F.38	Горелка блокирована Внутренний насос выключен. Без отопления помещений и приготовления горячей воды	Короткое замыкание датчика температуры давления в установке
F.49	Горелка в состоянии неисправности	Обрыв датчика температуры уходящих газов
F.50	Горелка в состоянии неисправности	Короткое замыкание датчика температуры уходящих газов
F.55	Горелка в состоянии неисправности	Обрыв датчика CO
F.56	Горелка в состоянии неисправности	Короткое замыкание датчика CO
F.57	Режим регулирования без влияния помещения	Обрыв датчика температуры помещения
F.58	Режим регулирования без влияния помещения	Короткое замыкание датчика температуры помещения
F.59	Горелка блокирована	Пониженное напряжение электропитания
F.62	Горелка в состоянии неисправности	Сработал защитный ограничитель температуры
F.63	Горелка в состоянии неисправности	Сработал ограничитель температуры уходящих газов.
F.65	Горелка запускается снова.	Сигнал пламени при пуске горелки отсутствует или слишком мал.
F.67	Горелка в состоянии неисправности	Ток ионизации вне допустимого диапазона
F.68	Горелка в состоянии неисправности	Сигнал пламени имеется уже при пуске горелки.
F.69	Горелка в состоянии неисправности	Ток ионизации вне допустимого диапазона
F.70	Горелка в состоянии неисправности	Внутренняя ошибка Висман топочного автомата
F.71	Горелка в состоянии неисправности	Частота вращения вентилятора слишком низкая
F.72	Горелка в состоянии неисправности	Вентилятор не остановился
F.73	Горелка в состоянии неисправности	Внутренние viessmann ошибки связи
F.74	Горелка блокирована. Внутренний насос выключен. Без отопления помещений и приготовления горячей воды.	Давление в установке слишком низкое
F.77	Горелка в состоянии неисправности	Память данных топочного автомата
F.89	Без отопления помещений и приготовления горячей воды	Внутренний насос блокирован
F.91	Функция соответствующего модуля расширения в аварийном режиме	Viessmann ошибки связи электронного модуля DIO
F.92	Функция соответствующего модуля расширения в аварийном режиме	Ошибка Висман связи с электронным модулем ADIO
F.93	Функция соответствующего модуля расширения в аварийном режиме.	Ошибка Висман связи с электронным модулем M2IO
F.94	Без приготовления горячей воды или поддержки отопления гелиоустановкой Подавление догрева не активно.	Ошибка связи с электронным модулем SDIO/ SM1A
F.100	Функция подключенного электронного модуля в аварийном режиме	Ошибка напряжения PlusBus
F.104	В зависимости от конфигурации модуля расширения EM-EA1 (электронный модуль DIO)	Внешний вход сигнала неисправности активен
F.142	Горелка в состоянии неисправности	Ошибка связи блока вентилятора
F.160	Режим регулирования	Нет связи через шину CAN-BUS с подключенными электронными модулями
F.161	Горелка в состоянии неисправности	Ошибка доступа к памяти данных
F.162	Горелка в состоянии неисправности	Пониженное напряжение процессора
F.163	Горелка в состоянии неисправности	Ошибка контрольной суммы доступа к памяти
F.182	Нет приготовления горячей воды	Короткое замыкание датчика температуры ГВ на выходе
F.183	Нет приготовления горячей воды	Обрыв датчика температуры ГВ на выходе
F.184	Горелка в состоянии неисправности	Короткое замыкание датчика температуры подающей магистрали/ защитного ограничителя температуры
F.185	Горелка в состоянии неисправности	Обрыв датчика температуры подающей магистрали/защитного ограничителя температуры
F.299	Неправильное время	Ошибка часов истинного времени
F.342	Горелка в состоянии неисправности	Ошибка связи топочного автомата BCU
F.345	Горелка блокирована	Сработало термореле
F.346	Горелка в состоянии неисправности	Ошибка калибровки ионизационного тока
F.348	Горелка в состоянии неисправности	Модуляционный газовый клапан
F.349	Режим регулирования Горелка работает с ограниченным диапазоном модуляции.	Блок вентилятора не идентифицирует правильно массовый расход воздуха.
F.350	Горелка в состоянии неисправности	Напряжение ионизации вне допустимого диапазона
F.351	Горелка в состоянии неисправности	Ток ионизации вне допустимого диапазона
F.352	Горелка в состоянии неисправности	Превышена предельная концентрация угарного газа внутри прибора
F.353	Горелка блокирована	Недостаточная подача газа, мощность горелки снижена
F.354	Горелка в состоянии неисправности	Модуляционный газовый клапан, допуск вне диапазона
F.355	Горелка в состоянии неисправности	Аналоговый сигнал эталонного контроля: сигнал пламени уже имеется при запуске горелки.
F.357	Горелка в состоянии неисправности	Недостаточная подача газа
F.359	Горелка в состоянии неисправности	Искра розжига отсуттвует
F.361	Горелка в состоянии неисправности	Сигнал пламени при пуске горелки отсутствует или слишком мал.
F.365	Горелка в состоянии неисправности	Несоответствующий обратный сигнал контакта реле газового клапана
F.366	Горелка в состоянии неисправности	Электропитание газового клапана не выключается.
F.367	Горелка в состоянии неисправности	Электропитание газового клапана не выключается.
F.368	Горелка блокирована	Ошибка реле контроля давления газа. Время принудительной вентиляции истекло.
F.369	Горелка в состоянии неисправности	Потеря пламени непосредственно после образования пламени (в течение времени безопасности).
F.370	Горелка в состоянии неисправности	Топливный или модуляционный клапан не закрывается.
F.371	Горелка в состоянии неисправности	Частота вращения вентилятора слишком низкая
F.372	Горелка в состоянии неисправности	Повторная потеря пламени во время калибровки
F.373	Горелка в состоянии неисправности	Слишком низкий уровень отбора тепла во время калибровки Сработало термореле.
F.375	Горелка в состоянии неисправности	Процесс калибровки тока ионизации: калибровка не выполнена. Минимальное значение или критерий прерывания не достигнуты.
F.377	Горелка в состоянии неисправности	Обработка результатов калибровки тока ионизации: условия стабилизации для последующей калибровки не достигнуты
F.378	Горелка в состоянии неисправности	Потеря пламени на этапе стабилизации или в процессе работы
F.380	Горелка в состоянии неисправности	Потеря пламени непосредственно после образования пламени (в течение времени безопасности).
F.381	Горелка в состоянии неисправности	Потеря пламени на этапе стабилизации или в процессе работы
F.382	Горелка в состоянии неисправности	Счетчик ошибок Висман превысил предельное значение
F.383	Горелка в состоянии неисправности	Газовый клапан не закрывается.
F.384	Горелка в состоянии неисправности	Газовый клапан не закрывается
F.385	Горелка в состоянии неисправности	Короткое замыкание сигнала 1 тока ионизации
F.386	Горелка в состоянии неисправности	Обрыв сигнала 1 тока ионизации
F.387	Горелка в состоянии неисправности	Короткое замыкание сигнала 2 тока ионизации
F.388	Горелка в состоянии неисправности	Обрыв сигнала 2 тока ионизации
F.395	Горелка в состоянии неисправности	Короткое замыкание сигнала температуры пламени 1
F.396	Горелка в состоянии неисправности	Обрыв сигнала температуры пламени 1
F.399	Горелка в состоянии неисправности	Короткое замыкание напряжения ионизации, сигнал 1
F.400	Горелка в состоянии неисправности	Обрыв напряжения ионизации, сигнал 1
F.401	Горелка в состоянии неисправности	Короткое замыкание напряжения ионизации, сигнал 2
F.402	Горелка в состоянии неисправности	Обрыв напряжения ионизации, сигнал 2
F.403	Горелка в состоянии неисправности	Короткое замыкание динамического тока ионизации, сигнал 1
F.404	Горелка в состоянии неисправности	Обрыв динамического тока ионизации, сигнал 1
F.405	Горелка в состоянии неисправности	Короткое замыкание динамического тока ионизации, сигнал 2
F.406	Горелка в состоянии неисправности	Обрыв динамического тока ионизации, сигнал 2
F.407	Горелка в состоянии неисправности	Цепь безопасности
F.408	Горелка в состоянии неисправности	Сработал контроль газового клапана, реле 1
F.410	Горелка в состоянии неисправности	Внутренняя ошибка процессора топочного автомата BCU
F.416	Горелка блокирована	Неправильное положение датчика температуры уходящих газов
F.417	Горелка в состоянии неисправности	Короткое замыкание напряжения питания 24 В
F.418	Горелка блокирована	Обрыв напряжения питания 24 В
F.425	Установка в режиме регулирования, балансировка не работает	Синхронизация по времени не выполнена.
F.426	Горелка в состоянии неисправности	Короткое замыкание внешнего сигнала разблокирования
F.427	Горелка в состоянии неисправности	Обрыв внешнего сигнала разблокирования
F.428	Режим регулирования	Короткое замыкание датчика массового расхода воздуха блока вентилятора
F.429	Режим регулирования	Обрыв датчика массового расхода воздуха блока вентилятора
F.430	Стыковка модулей автоматизации невозможна	Ошибка связи шлюза
F.432	Горелка блокируется, если ошибка появляется несколько раз.	Короткое замыкание сигнала частоты вращения вентилятора
F.433	Горелка блокируется, если ошибка появляется несколько раз.	Обрыв сигнала частоты вращения вентилятора
F.436	Режим регулирования	Короткое замыкание датчика объемного расхода
F.437	Режим регулирования	Обрыв датчика объемного расхода
F.440	Горелка блокирована	Короткое замыкание реле давления газа на модуле расширения EM- EA1 (электронный модуль DIO)
F.441	Горелка блокирована	Обрыв реле давления газа на модуле расширения EM-EA1 (электронный модуль DIO)
F.442	Горелка блокирована	Короткое замыкание сигнала заслонки дымохода на модуле расширения EM-EA1 (электронный модуль DIO)
F.443	Горелка блокирована	Обрыв сигнала заслонки дымохода на модуле расширения EM-EA1 (электронный модуль DIO)
F.444	Горелка блокирована	Короткое замыкание сигнала предохранительного клапана сжиженного газа (электромагнитного клапана) на модуле расширения EM-EA1 (электронный модуль DIO)
F.445	Горелка блокирована	Обрыв сигнала предохранительного клапана сжиженного газа (электромагнитного клапана) на модуле расширения EM-EA1 (электронный модуль DIO)
F.446	Горелка в состоянии неисправности	Отклонение показаний датчика температуры подающей магистрали/ защитного ограничителя температуры теплогенератора
F.447	Горелка в состоянии неисправности	Отклонение сигнала напряжения ионизации
F.448	Горелка в состоянии неисправности	Отклонение сигнала тока ионизации
F.449	Горелка в состоянии неисправности	Ошибка контроля времени выполнения программы
F.450	Горелка в состоянии неисправности	Ошибка контроля времени выполнения программы
F.451	Горелка в состоянии неисправности	Ошибка контроля времени выполнения программы
F.452	Горелка в состоянии неисправности	Ошибка контроля времени выполнения программы
F.453	Горелка в состоянии неисправности	Ошибка синхронизации последовательности
F.454	Горелка в состоянии неисправности	Ошибочная версия программного обеспечения
F.455	Горелка в состоянии неисправности	Ошибка контроля логики выполнения программы
F.456	Горелка в состоянии неисправности	Состояние системы при запуске
F.457	Горелка в состоянии неисправности	Вентилятор блокирован
F.458	Горелка блокирована	Внутренняя ошибка
F.461	Горелка в состоянии неисправности	Обратный сигнал заслонки дымохода на входе модуля расширения EM-EA1 (электронный модуль DIO) препятствует запуску горелки.
F.462	Горелка в состоянии неисправности	Предохранительный клапан сжиженного газа (электромагнитный клапан) на модуле расширения EM-EA1 (электронный модуль DIO) не открывается.
F.463	Горелка в состоянии неисправности	Слишком низкий ток ионизации в процессе калибровки
F.464	Горелка в состоянии неисправности	Слишком низкий ток ионизации в процессе калибровки. Разность относительно предыдущего значения недостоверна.
F.467	Горелка в состоянии неисправности	Недостаточная подача газа в процессе калибровки
F.468	Горелка в состоянии неисправности	Слишком высокий ток ионизации в процессе калибровки
F.471	Нет сигнала запроса тепло- генерации	Нет доступа к датчику давления в установке
F.473	Нет сигнала запроса тепло- генерации	Ошибка связи центрального электронного модуля HMU
F.474	Горелка в состоянии неисправности	Ошибка контроля времени выполнения программы
F.517	Режим регулирования, дистанционное управление не работает	Ошибка связи кабельного устройства дистанционного управления Vitotrol
F.527	Горелка блокирована	Обновление параметров ошибочное или неполное
F.528	Горелка блокирована	Базовое программирование ошибочное или неполное
F.530	Функция гелиоустановки ог- раничена	Отсутствуют значения датчиков температуры
F.538	Без поддержки отопления гелиоустановкой	Обрыв датчика температуры в обратной магистрали системы
F.539	Без поддержки отопления гелиоустановкой	Короткое замыкание датчика температуры в обратной магистрали системы
F.540	Горелка в состоянии неисправности	Скопление конденсата в тепловой ячейке
F.542	Смеситель закрывается. Насос отопительного контура работает	Обрыв датчика температуры подающей магистрали отопительного контура 1 со смесителем
F.543	Смеситель закрывается. Насос отопительного контура работает.	Короткое замыкание датчика температуры подающей магистрали отопительного контура 1 со смесителем
F.544	Смеситель закрывается. Насос отопительного контура работает.	Обрыв датчика температуры подающей магистрали отопительного контура 2 со смесителем
F.545	Смеситель закрывается. Насос отопительного контура работает.	Короткое замыкание датчика температуры подающей магистрали отопительного контура 2 со смесителем
F.546	Смеситель закрывается. Насос отопительного контура работает.	Обрыв датчика температуры подающей магистрали отопительного контура 3 со смесителем
F.547	Смеситель закрывается. Насос отопительного контура работает.	Короткое замыкание датчика температуры подающей магистрали отопительного контура 3 со смесителем
F.574	Режим регулирования без влияния помещения	Датчик температуры помещения отопительного контура 1 отсутствует
F.575	Режим регулирования без влияния помещения	Обрыв датчика температуры помещения отопительного контура 1
F.576	Режим регулирования без влияния помещения	Короткое замыкание датчика температуры помещения отопительного контура 1
F.577	Режим регулирования без влияния помещения	Датчик температуры помещения отопительного контура 2 отсутствует
F.578	Режим регулирования без влияния помещения	Обрыв датчика температуры помещения отопительного контура 2
F.579	Режим регулирования без влияния помещения	Короткое замыкание датчика температуры помещения отопительного контура 2
F.580	Режим регулирования без влияния помещения	Датчик температуры помещения отопительного контура 3 отсутствует
F.581	Режим регулирования без влияния помещения	Обрыв датчика температуры помещения отопительного контура 3
F.582	Режим регулирования без влияния помещения	Короткое замыкание датчика температуры помещения отопительного контура 3
F.666	Преднагрев 2-го емкостного водонагревателя и перемешивающий насос гелиоустановки не работают	Обрыв датчика температуры преднагрева воды в контуре ГВС TS3
F.667	Преднагрев 2-го емкостного водонагревателя и перемешивающий насос гелиоустановки не работают	Короткое замыкание датчика температуры преднагрева воды в контуре ГВС TS3
F.668	Преднагрев 2-го емкостного водонагревателя и перемешивающий насос гелиоустановки не работают	Обрыв датчика температуры догрева воды в контуре ГВС TS4
F.669	Преднагрев 2-го емкостного водонагревателя и перемешивающий насос гелиоустановки не работают	Короткое замыкание датчика температуры догрева воды в контуре ГВС TS4
F.670	Без поддержки отопления гелиоустановкой	Обрыв датчика температуры буферной емкости TS3
F.671	Без поддержки отопления гелиоустановкой	Короткое замыкание датчика температуры буферной емкости TS3
F.672	Термостатная функция контроллера гелиоустановки и перемешивающий насос гелиоустановки не работают	Обрыв датчика температуры с термостатной функцией TS3
F.673	Термостатная функция контроллера гелиоустановки и перемешивающий насос гелиоустановки не работают	Короткое замыкание датчика температуры с термостатной функцией TS3
F.682	Горелка в состоянии неисправности	Датчик массового расхода воздуха отсутствует
F.683	Горелка в состоянии неисправности	Датчик массового расхода воздуха неисправен
F.684	Горелка в состоянии неисправности	Предохранитель обратного потока неисправен

Для структуры ниже. F1-250 N, F2-300 N.F3-500N. 10 см L. CW = по часовой стрелке CCW = против часовой стрелки [Выберите горизонтальный …

А) Если F1 = 820 Н, F2 = 650 Н, определить величину …

A) Если F1 = 820 Н, F2 = 650 Н, определите величину Равнодействующая сила. Б) Определите направление равнодействующей силы измеряется против часовой стрелки от положительной оси абсцисс. Б) Определите направление измеренной равнодействующей силы. против часовой стрелки от положительной оси абсцисс.Вопрос дает мне 30 градусов. Кто-нибудь может дать мне шаг пошаговый процесс, как решить этот вопрос?

Две силы, F1 и F2, действуют в точке, как показано на рисунке ….

Две силы, F1 и F2, действуют в точке, как показано на картина. (Рисунок 1) F1 имеет звездную величину 8,00 N и направлен под углом α = 62,0 ∘ над отрицательной осью x в второй квадрант. F2 имеет звездную величину 5,60 Н и направлен на угол β = 52,8 ∘ ниже отрицательной оси x в ThirdA) Каков компонент x Fx результирующего сила? Выразите свой…

Не могли бы вы решить этот вопрос 9 из 9 Предположим, что F1 = 400 N F2 …

Не могли бы вы решить этот вопрос 9 из 9 Предположим, что F1 = 400 N F2 = 200 N 90 ° 150 F3 300N Q Коснитесь изображения, чтобы увеличить. Часть A Определите величину результирующего F, -F1 + F2. Выразите свой ответ тремя значащими цифрами и укажите соответствующие единицы. F ‘= Единицы значения Отправить запрос Ответ Часть B Определите направление результирующей силы F против часовой стрелки от положительной оси r.F1 + F2, измеряется Выразите свой ответ …

Две силы, F1 и F2, действуют в точке, как показано на картинке. (Фигура 1)…

Две силы, F1 и F2, действуют в точке, как показано на картинке. (Рисунок 1) F1 имеет величину 8,40 Н и направлено под углом a = 59,0 °. выше отрицательная ось x во втором квадранте. F2 имеет магнитудой 6,40 Н и направлена ​​под углом b = 54,1? ниже отрицательной оси x в третьем квадрант. а) Какова x-компонента Fx результирующего сила? Выражать…

Заполните таблицу ниже. (Измерьте все углы между 0 ° и 360, против часовой стрелки по оси + z.) Таблица данных 2 …

Заполните таблицу ниже. (Измерьте все углы между 0 ° и 360, против часовой стрелки по оси + z.) Таблица данных 2 Компонент g (Н) Компонент z (Н) Угол (градусы) Сила Масса (Н) (кг) Сила 150 0,300 Fi F2 0-35a 25 R = Fi + F Результирующее равновесие Какое расчетное значение Fa (равновесия) необходимо для уравновешивания двух сил F1 и F2, величина F3, направление шкалы 03, шкала Каковы экспериментальные значения F2 и F3? величина F2exp направление θ2,01p величина F3, exp направление 03, exp Что есть…

1) Две силы F1 и F2, действующие на ящик весом 40 кг, имеют значения 150 Н …

1) Две силы F1 и F2, действующие на ящик весом 40 кг, имеют значения 150 Н и 210 Н соответственно. Угол между ними составляет 50 градусов, при этом F1 действует в горизонтальном направлении, как показано на диаграмме ниже. Рассчитайте а) горизонтальную составляющую ускорения блока; б) вертикальную составляющую ускорения блока; в) величину и направление общего ускорения.

PartA Предположим, что F1-350 N.(Рисунок 1) Определите величину результирующего F F + F2 Выразите свой …

PartA Предположим, что F1-350 N. (Рисунок 1) Определите величину полученного F F + F2. Выразите свой ответ тремя значащими цифрами и включите соответствующие единицы. Рисунок 〈1011> Единицы измерения F F2 200 Н Отправить запрос Ответ 90 ° 150 Часть B Определите направление результирующей силы FFF2, измеренной против часовой стрелки от положительной оси a. Выразите свой ответ с помощью трех значащих цифр. F3 300N Отправить запрос Ответ ▼ Часть C Определите величину результирующей силы FR…

1. (10) Кривошип OA вращается в вертикальной плоскости с постоянной угловой скоростью по часовой стрелке a-4,5 рад / с. Для положения, когда OA находится в горизонтальном положении, (a) определить угловое ускорение un …

1. (10) Кривошип OA вращается в вертикальной плоскости с постоянной угловой скоростью по часовой стрелке a-4,5 рад / с. Для положения, когда OA находится в горизонтальном положении, (a) определите угловое ускорение однородного тонкого стержня AB массой 10 кг, а также горизонтальную и вертикальную составляющие ускорения его центра масс.Используйте методы кинематики (Глава 16), чтобы установить величину и направление (или для ag и; CW или CCW для aAB) каждой переменной. мс направление …

15 нКл 5,0 нКл 3,0 см a i -10 нКл Какова величина …

15 нКл 5,0 нКл 3,0 см a i -10 нКл Какова величина силы F, действующей на заряд -10 нКл (рисунок 1)? Предположим, что α-20 см. Выразите свой ответ с помощью соответствующих единиц F- Значение Отправить предыдущие ответы Запросить ответ X Неверно; Попробуй еще раз; Осталось 5 попыток. Часть B Каково направление силы, действующей на заряд -10 нКл (рис. 1)? Укажите свой ответ в виде угла, измеренного по часовой стрелке или против часовой стрелки (укажите какой) от…

часть Б. Только Какова величина силы F на заряде -10 нКл …

часть Б. Только Какова величина силы F, действующей на заряд -10 нКл (рисунок 1)? Предположим, что 2,4 см. Выразите свой ответ соответствующими единицами. Проверьте правильность значащих цифр. Отзыв: Ваш ответ 7.635-10-4 N был либо округлен по-другому, либо в нем использовано другое количество значащих цифр, чем требуется для этой части. Часть B Рисунок Каково направление силы F на заряд -10 нКл (Рисунок 1)? Дайте свой ответ как…

Растворение 5-ФУ из таблеток, покрытых оболочкой (F2).

Силикатное покрытие – это краска на водной основе, имеющая множество преимуществ и широкое применение во многих различных отраслях промышленности. Однако с силикатным покрытием все еще есть проблемы: как повысить его стойкость к нагреванию при высоких температурах и продлить срок службы покрытия. Силикатные краски обладают высокой стойкостью и долговечностью, зависящей главным образом от химического взаимодействия силикатного связующего с пигментами-наполнителями.Поэтому наши группы изучили процесс геополимеризации раствора силиката натрия с пигментами-наполнителями, чтобы исследовать силикатное покрытие с высокой термостойкостью. Влияние времени отверждения на химическое взаимодействие между раствором силиката натрия и пигментами-наполнителями (ZnO, TiO2, Fe2O3, CaCO3 и Na2SiF6) исследовали с помощью инфракрасной спектроскопии с преобразованием Фурье (FT-IR), термогравиметрического анализа (TGA) и X -дифракция лучей (XRD). Сдвиг антисимметричного растягивающего колебания связи Si-O-Si (1060 см⁻¹) в низкую частоту и увеличение интенсивности растяжения Si-O-Si при увеличении времени отверждения с 1 до 20 дней обусловлены увеличением химическое взаимодействие между пигментами-наполнителями (ZnO, TiO2, Fe2O3, CaCO3, Na2SiF6) и раствором силиката натрия.Более того, результаты ТГ покрытий из ZnO-силиката, TiO2-силиката, CaCO3-силиката, Na2SiF6-силиката и Fe2O3-силиката через 1 и 20 дней отверждения показывают высокий остаточный геополимер около 69–90% при 800 ° C. Таким образом, мы предположили, что процесс геополимеризации между раствором силиката натрия и пигментами-наполнителями (ZnO, TiO2, Fe2O3, CaCO3 и Na2SiF6) увеличивается, когда время отверждения от 1 до 20 дней приводит к образованию силиката геополимера с высокой термостойкостью. Кроме того, оптимальное соотношение между раствором силиката натрия и пигментами-наполнителями (ZnO, TiO2, Fe2O3, CaCO3 и Na2SiF6) составляет следующее: 25% связующего (раствор силиката натрия), 8% ZnO; 5% TiO2, 5% Fe2O3, 1% Na2SiF6, 21% CaCO3, 34% h3O и 1% добавок для создания силикатного покрытия с высокой термостойкостью и термостойкостью до 1000 ° C.1. Введение Вьетнам – страна с тропическим климатом с высокой влажностью и высокой температурой. Кроме того, в воздухе много примесей, таких как пыль, микроорганизмы и токсичные химические вещества. При таком климате многие строительные материалы повреждены, покрыты мхом и ржавчиной. Технология покрытия используется в виде пленки для защиты зданий от химического воздействия и коррозии окружающей среды. Обычно используются две краски: органические и неорганические покрытия [1]. Органическое покрытие, такое как эпоксидная смола, демонстрирует хорошие механические характеристики, химическую стойкость и антикоррозионное действие [2].Однако было показано, что органическое покрытие имеет много недостатков, таких как старение и особенно высокая цена [3]. Кроме того, органо-неорганические гибридные материалы – это материалы, в которых смешаны органические (эпоксидная смола) и неорганические (диоксид кремния рисовой шелухи [4, 5], наностекловолокно и зола-унос силанизированного угля [6]) для улучшения механических и механических свойств. трещиностойкость эпоксидной смолы. Неорганическое покрытие является основным компонентом сшитых неорганических связующих, таких как силиконовая смола [7], силикаты на основе воды и растворителей [8], силаны [9] и смесь органического связующего с силикатом [10].По сравнению с органическим покрытием неорганическое покрытие (силикатное покрытие) имеет большее преимущество из-за своей коррозионной и жаростойкости [11]. Тем не менее, с силикатным покрытием все еще существуют некоторые проблемы, такие как долговечность, низкая водостойкость и высокая цена, которые ограничивают широкое коммерческое применение органических покрытий в строительстве и строительстве [12]. Необходимость решения вопросов по разработке и внедрению в практику новых силикатных лакокрасочных материалов потребовала разработки новых подходов к разработке силикатных покрытий.При этом последние достижения в изменении свойств и механизма действия силикатного покрытия за счет добавления органических и неорганических соединений делают силикатное покрытие еще более перспективным для применения. Юань и др. сообщил об исследовании свойств и механизма действия водоразбавляемого полиуретан-модифицированного силикатного покрытия. Прочность на изгиб, сжатие и гибкость покрытия, модифицированного добавлением полиуретана, были значительно улучшены по сравнению с немодифицированным покрытием. Термостойкость водоразбавляемого полиуретан-модифицированного силикатного покрытия низкая при 250 ° C [13].Parashar et al. сообщили о покрытии на основе силиката щелочного металла с высоким содержанием цинка, с превосходной стойкостью к истиранию, предотвращением подрезания покрытий из-за коррозии, не подверженного воздействию температур до 528 ° C и органических растворителей, таких как кетоны и бензин [14]. Группа Бахрейни также синтезировала наночастицы ZnO на основе диоксида кремния в качестве нового пигмента для терморегулирующих покрытий [15]. Кроме того, Irfan Khan et al. использовали пигмент TiO2 для улучшения фотокаталитической активности силикатной краски [16].Однако силикатная краска, представляющая собой суспензию пигментов-наполнителей (Zn, наночастицы ZnO и TiO2) в жидком калиевом стекле, имеет некоторые недостатки, например, низкую гибкость и высокую стоимость. Жидкое натриевое стекло (раствор силиката натрия) представляет интерес для использования в качестве связующего для силикатного покрытия, обеспечивающего более высокие эксплуатационные свойства и низкую стоимость [12]. Использование жидкого натриевого стекла не обеспечивает водостойкости силикатных покрытий [12]. Пигменты-наполнители представляют интерес для использования в качестве наполнителя силикатных красок, обеспечивающих более высокие эксплуатационные свойства.Кроме того, силикатное покрытие имеет высокую термостойкость, долговечность и долговечность, зависящую в основном от процесса отверждения силикатного связующего с пигментами-наполнителями. Таким образом, понимание взаимодействия жидкого стекла с пигментами-наполнителями и красителями поможет нам создавать термостойкие лакокрасочные изделия с высокой прочностью и долговечностью. Силикатное покрытие пленкой силиката натрия является новым направлением благодаря высокой термостойкости, долгому сроку службы и невысокой цене и полностью подходит для климатических условий Вьетнама.Чтобы исследовать влияние взаимодействия жидкого стекла с пигментами-наполнителями на свойства силикатного покрытия, наши группы изучили процесс отверждения раствора силиката натрия с каждым из пигментов-наполнителей, таких как ZnO, TiO2, CaCO3, Na2SiF6 и Fe2O3. Химическое взаимодействие между раствором силиката натрия и пигментами-наполнителями в зависимости от времени отверждения исследовали с помощью FT-IR, TGA и XRD. Кроме того, новый материал на основе пигментов-наполнителей (ZnO, TiO2, CaCO3, Na2SiF6 и Fe2O3) был подготовлен для исследования силикатного покрытия с высокой термостойкостью.Термостабилизацию силикатного покрытия исследовали методами ТГА и СЭМ. 2. Материалы и методы 2.1. Химикаты Раствор силиката натрия (mNa2O.nSiO2.xh3O, d = 1,35 г / см³), оксид цинка (ZnO, ≥99%), титаноксид (TiO2, ≥99%), карбонат кальция (CaCO3, ≥99%), оксид железа ( Fe2O3, ≥99,5%) и фторид кремния (Na2SiF6, ≥99,5%) были закуплены у Merk. 2.2. Экспериментальный 2.2.1. Приготовление пигментов-наполнителей (ZnO, TiO2, Fe2O3, CaCO3 и Na2SiF6) силикатного покрытия Чтобы изучить процесс отверждения раствора силиката натрия с пигментами-наполнителями через 1 день и 20 дней, каждый из пигментов-наполнителей (ZnO, TiO2, Fe2O3, CaCO3 и Na2SiF6) был добавлен к 5.5–6,5 г раствора силиката натрия и перемешивают при комнатной температуре до получения порошка (обратите внимание, что такое количество пигментов-наполнителей было добавлено к раствору силиката натрия, чтобы время высыхания смеси до получения сухого порошка составляло менее 20 минут). Порошки для покрытия измельчали ​​методом шаровой мельницы в течение 1 часа; После этого порошок покрытия выдерживался от 1 до 20 дней на воздухе при комнатной температуре. Таким образом, формула смеси жидкого натриевого стекла с каждым из пигментов-наполнителей приведена в Таблице 1.Компоненты покрытия Весовой процент (%) Покрытие порошковое 1 mNa2O.nSiO2.xh3O 55 ZnO 35 год h3O 10 Покрытие порошковое 2 mNa2O.nSiO2.xh3O 55 TiO2 35 год h3O 10 Покрытие порошковое 3 mNa2O.nSiO2.xh3O 55 CaCO3 35 год h3O 10 Покрытие порошковое 4 mNa2O.nSiO2.xh3O 65 Na2SiF6 15 h3O 10 Покрытие порошковое 5 mNa2O.nSiO2.xh3O 55 Fe2O3 35 год h3O 10

LTEFX Информация о покупке | Инвестиционная информация по акциям облигаций Fu с ограниченным сроком действия

Allowab (без консультативных услуг)

Ameriprise Brokerage

Ameriprise Financial

Ameriprise SPS Advantage

Ameriprise SPS Advisor

Bears

Avantax

Комиссия за транзакцию загрузки

Cetera Advisor Networks LLC

Cetera Advisor Networks LLC – PAM, PRIME, Premier

Cetera Advisors LLC

Cetera Advisors LLC – PAM, PRIME, Premier

Cetera Financial Specialists LLC – Premier

Comerica

CommonWealth Core

CommonWealth PPS

Commonwealth (NTF – PPS / Advisory)

Commonwealth (PPS Access Program)

Commonwealth (PPS)

Commonwealth Universe

Fidelity Institution 9000lity Funds6

H Beck Inc.

HD Vest

HD Vest – Vest Advisor

ING Financial Advisers – SAS Funds

ING Financial Partners Inc.

ING Financial Ptnrs PAM и PRIME Утверждено

JP MORGAN NO-LOAD NTF

JP-LOAD NTF

JP-LOAD Комиссия за транзакцию

JPMorgan

LPL SAM Соответствует требованиям – 6.18.2020

LPL SWM – 6.18.2020

MSWM Brokerage

Merrill Lynch

Mid Atlantic Capital Corp

Счет в Atlantic Capital Group 9000 Stanley

– Счет Mid Atlantic Capital Group 9000 Stanley

Консультант Morgan Stanley Consulting Group

Morgan Stanley Portfolio Management

Morgan Stanley Select UMA

Pershing FundCenter

Pershing FundVest NTF

Pershing Retirement Plan Network

PruChoice Investments

PruChoice Investments

PruChoice Investments

PruChoice Investments Соответствует требованиям

RBC Wealth Management-Network Соответствует требованиям

9 0005 RBC Wealth Management-Wrap Соответствует

Raymond James

Raymond James Соответствует WRAP

Schwab All (Retail, Instl, Retirement)

Schwab Institutional

Schwab Institutional Only

Schwabde

Загрузить

Scottrade NTF

Scottrade TF

Securities America Advisors

Группа обслуживания акционеров

Sterne, Agee & Leach, Inc.,

TD Ameritrade Institutional

TD Ameritrade Institutional NTF

TD Ameritrade Retail NTF

TD Ameritrade Trust Company

TIAA-CREF Брокерские услуги

TIAA-CREF

TIAA-CREF 9000 Trade Комиссия за транзакцию PMR

Vanguard TF

WFA Fdntl Choice / PIM Обновлено 6.1.21

WFA MF Advisory Обновлено 6.1.21

Waddell & Reed Choice MAP Flex

Правильное кресло

ОПИСАНИЕ

Этот стильный предмет интерьера, идеально подходящий как для жилых, так и для коммерческих обеденных зон, кресло Proper с черным бархатным сиденьем и спиной из натурального ротанга в форме эллипса в обрамлении черного дерева.Сиденье расположено на тонких железных ножках, которые придают креслу изящный вид.

Черный бархат – это 100% полиэстер, тираж 23000.

ТЕХНИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ

Соответствующие размеры стула: Ширина 18,9 дюйма, глубина 21,6 дюйма, высота 30,7 дюйма; высота сиденья 17,7 дюйма

ГАРАНТИЯ

На нее распространяется обширная коммерческая гарантия Industry West.Для получения подробной информации см. Полную гарантию. Посмотреть полные гарантии на продукт

УХОД ЗА ИЗДЕЛИЕМ

Правильный стул не содержит специальной информации по уходу за продуктом.

Просмотреть всю информацию по уходу за продуктом

товар

Proper Dining Chair 23962 Правильный стул https://industrywest.com/media/catalog/product/t/h/thumbn_ail_proper.jpg 375 375.000000 доллар США Распродано / Стулья / Все стулья / Обеденные стулья / Стулья / Все стулья / Мягкие стулья / Коллекции / Коллекция тростников / Стулья / Все стулья / Столовая / Стулья

2 5 https://industrywest.com/media/catalog/product/2/0/20200323_ch51-rt-fu-f2-vdf054_186_copy.jpg https://industrywest.com/media/catalog/product/2/0/20200323_ch51-rt-fu-f2-vdf054_179_copy.jpg https://industrywest.com/media/catalog/product/2/0/20200323_ch51-rt-fu-f2-vdf054_176_copy.jpg https://industrywest.com/media/catalog/product/2/0/20200323_ch51-rt-fu-f2-vdf054_174_copy.jpg https://industrywest.com/media/catalog/product/2/0/20200323_ch51-rt-fu-f2-vdf054_175_copy.jpg добавить в корзину 18,9 дюйма в ширину, 21,6 дюйма в глубину x 30,7 дюйма в высоту; высота сиденья 17,7 дюйма На нее распространяется обширная коммерческая гарантия Industry West. Для получения подробной информации см. Полную гарантию.

Список деталей FM-передатчика

F2 / Информация о настройке Пересмотренный список деталей.xls Shenzhen Onuoda Electronics Technology

Тип № Код материала Код ERP спецификация компонента местоположение

uantit

Блок

1 F2-8027PCB-SMT1 300010000235 Материнская плата SMT Подробно см. F2-8027PCB – SMT1

Список материалов 1

F2-8027PCB-01 129

0044 Материнская плата OND – F2 – Двусторонняя

стеклопластиковая плата Guandu Gold

1 шт.

RC-0R0-110-J-01 110123000001 SMD резистор 0R 1 / 10W ± 5% 0603 R18 C19 2 шт.

RC-0R0-104-J-01 110123000001 SMD резистор 0R 1 / 4W ± 5% 1206 R1 R14 2 PCS

RC-75K-110-F-01 110123750201 SMD резистор 75K 1 / 10W ± 1% 0603 R2 R3 2 шт.

RC-49K9-110-F-01 110123499201 SMD резистор 49.9K 1 / 10Вт ± 1% 0603 R4 R5 2 шт.

RC-1R-110-J-01 110123100001 SMD резистор 1R 1 / 10Вт ± 5% 0603 R6 R7 R17 3 шт.

RC-100R-110-J-01 110123101001 Резистор SMD 100R 1 / 10Вт ± 5% 0603 R12 1 шт.

RC-220R-110-J-01 110123221001 Резистор SMD 220R 1 / 10Вт ± 5% 0603 R13 1 шт.

RC-820R-110-J-01 110123821001 Резистор SMD 820R 1 / 10Вт ± 5% 0603 R15 1 шт.

RC-4K7-110-J-01 110123472001 Резистор SMD 4,7 кОм 1 / 10Вт ± 5% 0603 R16 1 шт.

CC-22UF-500-J- 01 110235226002 Емкость патча 22 мкФ / 50 В 0805 C1 E1 E2 E3 4 шт.

CC-22UF-500-Z-01 110233334001 Емкость патча 22 мкФ / 50 В 1206 C3 1 шт.

CC-104P-500-J-01 110233104001 Patch емкость / 50V 0603 C2 C4 C12 C15 4 PCS

CC-106P-500-J-01 110233106001 Патч-емкость 106P / 50V 0603 C8 C9 2 PCS

CC-105P-500-J-01 110233105001 Патч-емкость 105P / 50V 0603 C6 C7 C17 3 шт.

CC-20P-500-J-01 110233210001 Емкость коммутации 20P / 50V 0603 C10 C11 2 шт. 900 06

CC-102P-500-J-01 110233102001 Емкость патча 102P / 50V 0603 C13 C14 2 шт.

LC-120NH-0805-01 110370124001 Индуктивность проволочной обмотки 120NH 0805 Высокая частота L5 1 шт.

LC-10UH-0603- 01 110323106001

Индуктивная аминированная вставка

10uH 0603 Низкочастотная L1 L2 L3 3 шт.

LC-30NH-0603-01 110323303001

Индуктивная аминированная вставка

30NH 10005 R116 9 -0005 30NH 0603 High-Frequency R11-000 1206-01 110502010002 Трубка регулятора заплатки 3.9 В (диод Avr) 1206 D2 1 шт.

TRC-8050-SOT23-01 110602010001 Патч-триод 8050 SOT-23 Q2 1 шт.

SMT

сменные

t

制表 ： 唐永华 、 ：批准 ： стр. 1 из 2

509 Превышен предел пропускной способности

509 Превышен предел пропускной способности Сервер временно не может обслуживать ваш запрос из-за того, что владелец сайта достиг своего ограничение пропускной способности.Пожалуйста, повторите попытку позже.

Анализ F2 с двойным считыванием, сочетающий передачу энергии резонанса флуоресценции и поляризацию флуоресценции для мониторинга бимолекулярных взаимодействий

Дизайн двойного считывания F

^{2 Анализ}

FRET и FP – две наиболее широко используемые технологии гомогенной HTS на основе флуоресценции для мониторинг бимолекулярных взаимодействий. FRET – это нерадиоактивный фотофизический эффект, при котором энергия, поглощаемая донорным флуорофором, передается акцепторному флуорофору. ²⁹ Передача энергии от донорного флуорофора к акцепторному происходит, когда (1) спектр излучения донорного флуорофора значительно перекрывается со спектром поглощения акцепторного флуорофора; 2) ориентации диполей донорного и акцепторного переходов примерно параллельны; и (3) молекулы донора и акцептора находятся в непосредственной близости (10–100 Å). Связывая донорные и акцепторные флуорофоры с двумя взаимодействующими молекулами, флуорофоры могут находиться в непосредственной близости и индуцировать сигнал FRET.Привлекательной особенностью TR-FRET является временная задержка измерения сигнала, которая снижает быструю автофлуоресценцию от тестируемых библиотечных соединений. FP – чувствительный нерадиоактивный метод исследования биомолекулярных взаимодействий в растворе. Когда флуоресцентные небольшие молекулы (такие как меченые пептиды) в растворе связываются большими молекулами (такими как белок), движение образовавшегося комплекса замедляется. Таким образом, связывание флуоресцентно меченного пептида с белком можно отслеживать по изменению испускаемых сигналов поляризации.

Формат анализа TR-FRET или FP обычно используется индивидуально для конкретной кампании HTS. Тем не менее, хорошо задокументировано, что различные технологии анализа и обнаружения, такие как FRET и FP, могут создавать совершенно разные списки совпадений для одного и того же биохимического взаимодействия. ^{30 – 32} Для повышения качества списка совпадений с первичных экранов в этом исследовании оценивалась возможность объединения двух форматов анализа, FRET и FP, в одну реакцию HTS, в которой считывались как сигналы FRET, так и FP. из того же колодца.В качестве модельной системы использовали взаимодействие Mcl-1 и Noxa, участвующее в регуляции апоптоза. Для дизайна анализа F ² меченный эпитопом белок Mcl-1 косвенно метят донором TR-FRET, тербием, через конъюгированное с тербием антиэпитоп-антитело (). Пептид Noxa непосредственно метят соответствующим акцепторным флуорофором, TMR, для образования пары тербия в этом случае. Для считывания TR-FRET связывание TMR-меченного пептида Noxa с Mcl-1 сближает донор (тербий) и акцептор (TMR), что приводит к передаче энергии от тербия к TMR при возбуждении и генерации сигнала FRET. , который может быть обнаружен при 572 нм.Тот же самый TMR-меченный пептид Noxa, используемый в качестве акцептора TR-FRET, служит индикатором флуоресценции при считывании FP. TMR-Noxa-пептид относительно мал и быстрее вращается в растворе. При возбуждении плоскополяризованным светом излучаемый свет является случайным и приводит к более низкому сигналу FP. Тогда как связывание пептида TMR-Noxa с большим белком Mcl-1 замедляет движение пептида TMR-Noxa, что приводит к испусканию поляризованного света и усилению сигнала FP. Таким образом, сигналы TR-FRET и FP могут быть получены в одной и той же реакции без необходимости использования дополнительных реагентов.Как и ожидалось, добавление антагонистов или соединений, которые нарушают образование комплекса Mcl-1 / Noxa, приведет к снижению сигналов в считывании как TR-FRET, так и FP.

Dual-Readout F

² Разработка анализа

Анализ и оптимизация TMR-меченного пептида Noxa на платформе двойного анализа

Ключевым моментом для успешного двойного анализа TR-FRET / FP является выбор оптимальных условий анализа для обоих анализов в одной реакции. Сначала мы оценили концентрации TMR-Noxa-пептида, оптимальные для двойных измерений.Возрастающие концентрации TMR-Noxa-пептида смешивали с постоянным количеством тербиевого анти-His антитела в присутствии или в отсутствие белка Mcl-1 (50 нМ). Пять микролитров смеси переносили в 1536-луночный планшет и измеряли сигнал TR-FRET, сигнал FP и интенсивность флуоресценции (FI) для TMR-меченного пептида Noxa, используя планшет-ридер Envision. Для измерения FP флуоресцентный квантовый выход индикатора должен быть значительно выше, чем у самого фона (буфера). ³³ Как показано на фигуре, всего 4 нМ одного TMR-Noxa-пептида, сигнал FI от индикатора в> 15 раз выше, чем фон из лунок, содержащих только буфер, и достигал примерно в 1100 раз выше при 250 нМ трассировщик. При примерно 500 нМ пептида TMR-Noxa обнаруженный сигнал FI был насыщен и достиг максимального ограничения обнаружения с использованием текущих настроек считывателя, которые уже генерировали широкий диапазон сигнального окна от 1 до 1100 раз. В качестве контроля FI существенно не изменился в присутствии белка Mcl-1.Добавление белка Mcl-1 (50 нМ) к возрастающим концентрациям пептида TMR-Noxa приводило к усилению сигнала FP (). Максимальное окно анализа FP составляло 78,8 МП при 31,3 нМ пептида TMR-Noxa. Дальнейшее увеличение пептида TMR-Noxa до 125 нМ привело к уменьшению окна сигнала FP. Расчетная Kd для связывания пептида TMR-Noxa с 50 нМ белка Mcl-1 составляет около 2,6 нМ.

Оценка пептида TMR-Noxa с двойным считыванием F ² анализ в формате с 1536 лунками. Возрастающие концентрации пептида TMR-Noxa инкубировали с 50 нМ белка Mcl-1 при комнатной температуре в течение 1 часа.Общий реакционный объем составляет 5 (л на лунку. (A) Общие значения FI измеряли для каждой концентрации пептида TMR-Noxa и сравнивали с таковыми только для буфера в присутствии или в отсутствие белка Mcl-1. (B) Сигнал поляризации был записан и выражен в виде окон сигнала FP после вычитания значений mP для одного индикатора. Показанные данные представляют собой средние значения с SD из четырех повторов. (C) Сигнал TR-FRET с возрастающими концентрациями пептида Noxa-Rho были измерены и нанесены на график в зависимости от концентраций пептида TMR-Noxa.Сигнал TR-FRET = A _{572 нм} / A _{545 нм} × 10 ⁴ ; (D) значения S / B TR-FRET (выраженные как вычисленные значения × 2 для аппроксимации аналогичной шкалы) или значения S / N FP были получены из данных в (B) и (C) и нанесены на график в зависимости от концентраций пептида TMR-Noxa. (E) Z ‘факторы анализа были рассчитаны как для измерений TR-FRET, так и для FP, исходя из данных в (B) и (C) . FI – интенсивность флуоресценции; мП – миллиполяризация; S / B, отношение сигнал / фон; SD, стандартное отклонение; S / N, отношение сигнал / шум.

Затем мы измерили сигнал TR-FRET для той же реакции в тех же лунках, которые использовались для измерения FP. Как показано на фиг.4, в присутствии 50 нМ белка Mcl-1 увеличение пептида TMR-Noxa приводило к дозозависимому увеличению сигналов TR-FRET. Максимальное окно сигнала FRET составляет около 2300. Пептид TMR-Noxa сам по себе в отсутствие белка Mcl-1 давал минимальный сигнал FRET. Kd связывания пептида TMR-Noxa с 50 нМ Mcl-1 при измерении TR-FRET составляет ~ 85,5 нМ. Этот результат согласуется с сообщенной аффинностью связывания пептида Noxa Bh4, ²⁴ , а также с нашими результатами, полученными с помощью анализа прямого связывания с помощью поверхностного плазмонного резонанса (Kd 72 нМ) и конкурентного анализа на основе FP (Ki = 97 нМ ) (данные не показаны).

Цель разработанного анализа F ² с двойным считыванием – предоставить платформу мультиплексного анализа, которая проста для рутинного использования, а также применима для HTS или uHTS. Таким образом, мы оценили эффективность анализа с двойным считыванием путем оценки его Z ‘фактора как при измерении TR-FRET, так и при измерении FP, S / B при считывании TR-FRET и S / N при считывании FP. Связывание 50 нМ Mcl-1 с возрастающими концентрациями пептида TMR-Noxa приводило к увеличению значений как S / B (TR-FRET), так и S / N (FP) ().S / B сигнала TR-FRET при 125 нМ пептида TMR-Noxa составляло около 8,6 и достигало максимума (9,1) при тестировании 250 нМ пептида TMR-Noxa. S / N считывания FP составляло 20 при 62,5 нМ пептида TMR-Noxa и достигало насыщения при 62,5 нМ или более высоких концентрациях пептида TMR-Noxa. Все факторы Z ‘были выше 0,5 как для TR-FRET, так и для FP, когда было протестировано более 30 нМ пептида TMR-Noxa (), что указывает на надежный и высококачественный анализ на HTS. ³⁴

Значения Kds, полученные с помощью измерений TR-FRET и FP для одной и той же реакции, кажутся разными.Kd для связывания пептида TMR-Noxa с 50 нМ Mcl-1, измеренный при считывании TR-FRET (85,5 нМ), примерно в 32,9 раза выше, чем Kd, полученный при считывании FP (2,6 нМ). Это может быть связано с разной силой сигнала, измеренной данной концентрацией флуорофор-лиганд в каждом формате анализа. Формат анализа FP позволяет использовать более низкую концентрацию флуорофор-лиганд, чем формат анализа TR-FRET. Чтобы получить достаточно высокий сигнал и оставаться в пределах динамического диапазона анализа как для измерений TR-FRET, так и для FP, необходимо тщательно выбирать концентрации пептида TMR-Noxa, используемые в анализах с двойным считыванием.Для формата анализа FP, когда используется более низкая концентрация флуорофора, вклад флуоресценции от библиотечного соединения будет иметь более сильное влияние на анализ, поскольку показания обнаружения являются мерой суммы всех флуоресцентных частиц в анализе. По мере увеличения концентрации флуорофора в анализе вклад флуоресцентных соединений снижается. Следовательно, использование более высоких концентраций лиганда, меченного флуорофором, будет иметь преимущество в уменьшении интерференции флуоресценции со стороны библиотечных соединений в формате анализа FP. ³⁵ Таким образом, на основании кривых титрования пептида TMR-Noxa при считывании FP и считывании TR-FRET были выбраны концентрации 62,5 и 125 нМ пептида TMR-Noxa для дальнейшей оценки в двойном считывании F ² пробирка.

Анализ и оптимизация белка Mcl-1 в тесте с двойным считыванием F

² платформа для анализа

Чтобы определить концентрации белка Mcl-1, оптимальные для анализа с двойным считыванием F ² , мы провели эксперименты по титрованию.Постоянную концентрацию пептида TMR-Noxa (62,5 или 125 нМ) титровали возрастающими концентрациями белка Mcl-1 (1–1000 нМ). Сигналы связывания измеряли как в режимах TR-FRET, так и в режиме FP.

Повышение концентрации Mcl-1 приводило к дозозависимому увеличению сигнала FRET с 62,5 или 125 нМ пептида TMR-Noxa (). Сигнал TR-FRET достигал максимума, когда 31,3 нМ белка Mcl-1 смешивали с 62,5 нМ TMR-Noxa или когда 62,5 нМ Mcl-1 инкубировали с 125 нМ пептида TMR-Noxa, соответственно.Расчетная Kd Mcl-1 составляла 6,2 и 20,6 нМ, соответственно, в этих двух условиях.

Оптимизация белка Mcl-1 в анализе с двойным считыванием F ² . (A) Возрастающие концентрации белка Mcl-1 инкубировали с 62,5 или 125 нМ пептида TMR-Noxa и инкубировали при комнатной температуре в течение 1 часа. Сигнал TR-FRET и сигнал FP измеряли с помощью планшет-ридера Envision Multilabel. (A) Окно сигнала FRET было получено вычитанием значений только для пептидов из значений в присутствии количества добавленного белка Mcl-1 и нанесено на график в зависимости от концентрации белка Mcl-1. (B) Окно анализа FP получали вычитанием значений mP одного индикатора из значений в присутствии белка. Данные были проанализированы с использованием метода нелинейной регрессии в Prism 5.0. (C) Сравнение кривых доза-ответ связывания 125 нМ пептида TMR-Noxa с белком Mcl-1 между измерениями TR-FRET и FP. Значения окна анализа FP в мП были кратны 17, чтобы привести к аналогичной шкале окна сигнала TR-FRET для сравнения. Представленные данные являются средними со стандартным отклонением для четырех повторов. (D) Значения S / B TR-FRET (значения × 2, чтобы приблизиться к той же шкале) и значения S / N FP были получены из данных в (A) и (B) для связывания 125 нМ пептид TMR-Noxa к Mcl-1. (E) Значения Z ‘для измерений TR-FRET и FP рассчитывали из данных в (A) и (B) для связывания 125 нМ пептида TMR-Noxa с возрастающими концентрациями белка Mcl-1.

При измерении FP по мере увеличения количества белка Mcl-1 наблюдалось прогрессивное увеличение сигнала FP до достижения насыщения.Достигнуто максимальное окно анализа около 100 мП. Kds для связывания с 62,5 и 125 нМ пептида TMR-Noxa в считывании FP составляли 11,5 и 20,5 нМ соответственно.

Оба анализа TR-FRET и FP из одной и той же реакции дали стабильные и надежные результаты анализа. Kd связывания Mcl-1 с 125 нМ пептида TMR-Noxa составлял 20,6 нМ при считывании TR-FRET и 20,5 нМ при считывании FP (). Белок Mcl-1 при 62,5 нМ генерировал максимальное значение S / B (10,6) в считывании TR-FRET и S / N (25,1) в считывании FP ().Дальнейшее увеличение концентрации белка Mcl-1 привело к снижению сигналов в считывании TR-FRET, хотя считывание FP оставалось постоянным (). Факторы Z ‘были выше 0,5 для показаний TR-FRET и FP, когда концентрации белка Mcl-1 были> 7,8 нМ. Из этих анализов представляется возможным определить условия анализа, которые обеспечивают оптимальную производительность обоих типов анализа TR-FRET и FP для взаимодействия Mcl-1 / Noxa. Соответственно, условия анализа, в которых используется 125 нМ пептида TMR-Noxa и 62.Отобрали 5 нМ белка Mcl-1 и использовали для следующих исследований. При таких условиях анализа можно достичь оптимальной производительности в отношении окна анализа и устойчивости как для измерения TR-FRET, так и для измерения FP.

Разработка формата uHTS

Для оценки пригодности технологии двойного считывания F ² для идентификации ингибиторов Mcl-1 в формате uHTS были исследованы толерантность к ДМСО и стабильность анализа. ДМСО является обычным растворителем, используемым для растворения многих природных и органических соединений, используемых при создании небольших молекулярных библиотек для HTS.Чтобы получить доступ к полной применимости двойного считывания F ² для uHTS, необходимо проверить влияние ДМСО на эффективность анализа перед скринингом на ингибиторы белка Mcl-1. Для этой цели сигналы TR-FRET и FP регистрировались при добавлении возрастающих концентраций ДМСО в лунки 1536-луночного планшета. Как показано на фиг. 5, показания FRET и FP остались неизменными в присутствии до 2,3% (об. / Об.) ДМСО. Дальнейшее увеличение ДМСО немного уменьшило сигнал FP и значительно мешало сигналу TR-FRET.Эти результаты показывают, что анализ uHTS Mcl-1 на основе F ² с двойным считыванием может быть надежно выполнен в присутствии до 2,3% ДМСО.

Влияние ДМСО на двойное считывание F ² производительность анализа и стабильность конкурентного анализа. Взаимодействие Mcl-1 (62,5 нМ) с пептидом TMR-Noxa (125 нМ) проводили в присутствии возрастающего количества ДМСО (0–9%) при комнатной температуре в течение 2 часов. (A) Сигналы TR-FRET были измерены и нанесены на график в зависимости от возрастающего количества ДМСО. (B) Сигнал FP был измерен и нанесен на график в зависимости от возрастающего количества ДМСО. (C, D) Стабильность ингибирующего действия немеченого пептида Noxa на связывание пептида TMR-Noxa (125 нМ) с белком Mcl-1 (50 нМ), измеренная с помощью считывания TR-FRET (C) или показания FP (D) после 2 или 10 ч инкубации при комнатной температуре. ДМСО, диметилсульфоксид.

Хорошая временная стабильность при добавлении соединения была бы очень привлекательной особенностью для анализа uHTS и особенно для кампании uHTS.Таким образом, мы исследовали стабильность анализа Mcl-1 на основе F ² с двойным считыванием в формате конкурентного анализа с немеченым пептидом Noxa в качестве конкурента. В двух разных временных точках (2 и 10 ч) после добавления возрастающих концентраций немеченого пептида Noxa к реакции, содержащей пептид TMR-Noxa (125 нМ) и Mcl-1 (62,5 нМ), сигналы FRET и FP в 1536-луночном планшете были измерены. Результаты показали, что ингибирующий эффект немеченого пептида Noxa в анализе действительно очень стабилен, о чем свидетельствуют практически неизменные значения IC ₅₀ в считывании TR-FRET () и считывании FP () в обеих временных точках.Такая стабильность анализа в присутствии антагониста позволяет использовать большие размеры партий, типичные для экранов uHTS.

Валидация анализа с двойным считыванием F

² на основе Mcl-1 в формате uHTS

Чтобы быть пригодным для uHTS, анализ с двойным считыванием F ² должен демонстрировать минимальные различия между лунками и лунками. от пластины к пластине и повседневные операции. Чтобы проверить полезность нашего оптимизированного анализа с двойным считыванием данных в формате uHTS, мы проверили точность и надежность анализа на восьмидесяти 1536-луночных микропланшетах, выполненных в небольшом объеме в разные дни.Около 4,5 мкл реакционного буфера, содержащего пептид TMR-Noxa (125 нМ), Mcl-1 (62,5 нМ) и тербиевое анти-His антитело (2 нМ), распределяли в 1536-луночный черный планшет с использованием Multidrop Combi. На каждом 1536-луночном планшете каждая из 32 лунок содержит свободный контрольный пептид TMR-Noxa (125 нМ) и антитело против тербия против His (2 нМ) без белка Mcl-1, что дает минимальный сигнал TR-FRET и FP. . Еще 32 лунки содержат пептид TMR-Noxa, белок Mcl-1 (62,5 нМ) и антитело против тербия против His (2 нМ), что определяет окно анализа для считывания как TR-FRET, так и FP.Реакции инкубировали 2 ч. Оба анализа TR-FRET и FP были выполнены в режиме TR-FRET и режиме FP, соответственно, с помощью считывающего устройства для микропланшетов EnVision. Анализ восьмидесяти 1536-луночных планшетов продемонстрировал стабильные сигналы в TR-FRET () и показаниях FP () с большими окнами анализа. Средний сигнал TR-FRET от 80 пластин составил 1553,6 гц при стандартном отклонении 136,8. Средний сигнал FP составил 133,9 мП при стандартном отклонении 10,2. Для дальнейшей оценки применимости технологии двойного считывания F ² для 1536-луночного uHTS были рассчитаны параметры эффективности анализа S / B (TR-FRET), S / N (FP) и Z ‘.Значения S / B для считывания TR-FRET, как определено для каждого планшета, постоянно были выше 5, а среднее значение составляло 6,2 для 80 планшетов со стандартным отклонением 0,8 (). Значения S / N для чтения FP были постоянно выше 8, а среднее значение составляло 8,8 при стандартном отклонении 0,5 (). Все факторы Z ‘были выше 0,5 как для считывания TR-FRET, так и для считывания FP (), демонстрируя надежный и последовательный анализ с минимальными вариациями. Таким образом, анализ связывания Mcl-1 / Noxa на основе F ² с двойным считыванием в 1536-луночном планшете имеет отличное качество для uHTS.

Оценка эффективности анализа с двойным считыванием F ² в формате uHTS. Восемьдесят 1536-луночных планшетов, каждый из которых содержит 32 контрольные лунки со свободным индикатором (125 нМ TMR-Noxa пептид) и 32 связанные контрольные лунки с индикатором (125 нМ TMR-Noxa и 62,5 нМ Mcl-1), всего 5 (л аналитического буфера на лунку). были использованы для определения эффективности анализа для uHTS. (A) При считывании TR-FRET регистрировали сигнал TR-FRET для каждой лунки; средние значения для каждого планшета наносили на график против соответствующего номера планшета. (B) При считывании FP измеряли сигнал FP для каждой лунки, и средние значения FP-сигналов от свободного и связанного индикатора наносили на график в зависимости от номера планшета. (C) Значения S / B считывания TR-FRET и значения S / N считывания FP были рассчитаны для каждого планшета. (D) Z ‘факторов для каждого планшета рассчитывали как для TR-FRET, так и для считывания FP. uHTS, скрининг со сверхвысокой пропускной способностью.

Чтобы проверить полезность анализа F ² с двойным считыванием для uHTS, мы провели скрининг с использованием библиотеки из 102 255 соединений из сети центров скрининга молекулярных библиотек.Соединения из библиотеки (0,1 мкл 1 мМ исходного раствора в ДМСО) разливали в 1536-луночные планшеты, содержащие 4,5 мкл на лунку реакционного буфера (125 нМ пептид TMR-Noxa, 62,5 нМ Mcl-1 и 2 нМ тербия-анти-His конъюгат. ). Конечная концентрация соединения составляла 21,7 мкМ с конечной концентрацией ДМСО 2,2%. Анализ данных, полученных с помощью TR-FRET, выявил в общей сложности 1568 положительных соединений, которые уменьшили окно анализа TR-FRET более чем на 50% с вероятностью попадания 1,5% (). Соединения с собственной флуоресценцией или свойствами гашения флуоресценции были идентифицированы с помощью FI при 545 нм.Кратность контроля (FOC) рассчитывалась по FI 545 нм для лунок с соединением по сравнению с контрольными лунками с носителем. Артефакты FI определялись FOC ≤ 0,2 (тушение 80%) или ≥ 2 (двукратная флуоресценция по сравнению с контролем). Среди этих 1568 положительных результатов, полученных с помощью TR-FRET, 53 соединения были возможными соединениями-артефактами, что привело к показателю артефактов 3,4%.

Валидация анализа с двойным считыванием F ² в формате uHTS. Анализ Mcl-1 F ² был подтвержден для uHTS с использованием в качестве примера библиотеки 102 255 соединений из сети центров скрининга молекулярных библиотек.Соединения из библиотеки добавляли в 1536-луночные планшеты, содержащие реакционный буфер с пептидом TMR-Noxa и Mcl-1, и инкубировали при комнатной температуре в течение 2 часов. Сигнал TR-FRET и сигнал FP из каждой лунки, содержащей соединение библиотеки, измеряли и наносили на график. (A) Процент ингибирования по считыванию TR-FRET наносили на график против FI соединения. FI соединения выражали как FOC и рассчитывали как кратное увеличение FI при 545 нм из лунок для соединения по сравнению с контрольными лунками с носителем для каждого планшета. (B) Процент ингибирования по считыванию FP был рассчитан и нанесен на график в зависимости от FI соединений, выраженных как FOC. FOC рассчитывали по кратному увеличению количества FI p-канала из лунки соединения по сравнению с контрольными лунками носителя для каждого планшета. Соединения, показавшие процент ингибирования> 50 при считывании как TR-FRET, так и FP, считались потенциальными попаданиями. Соединения с FI ≤ 0,2 или FI ≥ 2 были определены как артефакты FI. (C) FI соединений библиотеки из считываний FP наносили на график в сравнении с таковыми из считываний TR-FRET. (D) Процент ингибирования по считыванию FP был нанесен на график в сравнении с таковым из считывания TR-FRET. ВОК, фолд контроля.

С другой стороны, считывание FP дало 325 положительных результатов, когда отсечка попаданий была установлена ​​на 50% ингибирование окна анализа FP по сравнению с контрольными лунками DMSO (). FI p-канала считывания FP использовали в качестве ссылки для идентификации флуоресцентных или гасящих флуоресценцию соединений при считывании FP. FI соединения выражали как FOC и рассчитывали как количество p-каналов для соединения значительно выше, чем для контрольных лунок с носителем.Было обнаружено, что 57 соединений влияют на анализ флуоресценции (FI ≥ 2) или гашения флуоресценции (FI ≤ 0,2). Доля артефактов составила 21,3%.

Эти данные показывают, что считывание FP генерирует более высокую частоту артефактов (21,3%), чем показание TR-FRET (3,4%), предполагая, что анализ FP может быть более чувствительным к интерференции флуоресценции со стороны скрининговых соединений, что согласуется с предыдущими отчетами. ³⁵ Когда мы построили график FI FP из соединения против FI TR-FRET, мы обнаружили, что некоторые соединения мешали только считыванию FP или TR-FRET, тогда как некоторые флуоресцентные соединения мешали обоим показаниям.

Интересно, что большинство положительных результатов, полученных из FP, также обнаруживаются как положительные в формате анализа TR-FRET (). Двести пятьдесят девять соединений показали% ингибирования> 50 при считывании как TR-FRET, так и FP с 52 соединениями, мешающими флуоресценции, что привело к 207 лучшим результатам. Таким образом, требуя, чтобы совпадение было положительным как при считывании TR-FRET, так и при считывании FP, стратегия, использующая двойное считывание, должна значительно снизить количество ложных срабатываний, вызванных флуоресценцией соединения или гашением на длинах волн, используемых в любом анализе.Таким образом, технология двойного анализа F ² позволяет нам лучше ранжировать и определять приоритеты совпадений из HTS и позволяет выбирать высококачественные совпадения для последующих исследований.

Интересно, что 1268 соединений были идентифицированы как положительные только в анализе TR-FRET, а 60 положительных соединений были исключены при считывании FP (). Это говорит о том, что разные технологии анализа могут создавать разные списки совпадений, что согласуется с предыдущими отчетами. ³¹ С развитием приборов и точностью современных технологий обработки жидкостей проблема вариаций HTS была значительно уменьшена.Простое повторение проверки существенно не изменит список попаданий.