Л 80 лж: Мобильный телефон LG L80 (D380, Dual, white) / ЛЖ Л80 (Д380, Две Сим-карты, белый), цена, отзывы

alexxlab | 01.03.1978 | 0 | Разное

Содержание

Бытовая техника и электроника: ТВ, смартфоны и другое

ПУТЕШЕСТВУЙТЕ НА ЗДОРОВЬЕ!

ЛЕГКИЙ СПОСОБ СОХРАНЯТЬ ПРОДУКТЫ СВЕЖИМИ

ЧТО СЛЕДУЕТ ЗНАТЬ О СТИРАЛЬНЫХ МАШИНАХ LG

3 ЛАЙФХАКА ДЛЯ ТЕХ, КТО ДОРОЖИТ СВОИМ ВРЕМЕНЕМ

НЕЗАМЕТНАЯ РЕВОЛЮЦИЯ

ТЕЛЕВИЗОРЫ NANOCELL 2021: ЧТО НОВОГО?

4 ПРИЧИНЫ ВЫБРАТЬ ВСТРАИВАЕМУЮ ТЕХНИКУ

ИСТИНА — В ШКАФУ, ИЛИ 5 СВОЙСТВ ХОРОШЕГО ВИННОГО ШКАФА

ЖИЗНЬ КАК ПУТЕШЕСТВИЕ — С LG GRAM

5 НЕОЖИДАННЫХ ВЫГОД МИНИМАЛИЗМА

СИЛЬНЫЕ ЭМОЦИИ ОТ ЯРКИХ ФУТБОЛЬНЫХ СОБЫТИЙ С НОВОЙ СЕРИЕЙ ТЕЛЕВИЗОРОВ LG OLED С1

ОТКРОЙТЕ МИР С LG

КАК ОБУСТРОИТЬ КУХНЮ И НЕ ПОЖАЛЕТЬ ОБ ЭТОМ

РАЗРУШАЕМ 7 МИФОВ О СУШИЛЬНЫХ МАШИНАХ

OLED: ЧАСТО ЗАДАВАЕМЫЕ ВОПРОСЫ

БЕСПРОВОДНОЕ ПОДКЛЮЧЕНИЕ К МИРУ СОВЕРШЕННОГО ЗВУКА

КЛЮЧ К ПАРАЛЛЕЛЬНЫМ МИРАМ: НА ЧЕМ ИГРАТЬ В КУЛЬТОВЫЕ ИГРЫ

3 СИТУАЦИИ, КОГДА БЕЗ ПРОЕКТОРА НЕ ОБОЙТИСЬ

СТЕЛОКЕРАМИЧЕСКИЕ ПАНЕЛИ: ЧТО О НИХ НУЖНО ЗНАТЬ

10 АРГУМЕНТОВ В ПОЛЬЗУ СУШИЛЬНОЙ МАШИНЫ LG

ПОЛЕЗНЫЕ ЗАВТРАКИ ЗА 1, 2 И 3 МИНУТЫ

ПОДАРОК КАЖДОМУ НОВОМУ ДРУГУ

Домашние развлечения — дело техники

5 советов, как упростить домашние заботы

3 причины выбрать LG SIGNATURE

Работаете из дома?

3 способа продлить жизнь любимых вещей

3 способа повысить творческий тонус

Примерить технику в один клик? Да!

Разговоры о будущем на CES 2021

CES 2021: Ноутбуки LG GRAM 2021 года

Превосходной картинке — превосходный звук

Хорошо жить в умном доме LG ThinQ

Инновационный светодиодный дисплей LG для бизнеса

Гейминг на миллионы пикселей

Что нужно знать о качественных услугах и функциях LG SMART TV

Наполненный холодильник работает лучше! Советуют эксперты

Что выбирает новое поколение?

Подарок за регистрацию

IFA 2020: взять воздух в свои руки

Бытовая техника и электроника: ТВ, смартфоны и другое

ПУТЕШЕСТВУЙТЕ НА ЗДОРОВЬЕ!

ЛЕГКИЙ СПОСОБ СОХРАНЯТЬ ПРОДУКТЫ СВЕЖИМИ

ЧТО СЛЕДУЕТ ЗНАТЬ О СТИРАЛЬНЫХ МАШИНАХ LG

3 ЛАЙФХАКА ДЛЯ ТЕХ, КТО ДОРОЖИТ СВОИМ ВРЕМЕНЕМ

НЕЗАМЕТНАЯ РЕВОЛЮЦИЯ

ТЕЛЕВИЗОРЫ NANOCELL 2021: ЧТО НОВОГО?

4 ПРИЧИНЫ ВЫБРАТЬ ВСТРАИВАЕМУЮ ТЕХНИКУ

ИСТИНА — В ШКАФУ, ИЛИ 5 СВОЙСТВ ХОРОШЕГО ВИННОГО ШКАФА

ЖИЗНЬ КАК ПУТЕШЕСТВИЕ — С LG GRAM

5 НЕОЖИДАННЫХ ВЫГОД МИНИМАЛИЗМА

СИЛЬНЫЕ ЭМОЦИИ ОТ ЯРКИХ ФУТБОЛЬНЫХ СОБЫТИЙ С НОВОЙ СЕРИЕЙ ТЕЛЕВИЗОРОВ LG OLED С1

ОТКРОЙТЕ МИР С LG

КАК ОБУСТРОИТЬ КУХНЮ И НЕ ПОЖАЛЕТЬ ОБ ЭТОМ

РАЗРУШАЕМ 7 МИФОВ О СУШИЛЬНЫХ МАШИНАХ

OLED: ЧАСТО ЗАДАВАЕМЫЕ ВОПРОСЫ

БЕСПРОВОДНОЕ ПОДКЛЮЧЕНИЕ К МИРУ СОВЕРШЕННОГО ЗВУКА

КЛЮЧ К ПАРАЛЛЕЛЬНЫМ МИРАМ: НА ЧЕМ ИГРАТЬ В КУЛЬТОВЫЕ ИГРЫ

3 СИТУАЦИИ, КОГДА БЕЗ ПРОЕКТОРА НЕ ОБОЙТИСЬ

СТЕЛОКЕРАМИЧЕСКИЕ ПАНЕЛИ: ЧТО О НИХ НУЖНО ЗНАТЬ

10 АРГУМЕНТОВ В ПОЛЬЗУ СУШИЛЬНОЙ МАШИНЫ LG

ПОЛЕЗНЫЕ ЗАВТРАКИ ЗА 1, 2 И 3 МИНУТЫ

ПОДАРОК КАЖДОМУ НОВОМУ ДРУГУ

Домашние развлечения — дело техники

5 советов, как упростить домашние заботы

3 причины выбрать LG SIGNATURE

Работаете из дома?

3 способа продлить жизнь любимых вещей

3 способа повысить творческий тонус

Примерить технику в один клик? Да!

Разговоры о будущем на CES 2021

CES 2021: Ноутбуки LG GRAM 2021 года

Превосходной картинке — превосходный звук

Хорошо жить в умном доме LG ThinQ

Инновационный светодиодный дисплей LG для бизнеса

Гейминг на миллионы пикселей

Что нужно знать о качественных услугах и функциях LG SMART TV

Наполненный холодильник работает лучше! Советуют эксперты

Что выбирает новое поколение?

Подарок за регистрацию

IFA 2020: взять воздух в свои руки

Обзор кинотеатрального DLP-проектора LG HF80LSR

Видеообзор

Наш видеообзор DLP-проектора LG HF80LSR можно также посмотреть на iXBT.video

Паспортные характеристики, комплект поставки и цена

Паспортные характеристики
Технология проецирования	DLP
Матрица	один чип DMD
Разрешение матрицы	1920×1080 (Full HD)
Объектив	трансфокатор 1,1×, ручная настройка, сдвиг проекции вверх на 100%, проекционное соотношение 1,4
Тип источника света	лазерно-люминофорный
Срок службы источника света	20 000 ч
Световой поток	2000 ANSI лм
Контрастность	150 000 : 1
Размер проецируемого изображения при крайних значениях трансфокатора, диагональ (в скобках — расстояние до экрана)	от 693-762 мм (905 мм)
	до 2771-3048 мм (3698 мм)
Интерфейсы	видео/аудиовход, HDMI (CEC), 2 шт., один с поддержкой ARC (HDMI2) цифровой оптический аудиовыход, Toslink выход на наушники, 3-контактное гнездо миниджек 3,5 мм порт USB 2.0, чтение с внешних накопителей (FAT32/NTFS), поддержка HID, гнездо типа A (макс. 0,5 A), 2 шт. проводная сеть Ethernet 100Base-TX (RJ-45) встроенный адаптер Wi-Fi, 2,4/5 ГГц, 802.11b/g/n/ac встроенный адаптер Bluetooth
Форматы входного сигнала	HDMI — до 1080p (отчет MonInfo по интерфейсу HDMI)
Уровень шума	26/28/30 дБ в зависимости от режима
Встроенная звуковая система	громкоговорители 2×3 Вт
Особенности	платформа webOS 4.0 управление с помощью смартфона через приложение LG TV Plus мультимедийные функции: сетевые сервисы, воспроизведение аудио-, видео- и графических файлов и т. д. поддержка беспроводного приема изображения и звука — Miracast и Intel WiDi вывод звука по Bluetooth цифровая ручная и автоматическая коррекция вертикальных трапецеидальных искажений коррекция геометрии по четырем углам быстрое включение (10 с) и выключение (2 с) разъем для кенсингтонского замка
Размеры (Ш×В×Г)	108×140(144 с подставкой)×252 мм
Масса	2,1 кг
Потребляемая мощность	140 Вт, менее 0,5 Вт в ждущем экономном режиме, 1,3 Вт в ждущем режиме с активными сетевыми интерфейсами
Напряжение питания (внешний БП)	100—240 В, 50—60 Гц
Комплект поставки (необходимо уточнять перед покупкой!)	проектор пульт ДУ и два элемента питания АА для него внешний БП (100—240 В, 50—60 Гц на 19 В, 7,37 А) кабель питания, евровилка руководство пользователя гарантийный талон и дополнительная документация
Ссылка на сайт производителя	LG HF80LSR
Розничные предложения

Внешний вид

Проектор исполнен в оригинальном вертикальном форм-факторе и очень напоминает советские фильмоскопы типа «Сказка» и аналогичные. Корпус проектора изготовлен из пластика. Верхняя часть — с белым матовым покрытием, а нижняя — с серебристым. В целом корпус немаркий, и покрытие относительно устойчиво к появлению царапин. Воздух для охлаждения внутренностей забирается через решетки спереди и выдувается назад.

За небольшими боковыми решетками находятся по одному крохотному громкоговорителю с круглым диффузором.

На левом боку еще есть разъем для кенсингтонского замка.

Все разъемы помещены в неглубокую нишу на задней панели. Там же — окошко ИК-приемника. Второй ИК-приемник, видимо, находится где-то спереди за решеткой. На вертикальную плоскость ниши с разъемами наклеен лист прочного пластика — металлические края разъемов видимых царапин на нем не оставляют.

Пятипозиционный джойстик (нажатие и отклонение в четыре стороны) находится на верхней панели ближе к передней части. Перед ним — ниша с воротком трансфокатора. В режиме ожидания значок питания на джойстике неярко подсвечивается красным.

Расположенные на днище две передние ножки с резиновыми подошвами и стальными резьбовыми стойками выкручиваются из корпуса проектора примерно на 12 мм, что позволяет приподнять переднюю часть проектора, поставленного на стол или тумбочку. В задней части проектор опирается на широкую ногу с резиновой подошвой. Также на днище есть четыре резьбовых отверстия в металлических втулках, которые можно использовать при монтаже на потолочном кронштейне, и металлическое штативное гнездо, предназначенное для установки проектора на штативе.

Поставляется проектор в небольшой скромно оформленной коробке из гофрированного картона.

Коммутация

Проектор оснащен стандартными полноразмерными разъемами. Расположены они достаточно свободно. Таблица с характеристиками в начале статьи дает представление о коммуникационных возможностях проектора.

Один из двух разъемов HDMI поддерживает обратную передачу звука (ARC). Дополнительно к этому, а также к аналоговому и цифровому оптическому звук можно передавать по Bluetooth.

Для проверки мы успешно подключились к нашей тестовой беспроводной колонке Sven PS-200BL. Сам проектор наоборот можно использовать как внешнюю аудиосистему, подключаемую по Bluetooth, например, к смартфону или планшету, при этом с проектора можно ограниченно управлять воспроизведением контента. Работает, по крайней мере, базовая поддержка управления по HDMI: подключенный по HDMI плеер выключился при выключении проектора и наоборот, также проектор включился при включении плеера. Встроенный адаптер Wi-Fi может использоваться с целью передачи на проектор изображения и звука по технологиям Miracast и Intel WiDi (все это имеет фирменное название Screen Share). Но для просмотра видео данный режим подходит плохо, так как дополнительно привносятся артефакты сжатия, а частота кадров невысокая.

Работает проектор от внешнего блока питания.

Сам БП и комплектные кабели — белого цвета, что сочетается с основным цветом корпуса проектора. Масса самого проектора равна 2060 г, блок питания весит 548 г, пульт с элементами питания — 147 г.

Пульт и другие способы управления

Пульт серии Magic (модель AN-MR18BA) достался проектору (как и операционная система) от «умных» телевизоров LG. Верхняя часть корпуса пульта изготовлена из белого пластика, а нижняя — из прозрачного, но плотно тонированного красным пластика, прозрачного для ИК. Благодаря особой форме пульт удобно лежит в руке. Его можно положить или поставить на попа. Обозначения большинства кнопок достаточно крупные и контрастные. Кнопок не очень много, но и не мало, почти оптимальное количество. Большинство (кроме курсорного круга) кнопок изготовлено из упругого резиноподобного пластика. При нажатии на кнопки раздается негромкий щелчок и красным подсвечивается кнопка питания. Часть функций вызывается при длительном удерживании кнопок. Есть прокрутка списков и т. д. с помощью удобного колесика, а нажатие на колесико соответствует команде выбора.

Работает пульт в основном по Bluetooth, по ИК (и только по ИК) передается команда включения и выключения. В режиме воспроизведения звука по Bluetooth в варианте передачи звука на проектор, пульт переходит в режим передачи команд только по ИК. В этом случае возможности пульта ограничены передачей нажатий на кнопки. К несомненным плюсам относится возможность настроить этот пульт на управление другой аудио- и видеотехникой. Делается это согласно выводимым на экран подсказкам.

Для управления сторонней техникой используется ИК-излучатель пульта. Управлять ей приходится частично просто нажатием на кнопки, частично с помощью экранного меню, что не очень удобно, да и функций мало, например, нет команды открытия/закрытия лотка дисковода.

Пульт имеет функцию координатного ввода — курсор на экране перемещается наклоном пульта вверх-вниз и поворотом вправо-влево. Курсор появляется на экране после встряски пульта или прокрутки колесика и исчезает после нескольких секунд малоподвижного состояния пульта. Курсор при движении не выходит за края экрана, что позволяет легко калибровать координатный ввод под удобный хват пульта. Также к проектору по USB можно подключить клавиатуру и мышь. Подключение по Bluetooth поддерживается только для каких-то избранных клавиатур LG. Эти устройства ввода, как и любая опробованная нами USB-периферия работают через USB-разветвитель, освобождая дефицитные USB-порты под другие задачи. С проводными и беспроводными клавиатурами и мышами от разных производителей не возникло никаких проблем. Поддерживается прокрутка колесиком, а задержка перемещения курсора мыши относительно движения самой мышью минимальная. Для подключенной клавиатуры можно выбрать альтернативную раскладку, в том числе и кириллическую самого распространенного варианта, при этом поддерживается смена раскладки клавиатуры (сочетанием клавиш Ctrl и пробел) на основную (английскую) и обратно на выбранную. Некоторые клавиши клавиатуры из основного и дополнительного мультимедийного набора напрямую вызывают ряд функций (громкость больше/меньше, включение/выключение звука, запуск поиска — и все!). Нужно отметить, что в целом интерфейс хорошо оптимизирован для использования только кнопок пульта ДУ, то есть пользоваться мышью пульта или подключать клавиатуру и мышь, в общем-то, не обязательно. Нажатие на кнопку питания на пульте сразу выключает проектор. При работе проектора отклонение джойстика вправо-влево регулирует громкость звука, а нажатие выводит на экран короткое стартовое меню, из которого можно выйти, выключить проектор, перейти в выбору источника или к настройке проектора.

Кроме того, проектором можно управлять посредством мобильного устройства с помощью фирменного приложения LG TV Plus для Android и iOS (проектор и мобильное устройство должны находиться в одной сети).

Кроме функций управления это приложение позволяет получить доступ к мультимедийному контенту, находящемуся на мобильном устройстве. Правда, почему-то приложение не обнаруживает видеофайлы с расширением MKV.

Программной платформой для этого проектора служит операционная система webOS Smart TV, основанная на ядре Linux. На заглавной странице интерфейса расположены круглые значки быстрого доступа к некоторым функциям, значки запущенных мини-приложений, редактируемая лента из разноцветных скошенных параллелограммов со значками приложений, аналогичное по форме, но большее по размеру поле доступа к предыдущему приложению или источнику и поле доступа к любимому контенту (Мой контент). Но для активации последнего пользователь должен дать согласие на отслеживание предпочтений.

Фоном для вызванной страницы обычно служит изображение текущего приложения. Разумеется, есть магазин приложений и контента.

Приложений в магазине, вроде бы много, но действительно интересного в общем-то и нет. Контент предлагается в основном от российских сервисов потокового вещания. Встроенный браузер по интернету имеет довольно продвинутую функциональность, в частности он хорошо справился с показом главной страницы iXBT.com и содержимого статей. Особая «фишка» браузера — отображения в небольшом окошке видео от текущего источника.

Конечно, все доступное для webOS Smart TV по количеству и функциональности нельзя даже и пытаться сравнивать с разнообразием приложений для Android [TV]. Отметим, что в целом к стабильности работы оболочки у нас никаких претензий не возникло. На команды с пульта проектор реагирует практически без задержки, но, например, страница со списком настроек может появиться через пару секунд после вызова, особенно, если в текущем сеансе работы она еще не вызывалась. Вся функциональность обеспечивается с помощью приложений и на их запуск может требоваться некоторое ощутимое время.

Меню с настройками занимает большую часть экрана, надписи в нем читаемые. Есть русифицированный вариант интерфейса. Качество перевода хорошее, и самое главное, что настройки в большинстве случаев меняют именно то, что ожидаешь, исходя из их наименования.

Непосредственно при регулировке параметров изображения на экран выводится уже только название настройки, ползунок и текущее значение или список вариантов, что облегчает оценку влияния этой настройки на изображение, при этом настройки с ползунками перебираются стрелками вверх и вниз (и колесиком), а со списками — кнопками назад и далее.

Ползунки можно быстро передвигать, ухватившись за них курсором мыши. Списки в меню зациклены, что удобно. Вывод курсора за пределы поля меню делает меню полупрозрачным, а клик там убирает меню с настройками с экрана. Короткое контекстное меню с настройками вызывается при нажатии на кнопку с шестеренкой на пульте. Что-то можно поменять прямо там, не вызывая большое меню

Вообще, функций у данного проектора много, как и особенностей интерфейса, описать их все не представляется возможным. В целом все реализовано на хорошем уровне, удобно для пользователя и приятно с эстетической точки зрения.

Управление проекцией

Фокусировка изображения на экране осуществляются вращением гладкого серебристого кольца на объективе, а регулировка фокусного расстояния — рычажком.

Проекция направлена вверх, так что нижний край области проекции находится на оси объектива. Обычно такой сдвиг обозначают, как сдвиг на 50% (от высоты проекции), но производитель ввел свое обозначение: «Коэффициент направленной вверх проекции 100 %». В наличии функция автоматической коррекции вертикальных трапецеидальных искажений, также есть удобный режим ручной коррекции по каждому из углов в раздельности. Напомним, что эти виды коррекции выполняются цифровым способом, а, значит, качество изображения при этом снижается. Есть несколько режимов геометрической трансформации, позволяющие подстроить исходную картинку типичных форматов под экран 16:9. Есть и продвинутый режим ручной коррекции, который может выручить в некоторых случаях, например, если плеер проектора не справляется с правильным масштабированием изображения.

В меню выбирается тип проекции (фронтальная / на просвет, обычное / потолочное крепление). Проектор среднефокусный, поэтому при фронтальном проецировании его лучше располагать примерно на линии первого ряда зрителей или за ней.

Настройка изображения

В проекторе есть несколько предустановленных профилей (Режим экрана) с редактируемыми значениями настроек изображения.

Настроек регулирующих яркостный и цветовой баланс много, и даже избыточно много для проектора такого класса. Доступный набор настроек зависит от выбранного профиля, что еще больше запутывает пользователя.

Встроенный мультимедийный плеер

При поверхностном тестировании воспроизведения мультимедийного контента мы ограничились рядом файлов, запускаемых в основном с внешних USB-носителей. Источниками мультимедийного контента также могут быть серверы UPnP (DLNA). Были опробованы жесткие диски, внешние SSD и обычные флешки. Два протестированных жестких диска работали от любого из двух USB-портов, а в режиме ожидания или после некоторого периода отсутствия обращения к ним жесткие диски отключались (это настраивается в меню установок). Поддерживаются USB-накопители с файловыми системами FAT32 и NTFS (exFAT не поддерживается), а с кириллическими названиями файлов и папок не было никаких проблем. Плееры обнаруживают все файлы в папках, даже если на диске очень много файлов (более 100 тысяч). В текущей на момент тестирования прошивке явно была какая-то ошибка — именно файловый менеджер не показывал сами файлы на носителе, хотя по папкам навигация работала, а собственно плееры видео/графических файлов и аудиоплеер файлы соответствующих типов показывали.

Нами подтверждена способность проектора показывать растровые графические файлы в форматах JPEG, PNG и BMP, в том числе в виде слайд-шоу под фоновую музыку.

Правда, маленький значок запущенного аудиоплеера убрать нельзя (вернее, можно, но вместе с музыкой).

В случае аудиофайлов поддерживаются множество распространенных и не очень форматов, как минимум AAC, MP3, OGG, WMA (и с 24 бит), MPA, WAV и FLAC (расширение должно быть именно FLAC).

Для видеофайлов поддерживается большое количество самых разнообразных контейнеров и кодеков (вплоть до H.265 с 10 бит, HDR10 или HLG, с разрешением до UHD при 60 кадр/с), несколько звуковых дорожек в разнообразных форматах (AAC, AC3, DTS, MP3), внешние и встроенные текстовые субтитры (русские должны быть в кодировке Windows-1251 или в Unicode, выводится как минимум три строки и 50 символов в строке).

Настройка вывода субтитров имеет множество опций.

Редко, но попадались видеофайлы, с которыми были проблемы. Например, DivX 3 в AVI не воспроизводились, файлы OGM плеер не видит, а MPEG1 VCD и MPEG2 SVCD / KVCD неправильно увеличивались до размера экрана (но это можно исправить вручную). Поддерживается воспроизведение видеофайлов с HDR10 и HLG, а в случае файлов с 10 бит на цвет согласно визуальной оценке градаций оттенков больше, чем у 8-битных файлов. Видеофайлы 4K HDR воспроизводятся нормально в случае контейнеров MP4 и M2TS (HEVC, HDR10), и бледно в случае контейнеров MKV и WebM (VP9). Кстати, в приложении YouTube HDR-поток не выбирается, максимум — 1080p при 60 кадр/с с охватом BT.709, что, впрочем, логично.

Отметим, что в воспроизведении файлов с разрешением 4К на проекторе с матрицей Full HD есть некоторый смысл, так как картинка таких фалов все равно выглядит гораздо более четкой, чем в случае типичного Full HD-файла. В стандартном для видео диапазоне (16—235) отображаются все градации оттенков. Тестовые ролики на определение равномерности чередования кадров помогли выявить, что проектор при воспроизведении видеофайлов подстраивает частоту обновления экрана под частоту кадров в видеофайле, но только на 50 или 60 Гц, поэтому файлы с 24 кадр/с воспроизводятся с чередованием длительности кадров 2:3. Ситуацию спасает функция вставки промежуточных кадров. Максимальный битрейт видеофайлов, при котором еще не было артефактов, при воспроизведении с USB-носителей и по Wi-Fi (5 ГГц) составил как минимум 120 Мбит/с (не было тестовых файлов с большим битрейтом), а по проводной сети Ethernet — как минимум 90 Мбит/с (файл с битрейтом 120 Мбит/с уже периодически замирал на подгрузку). В двух последних случаях использовался медиасервер роутера Asus RT-AC68U. Статистика на роутере показывает, что скорость приема и передачи составляет 866,7 Мбит/с, то есть в проекторе установлен адаптер 802.11ac.

Работа с источниками видеосигнала

Кинотеатральные режимы работы тестировались при подключении к Blu-ray-плееру Sony BDP-S300. Использовалось HDMI-подключение. Поддерживаются сигналы 480i/p, 576i/p, 720p, 1080i и 1080p при 24/50/60 Гц. Цвета правильные, яркостная и цветовая четкость ниже возможной. В стандартном для видео диапазоне (16—235) отображаются почти все градации оттенков (при Контрастность = 99, Яркость = 51). В случае сигнала 1080p при 24 кадр/с кадры выводятся с чередованием длительности 2:3 (но не забываем про волшебную функцию вставки промежуточных кадров).

В случае чересстрочных сигналов только для неизменных частей кадра выполняется склейка из полей, меняющиеся области выводятся по полям. При масштабировании из низких разрешений и даже в случае чересстрочных сигналов и динамичной картинки выполняется сглаживание границ объектов — зубцы на диагоналях выражены несильно. Функции подавления видеошумов работают очень хорошо, не приводя к артефактам в случае динамического изображения. Есть функция вставки промежуточных кадров. Ее качество очень хорошее (но встречается и лучше), в большинстве случаев промежуточные кадры рассчитываются правильно с небольшим количеством малозаметных артефактов и с высокой детализацией. Вставка кадров отключена в режиме Игры.

При подключении к компьютеру по HDMI вывод изображения в разрешении 1920 на 1080 пикселей мы получили с кадровой частотой вплоть до 60 Гц включительно. Вывод собственно изображения на экран осуществляется с заниженной цветовой четкостью. Удивительно, но яркостная четкость также занижена. Например, мира с полосками через пиксель от края до края в центре смазывается до просто серого поля, тогда как к краям полоски начинают различаться. Такое ощущение, что картинка относительно матрицы на 1-2 пикселя растянута или сжата. Эффект проявляется всегда — как при выводе изображения от внешнего источника, так и при воспроизведении во встроенном плеере. Правда, на реальных изображениях (фотографии, кино) потеря четкости не ощущается. На белом поле заметно, что изображение к углам, особенно к верхним немного темнеет. Равномерность черного поля приемлемая. Бликов нет и паразитной засветки нет. Геометрия очень хорошая — изгиб границ проекции составляет порядка 3 мм при ширине 1,5 м. Ширина цветной каймы на границах объектов, обусловленная наличием хроматических аберраций у объектива, минимальная, ее можно скорее вообразить, чем увидеть. Равномерность фокусировки хорошая, к углам слабозаметная пиксельная решетка чуть размывается, но ничего критичного нет.

Звуковые характеристики и потребление электроэнергии

Внимание! Приведенные значения уровня звукового давления от системы охлаждения получены по нашей методике и их нельзя напрямую сравнивать с паспортными данными проектора.

Уровень шума и потребляемая мощность зависят от значения настройки Экономия энергии:

Значение настройки Экономия энергии	Уровень шума, дБА	Субъективная оценка	Потребление электроэнергии, Вт
Выкл.	35,2	тихо	110,1
Минимум	35,2	тихо	112,0
Средне	31,8	очень тихо	87,6
Максимум	30,9	очень тихо	71,5

В режиме ожидания потребление электроэнергии составило 0,9 Вт (Wi-Fi активен). С точки зрения использования в офисе проектор является относительно тихим даже в режимах с высокой яркостью. Дома, если смотреть кино на большом экране, но в затемнении, лучше перевести проектор в режим средней или максимальной экономии энергии. В режимах с высокой яркостью шум от проектора уже будет заметным во время тихих сцен. Встроенные громкоговорители для аппарата такого размера весьма громкие, низких частот нет, есть паразитные резонансы, но они не очень выражены, стереофонический эффект присутствует, но выражен слабо. В целом качество для встроенных миниатюрных источников звука хорошее, музыку слушать не очень приятно, но с озвучкой диалогов эти громкоговорители справляются.

Громкость в наушниках регулируется отдельно от громкости встроенных громкоговорителей. Звук в наушниках имеет запас громкости и шума в паузах нет, самых низких частот явно не хватает, но общее качество звука хорошее, пусть и не выдающееся.

Определение задержки вывода

Мы определяли полную задержку вывода от переключения страниц видеобуфера до начала вывода изображения на экран. В итоге при подключении по HDMI задержка вывода изображения в случае сигнала 1080p при 60 Гц кадровой частоты составила порядка 160 мс в обычном режиме. Это очень большая задержка, работать за ПК с такой задержкой могут только очень спокойные и терпеливые люди. Задержка снижается где-то до 55 мс после включения режима Игры в настройках. Это уже лучше, но все равно даже такая задержка будет чувствоваться как в очень динамичных играх, так и при работе за компьютером, но в последнем случае к ней уже точно можно привыкнуть и перестать замечать.

Измерение яркостных характеристик

Измерения светового потока, контрастности и равномерности освещения проводились по методике ANSI, подробно описанной тут.

Значение настройки Экономия энергии	Световой поток
Выкл.	1570 лм
Минимум	1460 лм
Средне	1140 лм
Максимум	860 лм
Равномерность
+19%, −39%
Контрастность
410:1

Максимальный световой поток немного меньше заявленных 2000 лм. В полной темноте яркости проектора хватает для проекции на экран шириной где-то до 4 м, в слабоосвещенном помещении для экрана шириной метра 1,5 картинка не будет выглядеть очень бледной. Равномерность освещенности белого поля средняя. Контрастность не самая низкая, но у DLP-проекторов она бывает и выше. Также мы измерили контрастность, измеряя освещенность в центре экрана для белого и черного поля, т. н. контрастность full on/full off, которая составила порядка 725:1, что для DLP-проектора немного.

В качестве источника света в данном проекторе используются синий лазерный светодиод и вращающийся круг с люминофором, превращающий часть синего света в желтый (схема LD + P/W). Синий плюс желтый дают белый свет. Для этого источника света заявлен срок службы до 20 000 часов, что на порядок больше типичного срока службы ртутной лампы. Конечно, это не означает, что любой конкретный проектор LG HF80LSR сможет проработать все эти 13 с лишним лет (если использовать его по 4 часа в день), но все же периодических проблем с заменой лампы уже точно не будет.

Анализ зависимостей яркости от времени показал, что частота чередования цветов составляет 120 Гц при сигналах 60 кадр/с, то есть светофильтр имеет скорость 2x. Эффект «радуги» присутствует. Как и во всех DLP-проекторах для формирования темных оттенков используется динамическое смешение цветов (дизеринг).

Сложно понять, с чем это связано, но на передней границе белых объектов, быстро движущихся по темному фону, видна узкая фиолетовая кайма, а на задней границе — узкая зеленая кайма. Хорошо то, что на реальных изображениях (кино) этот эффект практически не проявляется.

Для оценки характера роста яркости на шкале серого мы измерили яркость 256 оттенков серого (от 0, 0, 0 до 255, 255, 255) при Гамма = Средне. График ниже показывает прирост (не абсолютное значение!) яркости между соседними полутонами:

Тенденция роста прироста яркости сохраняется во всем диапазоне, и каждый следующий оттенок значимо ярче предыдущего, в том числе в темной области:

Аппроксимация полученной по 256 точкам гамма-кривой дала значение показателя 2,18, что близко к стандартному значению 2,2, при этом аппроксимирующая функция практически совпала с реальной гамма-кривой:

Оценка качества цветопередачи

Для оценки качества цветопередачи использовали спектрофотометр i1Pro 2 и комплект программ Argyll CMS (1.5.0).

Цветовой охват меняется зависимости от значения настройки Гамма цвета. Если Широкая, то охват близок к sRGB:

Если Расширенная, то охват немного уже sRGB, цвета бледнее, смысла выбирать такой вариант нет:

Смотрим на спектры в случае варианта Широкая (спектр для белого поля (белая линия), наложен на спектры красного, зеленого и синего полей (линии соответствующих цветов)):

Видно, что красный и зеленый цвета разделены слабо, а в случае синего пик очень узкий, что характерно для лазерного излучения.

Графики ниже показывают цветовую температуру на различных участках шкалы серого и отклонение от спектра абсолютно черного тела (параметр ΔE) для самого сбалансированного по цветам предустановленного режима Кино и после пробной коррекции цветового баланса настройками усиления трех цветов (значения 0/-47/-50 для R/G/B):

Близкий к черному диапазон можно не учитывать, так как в нем цветопередача не так важна, а погрешность измерения цветовых характеристик высокая. Видно, что в режиме Кино цветопередача неидеальная, так как цветовая температура довольно высокая, а ΔE около 10, однако оба параметра не сильно изменяются от оттенка к оттенку, поэтому при визуальной оценке особых претензий нет. Коррекция существенно улучшила баланс. Впрочем, выполнять ее особого смысла в данном случае нет, а если и выполнять, то индивидуально под конкретный экран.

Выводы

Проектор LG HF80LSR для своей яркости является весьма компактным устройством. Его можно использовать для проведения презентации на небольшом экране и дома для игр и просмотра развлекательного контента даже в условиях неполного затемнения. Кино, конечно, лучше смотреть в полной темноте и на экране побольше. Проектор является самодостаточным устройством, так как в принципе ему не нужен ни внешний плеер, ни акустика, но по возможности его все же лучше дополнить хорошей многоканальной акустической системой, так как встроенные громкоговорители пригодны только для озвучки диалогов. Отметим, что, несмотря на условно вечный источник света, использование проектора в качестве компьютерного монитора осложнено из-за некоторого занижения четкости изображения.

Достоинства

«Вечный» лазерно-люминофорный источник света
Очень удобный пульт ДУ с функцией мыши
Необычный дизайн
Небольшие размеры и вес
Встроенный плеер, воспроизводящий мультимедийные файлы с USB-носителей и по сети
Хорошо работающая функция вставки промежуточных кадров
Возможность беспроводного приема изображения
Вывод звука по Bluetooth
Управление с помощью мобильного приложения
Пульт можно настроить на управление другой техникой
Удобное меню
Стандартные разъемы интерфейсов
Тихая работа в режиме пониженной яркости
Русифицированное меню

Недостатки

Нет вывода пиксель в пиксель
Заметная задержка вывода изображения
Пульт ДУ без подсветки
Вариация длительности кадров в случае сигнала с 24 кадр/с

За оригинальный дизайн проектор LG HF80LSR получает редакционную награду:

лечение, операция в Санкт-Петербурге, цена

Аневризма левого желудочка сердца — это тяжелое осложнение перенесенного инфаркта миокарда, представляющее собою участок истонченной сердечной мышцы. Поврежденный участок мышечной ткани, принявший на себя давление крови во время приступа, продолжает испытывать давление, не в силах принять первоначальное положения.

В результате ткань истончается и растягивается, образуя выпячивание- аневризму. Чаще всего поражается левый желудочек в передней верхней части.

Аневризма левого желудочка сердца классифицируется по нескольким признакам:

1. По времени появления:

Острая форма — выявляется в срок до 2 недель после сердечного приступа.
Подострая форма — обнаруживается в период со 2 по 6 неделю после инфаркта, чаще всего характеризуется неправильным формированием рубцовой ткани.
Хроническая форма — технически сложная для диагностирования, симптоматически схожа с острой сердечной недостаточностью.

2. По форме проявления:

Грибовидная — выпячивание большого участка ткани на узкой шейке.
Мешковидная — округленная по форме деформация, образующаяся на широком основании сердечной мышцы.
Диффузная — выпячивание вытянутого участка ткани с углублением в виде чаши;
Расслаивающаяся — наличие множественных выпячиваний на одном месте («аневризма в аневризме»).

В практике более часто встречаются диффузные формы, реже диагностируют расслаивающуюся и грибовидную аневризмы.

3. По структуре:

Истинное — выпяченное из рубцовой или омертвевшей ткани образование на стенке желудочка.
Ложное — изъян, сформировавшийся вследствие нарушения целостности мышечной ткани сердца, с высоким риском разрыва аневризмы.
Функциональное — деформированный участок жизнеспособной мышечной оболочки.

Симптомы и причины появления

Основная причина появления аневризма — инфаркт миокарда. Так же появление истонченных, выпирающих участков ткани на сердце может быть спровоцировано такими причинами, как:

повышенная физическая нагрузка в течение длительного периода времени;
стойкое повышенное артериального давления;
инфекционные заболевания, такие как: сифилис, бактериальный эндокардит и даже регулярное воспаление миндалин;
травматизм (ранение в сердце, тупые травмы грудной клетки). Сюда можно отнести пулевые ранения, колото-резаные раны, падение с высоты, автомобильные аварии.

Симптоматически наличие аневризмы левого желудочка сердца определить невозможно, но поскольку она вызывает нарушения работы сердца то и, соответственно, вызывает общие признаки расстройства сердечной деятельности. Среди них:

болезненные ощущения в области сердца;
сердечные боли после физических и эмоциональных нагрузок;
дискомфорт области груди;
одышка и учащенное сердцебиение;
частые головокружения обморочные состояния;
отечность конечностей;
признаки удушья, нехватки воздуха и другие симптомы.

Диагностировать аневризму желудочка сердца может врач-кардиолог. После осмотра пациента и получения результатов всех необходимых исследований, в том числе ЭКГ, УЗИ и МРТ. Своевременная диагностика поможет избежать тяжелейших осложнений, часто смертельных. Для определения плана лечения необходимо точно знать локализацию, структуру и размеры аневризмы.

Методы диагностики

Главные способы диагностирования аневризмы основаны на последовательном выявлении клинических и инструментальных признаков. Начинается обследование с опроса больного, сбора анамнеза, некоторых лабораторных исследований крови и мочи — эти данные позволяют обнаружить сопутствующие заболевания, наличие которые может повлиять на развитие аневризмы. Пациент также получает направление на ЭКГ, МРТ или УЗИ и другие исследования.

Традиционные методы диагностики и информация, которую они предоставляют:

ЭКГ — позволяет выявить признаки обширного инфаркта, даже перенесенного ранее.
МРТ — предоставляет данные о локализации аневризмы и ее размеры.
УЗИ — позволяет визуально осмотреть зоны выпячивания ткани сердца, определить форму аневризмы.
ЭхоКг — определяет структуру выпячивания (истинное, ложное, функциональное), обнаруживает тромбы в полости сердца, при их наличии.
Левая вентрикулография — помогает определить не только локализацию и размер аневризмы, но и, что более важно, наличие или отсутствие сокращений в аневризме, и их характер.

Комплексное всестороннее обследование пациента позволяет получить полную картину деформации тканей желудочка, а значит, назначить точное и наиболее эффективное лечение. Помимо медикаментозной терапии, больным с выявленной аневризмой левого желудочка сердца может быть назначено хирургическое вмешательство. Обычно такое решение принимается лечащим врачом в случае, если размеры поврежденной ткани превышают 20% площади стенки.

Отказ от обследования и лечения – это большой риск для пациента. Наличие не диагностированной аневризмы может спровоцировать развитие сопутствующих заболеваний от аритмии и тромбоза до внезапной смерти по причине разрыва истонченной стенки.

Методы лечения

В связи с относительно благоприятным прогнозом при бессимптомных аневризмах левого желудочка (ЛЖ), показания к хирургическому лечению у таких пациентов относительны. Тем не менее, у пациентов, которым показана хирургическая реваскуляризация миокарда (АКШ), в некоторых случаях необходимо выполнять хирургическое восстановление правильной формы левого желудочка.

Хирургическое лечение абсолютно показано пациентам, у которых в результате инфаркта миокарда появилась дисфункция ЛЖ с участками акинезии и дискинезии его стенок и закономерным увеличением объема ЛЖ: > 80 мл / м² при сокращении и > 120 мл / м² в момент расслабления, а также при угрозе разрыва аневризмы и в случае тромбоэмболического синдрома при тромбированных аневризмах.

При правильном профессиональном подходе, внимательном изучении функции ЛЖ по данным ЭхоКГ, оценке формы и локализации аневризмы, фракции выброса сокращающейся (уцелевшей) части ЛЖ – операция по устранению левожелудочковой аневризмы является вполне оправданной, так как впоследствии снижается напряжение в стенке ЛЖ, мышечные волокна вновь направляются в правильную сторону, возрастает систолическая и улучшается диастолическая функция ЛЖ.

Относительные противопоказания: крайне высокий риск анестезии, отсутствие «живого» миокарда за пределами аневризмы, низкий сердечный индекс.

При хирургическом лечении аневризмы ЛЖ выполняется стандартный доступ путем срединной стернотомии. Аппарат искусственного кровообращения подключается как для АКШ, для удобства устанавливается дренаж ЛЖ через правые легочные вены. После кардиоплегии участок аневризмы выглядит как белесая, фиброзная площадка, впалая в полость левого желудочка. Выполняется разрез аневризмы вдоль передней нисходящей артерии, отступая от нее не менее 1,5 см. Имеющийся в полости тромб удаляется, исключая оставление даже очень мелких фрагментов. Часто такие операции сопровождаются вмешательством на митральном клапане, а также шунтированием передней нисходящей артерии и других артерий при наличии показаний. Оценив объем резецированного участка приступают к ремоделированию и восстановлению геометрии ЛЖ. Методик для этого предложено много, ниже мы приведем основные из них. После завершения хирургических манипуляций на сердце, выполняется важный процесс изгнания воздуха из полостей сердца, следом к сердцу пускают кровоток, снимая зажим с аорты, и через пару минут происходит восстановление сердечной деятельности. Окончание сеанса искусственного кровообращения для оперированного ЛЖ может стать настоящим испытанием и потребовать применение до трех инотропных и вазопрессорных препаратов, а также внутриаортальной баллонной контрапульсации.

Техники ремоделирования ЛЖ

Линейная пластика по Кули (Cooley). Стенка аневризмы иссекается с оставлением краев шириной 3 см для обеспечения надежной линейной герметизации полости ЛЖ, при помощи толстой артавматичной нити из полипропилена и укрепляющих фетровых прокладок вдоль обоих краев шва. Наибольшая надежность данной пластики достигается путем двухрядного шва. Первый ряд – матрасный шов, второй-обвивной.

Кисетная пластика по Жатене (Jatene). После вскрытия аневризмы ЛЖ на границе рубцовой ткани и жизнеспособного миокарда накладывается кисетный шов и затягивается. ЛЖ герметизируется аналогично предыдущему случаю.

Эндовентрикулопластика заплатой по Дору (Dor). Вскрывается полость аневризмы ЛЖ, выполняется тромбэктомия, на границе рубцовой ткани и жизнеспособного миокарда накладывается и затягивается кисетный шов. В оставшийся дефект стенки вшивается заплата из ксеноперикарда, закрывая дефект стенки и исключая из гемодиамики тромбогенную поверхность. Далее куполом над заплатой сшиваются стенки аневризматического мешка двухрядным линейным швом.

Прогресс не стоит на месте, и методики постоянно совершенствуются, но основные хирургические принципы для лечения данной патологии представлены вашему вниманию и заключаются в стремлении к уменьшению полости ЛЖ за счет резекции нефункционального аневризматического мешка и восстановлению близкой к нормальной геометрической формы ЛЖ применяя разной формы заплаты и кисетные пластики.

Результаты хирургического лечения аневризмы левого желудочка сердца

Частым осложнением после операции по поводу аневризмы ЛЖ является синдром малого выброса, который развивается вследствие чрезмерного уменьшения размеров полости ЛЖ, а так же желудочковые нарушения ритма и легочная недостаточность.

30-ти дневная летальность в последние годы снизилась и составляет 3-7%. Факторы повышенного риска операции это: пожилой возраст, женский пол, операция в экстренном порядке, а так же операция дополненная протезированием митрального клапана, исходно низкая сократительная способность миокарда (ФВ менее 30%), умеренная и высокая легочная гипертензия, почечная недостаточность.

При правильном выполнении операции в отдаленном послеоперационном периоде наблюдаются, как правило, положительные эффекты. Улучшается: функция ЛЖ, фракция выброса, толерантность к физической нагрузке. Снижается класс стенокардии, класс сердечной недостаточности. 5-летняя выживаемость пациентов достигает 80%, 10-летняя – около 60%.

В нашей клинике успешно выполняются все виды операций на сердце включая хирургическое ремоделирование и пластику при аневризмах ЛЖ.

Стиральная машина LG 6 MOTION F80B8LD6

ОБЩИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
Цвет	белый
цвет дверцы	белый
Максимальная допустимая загрузка (кг)	5
тип мотора	Прямой привод (Inverter Direct Drive)
6 MOTION Технология (6 Движений заботы)	+
тип установки	отдельностоящая
Съёмная крышка для встраивания	+
тип загрузки	Фронтальная
датчик пенообразования	+
Автобалансировка	+
Управление	Электронное
Максимальная скорость отжима (об / мин)	800
Изменяемая скорость отжима (об / мин)	800/600/400 / Без отжима
Диапазон температур стирки (° С)	Холодная / 20/40/60/95
Экономичная система интеллектуальной стирки	+
Безопасная не нагревающаяся дверца	–
Диаметр люка (мм . )	300
Угол открытия дверцы	180
Регулируемые ножки (мм . )	10
Дисплей	светодиодный
Индикатор оставшегося времени стирки	+
Индикатор рабочего цикла	+
Индикатор блокировки дверцы	+
Индикатор ошибок / Самодиагностика	+
Сигнал ошибок	+
Шерсть Марка Сертификат	+
Подключение к холодной воде	+
тип барабана	пузырьковая поверхность
Гарантия	1 год + 10 лет на МОТОР *
ПРОГРАММЫ сТИРКИ
программы стирки	13
Хлопок	+
Хлопок-Макс	+
спортивная одежда	+
Деликатная	+
Шерсть	+
пуховое одеяло или УДАЛЕНИЕ ПЯТЕН(зависит от модификации)	+
смешанные ткани	+
Интенсивно 60	+
одежда малыша	+
повседневная стирка	+
Забота о здоровье	+
30 Быстро	+
Полоскание + Отжим	+
ДОПОЛНИТЕЛЬНЫЕ РЕЖИМЫ
Количество опций	14
только отжим	+
без отжима	+
предварительная стирка	+
супер полоскание	+
без складок	+
без слива	+
Интенсивная стирка	+
Звуковой сигнал вкл. / Выкл.	+
Блокировка от детей	+
Режим таймера, ч	3 – 19
Выбор скорости отжима	+
Выбор температурного режима	+
Функция “Очистка барабана”	+
LG Смарт Диагноз ™ (мобильная диагностика)	+
ТЕХНИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
Потребление воды (л)	48
Допустимое давление воды	1,0 ~ 10 кгс / см2 (0,1 ~ 1 МПа)
класс энергопотребления	A
класс стирки	A
класс отжима	C
Нулевое энергопотребление в режиме ожидания	+
Энергопотребление, (кВтч)	0,85
Напряжение	220-240 В ~ 50 Гц
Максимальная мощность	1700 Вт
ГАБАРИТЫ
Размеры (ширина х глубина х высота, мм . )	600 х 440 х 850
Размеры с упаковкой (ширина х глубина х высота, мм . )	645 х 540 х 885
Вес (кг)	59
Вес в упаковке, кг	62

Расшифровка маркировки телевизоров LG | Каталог цен E-Katalog

Компания LG разделяет маркировки OLED телевизоров и телевизоров с обычными матрицами, начнем с последних.

1. Первое что мы видим в названии модели — это диагональ телевизора в дюймах.

2. За диагональю следует тип матрицы экрана, установленного на модели («S» — Super UHD, Nano Cell матрица, «U» — UHD матрица , «L» — LED матрица, «E» — OLED до 2016 года).

3. Далее идет год разработки модели («N» — 2020, «M» — 2019, «K» — 2018, «J» — 2017, «H» — 2016, «F» и «G» — 2015, «B» и «C» — 2014, «N» и «A» — 2013).

4. После года разработки модели идет серия телевизоров. Серии представлены достаточно широко и, в зависимости от года выпуска, объединяют в себе те или иные технологии. Серии завязаны на типе матрицы, установленной на конкретной модели и повышаются с более крутой начинкой. Как пример в бюджетных моделях серия будет шестой, в моделях с UHD матрицей 7, в телевизорах с Nano Cell матрицами 8 или 9 и т. д.

5. Следом за обозначением серии расположилась цифра, которая характеризует непосредственно модель устройства в серии с определенными разъемами и техническими характеристиками.

6. Маркировка следующая после означает изменение дизайна модели. В рамках модели производитель может изменять тип подставки, толщину рамки или цвет устройства. Именно эту информацию несет в себе данное обозначение.

7. Начиная с 2018 года последние 3 буквы обозначают следующее параметры: рынок, для которого создана модель («P» — модель для всех стран, «W» — модель для корейского рынка, «S» — Великобритания и Сингапур, «T» — США), тип тюнеров установленных на телевизор («L» — DVB-T/T2/T2HD/C/S/S2, «U» — ATSC, Clear QAM, «N» — ATSC 3.0, ATSC 1.0), и модификация модели (на данный момент только маркировка «A»).

7.1 Для моделей 2018 года и старше, после модификации модели шла маркировка типа цифрового тюнера “на борту” устройства («T» — DVB-T, «C» — DVB-C, «S» — DVB-S2/T/C, «V» — DVB-S2/T2/C, «0» — DVB-T/C).

Рассмотрим пример маркировки телевизора

LG 55UM7660 55 “

55 — диагональ устройства 55 дюймов, U — матрица телевизора UHD, М — год разработки модели — 2019, 7 — седьмая серия, 6 — шестая модель в серии, 60 — отличительные особенности в дизайне, P — модель для всех стран, L — установлены тюнеры DVB-T/T2/T2HD/C/S/S2, А — модификация модели.

Телевизоры LG без технологии OLED

Так же стоит отметить что начиная с 2020 года LG вводит новый вид маркировки Nano Cell телевизоров, не отменяя маркировку моделей SN. Возможно это в ближайшее время изменится но пока новые маркировки Nano Cell моделей выглядят так:

1. Диагональ телевизора в дюймах.

2. Аббревиатура NANO, соответственно Nano Cell, для большей узнаваемости и быстрой идентификации телевизоров NanoCell.

3. Далее идет серия телевизоров.

4. Модель в серии.

5. Первое из трех последних обозначений это тип тюнера и региональные стандарты.

6. Следом идет год выпуска («N» — 2020).

7. Замыкает маркировку обозначение модификации модели.

Что касается маркировки OLED телевизоров, то в 2018 году она немного изменилась. Теперь название модели будет выглядеть так:

1. Сразу мы видим буквы «OLED» — это означает что модель телевизора имеет матрицу на основе органических светодиодов (технология OLED — Organic Light Emitting Diode).

2. Далее следует диагональ телевизора в дюймах.

3. За диагональю расположилась буква обозначающая модель OLED телевизора. Она объединяет в себе как техническое оснащение, поддержку технологий, так и внешний вид, дизайн устройства (с 2018 года за дизайн отвечает отдельная буква, пункт 7.).

4. Следующая цифра, а в 2020 буква — это год выпуска модели («6» — 2016, «7» — 2017, «8» — 2018, «9» — 2019, «X» — 2020 ).

5.1. После года выпуска находится буква, которая с 2018 года указывает на регион продажи модели («P» — Европа, США, «W» — Корея).

5.2. До 2018 года данная цифра обозначала тип тюнера («V» и «J» — DVB-T2/C/S2, «P» — ATSC, ISDB, «D» — DVB-T/T2/C/S/S2, «T» — DVB-T2).

На этом маркировка OLED телевизоров 2016-2017 заканчивалась, следующие маркировки относятся только для моделей 2018 года.

6. За регионом продажи будет тип тюнера («U» — ATSC, Clear QAM, «L» — DVB-T/T2/T2HD/C/S/S2, «N» — ATSC 3.0, ATSC 1.0).

7. Последняя буква обозначает дизайн телевизора (как и в обычных телевизорах одна модель может выпускаться с некоторыми изменениями в дизайне).

Рассмотрим пример: телевизор

LG OLED65E8 65 “

OLED — телевизор с матрицей на основе органических светодиодов, 65 — диагональ устройства 65 дюймов, Е — модель телевизора, 8 — год выпуска модели — 2018, Р — телевизор выпущен для Европейского и Американского рынков, U — тип тюнера — ATSC, Clear QAM, A — дизайн устройства.

Телевизоры LG с технологией OLED

Ознакомьтесь с другими материалами по этой теме: — Расшифровка маркировки телевизоров Samsung; — Расшифровка маркировки телевизоров Philips; — Расшифровка маркировки телевизоров Sony.

ᐅ LG MS2535GIS отзывы — 80 честных отзыва покупателей о микроволновой печи LG MS2535GIS

Самые выгодные предложения по LG MS2535GIS

Стас, 14.05.2020

Достоинства:
Мощная, красивая, вместительная

Недостатки:
нет

Комментарий:
Мощная микроволновка, с красивым дизайном. Идеально вписалась в кухонный гарнитур. Мощность 1000вт очень быстро разогревает, а главное еда больше не холодная внутри. На магнитрон гарантия 10лет, а это самое дорогое в печке и самое важно, не может не радовать. Кнопок нет, мыть легко. В общем рекомендую.

Дмитрий, 19.04.2020

Достоинства:
тихая, вместительная.

Недостатки:
Габариты, больше чем у обычной, но нам вошли идеально.

Комментарий:
Купили данную микроволновку 3 месяца назад. Сразу хочется отметить качественный и равномерный разогрев, за счет инверторного магнетрона. Так же приличный объем 25 литров. Она довольно таки тихо работает, что не может не радовать. Легко моется, покрытие надежное. Удобно сделан поворотный стол, расположен на шести роликах, а не как почти везде на трех. Удобное сенсорное управление. Так же хочется отметить дизайн, полностью черная, и внешнее стекло, обычно ставят пластик.

Анатолий, 12.04.2020

Достоинства:
Очень быстро разогревает. Тихая

Недостатки:
Нет

Комментарий:
Приобрел эту свч около полугода назад, рекомендовали как самую тихую и быструю с точки зрения разогрева. Не разочаровался. Скорее наоборот – был приятно удивлен, что суп теперь по краям и в центре почти одинаковой температуры, а разморозка не превращает полуфабрикат в варево. Дизайн очень даже, после пластиковой расцарапаной ребенком дверцы на старой свч, стелко здесь как нельзя кстати. пару раз недоследил за супом, был очень удивлен что очищается внутренняя камера буквально обычной салфеткой. Уровень шума так же на уровне, на весьма тихом кстати. в общем всем рекомендую, остался очень доволен!

Андрей, 22.04.2019

Микроволновка супер

Вера, 26.03.2019

Плюсы: Тихая, вместительная, функциональная, красивая.

Брали на замену сдохнувшей старой другой марки. Сразу скажу – очень довольны.
Качество разогрева и готовки – отличное. Прогревает действительно изнутри.
Первую пробу делали на попкорне – ни одного обуглившегося и ни одного оставшегося целым зерна, со старой СВЧ так не получалось.
Удобные программы: самая часто используемая у нас готовка “печеный картофель”, разогрев – “суп” (даже самый густой не надо перемешивать, прогревается равномерно).
Управление простое – минимум кнопок, максимум функциональности. Открываешь дверцу – подсказки всегда перед глазами, табло тоже подсказывает следующую кнопку.
Тихая, вместительная, очень порадовала музыка вместо пищалки в качестве сигнала.
Бонусом – яркая подсветка.

Алексей, 25.03.2019

Плюсы: Дизайн, функционал. ЙОГУРТ И РАСТОПКА ПРОСТО КЛАСС.

Минусы: Крайне чувствительная к перепадам напряжения. При падении ниже 210В стакан воды греет до 40С 3 минуты. При 220В 30 с. При работе микроволновки падает WiFi в квартире. До роутера 7м и бетонная стена. Подобных проблем со старым Самсунгом не было.

Аппарату почти год. Если бы не чувствительность к напряжению и проблема с Wi-Fi поставил бы 10, а так 3 с натягом.

Ирина, 21.03.2019

Плюсы: Стильная, инвекторный мотор, сенсорная

Минусы: Слишком замудренное меню

Пользуемся ей уже пол года, на кухню вписалась отлично, очень красивая и стильная, сенсор легко нажимается, но чтобы выбрать нужную программу нужно нажать кучу кнопок, а если разогревать без выбора программы то время прибавляется по 10 секунд) разогревает конечно намного более равномерно чем обычная микроволновка

Алина, 20.03.2019

Плюсы:
+

Минусы:
Минусов не имеется

«Отзыв февраля» Всем привет! Как я уже давно с семьей заказываем достаточное количество вещей с Эмвидео я бы хотела по советовать вам эту микроволновую печь! Давно хотели обзовестись этим товаром, но не как не находили именно то что нам нужно. У этой же печи много функций. Очень классный дизайн. Легко разобраться в установке!! Скажу более у нее сэнсорное управление это очень удобно. Прослужит много лет!!

алекс, 11.03.2019

Плюсы:
Красивый дизайн

Минусы:
Нет в наличии ни в одном магазине (в Чехове только) , в остальных витринный образей

Купил бы , да нет в наличии товара в сети магазина

Диана, 04.03.2019

Плюсы: Красивая

Минусы: Нет

Здравствует , купила микроволновую печь мне все нравится быстро греет, равномерно прогревает еду , сияния подсветка )) классная песня при включение и при окончание приготовление

Виталий, 23.02.2019

Очень хорошая печь, сделана шикарно, не скользит, греет очень быстро,.

Дмитрий, 15.02.2019

Плюсы: Высокая мощность, гарантия на инвертер 10 лет, сенсорное управление, достаточно большой объем. Охлаждение.

Минусы: Может попасться заводской брак, сенсорное управление, механизм открывания

Купили в январе 18. Достали из коробки, проработала вечер, на следующий день начался треск справа вверху и перестала греть. Пришлось везти менять. Дали второй шанс этой модели. Пока работает нормально. Объем камеры достаточно большой. При покупке сразу отмели модели с грилем, т.к. в предыдущей пользовались только раз 5-10 за 15 лет службы. Если есть духовой шкаф, то смысла в гриле нет, только сложнее мыть. Греет быстро и равномерно, всей семье нравится.
Сенсорное управление на мой взгляд не доработано. Работает отлично, нареканий нет, но ночью или вечером приходится находить на ощупь кнопки включения при тусклом свете. Панель гладкая и найти кнопку включения несколько затруднительно.
Открывается и закрывается легко, но из-за своего не большого веса при установке на кронштейн стоит неустойчиво. пришлось снять т.к. можно потянуть за дверцу и нечаянно уронить если не придерживать. До этого микроволновка открывалась клавишей и была тяжелее, проблем таких не возникало.
Охлаждение удобное, можно встраивать т.к. производится через переднюю дверцу.
Работает тихо. Нареканий сильных нет. на твердую 4 товар.

Дмитрий, 12.02.2019

Плюсы: Сенсорная панель управления, хороший отклик.

Минусы: не обнаружено

Долго выбирали подходящую модель по дизайну, решили остановиться на данной модели. Необычный дизайн, но к нему быстро привыкаешь. Удобное управление, подсветка во время разогрева или приготовления пищи, хорошая мощность. Всем советую. После месяца эксплуатации недостатков не увидел.

Анастасия, 08.02.2019

Плюсы: Все

Минусы: Нет

«Отзыв об LG» Купили эту микроволновку сразу как она появилась в магазинах. Она у нас примерно год и никаких минусов мы не обнаружили. Разогревает очень быстро при этом почти не нагревает посуду. Привыкали только к вентилятору, который жужжит после окончания работы еще несколько секунд. Она даже мороженое разогревает так, что оно не тает, а становится просто мягким. Мы ей очень довольны, рекомендую!

Игорь, 07.02.2019

Плюсы: Управление и мощность

Минусы: Особых не видел, дверцу не очень удобно открывать, если печка не закреплена

Нормальная машинка,греет ровно и быстро

Анатолий, 29.01.2019

Плюсы: Равномерный и быстрый разогрев, дизайн бомба

Минусы: При разогреве блюдо внутри сильно бьется, звук неприятный, и после долгое охлаждение

В мою кухню (черно-красный цвет) вписалась просто бесподобно, закаленное стекло завораживает. Сравнивал ее с простой микроволновкой, небо и земля, и по равномерности разогрева и по времени. Единственное бесит шум при разогреве, гляди тарелка сейчас разобьется при движении по кругу. А так товар советую, инвертер сила

Алексей, 27.01.2019

Плюсы: +++

Минусы: не выявили

Подкупила внешним видом, на деле оказалась очень хорошая микроволновая печь. Прогревает равномерно. Пробовали готовить молочную кашу, отлично получилось! Единственное остаются отпечатки на поверхности дверки, но моется легко и быстро!

Алексей, 21.01.2019

Плюсы: Качественное приготовление и разогрев. Легкая. Матовые боковые поверхности и сенсорная панель.

Минусы: Маркость (хоть и умеренная).

Пользуюсь пока только 3-ю неделю. Нареканий по работе нет. Хорошо вписалась в интерьер кухни. Установлена на настенные кронштейны, так что, малый вес при выборе также имел значение. Все хорошо, но к стандартным минусам почти все микроволновок можно отнести маркость лицевой (глянцевой) панели, да и на сенсорной (матовой) панели тоже остаются следы, в белом цвете скорее всего было бы заметно чуть меньше, в идеале нержавейка, но стоит дороже. Куплена по акции и с учетом всех дополнений чуть менее 9 т.р.

Денис, 12.01.2019

Плюсы: Дизайн, хорошая мощность, большой объем, функция “защита от детей”

Минусы: Пока не обнаружил

Красивый, лаконичный дизайн. Хороший объем камеры, но при этом компактная. У микроволновки большая мощность, за счет этого и быстрый разогрев, что экономит иногда время когда опаздываешь. Приятные мелодии при включении и окончании работы. Есть возможность готовить йогурты, но пока не делали. Главное есть функция “защита от детей”, т.е. блокируется панель управления печи, у кого есть маленькие дети – сразу поймут необходимость этой функции (мой ребенок иногда начинает нажимать на все кнопки подряд, но из-за блокировки панели микроволновка также продолжает работать).

Магомед, 08.01.2019

Плюсы: Дизайн, функциональность

Минусы: Походу попался брак

31.12.18 купили данный товар, приехали домой дали отстоятся, зате подключили при разогретые начал выдавать зловонный запах. Подумали, что может надо ещё подождать, прошло 8 дней запах все ещё остался. Сегодня вернули в сервисный центр, ждём результатов.

Александр, 08.01.2019

Плюсы: Очень красивая. На мою кухню вписалась просто идеально. Хорошо греет, не шумная, стильная led подсветка, посуда после прогрева реально не горячая.

Минусы: Пока не выявил.

Начитавшись хвалебных отзывов пошёл и купил. Всё в принципе устраивает только одно но… не работает охлаждение после работы микроволновки. Позвонил в службу поддержки, после 20 минут песен-ожиданий мне специалист через SMART DIAGNOSIS выдал следущее: ” Устройство работает нормально, просто Ваша модель не поддерживает функцию охлаждения” .

Сергей, 30.11.2018

Плюсы: Довольно привлекательный дизайн, инвертерный магнетрон.

Минусы: Пока не обнаружено.

В первую очередь привлекла своим внешним видом, да и использование инвертерного магнетрона тоже повлияло на выбор. Работает тише чем обычная. Приятные звуковые сигналы. Немного дороговата, но покупалась по акции и с учетом купонов обошлась в 9000. В целом доволен.

Ольга, 29.11.2018

Плюсы: Достаточно тихая при разогреве, вместительная. Разогревается еда, а не посуда как во многих микроволновка хорошо. Очень чувствительный сенсор, яркая подсветка и интересная ненавязчивая мелодия

Минусы: Нужно время чтобы разобраться в функциональности

Пользуюсь два месяца, все устраивает. При выборе особо никаких критериев небыло, хотелось темную и надёжную без лишних функций наподобие гриля и ТД..

Лорелея, 08.11.2018

Хорошая печка, дельная. Влезает большое блюдо. От детей есть защита, надо только не забывать про нее)

Сергей, 23.09.2018

Плюсы:
Дизайн, тихая и вместительная

Минусы:
пока нет

Порекомендовал продавец, сказал новинка. Покупали по картинке и не пожалели, нравится все. Так как модель новая взяли быстросервис на 3 года (мало ли что).

Владимир, 24.08.2018

Плюсы: Мощность, стильный дизайн

Минусы: Нет возможности изменить мощность микроволн во время приготовления

Отличная микроволновка, большая, мощная, сенсор работает на ура. Но один недостаток, для меня он конечно большой, но для кого то не так важен – нельзя изменить мощность микроволн во время разогрева, без остановки разогрева. Первый раз конечно с таким сталкиваюсь, во всех ранее использованных микроволновках мощность легко меняется во время приготовления путем нажатия на кнопку мощности МКВ. Ну буду привыкать)

Александр, 26.07.2018

Приобрел микроволновку в интернет магазине МВидио.
Все плюсы описанные в предыдущих отзывах перечеркиваются тем, что печь не выполняет свою основную функцию. Комментировать дизайн ,приятную мелодию и т.п. для бракованного товара язык не поворачивается. С 04.02.19 через день обращаюсь в сервисную службу LG, но слышу лишь обещания , что позвонит сервисный специалист и просьба оценить работу обещавшего.

Марина, 04.07.2018

Плюсы: дизайн просто!!!!!

Минусы: нет

отличная микроволновая печь!!поехали за самсунгом,а вернулись с LG!!!!!передумали в последний момент)))и не прогадали!!!

Андрей, 03.07.2018

Плюсы: Новое – всегда хорошо! Мощная. Шумит не сильно. Не пищит, а мелодично напоминает.

Минусы: На мощности 1000 Вт разогревает не только содержимое, но и саму посуду. Минус это или норма, не знаю. Прежняя старушка-микроволновку не была такой горячей)

Использую 2 месяца. Готовку не пробовал, только разогревал еду. Мощная машинка, радует.

Лилия, 25.06.2018

Плюсы: Стильная, бесшумная,

Очень хорошая микроволновая печь!

Индекс / files / kiss / data / l

900zh23 l12_ami -16 22:09

Название	Последнее изменение	Размер

Родительский каталог		–
435K
l_01.lzh	2007-09-16 22:09	74K
labyrnlg.lzh	2011-05-22 14:32	1.4M
lachmose.lzh	2007-10-21 09:43	36K
lacie.lzh	2007-09-16 22:09	223K
lady.lzh	2007-09-16 22:09	899K
ladyluna.lzh	2008-02-18 21:22	81K
ladyosca.lzh	2007-09-16 22:09	388K
ladyros.lzh	2007-09-16 22:09	676K
ladysere.lzh	2007-09-16 22:09	1.7M
lafang.lzh	2007-09-16 22:09	261K
lafdy2.lzh	2007-09-16 22:09	33K
lailai.lzh	2007-09-16 22:09	732K
lain.lzh	2007-09-16 22:09	151K
lain_lg.лж	2011-05-22 14:33	699К
lainey.lzh	2007-09-16 22:09	1.1M
лакла.лж	2007-09-16 22:09	50K
lalice.lzh	2007-09-16 22:09	155K
lammy.лж	2007-09-16 22:09	24К
лани.лж	2007-09-16 22:09	49К
ланих3.ж	2007-09-16 22:09	31K
lantelle.lzh	2007-09-16 22:09	71K
laracrft.lzh	2007-09-16 22:09	55K
larva.lzh	2007-09-16 22:09	72K
larvax.lzh	2007-09-16 22:09	78K
laura.lzh	2008-04-27 17:25	19K
laura1.лж	2007-09-16 22:09	82К
laurabow.lzh	2007-09-16 22:09	113K
лаз.ж	2007-09-16 22:09	59K
lb.lzh	2007-09-16 22:09	40K
lbanisa.lzh	2007-09-16 22:09	934K
lbmana.lzh	2011-08-21 09:23	139K
lbrache.lzh	2011-08-07 16:09	349K
lbri2.lzh	2007-09-16 22:09	211K
lc_angie.lzh	2007-09-16 22:09	235K
lc_cxmas.lzh	2007-09-16 22:09	104K
lc_mimi.lzh	2007-09-16 22:09	90K
lcarol.lzh	2007-09-16 22:09	128K
lckori.lzh	2007-09-16 22:09	63K
ldeath3.lzh	2007-09-16 22:09	306K
ldg_sm.lzh	2007-09-16 22:09	78K
lee.lzh	2007-09-16 22:09	11K
leela.lzh	2007-09-16 22:09	25K
leeloo.lzh	2007-09-16 22:09	92K
leena2.lzh	2007-09-16 22:09	268K
lefey.lzh	2007-09-16 22:09	618K
леголас.лж	2007-09-16 22:09	105K
legolas1.lzh	2007-09-16 22:09	678K
ножки.lzh	2007-09-16 22:09	717K
legs_nog.lzh	2007-09-16 22:09	366K
legj.lzh	2007-09-16 22:09	41K
leila.lzh	2007-09-16 22:09	76K
leilac.lzh	2007-09-16 22:09	92K
leirua.lzh	2007-09-16 22:09	80K
lel2007.лж	2008-04-27 17:25	113K
lelilian.lzh	2007-09-16 22:09	93K
лимон1.lzh	2007-09-16 22:09	382K
lemon2.lzh	2007-09-16 22:09	186K
lemurgir.lzh	2007-09-16 22:09	86K
lenore.lzh	2007-09-16 22:09	33K
lenoref.lzh	2007-09-16 22:09	287K
lenoret.lzh	2007-09-16 22:09	53K
ленорев.лж	2010-03-07 10:50	177K
leo.lzh	2007-09-16 22:09	26K
leo_sp.lzh	2007-09-16 22:09	83K
leololo.lzh	2007-09-16 22:09	152K
leona.lzh	2007-09-16 22:09	193K
leonier.lzh	2007-09-16 22:09	40K
levans.lzh	2007-09-16 22:09	374K
lewaunna.lzh	2007-09-16 22:09	47K
lexi.lzh	2007-09-16 22:09	319K
lexivodo.lzh	2007-09-16 22:09	409K
lfairy.lzh	2007-09-16 22:09	279K
lg_mars.lzh	2007-09-16 22:09	298K
lg_merc.lzh	2007-09-16 22:09	196K
lg_moon.lzh	2007-09-16 22:09	76K
lg_tench.lzh	2007-09-16 22:09	122K
lg_venus.lzh	2007-09-16 22:09	287K
лх3.lzh	2007-09-16 22:09	53K
lhamber.lzh	2007-09-16 22:09	208K
lhana.lzh	2007-09-16 22:09	39K
li-hiri.lzh	2007-09-16 22:09	161K
li_flowe.lzh	2007-09-16 22:09	152K
li_kaori.lzh	2007-09-16 22:09	265K
li_minak.lzh	2007-09-16 22:09	205K
li_naryu.lzh	2007-09-16 22:09	151K
лиана.lzh	2007-09-16 22:09	8.1K
licca_kg.lzh	2007-09-16 22:09	281K
liccaks2.lzh	2007-09-16 22:09	559K
lideeya.lzh	2007-09-16 22:09	41K
лиф.lzh	2007-09-16 22:09	173K
lif_ht.lzh	2007-09-16 22:09	221K
lifbly.lzh	2007-09-16 22:09	207K
lifbw.lzh	2007-09-16 22:09	30K
лила.лж	2007-09-16 22:09	64K
lilac.lzh	2007-09-16 22:09	45K
лилах.лж	2007-09-16 22:09	42K
lilbit.lzh	2007-09-16 22:09	37K
lildolli.lzh	2007-09-16 22:09	10K
lildolly.lzh	2007-09-16 22:09	28K
lilfashi.lzh	2007-09-16 22:09	27K
lilia.lzh	2007-09-16 22:09	17K
lilith2.lzh	2007-09-16 22:09	160K
lillian1.lzh	2007-09-16 22:09	66K
lillith.lzh	2007-09-16 22:09	82K
lillium.lzh	2007-09-16 22:09	145K
lilmoon1.lzh	2007-09-16 22:09	25K
lilrini.lzh	2007-09-16 22:09	98K
liltasha.lzh	2007-09-16 22:09	46K
lily.lzh	2007-09-16 22:09	17K
lily_dol.лж	2007-09-16 22:09	390K
lilychan.lzh	2007-09-16 22:09	241K
lilyg.lzh	2007-09-16 22:09	17K
lilyj.lzh	2007-09-16 22:09	10K
лилыск.лж	2007-09-16 22:09	41К
лайм.ж	2007-09-16 22:09	77К
лайм21.ж	2007-09-16 22:09	316K
lina.lzh	2007-09-16 22:09	11K
lina3.lzh	2007-09-16 22:09	87K
linal.lzh	2007-09-16 22:09	17K
linda.lzh	2007-09-16 22:09	91K
lindam.lzh	2007-09-16 22:09	74K
Линдси.lzh	2007-09-16 22:09	12K
lindz.lzh	2007-09-16 22:09	37K
ling_db.lzh	2007-09-16 22:09	20K
lingx.lzh	2007-09-16 22:09	27K
lingxhnm.lzh	2007-09-16 22:09	46K
link.lzh	2007-09-16 22:09	103K
link0.lzh	2007-09-16 22:09	31K
linkz1.lzh	2007-09-16 22:09	8.1K
линн-м.lzh	2007-09-16 22:09	123K
linoa.lzh	2007-09-16 22:09	110K
liralin.lzh	18.10.2009 17:17	346K
liroa.lzh	2007-09-16 22:09	476K
lisa-eq.лж	2007-09-16 22:09	576K
lisa.lzh	2007-09-16 22:09	132K
lisabylondon.lzh	2007-09-16 22:27	748K
lisacici.lzh	2007-09-16 22:09	36K
lise.лж	2007-09-16 22:09	2.5M
лита.лж	2007-09-16 22:09	47K
litachan.lzh	2007-09-16 22:09	54K
litamako.lzh	2007-09-16 22:09	29K
litkis02.лж	2007-09-16 22:09	39К
литкс03.лж	2007-09-16 22:09	45К
литкс04c.lzh	2007-09-16 22:09	81K
litks06.lzh	2007-09-16 22:09	18K
litks07.лж	2007-09-16 22:09	10К
литкс09э.лж	2007-09-16 22:09	32К
литкс10c.lzh	2007-09-16 22:09	25K
litks11e.lzh	2007-09-16 22:09	27K
litks13e.лж	2007-09-16 22:09	70К
литкс15э.лж	2007-09-16 22:09	28К
литкс17э.лж	2007-09-16 22:09	24K
litldoll.lzh	2007-09-16 22:09	8.3K
мало.лж	2008-06-15 21:37	255K
littlemermaid.lzh	2008-07-27 16:33	103K
лиз.ж	2007-09-16 22:09	56K
lizette.lzh	2007-09-16 22:09	110K
liztb.лж	2007-09-16 22:09	112K
lizza.lzh	2007-09-16 22:09	40K
lizza2.lzh	2007-09-16 22:09	1.1M
lizzie.lzh	2007-09-16 22:09	11K
lizziejb.lzh	2007-09-16 22:09	63K
lizzilla.lzh	2007-09-16 22:09	99K
lizzy.lzh	2007-09-16 22:09	55K
lizzyg2.lzh	2007-09-16 22:09	34K
ll_chibi.лж	2007-09-16 22:09	128К
ll_naru.lzh	2007-09-16 22:09	92К
llbonni2.lzh	2007-09-16 22:09	95K
llchii.lzh	2007-09-16 22:09	296K
llmero.lzh	2007-09-16 22:09	120K
llsjamie.lzh	2007-09-16 22:09	52K
llsugar2.lzh	2007-09-16 22:09	198K
lmc.lzh	2010-03-07 10:50	795K
lmorgana.lzh	2007-09-16 22:09	138K
lmpbzkt.lzh	2007-09-16 22:09	214K
lola.lzh	2007-09-16 22:09	82K
lolita.lzh	2007-09-16 22:09	36K
lolitad.lzh	2007-09-16 22:09	25K
lolitae.lzh	2007-09-16 22:09	188K
lolli2.lzh	2007-09-16 22:09	69K
lorelei.lzh	2007-09-16 22:09	145K
lorillia.lzh	2007-09-16 22:09	24K
lorne02.lzh	2008-04-27 17:25	153K
lostell.lzh	2007-09-16 22:09	1.2M
lostsaku.lzh	2007-09-16 22:09	60K
лотор.лж	2007-09-16 22:09	1.0M
lotr3.lzh	2007-09-16 22:09	251K
lotte_me.lzh	2007-09-16 22:09	579K
louisa.lzh	2007-09-16 22:09	113K
loulou.lzh	2007-09-16 22:09	62K
lourdes.lzh	2008-04-27 17:25	21K
love.lzh	2007-09-16 22:09	62K
lquprin1.lzh	2007-09-16 22:09	111K
lsailor.lzh	2007-09-16 22:10	93K
lsasami.lzh	2007-09-16 22:10	120K
lsimp.lzh	2007-09-16 22:10	15K
lskdoll.lzh	2007-09-16 22:10	66K
ltjgrynn.lzh	2007-09-16 22:10	220K
lucca1r.lzh	2007-09-16 22:10	208K
lucia.lzh	2007-09-16 22:10	91K
luciabx.lzh	2007-09-16 22:10	399K
luciola.lzh	2007-09-16 22:10	41K
lucky.lzh	2007-09-16 22:10	24K
lucy3.lzh	2007-09-16 22:10	51K
lucym.lzh	2007-09-16 22:10	61K
lucys.лж	2007-09-16 22:10	28К
лух.лж	2007-09-16 22:10	74К
луиза.ж	2007-09-16 22:10	92K
luiza1.lzh	2007-09-16 22:10	633K
luiza_v2.лж	2007-09-16 22:10	114К
лулишка.ж	2007-09-16 22:10	124К
колыбельная.ж	2007-09-16 22:10	38K
lulu.lzh	2007-09-16 22:10	447K
люм-чан.lzh	2007-09-16 22:10	27K
lum-swim.lzh	2007-09-16 22:10	8.2K
lumitere .lzh	2007-09-16 22:10	195K
lumkiss.lzh	2007-09-16 22:10	104K
lunacat2.лж	2007-09-16 22:10	9.4K
lunah.lzh	2007-09-16 22:10	111K
луран.лж	2007-09-16 22:10	22K
lush.lzh	2007-09-16 22:10	153K
luthien.lzh	2007-09-16 22:10	72K
luthiena.lzh	2007-09-16 22:10	344K
luv3000.lzh	2007-09-16 22:10	26K
luvbaby.lzh	2007-09-16 22:10	51K
luvbaby2.lzh	2007-09-16 22:10	38K
lycan.lzh	2007-09-16 22:10	36K
lycra.lzh	2007-09-16 22:10	438K
lydia-eq.lzh	2007-09-16 22:10	534K
lydia.лж	2007-09-16 22:10	38K
lye.lzh	2007-09-16 22:10	108K
lyla.lzh	2007-09-16 22:10	87K
lylie.lzh	2007-09-16 22:10	18K
lyn-и.lzh	2007-09-16 22:10	132K
lynn2.lzh	2007-09-16 22:10	35K
lynnchan.lzh	2007-09-16 22:10	188K
lynnwe.lzh	2007-09-16 22:10	42K
лирабета.lzh	2007-09-16 22:10	25K
lyrisii.lzh	2007-09-16 22:10	390K
lyx_asco.lzh	2007-09-16 22:10	115K
lyx_ayla.lzh	2007-09-16 22:10	234K
lyx_euro.лж	2007-09-16 22:10	341K
lyx_geni.lzh	2007-09-16 22:10	187K
lyx_mlch.lzh	2007-09-16 22:10	298K
lzgoldie.lzh	2007-09-16 22:10	47K

(PDF) Генная инженерия Pseudomonas chlororaphis Lzh-T5 для увеличения производства транс-2,3-дигидро-3-гидроксиантраниловой кислоты



Научные отчеты | (2021) 11: 16451 | 

www.nature.com/scientificreports/

4. Палко, М., Кисс, Л., Фулоп, Ф. Синтезы гидроксилированных производных циклических бета-аминокислот. Curr. Med. Chem. 12 (26), 3063–3083

(2005).

5. Lee, S. Y. et al. Подробная метаболическая карта для производства химикатов на биологической основе. Nat. Катал. 2 (1), 18–33 (2019).

6. Кислинг, Дж. Д. Производство молекул посредством метаболической инженерии. Science 330 (6009), 1355–1358 (2010).

7. Нильсен, Дж. Метаболическая инженерия.Прил. Microbiol. Biotechnol. 55 (3), 263–283 (2001).

8. Liu, Q. et al. Современное состояние производства ароматических углеводородов с использованием дрожжей: достижения и проблемы. Curr. Opin. Biotechnol. 65, 65–74

(2020).

9. B ecker, J. et al. Высокоэффективные химические продукты: производство органических кислот на основе биологических материалов. Curr. Opin. Biotechnol. 2015. Т. 36. С. 168–175.

10. Choi, S. et al. Биозаводы по производству химических строительных блоков и их производных. Метаб.Англ. 28. С. 223–239 (2015).

11. Нода, С. и Кондо, А. Последние достижения в микробиологическом производстве ароматических химикатов и производных. Trends Biotechnol. 35 (8),

785–796 (2017).

12. McCormick, J. et al. (+) транс-2,3-дигидро-3-гидроксиантраниловая кислота. Новая аминокислота, производимая Streptomyces aureofaciens.

J. Am. Chem. Soc. 83, 4104–4105 (1961).

13. Mavrodi, D. V. et al. Семигенный локус для синтеза феназин-1-карбоновой кислоты Pseudomonas uorescens 2–79.J. Bacteriol.

180 (9), 2541–2548 (1998).

14. McDonald, M. et al. Биосинтез феназина в Pseudomonas uorescens: точка ветвления от первичного пути биосинтеза шикимата

и роль феназин-1,6-дикарбоновой кислоты. Варенье. Chem. Soc. 123 (38), 9459–9460 (2001).

15. Li, Z. et al. Последовательность генома Pseudomonas chlororaphis Lzh-T5, ризобактерии, способствующей росту растений, с антимикробной активностью

. Объявление о геноме. 6 (18), e00328 (2018).

16. Liu, K. et al. Генная инженерия Pseudomonas chlororaphis GP72 для увеличения производства 2-гидроксифеназина. Microb.

Cell Fact. 15 (1), 131 (2016).

17. Li, Q.A. et al. Связывание лиганда индуцирует аммиачный канал в 2-амино-2-дезоксиизохоризмат (ADIC) синтазе PhzE. J. Biol.

Chem. 286 (20), 18213–18221 (2011).

18. Jin, X. J. et al. Количественный протеомный анализ на основе iTRAQ выявляет потенциальные факторы, связанные с повышением продукции феназин-

1-карбоксамида в Pseudomonas chlororaphis P3.Sci. Отчет 6, 27393 (2016).

19. Livak, K. J. & Schmittgen, T. D. Анализ данных относительной экспрессии генов с использованием количественной ПЦР в реальном времени и метода 2-ΔΔCT.

Методы 25, 402–408 (2001).

20. Hu, H. et al. Производство транс-2,3-дигидро-3-гидроксиантраниловой кислоты с помощью модифицированного Pseudomonas chlororaphis GP72. Прил.

Microbiol. Biotechnol. 101 (17), 6607–6613 (2017).

21. Weydert, C.J. и Cullen, J.J. Измерение супероксиддисмутазы, каталазы и глутатионпероксидазы в культивируемых клетках и тканях.

Нат. Protoc. 5. С. 51–66 (2010).

22. Martins, D. et al. Активность супероксиддисмутазы придает (p) ppGpp-опосредованную толерантность к антибиотику к Pseudomonas

aeruginosa в стационарной фазе. Proc. Natl. Акад. Sci. США 115, 9797–9802 (2018).

23. Blankenfeldt, W. et al. Структура и функция феназинового биосинтетического белка PhzF из Pseudomonas uorescens. Proc.

Нац. Акад. Sci. США. 101 (47), 16431–16436 (2004).

24.Chin, A. W. T. F. et al. Сигма-регулятор Pseudomonas chlororaphis PCL1391 psrA подавляет выработку противогрибкового метаболита

феназин-1-карбоксамида. Мол. Взаимодействие с растительными микробами. 18 (3), 244–253 (2005).

25. Peng, H. et al. Усиленный биосинтез феназин-1-карбоксамида сконструированным Pseudomonas chlororaphis HT66. Microb. Ячейка

Факт. 17 (1), 117 (2018).

26. Хуанг, Л. и другие. Повышенное производство 2-гидроксифеназина в Pseudomonas chlororaphis GP72.Прил. Microbiol. Biotechnol.

89 (1), 169–177 (2011).

27. Wang, D. et al. Дифференциальная регуляция биосинтеза феназина с помощью RpeA и RpeB у Pseudomonas chlororaphis 30–84. Microbiol-

ogy 158 (Pt 7), 1745–1757 (2012).

28. Уистлер, К. А. и Пирсон, Л. С. 3-е. Подавление продукции феназинового антибиотика в штамме Pseudomonas aureofaciens 30–84 с помощью

RpeA. J. Bacteriol. 185 (13), 3718–3725 (2003).

29. Juminaga, D.и другие. Модульное проектирование производства L-тирозина в Escherichia coli. Прил. Environ. Microbiol. 78 (1), 89–98 (2012).

30. Штарк, О., Шапошников, А. И., Кравченко, Л. В. Производство противогрибковых метаболитов Pseudomonas chlororaphis, выращенных

на различных источниках питательных веществ. Микробиология 72 (5), 645–650 (2003).

31. Kerins, M. J. & Ooi, A. e роли NRF2 в модулировании гомеостаза клеточного железа. Антиоксид. Редокс-сигнал. 29 (17), 1756–1773

(2018).

32. Silby, M. W. et al. Геномы псевдомонад: разнообразные и адаптируемые. FEMS Microbiol. Ред. 35 (4), 652–680 (2011).

33. Liu, H. et al. Характеристика феназин-продуцирующего штамма Pseudomonas chlororaphis GP72 с широким спектром противогрибковой активности

из ризосферы зеленого перца. Curr. Microbiol. 54 (4), 302–306 (2007).

34. Shen, X. et al. Последовательность генома Pseudomonas chlororaphis GP72, штамма биоконтроля, колонизирующего корни. J. Bacteriol.194 (5),

1269–1270 (2012).

35. Paulsen, I. T. et al. Полная последовательность генома растения-комменсала Pseudomonas uorescens Pf-5. Nat. Biotechnol. 23 (7),

873–878 (2005).

36. Nouwens, A. S. et al. Дополнение геномики протеомикой: мембранный субпротеом Pseudomonas aeruginosa PAO1.

Электрофорез 21 (17), 3797–3809 (2000).

37. Lee, T. S. et al. Векторы и таблицы данных BglBrick: платформа синтетической биологии для экспрессии генов.J. Biol. Англ. 5, 12 (2011).

38. Parsons, J. F. et al. Структура и функция белка биосинтеза феназина PhzF из Pseudomonas uorescens 2–79. Био-

, химия 43 (39), 12427–12435 (2004).

39. Xu, N. et al. Захваченные промежуточные соединения в кристаллах FMN-зависимой оксидазы PhzG позволяют понять основные стадии биосинтеза феназина

. Acta Crystallogr. D Biol. Кристаллогр. 69 (Pt 8), 1403–1413 (2013).

40. Цзян М.И Чжан Х. Разработка шикиматного пути биосинтеза молекул с фармацевтической активностью в E. coli.

Curr. Opin. Biotechnol. 42, 1–6 (2016).

41. Noda, S. et al. Метаболический дизайн платформенного штамма Escherichia coli, продуцирующего различные производные хоризмата. Метаб. Англ. 33,

119–129 (2016).

42. Sengupta, S. et al. Метаболическая инженерия нового пути биосинтеза муконовой кислоты через 4-гидроксибензойную кислоту в Escherichia

coli.Прил. Environ. Microbiol. 81 (23), 8037–8043 (2015).

43. Госсет, Г. Производство ароматических соединений в бактериях. Curr. Opin. Biotechnol. 20 (6), 651–658 (2009).

44. Kramer, M. et al. Метаболическая инженерия для микробного производства шикимовой кислоты. Метаб. Англ. 5 (4), 277–283 (2003).

45. Chancey, S. T. et al. Выживание мутантов GacS / GacA биологической контрольной бактерии Pseudomonas aureofaciens 30–84 в ризосфере пшеницы

. Прил. Environ.Microbiol. 68 (7), 3308–3314 (2002).

46. Heeb, S., Blumer, C. & Haas, D. Регуляторная РНК как медиатор в GacA / RsmA-зависимом глобальном контроле образования экзопродуктов

в Pseudomonas uorescens CHA0. J. Bacteriol. 184 (4), 1046–1056 (2002).

47. Слинингер, П. Дж. И Ши-Уилбур, М. А. pH жидкой культуры, температура и источник углерода (не азота) регулируют активность феназинового про-

агента биоконтроля всепроникающего действия Pseudomonas uorescens 2–79.Прил. Microbiol. Biotechnol. 43 (5), 794–800 (1995).

48. van Rij, E. T. et al. Влияние условий окружающей среды на производство феназин-1-карбоксамида Pseudomonas chlo-

roraphis PCL1391. Мол. Взаимодействие с растительными микробами. 17 (5), 557–566 (2004).

Содержимое предоставлено Springer Nature, применяются условия использования. Права защищены

Секвенирование всего генома и сравнительный геномный анализ Lysinibacillus pakistanensis LZH-9, галотолерантного штамма с отличной способностью к удалению ХПК

Микроорганизмы 2020, 8, 716 22 из 29

3.Кубо, М .; Hiroe, J .; Мураками, М .; Fukami, H .; Тачики Т. Очистка гиперсоленосодержащих

сточных вод солеустойчивыми микроорганизмами. J. Biosci. Bioeng. 2001, 91, 222–224,

DOI: 10.1016 / s1389-1723 (01) 80070-0.

4. Soltani, R.D.C .; Jorfi, S .; Ramezani, H .; Пурфадакари, С. Нанокомпозит ZnO – biosilica

, индуцированный ультразвуком, для разложения текстильного красителя в водной фазе. Ультразвуковой. Sonochem. 2016, 28, 69–78,

DOI: 10.1016 / j.ultsonch.2015.07.002.

5. Soltani, R.D.C .; Jorfi, S .; Сафари, М .; Раджаи, М. Улучшенный сонокатализ текстильных сточных вод с использованием наночастиц ZnO на основе

бентонита: методологический подход к поверхности отклика. J. Environ. Manag.

2016, 179, 47–57, DOI: 10.1016 / j.jenvman.2016.05.001.

6. Lefebvre, O .; Молетта, Р. Обработка органических загрязнений в промышленных соленых сточных водах: обзор литературы

.Water Res. 2006, 40, 3671–3682, DOI: 10.1016 / j.watres.2006.08.027.

7. Castillo-Carvajal, L.C .; Sanz-Martín, J.L .; Барраган-Уэрта, Б. Биоразложение органических загрязнителей в

соленых сточных водах галофильными микроорганизмами: обзор. Environ. Sci. Загрязнение. Res. 2014, 21, 9578–9588,

DOI: 10.1007 / s11356-014-3036-z.

8. Chung, T.-P .; Tseng, H.-Y .; Хуанг, Р.-С. Эффект массопереноса и промежуточное обнаружение разложения фенола

в иммобилизованных системах Pseudomonas putida.Процесс. Biochem. 2003, 38, 1497–1507,

DOI: 10.1016 / s0032-9592 (03) 00038-4.

9. Lee, C.S .; Jung, Y.-T .; Парк, С .; О, Т.-К .; Юн, Дж.-Х. Lysinibacillus xylanilyticus sp. nov.,

ксилан-деградирующая бактерия, выделенная из лесного гумуса. Int. J. Syst. Evol. Microbiol. 2010, 60, 281–286,

DOI: 10.1099 / ijs.0.013367-0.

10. Kämpfer, P .; Мартин, К .; Glaeser, S.P. Lysinibacillus contaminans sp. nov., изолированные от поверхностных вод.Int.

J. Syst. Evol. Microbiol. 2013, 63, 3148–3153, DOI: 10.1099 / ijs.0.049593-0.

11. Sun, J.-Q .; Xu, L .; Ву, X.-L. Lysinibacillus alkalisoli sp. nov., выделенный из солончаковой почвы. Int. J. Syst.

Evol. Microbiol. 2017, 67, 67–71, DOI: 10.1099 / ijsem.0.001571.

12. Wan, S .; Li, G .; An, T .; Guo, B .; Вс, л .; Zu, L .; Рен, А. Биоразложение этантиола в водной среде

новым штаммом Lysinibacillus sphaericus RG-1, выделенным из активного ила.Биогеохимия 2010, 21,

1057–1066, DOI: 10.1007 / s10532-010-9366-8.

13. Wu, S.J .; Hu, Z.H .; Zhang, L.L .; Yu, X .; Chen, J. Новый разлагающий дихлорметан штамм Lysinibacillus

sphaericus wh32 и его деградирующая плазмида. Прил. Microbiol. Biotechnol. 2009, 82, 731–740,

DOI: 10.1007 / s00253-009-1873-3.

14. Yao, H .; Ren, Y .; Дэн, X .; Вей, С. Кинетика биодеградации м-крезола и пиридина на двойных субстратах под действием Lysinibacillus cresolivorans

.J. Hazard. Матер. 2011, 186, 1136–1140, DOI: 10.1016 / j.jhazmat.2010.11.118.

15. Liang, B .; Lu, P .; Li, H .; Li, R .; Li, S .; Хуанг, X. Биодеградация фомесафена штаммом Lysinibacillus sp.

ЗБ-1 изолирован от почвы. Chemosphere 2009, 77, 1614–1619, DOI: 10.1016 / j.chemosphere.2009.09.033.

16. Esmaeili, A .; Pourbabaee, A.A .; Алихани, H.A .; Шабани, Ф .; Эсмаили, Э. Биоразложение полиэтилена низкой плотности

(LDPE) смешанной культурой Lysinibacillus xylanilyticus и Aspergillus niger в почве.PLoS

ONE 2013, 8, e71720, doi: 10.1371 / journal.pone.0071720.

17. Saratale, R.G .; Saratale, G.D .; Govindwar, S .; Ким, Д.С.Использование эффективности лизинибактерии. RGS за

обесцвечивание и детоксикация промышленных красителей, текстильных стоков и исследования биореакторов. J. Environ. Sci.

Исцеление. Часть A 2015, 50, 176–192, DOI: 10.1080 / 10

9.2014.

18. Kong, D .; Wang, Y .; Li, Y .; Song, J .; Zhai, Y .; Zhang, C .; Ван, Х.; Чен, X .; Чжао, Б .; Ruan, Z.

Lysinibacillus halotolerans sp. nov., выделенный из солончаковой почвы. Int. J. Syst. Evol. Microbiol. 2014, 64,

2593–2598, DOI: 10.1099 / ijs.0.061465-0.

19. He, M .; Li, X .; Liu, H .; Miller, S.J .; Wang, G .; Ренсинг, С. Характеристика и геномный анализ

хроматорезистентного и восстанавливающего штамма бактерий Lysinibacillus fusiformis ZC1. J. Hazard. Матер. 2011, 185,

682–688, DOI: 10.1016 / j.jhazmat.2010.09.072.

20. Chaudhari, A.U .; Tapase, S .; Маркад, В.Л .; Кодам К. Одновременное обесцвечивание реактивного красителя Orange

M2R и восстановление хромата с помощью Lysinibacillus sp. КМК-А. J. Hazard. Матер. 2013, 262, 580–588,

DOI: 10.1016 / j.jhazmat.2013.09.006.

21. Bahuguna, A .; Лили, М.К .; Munjal, A .; Singh, R.N .; Dangwal, K .; Лили, М. Обессеривание

дибензотиофена (DBT) новым штаммом Lysinibacillus sphaericus DMT-7, выделенным из загрязненной дизельным топливом

почвы.J. Environ. Sci. 2011, 23, 975–982, DOI: 10.1016 / s1001-0742 (10) 60504-9.

22. Rahman, A .; Nahar, N .; Nawani, N .; Jass, J .; Desale, P .; Кападнис, Б .; Hossain, K .; Saha, A.K .; Ghosh, S .;

Olsson, B .; и другие. Выделение и характеристика штамма Lysinibacillus B1-CDA, показывающего потенциал для

Вольт, 2 тонны, 2 звезды, AC 242 LZH-R32, MRP: 36090,00, Наша цена: 31,990,00

.

2-тонный 2-звездочный кондиционер с оконным стеклом и компрессором с устойчивым охлаждением.

.

2 звезды Рейтинг BEE 2019: для экономии энергии до 15% (по сравнению с неинверторной 1 звездой)

.

Политика возврата в течение 7 дней – Возврат принимается продавцом в течение 7 дней с момента доставки, только если товар поврежден. В случае обнаружения неправильного, отсутствующего или недоставленного товара, пожалуйста, укажите проблему в течение 2 дней с момента доставки.

Примечание

мы настоятельно рекомендуем использовать только стандартные и авторизованные аксессуары.В случае, если заказчик самостоятельно подбирает аксессуары, инженер по обслуживанию бренда может отказать и / или потребовать оплаты труда за ремонт этих аксессуаров.

Сведения о посещении техником

Авторизованный сервисный инженер ремонтных служб выполнит следующие действия. Отремонтируйте / замените дефектную деталь. Обеспечьте замену заказчику в случае, если деталь / продукт не подлежат ремонту (только после утверждения запроса на замену).

.

Детали установки Стандартная установка кондиционеров до 1000 рупий покрывает только: 1) Просверливание отверстий в кирпичной стене для вынимания труб 2) Установка муфты для отверстий и заглушки. 3) Крепление и соединение внутреннего и внешнего блоков с помощью стандартного набора, предоставленного производителем. 5) Обмотка трубы приправой лентой.

.

Не входит в стандартную плату за установку: 1) Подставка для наружного блока – рупий. 750-1000. 2) Дополнительный медный провод – рупий. 600-800 на метр (будут использоваться медные трубы двух размеров) 3) Удлинитель сливной трубы – Rs. 80-110 за метр. 4) Удлинение электропроводки от счетчика до места установки – руп. 90 за метр. 5) Рулон виниловой ленты -Rs. 80-110 6) Демонтаж / перенос старых кондиционеров – руп. 700-800 7) Закрытие отверстий белым цементом – актуально 8) Стабилизатор 9) Сантехнические и кладочные работы 10) Монтаж розеток / автоматических выключателей и любые другие электромонтажные работы 11) Столярные работы.12) Изготовление стержневой резки и электрика.

Публикации – ПРОФЕССОР ШАРЛОТТ К. УИЛЬЯМС

Саид С.А., Робертс К.С., Ли Дж. К., Shaffer MSP, Williams CK et al., 2021, Прямой металлорганический синтез карбоксилатных интеркалированных слоистых гидроксидов цинка для полностью расслоенных функциональных нанолистов, Advanced Functional Materials , Vol: 31, Pages: 1-11, ISSN: 1616-301X

Внедрение органических анионов в 2D-материалы может способствовать отшелушиванию, улучшать стабильность дисперсии, увеличивать площадь поверхности и обеспечивать полезные функциональные группы.В слоистых гидроксидах металлов интеркалирование объемных структур обычно достигается за счет громоздких и, как правило, неполных реакций анионного обмена. Напротив, здесь ряд слоистых гидроксидов цинка с интеркалированными карбоксилатами (LZH-R) синтезируется непосредственно при комнатной температуре путем взаимодействия цинкорганического реагента с точным субстехиометрическим количеством желаемой карбоновой кислоты и воды. Ряд карбоновых кислот используется для создания новых материалов LZH-R, которые являются кристаллическими, растворимыми и функционализированными, как установлено методами дифракции рентгеновских лучей, спектроскопии и микроскопии.Когда R представляет собой карбоксилат алкилового эфира, этот метод прямого синтеза приводит к спонтанному расслоению LZH-R на однослойные нанолисты с высокими выходами (70–80%) и высокой растворимостью в спиртах и воде до 180 мг / мл. Путем изменения карбоксилатного лиганда также вводятся функциональные группы, подходящие для постсинтетической модификации или для обнаружения по флуоресценции. Эти примеры демонстрируют универсальный способ синтеза функциональных расслоенных нанолистов.

Статья журнала

Диси А.С., Грегори Г.Л., Салли Г.С., Чен TTD, Уильямс С.К. и др., 2021, Контроль последовательности из смесей: переключаемый полимеризационный катализ и применение материалов будущего, ЖУРНАЛ АМЕРИКАНСКОГО ХИМИЧЕСКОГО ОБЩЕСТВА , том: 143, страницы: 10021-10040, ISSN: 0002-7863

Статья журнала

Lindeboom W, Fraser DAX, Durr CB, Williams CK et al., 2021, Гетеродиядерные катализаторы Zn (II), Mg (II) или Co (III) с Na (I) для сополимеризации диоксида углерода и оксида циклогексена с раскрытием цикла, CHEMISTRY-A EUROPEAN JOURNAL , Vol: 27, Страницы: 12224-12231, ISSN: 0947-6539

Статья журнала

Deacy AC, Durr CB, Kerr RWF, Уильямс С.К. и др., 2021, Гетеродиядерные катализаторы Zn (ii) / M и Mg (ii) / M, где M = Na (i), Ca (ii) или Cd (ii), для сополимеризации фталевого ангидрида / оксида циклогексена с раскрытием цикла, CATALYSIS SCIENCE & ТЕХНОЛОГИИ , Том: 11, Страницы: 3109-3118, ISSN: 2044-4753

Статья журнала

Димент В.Т., Штоссер Т., Керр РВФ, Phanopoulos A, Durr CB, Williams C.Ket al., 2021, Каталитические системы, полученные из орто-ванилина, Al (iii) и Co (iii) для переключаемого катализа с использованием эпсилон-декалактона, фталевого ангидрида и оксида циклогексена, CATALYSIS SCIENCE & TECHNOLOGY , Vol. : 11, Страницы: 1737-1745, ISSN: 2044-4753

Статья журнала

Kerr RWF, Ewing PMDA, Raman SK, Смит А.Д., Уильямс К.К., Арнольд П.Л. и др., 2021, Сверхбыстрые катализаторы церий (III) -NHC для высокомолекулярных циклических полилактидов, ACS CATALYSIS , Vol: 11, Pages: 1563-1569, ISSN: 2155-5435

Статья журнала

Карродегуас Л.П., Чен ТТД, Грегори Г.Л., Салли Г.С., Уильямс С.К. и др., 2020, Высокоэластичные, химически перерабатываемые термопласты из мономеров на биологической основе: диоксида углерода, оксида лимонена и эпсилон-декалактона, GREEN CHEMISTRY , Vol: 22, Pages: 8298-8307, ISSN: 1463-9262

Статья журнала

Диси А.С., Морби Э., Фанопулос А, Уильямс С.К. и др., 2020, Гетеродиядерные катализаторы Co (III) / щелочные металлы (I) для сополимеризации с раскрытием цикла CO2 и оксида пропилена., Журнал Американского химического общества , том: 142, страницы: 19150-19160, ISSN: 0002-7863

Сополимеризация с раскрытием цикла диоксида углерода и оксида пропена является полезным средством превращения отходов в коммерчески привлекательные поли (пропиленкарбонат) (PPC) полиолы. Реакция ограничена низкой каталитической активностью, плохой переносимостью большого избытка агента передачи цепи и склонностью к образованию побочных продуктов.Здесь сообщается о серии новых катализаторов, которые включают гетеродиядерные макроциклические комплексы Co (III) / M (I) (где M (I) = металл группы 1). Эти катализаторы демонстрируют высокоэффективное производство полиолов PPC, выдающиеся выходы (числа оборотов), количественное поглощение диоксида углерода (> 99%) и высокую селективность образования полиолов (> 95%). Наиболее активный комплекс Co (III) / K (I) показывает частоту оборота 800 ч-1 при низкой загрузке катализатора (0,025 мол.%, 70 ° C, 30 бар CO2). Сополимеризация хорошо контролируется и дает гидроксил-телехелический ППК с предсказуемыми молярными массами и узкой дисперсностью (<1.15). Кинетика полимеризации показывает закон скорости второго порядка, первый порядок как по концентрации пропиленоксида, так и по концентрации катализатора, и нулевой порядок по давлению CO2. Анализ Эйринга, изучающий влияние температуры на коэффициент скорости распространения (kp), выявляет барьер переходного состояния для образования поликарбоната: ΔG ‡ = +92,6 ± 2,5 кДж / моль. Катализатор Co (III) / K (I) также очень активен и селективен при сополимеризации других эпоксидов с диоксидом углерода.

Статья журнала

Юнтаваттана N, McGuire TM, Durr CB, Бучард А., Уильямс С.К. и др., 2020, Катализаторы фосфазалена индия, демонстрирующие высокую изоселективность и активность в полимеризации с раскрытием рацемического лактида и лактонного цикла, CATALYSIS SCIENCE & TECHNOLOGY , Vol: 10, Pages: 7226-7239, ISSN: 2044-4753

Статья журнала

Чен ТТД, Карродегуас Л.П., Салли Г.С., Грегори Г.Л., Уильямс С.К. и др., 2020, Биоразлагаемые блочные полиэфирные клеи, чувствительные к давлению, ANGEWANDTE CHEMIE-INTERNATIONAL EDITION , Vol: 59, Pages: 23450-23455, ISSN: 1433-7851

Статья журнала

Грегори Г.Л., Салли Г.С., Карродегуас Л.П., Чен TTD, Сантмарти А., Террилл Нью-Джерси, Ли Кей, Уильямс К.К. и др., 2020, Триблок полиэфирные термопластические эластомеры с полуароматическими полимерными концевыми блоками путем сополимеризации с раскрытием цикла, Chemical Science , Vol: 11, Pages: 6567-6581, ISSN: 2041-6520

Термопластические эластомеры обладают высокой эластичностью и простой (повторной) технологичностью; они широко используются во множестве секторов. В настоящее время большинство из них получают из нефти, не разлагаются и не подвергаются химической переработке. Здесь синтезируется новая серия трехблочных полиэфиров ABA, которые демонстрируют высокие характеристики разлагаемых термопластичных эластомеров; их состав – поли (циклогексен-альт-фталат) -b-поли (ε-декалактон) -b-поли (циклогексен-альт-фталат) {PE – PDL – PE}.Синтез осуществляется с использованием катализатора цинк (II) / магний (II) в однореакторной процедуре, где сначала происходит полимеризация с раскрытием кольца ε-декалактона с образованием дигидроксил-телехелического поли (ε-декалатона) (PDL, soft-block) и , затем добавление сополимеризации с раскрытием кольца фталевого ангидрида / оксида циклогексена приводит к получению концевых блоков из полуароматического полиэфира (PE, жесткий блок). Состав блоков легко контролировать, исходя из начальной стехиометрии мономера, а конверсия высока (85–98%).Готовят две серии сложных полиэфиров: (1) от TBPE-1 до TBPE-5 имеют эквивалентную объемную долю жесткого блока (fhard = 0,4) и переменную молярную массу 40–100 кг · моль − 1; (2) TBPE-5 – TBPE-9 имеют эквивалентные молярные массы (∼100 кг / моль) и переменные объемные доли жесткого блока (0,12 1300) с линейным соотношением напряжение-деформация, высоким пределом прочности при растяжении (σb = 1–5 МПа), очень высоким относительным удлинением при разрыве (& ep

Статья журнала

Паста М, Армстронг Д, Браун ЗЛ, Бу Дж., Кастелл М.Р., Чен П., Кокс А., Корр С.А., Куссен Э.Дж., Дарнбро Э., Дешпанде В., Доррер С., Дайер М.С., Эль-Шинави Х., Флек Н., Грант П., Грегори Г.Л., Гровенор С., Хардвик Л.Дж., Irvine JTS, Lee HJ, Li G, Liberti E, McClelland I, Monroe C, Nellist PD, Shearing PR, Shoko E, Song W, Jolly DS, Thomas C, Turrell SJ, Vestli M, Williams CK, Zhou Y, Bruce PGet al., 2020, план развития твердотельных аккумуляторов на 2020 год, ЖУРНАЛ ФИЗИКО-ЭНЕРГЕТИКИ , Том: 2, ISSN: 2515-7655

Статья журнала

Леунг АХМ, Гарсия-Тренко А, Фанопулос А, Regoutz A, Schuster ME, Pike SD, Shaffer MSP, Williams CKet al., 2020, Cu / M: ZnO (M = Mg, Al, Cu) коллоидные нанокатализаторы для гидрирования раствора диоксида углерода в метанол, Journal of Materials Chemistry A , Том: 8, Страницы: 11282-11291, ISSN: 2050-7488

Наночастицы легированного ZnO, покрытые диоктилфосфинатными лигандами, синтезированы путем контролируемого гидролиза смеси металлорганических предшественников.Замещающее легирование наночастиц ZnO вюрцита 5 мол.% Mg (II), Al (III) и Cu (I) достигается добавлением субстехиометрических количеств соответствующей легирующей примеси [(н-бутил) (втор-бутил) магний, триэтилалюминий или мезитилмедь] до диэтилцинка в смеси предшественников. После гидролиза полученные коллоидные наночастицы (размер 2–3 нм) охарактеризованы с помощью порошковой рентгеновской кристаллографии, просвечивающей электронной микроскопии, оптической эмиссионной спектрометрии с индуктивно связанной плазмой и рентгеновской фотоэлектронной спектроскопии.Раствор наночастиц легированного ZnO и коллоидных наночастиц Cu (0) [M: ZnO: Cu = 1: 1] применяют в качестве катализаторов для гидрирования CO2 в метанол в жидкофазном реакторе с мешалкой с непрерывным потоком [210 ° C, 50 бар, CO2: h3 = 1: 3, 150 мл / мин, мезитилен, 20 ч]. Все каталитические системы демонстрируют более высокие скорости производства метанола и лучшую стабильность, чем эталонный гетерогенный катализатор, Cu – ZnO – Al2O3 [480 мкмоль ммольметалл – 1 ч – 1], с примерно вдвое большей активностью для нанокатализатора, легированного Al (III).Несмотря на то, что он превосходит эталонный катализатор, легирование Mg (II) вредно для производства метанола по сравнению с нелегированным ZnO. Рентгеновская фотоэлектронная спектроскопия и анализ просвечивающей электронной микроскопии наиболее активных образцов после катализа указывают на миграцию Al (III) на поверхность катализатора, и предполагается, что это обогащение поверхности способствует стабилизации каталитических границ раздела ZnO / Cu.

Статья журнала

Raman SK, Deacy AC, Carrodeguas LP, Рейс Н., Керр РВФ, Фанопулос А., Мортон С., Дэвидсон М.Г., Уильямс С.К. и др., 2020, Ti (IV) -Tris (фенолятные) каталитические системы для сополимеризации оксида циклогексена и диоксида углерода с раскрытием цикла, Organometallics , Vol: 39, Pages: 1619-1627, ISSN: 0276-7333

Титановые (IV) комплексы амино-трис (фенолятных) лигандов (LTiX, X = хлорид, изопропоксид) вместе с бис (трифенилфосфин) иминийхлоридом (PPNCl) являются активными каталитическими системами для сополимеризации с раскрытием цикла диоксида углерода и оксида циклогексена. .Они демонстрируют умеренную активность со значениями частоты смены порядка 60 ч – 1 (0,02 мол.% Катализатора, 80 ° C, 40 бар CO2) и высокую селективность (карбонатные связи> 90%), но их абсолютные характеристики ниже, чем у них. наиболее активных каталитических систем Ti (IV). Реакции протекают с линейной эволюцией молярной массы поликарбоната (PCHC) с превращением эпоксида в соответствии с контролируемой полимеризацией и приводят к бимодальному распределению молярной массы PCHC (до Mn = 42 кг · моль – 1). Стехиометрическая реакция между [LTiOiPr] и тетрафенилфосфонийхлоридом, PPh5Cl, позволяет выделить предполагаемый каталитический промежуточный продукт [LTi (OiPr) Cl] -, который охарактеризован с использованием методов дифракции рентгеновских лучей на монокристаллах.Анионный комплекс титана [LTi (OR) Cl] – предлагается в качестве модели распространения промежуточных алкоксидов в каталитическом цикле.

Статья журнала

Сехми СК, Лоренко К, Алькхудер К, Pike SD, Noimark S, Williams CK, Shaffer MSP, Parkin IP, MacRobert AJ, Allan Eet al., 2020, Антибактериальные поверхности с активностью против антимикробных устойчивых бактериальных патогенов и эндоспор, ACS Infectious Diseases , Vol: 6, Pages: 939 -946, ISSN: 2373-8227

Бактериальные инфекции, приобретенные в больнице, являются серьезным бременем для систем здравоохранения во всем мире, вызывая увеличение продолжительности пребывания в больнице и продолжительные страдания пациентов.Мы показываем, что полиуретан, содержащий наночастицы кристаллического фиолетового (CV) и 3–4 нм оксида цинка (НЧ ZnO), обладает превосходной бактерицидной активностью против патогенов, приобретенных в больнице, включая кишечную палочку с множественной лекарственной устойчивостью (E. coli), синегнойную палочку, метициллин-устойчивый золотистый стафилококк. (MRSA) и даже эндоспоры Clostridioides (Clostridium) difficile с высокой устойчивостью. Важно отметить, что мы использовали клинические изоляты бактериальных штаммов, протокол для имитации условий окружающей среды при реальном воздействии в медицинских учреждениях и низкую интенсивность света, эквивалентную той, которая наблюдается в больницах Великобритании (~ 500 люкс).Наши данные показывают, что НЧ ZnO усиливают фотобактерицидную активность CV при низкой интенсивности света даже при коротком времени воздействия, и мы показываем, что это касается фотохимических путей как типа I, так и типа II. Интересно, что полиуретан, содержащий только НЧ ZnO, показал значительную бактерицидную активность в темноте против одного штамма E. coli, что указывает на то, что НЧ обладают как активируемой светом синергетической активностью с CV, так и присущей бактерицидной активностью, которая не зависит от света. Эти новые антибактериальные полимеры потенциально полезны в учреждениях здравоохранения для уменьшения передачи патогенов от человека к окружающей среде.

Статья журнала

Салли Г.С., Грегори Г.Л., Чен ТТД, Carrodeguas LP, Trott G, Santmarti A, Lee KY, Terrill NJ, Williams C.Ket al., 2020, Переключаемый катализ улучшает свойства полимеров, производных от CO2: клеи поли (циклогексенкарбонат-b-эпсилон-декалактон-b-циклогексенкарбонат) , эластомеры и упрочненные пластмассы, Журнал Американского химического общества , том: 142, страницы: 4367-4378, ISSN: 0002-7863

Сополимеризация диоксида углерода и эпоксида – эффективный способ увеличения стоимости отходов CO2 и уменьшения загрязнения при производстве полимеров.Использование этого процесса для производства поликарбонатных полиолов с низкой молярной массой является коммерчески актуальным способом получения новых термореактивных полимеров и полиуретанов. Напротив, поликарбонаты с высокой молярной массой, произведенные из CO2, обычно не обладают хорошими характеристиками, а один из наиболее широко исследуемых, поли (циклогексенкарбонат), ограничен своим низким удлинением при разрыве и высокой хрупкостью. Здесь сообщается о новом процессе каталитической полимеризации, который селективно и эффективно дает разлагаемые блок-полимеры ABA, содержащие 6–23 мас.% CO2.Полимеры синтезируются с использованием нового высокоактивного металлоорганического гетеродиядерного катализатора Zn (II) / Mg (II), применяемого в однореакторной методике вместе с биоосновным ε-декалактоном, оксидом циклогексена и диоксидом углерода для получения ряда поли (циклогексена). карбонат-b-декалактон-b-циклогексенкарбонат) [PCHC-PDL-PCHC]. Процесс является высокоселективным (селективность по CO2> 99% от теоретического значения), обеспечивает высокую конверсию мономера (> 90%) и дает полимеры с предсказуемым составом, молярной массой (от 38–71 кг · моль – 1) и образует дигидроксил телехелические цепи.Эти новые материалы улучшают свойства поли (циклогексенкарбоната) и, в частности, показывают хорошую термическую стабильность (Td, 5 ∼ 280 ° C), высокую ударную вязкость (112 МДж м – 3) и очень высокое удлинение при разрыве (> 900%). Свойства материалов улучшаются за счет точного контроля как количества, так и расположения диоксида углерода в полимерной цепи. Предварительные исследования показывают, что полимеры стабильны в водной среде при комнатной температуре в течение нескольких месяцев, но они быстро разлагаются при осторожном нагревании в кислой среде (60 ° C, толуол, п-толуолсульфоновая кислота).Этот процесс, вероятно, обычно применим ко многим другим лактонам, лактидам, ангидридам, эпоксидам и гетерокумуленам и устанавливает норму

Статья журнала

Йи Н, Чен ТТД, Унруангсри Дж., Чжу Ю., Уильямс С.К. и др., 2019, Ортогональная функционализация чередующихся полиэфиров: селективное формирование паттерна последовательностей (AB) (n), CHEMICAL SCIENCE , Vol: 10, Pages: 9974-9980, ISSN: 2041-6520

Статья журнала

Хепберн К., Адлен Э., Беддингтон Дж., Картер Е.А., Фусс С., Мак Доуэлл Н., Минкс Дж. С., Смит П., Уильямс С.К. и др., 2019, Технологические и экономические перспективы утилизации и удаления СО2, Nature , Том: 575, Страницы: 87-97, ISSN: 0028-0836

Улавливание и использование диоксида углерода для создания ценных продуктов может снизить чистые затраты на сокращение выбросов или удаление диоксида углерода из атмосферы. Здесь мы рассмотрим десять способов утилизации углекислого газа. Пути, связанные с химическими веществами, топливом и микроводорослями, могут снизить выбросы углекислого газа, но имеют ограниченный потенциал для его удаления, тогда как пути, которые включают строительные материалы, могут как использовать, так и удалять углекислый газ.Наземные дороги могут увеличить объем сельскохозяйственного производства и удалить углекислый газ. Наша оценка предполагает, что каждый путь может масштабироваться до более чем 0,5 гигатонн утилизации углекислого газа в год. Тем не менее, препятствия на пути реализации остаются существенными, а ограниченность ресурсов препятствует одновременному развертыванию всех путей.

Статья журнала

Раман С.К., Раджа Р., Арнольд П.Л., Дэвидсон М.Г., Уильямс С.К. и др., 2019, Отходы не нужны, не хотят: CO2 (ре) циклическое превращение в блок-полимеры (том 55, стр. 7315, 2019), ХИМИЧЕСКИЕ СВЯЗИ , Том: 55, Страницы: 8190-8190, ISSN: 1359-7345

Статья журнала

Раман С.К., Раджа Р., Арнольд П.Л., Дэвидсон М.Г., Уильямс С.К. и др., 2019, Отходы не нужны, не хотят: CO2 (ре) циклическое превращение в блок-полимеры, ХИМИЧЕСКИЕ СВЯЗИ , том: 55, страницы: 7315-7318, ISSN: 1359-7345

Статья журнала

Панкхерст Дж. Р., Пол С., Чжу Ю., Уильямс К.К., Лав Дж.Бет и др., 2019, Полиядерные алкокси-цинковые комплексы чашеобразных макроциклов и их использование в сополимеризации оксида циклогексена и CO2, DALTON TRANSACTIONS , Vol: 48, Pages: 4887-4893, ISSN: 1477-9226

Статья журнала

Чжу Ю, Пома А, Риццелло Л, Гувейя В.М., Руис-Перес Л., Батталья Г., Уильямс К.К. и др., 2019, Метаболически активные, полностью гидролизуемые полимерсомы, ANGEWANDTE CHEMIE-INTERNATIONAL EDITION , том: 58, страницы: 4581-4586, ISSN: 1433-7851

Статья журнала

Эти данные взяты из Web of Science и воспроизводятся по лицензии Thomson Reuters.Вы не можете копировать или повторно распространять эти данные полностью или частично без письменного согласия отдела науки Thomson Reuters.

Непосредственная, мультиплексная и последовательная инженерия генома с помощью CRISPR / Cas9 у Saccharomyces cerevisiae | Журнал промышленной микробиологии и биотехнологии

Аннотация

Метод под названием Cas-3P, обеспечивающий немедленную, мультиплексную и последовательную инженерию генома, был разработан с использованием одной плазмиды, экспрессирующей Cas9, и трех меченых плазмидных остовов (P1, P2 и P3) для экспрессии направляющей РНК (gRNA).Три меченых плазмидных каркаса gRNA повторяли в порядке P1 – P2 – P3 для последовательного нацеливания на гены без конструирования какой-либо дополнительной плазмиды и удаления плазмиды gRNA индукцией в каждом цикле. Эффективность прямого лечения плазмиды гРНК, опосредованного Cas-3P, составляла более 40% при последовательном нацеливании на гены. Кроме того, Cas-3P позволял нацеливать гены с одним, двумя и тремя локусами с эффективностью 75%, 36,8% и 8,2% в течение 3-4 дней соответственно. Через три последовательных раунда нацеливания на гены в течение 10 дней S.cerevisiae был оптимизирован для продукции пачулола путем замены одного промотора, сверхэкспрессии трех генов и нарушения четырех генов. Работа важна для практического применения в инженерии фабрики клеток S. cerevisiae .

Чжэнь-Хай Ли и Хао Мэн внесли равный вклад в эту работу.

Электронные дополнительные материалы

Онлайн-версия этой статьи (10.1007 / s10295-019-02251-w) содержит дополнительные материалы, которые доступны авторизованным пользователям.

Введение

В последние годы Saccharomyces cerevisiae служит важным организмом-платформой для производства биотоплива, химикатов и фармацевтических препаратов на основе биоразнообразия, устойчивого и экологически чистого производства [11, 18, 20]. До недавнего времени многие важные молекулярные соединения, такие как предшественник артемизинина, фарнезен и гинсенозиды, уже были синтезированы с высокой эффективностью в S. cerevisiae , чему способствовала быстро развивающаяся метаболическая инженерия и синтетическая биология [7, 10, 21].Из-за циклов «проектирование-создание-тестирование» пути синтеза, задействованного в конструировании и оптимизации клеточных фабрик, драматическая реконструкция и частая отладка метаболической сети необходимы для создания эффективных клеточных фабрик в S. cerevisiae [3, 22, 23 , 27]. Для сбалансированной интеграции многоступенчатого метаболического пути требуются эффективные методы генетической манипуляции с целью исследования наиболее оптимальных комбинаций, которые могут принести пользу синтезу целевых продуктов в S.cerevisiae .

Эффективный аппарат гомологичной рекомбинации (HR) S. cerevisiae позволил интегрировать молекулы ДНК в хромосомы с заметной эффективностью. Хотя интеграция в геном линейных фрагментов ДНК, облегченная с помощью маркеров селекции, была хорошо развита в S. cerevisiae , последовательное редактирование генома все еще требует времени и труда, чему препятствует ограниченное количество маркеров селекции [26, 34 ]. Обычно на практике отдается предпочтение редактированию генов без использования маркеров.Тем не менее, нативный HR-механизм S. cerevisiae недостаточно эффективен для комплексного и безмаркерного нацеливания на гены, необходимого для современной синтетической биологии [30]. Эффективность нацеливания гена на хромосому с помощью HR может быть значительно увеличена, если в геном во время трансформации вводится двухцепочечный разрыв (DSB), что может быть в 4000 раз выше, чем эффективность рекомбинации без DSB-индуцированной интеграции фрагментов ДНК [29 ]. В последние несколько лет кластерная система, ассоциированная с короткими палиндромными повторами с регулярными интервалами (CRISPR) (система CRISPR / Cas9), способная генерировать DSB в геноме, привлекает все больше внимания благодаря своей высокой точности и эффективности.Система CRISPR / Cas9 из Streptococcus pyogenes уже широко используется во многих организмах [2, 15, 19, 24, 28, 31–33, 36, 37]. Возможность применения системы CRISPR / Cas для решения более сложных инженерных задач может быть увеличена с помощью собственного HR [6, 25, 38]. В настоящее время опубликовано несколько сообщений о метаболической инженерии S. cerevisiae с использованием системы CRISPR / Cas. В 2013 году DiCarlo et al. впервые сообщил, что DSB может быть эффективно генерирован в геноме дрожжей с помощью системы CRISPR / Cas9, а гомологически направленная репарация DSB может быть также эффективно получена путем совместной трансформации системы CRISPR / Cas9 с помощью двухцепочечных олигонуклеотидов 90 bp [9].Между тем, явной токсичности системы CRISPR / Cas9 у S. cerevisiae обнаружено не было. При использовании системы CRISPR / Cas9 для нацеливания генов в дрожжах следует учитывать доставку Cas9, направляющей РНК (пРНК) и донорной ДНК. Как правило, Cas9 конститутивно экспрессируется в дрожжах, а донорская ДНК котрансформируется с гРНК. Особое беспокойство вызывает то, что доставка гРНК в форме фрагмента или плазмиды является критическим параметром для мультиплексного редактирования генов [13]. Тадас Якочюнас и др.сообщили о методе CasEMBLR для безмаркерной мультилокусной интеграции собранных in vivo частей ДНК с использованием плазмидной формы доставки гРНК [16]. Horwitz et al. показали, что мультиплексная интеграция точечных мутаций и больших конструкций может быть осуществлена путем совместной трансформации одной линеаризованной плазмиды с множеством генерируемых ПЦР гРНК и кассет донорской ДНК [13]. Хотя многолокационная геномная интеграция до сих пор не была проблемой, эти два метода не могли позволить последовательное редактирование генома из-за удержания плазмиды gRNA в дрожжевых клетках.Чжоу и др. разработали основанный на CRISPR / Cas9 метод CasHRA для последовательного редактирования генома, в котором плазмиду гРНК можно вылечить с помощью индуктора [41]. Упомянутые выше методы значительно повысили эффективность редактирования генома S. cerevisiae . Тем не менее, немедленное, мультиплексное и последовательное редактирование генома все еще ограничено заранее созданием мультиплексированной плазмиды gRNA и последующим лечением плазмиды gRNA индуктором. Следовательно, есть еще возможности для дальнейшего улучшения метода на основе CRISPR / Cas9 в S.cerevisiae .

В работе был разработан метод, называемый Cas-3P, с использованием одной плазмиды, экспрессирующей Cas9 (pCas9), и трех меченых плазмидных остовов (P1, P2 и P3) для экспрессии направляющей РНК, что позволило немедленно, мультиплексно и последовательно нацеливать гены в . С. cerevisiae . Прямое использование линеаризованного плазмидного остова, ПЦР-генерируемых гРНК и кассет донорской ДНК для одностадийных сборок in vivo могло бы избежать множества манипуляций с линейными сегментами ДНК in vitro. Кроме того, эффективное и удобное удаление вектора экспрессии гРНК было полезным для последовательного нацеливания на гены без дополнительных операций конструирования плазмиды и лечения плазмид гРНК.Эффективность Cas-3P для последовательного нацеливания на один локус и мультиплексных генов оценивали с использованием вставки гена α-галактозидазы для сине-белой селекции и построения пути синтеза β-каротина в S. cerevisiae . Кроме того, Cas-3P также использовался при конструировании и оптимизации фабрики клеток пачулола в S. cerevisiae для оценки эффективности этого метода.

Материалы и методы

Штаммы, среды и реактивы

Saccharomyces cerevisiae BY4741 ( MATa, his3Δ1, leu2Δ0, met15Δ0, ura3Δ0 ) использовали в качестве родительского штамма. S. cerevisiae Y187 использовали в качестве матрицы для амплификации гена α-галактозидазы ( MEL1 ). Все сконструированные штаммы дрожжей перечислены в таблице 1. Для культивирования дрожжей использовали среду YPD (1% дрожжевой экстракт, 2% пептон и 2% d-глюкозы). SD-LEU, SD-LEU-URA и SD-LEU-HIS, приобретенные у FunGenome (FunGenome, Китай), использовали для отбора и культивирования рекомбинантов. Дрожжевые клетки размножали при 30 ° C. Escherichia coli DH5α (Takara, Япония) использовали для трансформации, амплификации и экстракции плазмид.KOD-FX (TOYOBO, Япония) использовали в соответствии с рекомендациями производителя для всех ПЦР. X-α-гал и стандартный β-каротин и пачулол были приобретены у Sigma (Sigma-Aldrich, США). При необходимости добавляли G418 (150 мг / л, Inalco, США) или X-α-гал (40 мг / л). Праймеры, оптимизированная по кодонам пачулолсинтаза ( PTS ) из pachouli ( Pogostemon cablin ) и фрагменты ДНК (CS1-gRNA_CS3, CS1-linkerX-linkerY, CS2-gRNA_CS1, CS2-linkerXS-gRNA, CS2-linkerX3-linkerY, и CS3-linkerX-linkerY, таблица S1) были синтезированы в Ruimian (Ruimian, Китай).Эндонуклеазы рестрикции и ДНК-лигаза Т4 были приобретены в Thermo Scientific. Оптимизированный по кодонам код PTS , праймеры и синтезированные фрагменты ДНК, использованные в этом исследовании, перечислены в дополнительных таблицах S1.

Плазмиды и штаммы, использованные в этом исследовании

pRI 9000 tHMG1 pGBK23 22 Это исследование– 930 Это исследование Штамм L0003

Плазмиды или штаммы .	Характеристики .	Источник или ссылка .
Плазмида
pESC-URA	URA3 , P _Gal10 -ADh2TT, 2μ ori –	[34]	crtE, tHMG1	[34]
pMRI-35- crtYB – crtI	crtYB, crtI	34 [34]	P _TEF1 -TPS1TT	[34]
p426-P _SNR52 -gRNA-SUP4TT	P _SNR52 -gRNA22 0]	p415-P _GalL – Cas9 -CYC1TT	P _GalL – Cas9 -CYC1TT	[9]
pGBK23	Clontech
pRS II-413	HIS3	[5]
pCas9	LEU2 , P _TEF1 – Cas9 9330T22 900 CYC9 9330T22 900 Это исследование
P1	URA3 , CS1 × 3, gRNA_CS3, 2μ ori	Это исследование
P2	G418 , CS2 × 3, gRNA_CS1, 2μ ori
P3	HIS3 , CS1 × 3, gRNA_CS2, 2μ ori	Это исследование
pESC-URA- tHMG1 – IDI1	CYC1TTG 9359 -P _Gal10 – IDI1* -ADh2TT*	Это исследование
pUMRI-15- UPC2 – 1	P _TEF1– – UPC 5 1 -TPS1TT	Настоящее исследование
pESC-URA- PTS	URA3 , P _Gal10 – PTS -ADh2TT, 2μ ori
BY4741	MATa, his3Δ1, leu2Δ0, met15Δ0, ura3Δ0	[8]
BY-LZH-001	BY4741, pCas9
L0003 -002	BY-LZH-001, ∆Gal1 – 7 :: MEL1 , P1-gRNA_Gal17	Это исследование
BY-LZH-003	BY-LZH-001, ∆DPP1: : tHMG1 , P1-gRNA_DPP1	Это исследование
BY-LZH-004	BY-LZH-001, ∆DPP1 :: tHMG1 , ∆HO :: crtE , P2-g22RNA_HO This исследование
BY-LZH-005	BY-LZH-001, ∆DPP1 :: tHM G1 , ∆HO :: crtE , ∆Gal80 :: crtYB , P3-gRNA_Gal80	Это исследование
BY-LZH-006	BY-LZH-001, ∆DPP1 :: tHM , ∆HO :: crtE* , ∆Gal80 :: crtYB , ∆Gal1 – 7 :: crtI , P1-gRNA_Gal17*	Это исследование
BY-LZH-007	BY-LZH-007	BY-LZH-007	BY-LZH-007	BY-LZH-007	BY-LZH-007	BY-LZH-007	BY-LZH-007	BY-LZH -001, ∆Gal1 – 7 :: MEL1 , ∆Gal80 :: KAN , P1-gRNA_Gal17-1 / Gal80-2	Это исследование
BY-LZH-008	BY-LZH -001, ∆DPP1 :: tHMG1 , ∆HO :: crtE , ∆Gal80 :: crtYB , ∆Gal1 – 7 :: crtI , P2-gRNA_Gal17-1 / HO-2 / Gal80 -3	Это исследование
BY-LZH-009	BY-LZH-001, Gal80 :: tHMG1 – IDI1 , P1-gRNA_Gal80	Это исследование
BY-LZH-010	BY-LZH-001, ∆Gal80 :: tHMG1 – IDI1 , ∆LPP1 , ∆DPP1 , P2-gRNA_Lpp1-1 / Dpp1-2,	Это исследование
BY-LZH-011	BY-L305 ∆1, Gal80 :: tHMG1 – IDI1 , ∆LPP1 , ∆DPP1 , ∆Gal1 – 7 :: UPC2 – 1 , ∆ERG9p :: HXT_ PGal-9330 ERG9-2	Это исследование
BY-LZH-012	BY-LZH-001, ∆Gal80 :: tHMG1 – IDI1	Это исследование
BY-LZH-013	BY-LZH001, pESC-URA- PTS	Это исследование
BY-LZH-014	BY-LZH-012, pESC-URA- PTS	Это исследование
BY-LZH -015	BY-LZH-010, pESC-URA- PTS	Настоящее исследование
BY-LZH-016	BY-LZH-011, pESC-URA- PTS	Это исследование

pRI 9000 tHMG1 pGBK23 22 Это исследование– 930 Это исследование Штамм L0003

Плазмиды или штаммы .	Характеристики .	Источник или ссылка .
Плазмида
pESC-URA	URA3 , P _Gal10 -ADh2TT, 2μ ori –	[34]	crtE, tHMG1	[34]
pMRI-35- crtYB – crtI	crtYB, crtI	34 [34]	P _TEF1 -TPS1TT	[34]
p426-P _SNR52 -gRNA-SUP4TT	P _SNR52 -gRNA22 0]	p415-P _GalL – Cas9 -CYC1TT	P _GalL – Cas9 -CYC1TT	[9]
pGBK23	Clontech
pRS II-413	HIS3	[5]
pCas9	LEU2 , P _TEF1 – Cas9 9330T22 900 CYC9 9330T22 900 Это исследование
P1	URA3 , CS1 × 3, gRNA_CS3, 2μ ori	Это исследование
P2	G418 , CS2 × 3, gRNA_CS1, 2μ ori
P3	HIS3 , CS1 × 3, gRNA_CS2, 2μ ori	Это исследование
pESC-URA- tHMG1 – IDI1	CYC1TTG 9359 -P _Gal10 – IDI1* -ADh2TT*	Это исследование
pUMRI-15- UPC2 – 1	P _TEF1– – UPC 5 1 -TPS1TT	Настоящее исследование
pESC-URA- PTS	URA3 , P _Gal10 – PTS -ADh2TT, 2μ ori
BY4741	MATa, his3Δ1, leu2Δ0, met15Δ0, ura3Δ0	[8]
BY-LZH-001	BY4741, pCas9
L0003 -002	BY-LZH-001, ∆Gal1 – 7 :: MEL1 , P1-gRNA_Gal17	Это исследование
BY-LZH-003	BY-LZH-001, ∆DPP1: : tHMG1 , P1-gRNA_DPP1	Это исследование
BY-LZH-004	BY-LZH-001, ∆DPP1 :: tHMG1 , ∆HO :: crtE , P2-g22RNA_HO This исследование
BY-LZH-005	BY-LZH-001, ∆DPP1 :: tHM G1 , ∆HO :: crtE , ∆Gal80 :: crtYB , P3-gRNA_Gal80	Это исследование
BY-LZH-006	BY-LZH-001, ∆DPP1 :: tHM , ∆HO :: crtE* , ∆Gal80 :: crtYB , ∆Gal1 – 7 :: crtI , P1-gRNA_Gal17*	Это исследование
BY-LZH-007	BY-LZH-007	BY-LZH-007	BY-LZH-007	BY-LZH-007	BY-LZH-007	BY-LZH-007	BY-LZH-007	BY-LZH -001, ∆Gal1 – 7 :: MEL1 , ∆Gal80 :: KAN , P1-gRNA_Gal17-1 / Gal80-2	Это исследование
BY-LZH-008	BY-LZH -001, ∆DPP1 :: tHMG1 , ∆HO :: crtE , ∆Gal80 :: crtYB , ∆Gal1 – 7 :: crtI , P2-gRNA_Gal17-1 / HO-2 / Gal80 -3	Это исследование
BY-LZH-009	BY-LZH-001, Gal80 :: tHMG1 – IDI1 , P1-gRNA_Gal80	Это исследование
BY-LZH-010	BY-LZH-001, ∆Gal80 :: tHMG1 – IDI1 , ∆LPP1 , ∆DPP1 , P2-gRNA_Lpp1-1 / Dpp1-2,	Это исследование
BY-LZH-011	BY-L305 ∆1, Gal80 :: tHMG1 – IDI1 , ∆LPP1 , ∆DPP1 , ∆Gal1 – 7 :: UPC2 – 1 , ∆ERG9p :: HXT_ PGal-9330 ERG9-2	Это исследование
BY-LZH-012	BY-LZH-001, ∆Gal80 :: tHMG1 – IDI1	Это исследование
BY-LZH-013	BY-LZH001, pESC-URA- PTS	Это исследование
BY-LZH-014	BY-LZH-012, pESC-URA- PTS	Это исследование
BY-LZH -015	BY-LZH-010, pESC-URA- PTS	Настоящее исследование
BY-LZH-016	BY-LZH-011, pESC-URA- PTS	Это исследование

Плазмиды и штаммы, использованные в этом исследовании

pRI 9000 tHMG1 pGBK23 22 Это исследование– 930 Это исследование Штамм L0003

Плазмиды или штаммы .	Характеристики .	Источник или ссылка .
Плазмида
pESC-URA	URA3 , P _Gal10 -ADh2TT, 2μ ori –	[34]	crtE, tHMG1	[34]
pMRI-35- crtYB – crtI	crtYB, crtI	34 [34]	P _TEF1 -TPS1TT	[34]
p426-P _SNR52 -gRNA-SUP4TT	P _SNR52 -gRNA22 0]	p415-P _GalL – Cas9 -CYC1TT	P _GalL – Cas9 -CYC1TT	[9]
pGBK23	Clontech
pRS II-413	HIS3	[5]
pCas9	LEU2 , P _TEF1 – Cas9 9330T22 900 CYC9 9330T22 900 Это исследование
P1	URA3 , CS1 × 3, gRNA_CS3, 2μ ori	Это исследование
P2	G418 , CS2 × 3, gRNA_CS1, 2μ ori
P3	HIS3 , CS1 × 3, gRNA_CS2, 2μ ori	Это исследование
pESC-URA- tHMG1 – IDI1	CYC1TTG 9359 -P _Gal10 – IDI1* -ADh2TT*	Это исследование
pUMRI-15- UPC2 – 1	P _TEF1– – UPC 5 1 -TPS1TT	Настоящее исследование
pESC-URA- PTS	URA3 , P _Gal10 – PTS -ADh2TT, 2μ ori
BY4741	MATa, his3Δ1, leu2Δ0, met15Δ0, ura3Δ0	[8]
BY-LZH-001	BY4741, pCas9
L0003 -002	BY-LZH-001, ∆Gal1 – 7 :: MEL1 , P1-gRNA_Gal17	Это исследование
BY-LZH-003	BY-LZH-001, ∆DPP1: : tHMG1 , P1-gRNA_DPP1	Это исследование
BY-LZH-004	BY-LZH-001, ∆DPP1 :: tHMG1 , ∆HO :: crtE , P2-g22RNA_HO This исследование
BY-LZH-005	BY-LZH-001, ∆DPP1 :: tHM G1 , ∆HO :: crtE , ∆Gal80 :: crtYB , P3-gRNA_Gal80	Это исследование
BY-LZH-006	BY-LZH-001, ∆DPP1 :: tHM , ∆HO :: crtE* , ∆Gal80 :: crtYB , ∆Gal1 – 7 :: crtI , P1-gRNA_Gal17*	Это исследование
BY-LZH-007	BY-LZH-007	BY-LZH-007	BY-LZH-007	BY-LZH-007	BY-LZH-007	BY-LZH-007	BY-LZH-007	BY-LZH -001, ∆Gal1 – 7 :: MEL1 , ∆Gal80 :: KAN , P1-gRNA_Gal17-1 / Gal80-2	Это исследование
BY-LZH-008	BY-LZH -001, ∆DPP1 :: tHMG1 , ∆HO :: crtE , ∆Gal80 :: crtYB , ∆Gal1 – 7 :: crtI , P2-gRNA_Gal17-1 / HO-2 / Gal80 -3	Это исследование
BY-LZH-009	BY-LZH-001, Gal80 :: tHMG1 – IDI1 , P1-gRNA_Gal80	Это исследование
BY-LZH-010	BY-LZH-001, ∆Gal80 :: tHMG1 – IDI1 , ∆LPP1 , ∆DPP1 , P2-gRNA_Lpp1-1 / Dpp1-2,	Это исследование
BY-LZH-011	BY-L305 ∆1, Gal80 :: tHMG1 – IDI1 , ∆LPP1 , ∆DPP1 , ∆Gal1 – 7 :: UPC2 – 1 , ∆ERG9p :: HXT_ PGal-9330 ERG9-2	Это исследование
BY-LZH-012	BY-LZH-001, ∆Gal80 :: tHMG1 – IDI1	Это исследование
BY-LZH-013	BY-LZH001, pESC-URA- PTS	Это исследование
BY-LZH-014	BY-LZH-012, pESC-URA- PTS	Это исследование
BY-LZH -015	BY-LZH-010, pESC-URA- PTS	Настоящее исследование
BY-LZH-016	BY-LZH-011, pESC-URA- PTS	Это исследование

pRI 9000 tHMG1 pGBK23 22 Это исследование– 930 Это исследование Штамм L0003

Плазмиды или штаммы .	Характеристики .	Источник или ссылка .
Плазмида
pESC-URA	URA3 , P _Gal10 -ADh2TT, 2μ ori –	[34]	crtE, tHMG1	[34]
pMRI-35- crtYB – crtI	crtYB, crtI	34 [34]	P _TEF1 -TPS1TT	[34]
p426-P _SNR52 -gRNA-SUP4TT	P _SNR52 -gRNA22 0]	p415-P _GalL – Cas9 -CYC1TT	P _GalL – Cas9 -CYC1TT	[9]
pGBK23	Clontech
pRS II-413	HIS3	[5]
pCas9	LEU2 , P _TEF1 – Cas9 9330T22 900 CYC9 9330T22 900 Это исследование
P1	URA3 , CS1 × 3, gRNA_CS3, 2μ ori	Это исследование
P2	G418 , CS2 × 3, gRNA_CS1, 2μ ori
P3	HIS3 , CS1 × 3, gRNA_CS2, 2μ ori	Это исследование
pESC-URA- tHMG1 – IDI1	CYC1TTG 9359 -P _Gal10 – IDI1* -ADh2TT*	Это исследование
pUMRI-15- UPC2 – 1	P _TEF1– – UPC 5 1 -TPS1TT	Настоящее исследование
pESC-URA- PTS	URA3 , P _Gal10 – PTS -ADh2TT, 2μ ori
BY4741	MATa, his3Δ1, leu2Δ0, met15Δ0, ura3Δ0	[8]
BY-LZH-001	BY4741, pCas9
L0003 -002	BY-LZH-001, ∆Gal1 – 7 :: MEL1 , P1-gRNA_Gal17	Это исследование
BY-LZH-003	BY-LZH-001, ∆DPP1: : tHMG1 , P1-gRNA_DPP1	Это исследование
BY-LZH-004	BY-LZH-001, ∆DPP1 :: tHMG1 , ∆HO :: crtE , P2-g22RNA_HO This исследование
BY-LZH-005	BY-LZH-001, ∆DPP1 :: tHM G1 , ∆HO :: crtE , ∆Gal80 :: crtYB , P3-gRNA_Gal80	Это исследование
BY-LZH-006	BY-LZH-001, ∆DPP1 :: tHM , ∆HO :: crtE* , ∆Gal80 :: crtYB , ∆Gal1 – 7 :: crtI , P1-gRNA_Gal17*	Это исследование
BY-LZH-007	BY-LZH-007	BY-LZH-007	BY-LZH-007	BY-LZH-007	BY-LZH-007	BY-LZH-007	BY-LZH-007	BY-LZH -001, ∆Gal1 – 7 :: MEL1 , ∆Gal80 :: KAN , P1-gRNA_Gal17-1 / Gal80-2	Это исследование
BY-LZH-008	BY-LZH -001, ∆DPP1 :: tHMG1 , ∆HO :: crtE , ∆Gal80 :: crtYB , ∆Gal1 – 7 :: crtI , P2-gRNA_Gal17-1 / HO-2 / Gal80 -3	Это исследование
BY-LZH-009	BY-LZH-001, Gal80 :: tHMG1 – IDI1 , P1-gRNA_Gal80	Это исследование
BY-LZH-010	BY-LZH-001, ∆Gal80 :: tHMG1 – IDI1 , ∆LPP1 , ∆DPP1 , P2-gRNA_Lpp1-1 / Dpp1-2,	Это исследование
BY-LZH-011	BY-L305 ∆1, Gal80 :: tHMG1 – IDI1 , ∆LPP1 , ∆DPP1 , ∆Gal1 – 7 :: UPC2 – 1 , ∆ERG9p :: HXT_ PGal-9330 ERG9-2	Это исследование
BY-LZH-012	BY-LZH-001, ∆Gal80 :: tHMG1 – IDI1	Это исследование
BY-LZH-013	BY-LZH001, pESC-URA- PTS	Это исследование
BY-LZH-014	BY-LZH-012, pESC-URA- PTS	Это исследование
BY-LZH -015	BY-LZH-010, pESC-URA- PTS	Настоящее исследование
BY-LZH-016	BY-LZH-011, pESC-URA- PTS	Настоящее исследование

Приготовление кассет гРНК и донорской ДНК

Все гРНК были разработаны CRISPRdirect (http: // crispr.dbcls.jp/). Все линкеры были разработаны R2oDNA Designer (http://www.r2odna.com/) [4]. Все кассеты пРНК были созданы с помощью ПЦР с перекрыванием с линкерами и специфическими праймерами, содержащими целевые последовательности 20 п.н. (дополнительный рисунок S1A). В качестве матрицы использовали плазмиду p426-P _SNR52 -gRNA-SUP4TT. Все праймеры, использованные в работе, перечислены в Таблице S1. Праймеры linkerX-F и linkerY-R использовали для конструирования кассеты гРНК для нацеливания на один локус гена. LinkerX-F и linkerA-R использовали для конструирования первой кассеты gRNA, а linkerA-F и linkerY-R использовали для конструирования второй кассеты gRNA для нацеливания на гены с двумя локусами посредством одной трансформации.LinkerX-F и linkerA-R использовали для конструирования первой кассеты gRNA, linkerA-F и linkerB-R использовали для конструирования второй кассеты gRNA, а linkerB-F и linkerY-R использовали для конструирования третьей кассеты gRNA для нацеливание гена с тремя локусами с помощью одной трансформации (рис. S1). Донорская ДНК для каждой экспрессионной кассеты содержала пять фрагментов, включая промотор, структурный ген, терминатор и два гомологичных плеча (вверх и вниз, примерно на 500 п.н., идентичных геному), соответственно. Все гомологичные рукава, промоторы P _TEF1, P _FBA1, P _PGK1, P _HXT1 и P _HXT7 и терминаторы P _{AD59305 HXT7 935 PGK1TT и TPS1TT, а также ген IDI1 были амплифицированы из генома S.cerevisiae BY4741. Фрагменты укороченной 3-гидрокси-3-метилглутарил-коэнзим-А-редуктазы ( tHMG1 ) и геранилгеранилпирофосфатсинтазы ( crtE ) амплифицировали с плазмиды pMRI-34- crtE MG . Фрагменты фитоен-синтазы / ликопенциклазы ( crtYB ) и фитоен-десатуразы ( crtI ) амплифицировали из плазмиды pMRI-35- crtYB – crtI . Фрагмент полудоминантного мутантного аллеля белка контроля захвата стерола 2 ( UPC2 – 1) был амплифицирован из плазмиды pUMRI- UPC2 – 1 .Плазмида pESC-URA- tHMG1 – IDI1 была использована для амплификации фрагмента CYC1TT- tHMG1 -P _Gal1 -P _Gal101--IDI1.}

Конструкция плазмиды

Для создания плазмиды pCas9, конститутивно экспрессирующей Cas9 , промотор P _GalL плазмиды p415-P _GalL– Cas9 -CYC1TT был заменен промотором 56 P 56 из P 56. плазмида p414-P _TEF1 – Cas9 -CYC1TT, используя эндонуклеазы рестрикции Swa I и Spe I.Фрагмент ПЦР (ESC-URA) амплифицировали с использованием плазмиды pESC-URA в качестве матрицы и праймеров P4 и P5. Синтезированные фрагменты ДНК CS1-linkerX-linkerY, CS2-linkerX-linker Y и CS3-linkerX-linkerY лигировали с ESC-URA с использованием Hind III и Xho I, создавая плазмиды pURA-XYCS1, pURA-XYCS2 и pURA-XYCS3. , соответственно. Фрагмент ПЦР (URA-XYCS1) амплифицировали с использованием плазмиды pURA-XYCS1 в качестве матрицы и праймеров P6 и P7. Для создания плазмиды P1 синтезированный фрагмент ДНК CS1-gRNA_CS3 лигировали с URA-XYCS1 с использованием Kpn I и BamH I.Фрагмент ПЦР (URA-XYCS2) амплифицировали с использованием плазмиды pURA-XYCS2 в качестве матрицы и праймеров P6 и P7, вводя Kpn I и BamH I. Синтезированные фрагменты ДНК CS2-gRNA_CS1 лигировали с URA-XYCS2 с использованием Kpn I и BamH I. для создания плазмиды pURA-XYCS2-gCS1. Фрагмент ПЦР (XYCS2-gCS1) амплифицировали с использованием плазмиды pURA-XYCS2-gCS1 в качестве матрицы и праймеров P8 и P9, вводя Spe I и Mlu I. Кассету G418 амплифицировали из плазмиды pGBK-T7 в качестве матрицы с использованием праймеров. P10 и P11.Кассету G418 лигировали с XYCS2-gCS1 с использованием Spe I и Mlu I для создания плазмиды P2. ПЦР-фрагмент URA-XYCS3 амплифицировали с использованием плазмиды pURA-XYCS3 в качестве матрицы и праймеров P6 и P7 с введенными Kpn I и BamH I. Синтезированные фрагменты ДНК CS3-gRNA_CS2 лигировали с URA-XYCS3 с использованием Kpn I и BamH I, получая плазмиду pURA-XYCS3-gCS2. ПЦР-фрагмент XYCS3-gCS2 амплифицировали с использованием плазмиды pURA-XYCS3-gCS2 в качестве матрицы и праймеров P8 и P9 с введенными Spe I и Mlu I.Кассету HIS3 амплифицировали из плазмиды pRSII-413 с использованием праймеров P12 и P13. Для создания плазмиды P3 кассету HIS3 лигировали с XYCS3-gCS2 с использованием Spe I и Mlu I.

Для конструирования плазмиды pESC-URA- PTS , оптимизированной по кодонам пачулолсинтазы PTS из pachou Pogostemon cablin ) лигировали в плазмиду pESC-URA с использованием EcoR I и Spe I. Для конструирования плазмиды pESC-URA- tHMG1 – IDI1 укороченную 3-гидрокси-3-метилглутарил-коэнзим-A редуктазу tHMG (

) и гены изопентенилпирофосфатизомеразы ( IDI1 ) лигировали в плазмиду pESC-URA с использованием BamH I и Sal I, EcoR I и Spe I, соответственно.

Для создания мутации в гене UPC2 (белок 2, контролирующий захват стерола), два фрагмента ДНК были амплифицированы из генома S. cerevisiae BY4741 с использованием праймеров P14 / P15 и P16 / P17 соответственно. Затем два фрагмента ДНК были слиты с образованием гена UPC2 – 1 (полудоминантный мутантный аллель UPC2 ) с помощью перекрывающейся ПЦР. Для конструирования плазмиды pUMRI-15- UPC2 – 1 , фрагмент гена UPC2 – 1 был лигирован в плазмиду pUMRI-15 с использованием BamH I и Xho I.

Конструкция штамма

Электропорацию использовали для трансформации всех штаммов S. cerevisiae [17]. Для получения исходного штамма BY4741-LZH001 100 нг плазмиды pCas9 трансформировали в S. cerevisiae BY4741. Для получения линеаризованных плазмидных остовов gRNA плазмиды P1, P2 и P3 были линеаризованы с использованием EcoR I, соответственно. В каждом цикле 500 нг линеаризованной плазмиды котрансформировали фрагментами ДНК и кассетами гРНК в количестве 100 нг соответственно.

Чтобы выяснить, может ли система Cas-3P доставлять одну кассету гРНК и способствовать нацеливанию на один локус гена, была использована смесь линеаризованных P1, Gal1-7_Up, P _TEF1, MEL1 , TPS1TT, Gal1-7_Dn и Кассеты gRNA_Gal17 котрансформировали в BY-LZH001. Чашки SD-LEU-URA, содержащие X-α-gal, использовали для отбора положительных трансформантов, названных BY-LZH002. Трансформанты, котрансформированные вышеуказанными смесями без кассеты gRNA_Gal17, использовали в качестве контроля.

Чтобы проверить, может ли система Cas-3P способствовать немедленному и последовательному нацеливанию на гены, было проведено четыре раунда немедленного нацеливания на гены. Сначала смесь линеаризованных кассет P1, Dpp1_Up, P _TEF1, tHMG1 , CYC1TT, Dpp1_Dn и gRNA_Dpp1 трансформировали в BY-LZH001 для замены гена Dpp1 ZH Dpp1 H гена BY-LZH001. . Планшеты SD-LEU-URA использовали для отбора положительных трансформантов, названных BY-LZH003.Во-вторых, для замены гена HO в BY-LZH003 на ген crtE и устранения плазмид гРНК, полученных из P1, в BY-LZH002, смесь линеаризованных P2, HO_Up, P _HXT7, crtE , Кассеты CYC1TT, HO_Dn и gRNA_HO были котрансформированы в BY-LZH003. Планшеты SD-LEU, содержащие G418, использовали для отбора положительных трансформантов, названных BY-LZH004. В-третьих, для замены гена Gal80 BY-LZH004 на ген crtYB и устранения плазмид гРНК, полученных из P2, в BY-LZH004, смесь линеаризованных P3, Gal80_Up, P _FBA1, crtYB 9330 Кассеты PGK1TT, Gal80_Dn и gRNA_Gal80 котрансформировали в BY-LZH004.Планшеты SD-LEU-HIS использовали для отбора положительных трансформантов, названных BY-LZH005. Наконец, для замены гена Gal1 – 7 в BY-LZH005 геном crtI и устранения плазмид гРНК, производных от P3, в BY-LZH005, смеси линеаризованных P1, Gal1-7_Up, P _{PGK1 Кассеты}, crtI , TPS1TT, Gal1-7_Dn и gRNA_Gal17 котрансформировали в BY-LZH005. Планшеты SD-LEU-URA использовали для отбора положительных трансформантов, названных BY-LZH006.

Чтобы исследовать, может ли система Cas-3P доставлять две кассеты гРНК и способствовать нацеливанию гена с двумя локусами, была использована смесь линеаризованных P1, gRNA_Gal17-1, gRNA_Gal80-2, Gal1-7_Up, P _TEF1, MEL1 Кассеты , TPS1TT, Gal1-7_Dn, Gal80_Up, G418 и Gal80_Dn были котрансформированы в BY-LZH001. Чашки SD-LEU-URA, содержащие G418 и X-α-gal, использовали для отбора положительных трансформантов, названных BY-LZH007. Трансформанты, котрансформированные вышеуказанной смесью без кассеты gRNA_Gal17-1 и gRNA_Gal80-2, использовали в качестве контроля.

Чтобы исследовать, может ли система Cas-3P доставлять три кассеты гРНК и способствовать нацеливанию гена с тремя локусами, была использована смесь линеаризованных P2, gRNA_Gal17-1, gRNA_HO-2, gRNA_Gal80-3, Gal1-7_Up, P _PGK1, crtI , TPS1TT, Gal1-7_Dn, HO_Up, P _HXT7, crtE , CYC1TT, HO_Dn, Gal80_Up, P _{_ FBA1 преобразовал кассеты PG1} и crtY, , преобразовал кассеты Gal80K, в BY-LZH003. Чашки SD-LEU, содержащие G418, использовали для отбора положительных трансформантов, названных BY-LZH008.Трансформанты, котрансформированные вышеуказанной смесью без кассет gRNA_Gal17-1, gRNA_HO-2 и gRNA_Gal80-3, использовали в качестве контроля.

Чтобы сконструировать и оптимизировать фабрику клеток пачулола в S. cerevisiae , смесь линеаризованного P1, CYC1TT- tHMG1 -P _Gal1 -P _Gal10 – ADI1h Кассеты, Gal80_Up и Gal80_Dn были котрансформированы в BY-LZH001, чтобы сначала заменить ген Gal80 .Планшеты SD-LEU-URA использовали для отбора положительных трансформантов, названных BY-LZH009. Во-вторых, смесь линеаризованных P2, gRNA_Lpp1-1, gRNA_Dpp1-2, LPP1_Up-LPP1_Dn и DPP1_Up-DPP1_Dn была совместно трансформирована в BY-LZH009, чтобы разрушить гены LPP1 и DPP1 , производные от P1, и устранить плазмида gRNA. Чашки SD-LEU, содержащие G418, использовали для отбора положительных трансформантов, названных BY-LZH010. В-третьих, смесь линеаризованных P3, gRNA_Gal17-1, gRNA_ERG9-2, Gal1-7_Up, P _Gal1, UPC2 – 1 , PGK1TT, Gal1-7_Dn и Up-P _{HXT59 – 93 Dn была совместно трансформирована в BY-LZH010 для замены гена Gal1 – 7 и промотора гена ERG9 .Планшеты SD-HIS использовали для отбора положительных трансформантов, названных BY-LZH011. Для удаления плазмиды рРНК, полученной из P1, в BY-LZH009 использовали селекционный планшет SD-5-FOA. Положительные трансформанты были названы BY-LZH012. Плазмиду pESC-URA- PTS , соответственно, трансформировали в штаммы BY-LZH012, BY-LZH010 и BY-LZH011 для исследования эффективности продукции пачулола. Полученные соответствующие трансформанты были названы BY-LZH014, BY-LZH015 и BY-LZH016 соответственно.Штамм BY-LZH001, трансформированный плазмидой pESC-URA- PTS , был назван BY-LZH013, который использовали в качестве контроля.}

Идентификация генотипа штамма, циклизация плазмиды gRNA и лечение плазмиды gRNA

Для анализа генотипирования десять колоний от каждой трансформации были предварительно проанализированы с помощью ПЦР колоний с праймерами, которые запускают верхнее плечо гомологии и нижнее плечо гомологии и последующее секвенирование. Циклизацию плазмиды gRNA идентифицировали с помощью ПЦР колоний, и последующий продукт ПЦР секвенировали с линкером X-F и линкером Y-R.Длина кассет одно-, двух- и трехгРНК составляла примерно 400, 1000 и 1500 п.н. соответственно. Лечение плазмид гРНК, происходящих из P1, P2 и P3, было идентифицировано с помощью ПЦР колоний с праймерами P1-F / P1-R, P2-F / P2-R и P3-F / P3-R, соответственно. Если вылечить плазмиду гРНК, продукт ПЦР не будет обнаружен. В противном случае будет обнаружен продукт ПЦР 1000 пар оснований.

Культивирование штамма и анализ β-каротина и пачулола

Штаммы для анализа продукта предварительно культивировали в 5 мл YPD при 30 ° C, 220 об / мин в течение 24 часов.Предварительные культуры инокулировали до исходной OD ₆₀₀ 0,05 в 50 мл YPD в колбах на 250 мл и выращивали в тех же условиях в течение 72 часов. Β-каротин экстрагировали из продуктов ферментации методом горячей соляной кислоты с ацетоном [34]. Agilent 1000, оборудованный колонкой Agilent C18 (5 мкм, 4,6 мм × 250 мм), использовали для анализа ВЭЖХ. Подвижная фаза состояла из ацетонитрил: метанол: изопропанол = 5: 3: 2 со скоростью потока 1 мл / мин при 40 ° C, и сигналы УФ / видимого света детектировались при 450 нм. Пачулол из продуктов ферментации экстрагировали додекановым методом [1].GCMS-QP2010 ultra, оборудованный капиллярной колонкой DB-5 (внутренний диаметр 30 м × 0,25 мм, толщина пленки 0,25 мкм) с использованием гелия в качестве газа-носителя при скорости потока 1,2 мл / мин, использовался для идентификации и количественного анализа пачулол. Инжектор с разделением / без разделения использовался в режиме без разделения. Начальная температура печи составляла 80 ° C, а температура инжектора составляла 250 ° C. Температуру печи увеличивали до 120 ° C через 1 минуту со скоростью 108 ° C / мин, а затем повышали до 160 ° C со скоростью 3 ° C / мин.Наконец, температуру печи повысили до 270 ° C со скоростью 10 ° C / мин и выдерживали в течение 5 минут при этой температуре.

Результаты

Дизайн метода Cas-3P для немедленного, мультиплексного и последовательного нацеливания на гены

В этом исследовании мы намеревались разработать метод немедленного, мультиплексного и последовательного нацеливания на гены в S. cerevisiae путем объединения системы CRISPR / Cas9 с HR-направленной репарацией разрывов, сборкой ДНК in vivo и репарацией DSB.Это могло бы облегчить прямое использование линеаризованного остова плазмиды, генерируемой ПЦР гРНК и кассет донорской ДНК для одностадийных сборок in vivo и избежать множества манипуляций с линейными сегментами ДНК in vitro.

С этой целью была построена плазмида CEN / ARS, конститутивно экспрессирующая Cas9, которая получила название pCas9 (рис. 1). Три плазмиды для экспрессии гРНК были сконструированы с использованием различных маркеров отбора и плазмидного остова размером 2 мкм, которые были названы P1, P2 и P3 соответственно (рис. 1). Для облегчения последовательного нацеливания на гены были сконструированы три сайта CS1, CS2 и CS3 в P1, P2 и P3, которые можно было использовать для лечения плазмид путем конститутивной экспрессии gRNA_CS1 в P2, gRNA_CS2 в P3 и gRNA_CS3 в P1 соответственно ( Инжир.1). Этот метод получил название Cas-3P.
Рис. 1
Плазмида Cas9 и три плазмиды гРНК, используемые в системе Cas-3P. pCas9: плазмида CEN / ARS, экспрессирующая Cas9; P1, P2 и P3: три плазмиды гРНК с разными маркерами отбора; 2μ ori: репликон 2μ; URA3: маркер ауксотрофа урацила; HIS3: маркер ауксотрофного гистидина; G418: маркер отбора устойчивости к генетицину; CS1: сайт отверждения плазмиды, производной от P1; CS2: сайт отверждения плазмиды, полученной из P2; CS3: сайт отверждения плазмиды, полученной из P3; gRNA_CS1: гРНК, нацеливающая на сайт CS1; gRNA_CS2: гРНК, нацеливающая на сайт CS2; gRNA_CS3: гРНК, нацеливающая на сайт CS3; linkerX и linkerY: линкеры для репарации разрывов с помощью кассет гРНК
Рис.1
Плазмида Cas9 и три плазмиды гРНК, используемые в системе Cas-3P. pCas9: плазмида CEN / ARS, экспрессирующая Cas9; P1, P2 и P3: три плазмиды гРНК с разными маркерами отбора; 2μ ori: репликон 2μ; URA3: маркер ауксотрофа урацила; HIS3: маркер ауксотрофного гистидина; G418: маркер отбора устойчивости к генетицину; CS1: сайт отверждения плазмиды, производной от P1; CS2: сайт отверждения плазмиды, полученной из P2; CS3: сайт отверждения плазмиды, полученной из P3; gRNA_CS1: гРНК, нацеливающая на сайт CS1; gRNA_CS2: гРНК, нацеливающая на сайт CS2; gRNA_CS3: гРНК, нацеливающая на сайт CS3; linkerX и linkerY: линкеры для репарации разрывов с помощью кассет гРНК
Для использования Cas-3P плазмиду pCas9 необходимо трансформировать в S.cerevisiae для создания стартового штамма. Одна линеаризованная плазмида gRNA была котрансформирована с помощью PCR-генерируемых gRNAs и кассет донорской ДНК в каждом цикле (фиг. 2). Используя преимущества высокоэффективной системы HR в S. cerevisiae , линеаризованный остов плазмиды был затем надлежащим образом собран вместе с кассетами гРНК in vivo (фиг. 2, фиг. S2). Мультиплексная генетическая манипуляция может быть реализована с помощью Cas9-опосредованных мультилокусных DSB и HR-направленной репарации с помощью кассет донорской ДНК (рис.2). Следующий раунд генетических манипуляций может быть проведен немедленно с помощью различных маркеров отбора, содержащихся в P1, P2 и P3, просто путем совместной трансформации другого линеаризованного плазмидного остова с генерируемыми ПЦР гРНК и кассетами донорской ДНК в трансформант, полученный в предыдущем примере. круглый. Плазмида гРНК, созданная в предыдущем цикле, может быть удалена с помощью Cas9, связанного с гРНК, экспрессируемой плазмидой, созданной в следующем цикле. Наконец, только новая сгенерированная плазмида gRNA и плазмида pCas9 были зарезервированы в трансформанте (рис.2). Общая процедура Cas-3P для последовательного нацеливания на гены с порядком P1 – P2 – P3 показана следующим образом (рис. 3): в 3 N + 1 ( N ≥ 0, времена цикла P1 – P2– P3), линеаризованный P1 совместно трансформируют с помощью донорской ДНК и гРНК, полученных с помощью ПЦР, в BY4741-LZH001 или штамм, полученный в 3 N + 3 раундах. После идентификации генотипа и удаления плазмиды рРНК, полученной из P3, отобранные трансформанты используют в следующем раунде. В раунде 3 N + 2 линеаризованный P2 совместно трансформируется с помощью ПЦР-генерируемой донорной ДНК и кассет гРНК в трансформант, полученный в раунде 3 N + 1.После идентификации генотипа и удаления плазмиды гРНК, полученной из P1, отобранные трансформанты используются для следующего раунда. В 3 N + 3 раундах линеаризованный P3 совместно трансформируют с генерированными ПЦР донорскими ДНК и кассетами гРНК в трансформант, полученный в 3 N + 2 раундах. После идентификации генотипа и удаления плазмиды гРНК, полученной из P2, выбранный трансформант используется для следующего раунда, который входит в новый цикл P1 – P2 – P3.
Рис.2
Схема мультиплексного нацеливания на гены и лечения плазмиды гРНК с помощью Cas-3P в S.cerevisiae . pCas9: плазмида CEN / ARS, экспрессирующая Cas9; плазмида гРНК (N-раунд): плазмида гРНК, зарезервированная в N-раунде генетических манипуляций; плазмида гРНК (N + 1 раунд): плазмида гРНК, зарезервированная в N + 1 раунде генетической манипуляции; Р: линеаризованная плазмида гРНК; gRNA1, gRNA2 и gRNA3: кассеты gRNA; P ₁, P ₂ и P ₃: промоторы; Gene1, Gene2 и Gene3: вставленные гены; TT1, TT2 и TT3: терминаторы; HA1_Up, HA2_Up, HA3_Up, HA1_Dn, HA2_Dn и HA3_Dn: гомологичные плечи выше и ниже по потоку
Рис.2
Краткое описание мультиплексного нацеливания на гены и лечения плазмиды гРНК с помощью Cas-3P в S. cerevisiae . pCas9: плазмида CEN / ARS, экспрессирующая Cas9; плазмида гРНК (N-раунд): плазмида гРНК, зарезервированная в N-раунде генетических манипуляций; плазмида гРНК (N + 1 раунд): плазмида гРНК, зарезервированная в N + 1 раунде генетической манипуляции; Р: линеаризованная плазмида гРНК; gRNA1, gRNA2 и gRNA3: кассеты gRNA; P ₁, P ₂ и P ₃: промоторы; Gene1, Gene2 и Gene3: вставленные гены; TT1, TT2 и TT3: терминаторы; HA1_Up, HA2_Up, HA3_Up, HA1_Dn, HA2_Dn и HA3_Dn: гомологичные плечи выше и ниже по потоку
Рис.3
Обзор немедленного и непрерывного нацеливания гена с помощью Cas-3P в S. cerevisiae
Рис. 3
Обзор немедленного и непрерывного нацеливания гена с помощью Cas-3P в S. cerevisiae
Эффективность Cas -3P для последовательного однолокусного гена, нацеленного на
Перед оценкой эффективности Cas-3P для последовательного и мультиплексного нацеливания на гены была оценена эффективность Cas-3P для последовательного нацеливания на один локус гена.Во-первых, эффективность доставки одной гРНК и нацеливания на один локус гена, опосредованного системой Cas-3P, была протестирована с использованием гетерогенного MEL1 для замены генов Gal1-7 в геноме. MEL1 может катализировать субстрат X-α-gal с образованием продукта видимого синего цвета, что облегчает фенотипический анализ [14]. Было показано, что 75% (31/40) голубых трансформантов (названных BY-LZH-002) были получены посредством трансформации gRNA_gal17, линеаризованного P1 и соответствующей донорной ДНК, тогда как синие трансформанты не были получены посредством трансформации без gRNA_gal17 ( Инжир.S3A). ПЦР-анализ колоний показал, что gRNA_gal17 и линеаризованный P1 были успешно собраны в кольцевую плазмиду и ген Gal1 – 7 был успешно заменен геном MEL1 (рис. S3B и C). Согласованные результаты были получены при использовании линеаризованных P2 или P3 (данные не показаны). В совокупности система Cas-3P может осуществлять доставку одной гРНК и нацеливание на один локус гена с эффективностью 75%.
Чтобы оценить возможность немедленных и последовательных генетических манипуляций, опосредованных Cas-3P, эффективность нацеливания на один локус гена была дополнительно исследована путем конструирования пути синтеза β-каротина в S.cerevisiae . β-каротин может быть эффективно продуцирован из нативного мевалонатного (MVA) пути путем экспрессии гетерогенных каротиногенных генов crtE , crtI и crtYB из Xanthophyllomyces dendrorhous и высвобождает скорость 306 lim путь MVA, который придал дрожжевым клеткам оранжевый фенотип (рис. 4а) [35]. Cas-3P применялся для восстановления пути β-каротина последовательными четырьмя раундами нацеливания на гены, включая DPP1 , замененный на tHMG1 в первом раунде, HO замененный на crtE во втором раунде, Gal80 заменен на crtYB в третьем раунде и Gal1 – 7 заменен на crtI в четвертом раунде (рис.4б). Поскольку отверждение плазмиды gRNA было критическим параметром для немедленного и последовательного нацеливания на гены, эффективность лечения плазмиды gRNA определяли с помощью ПЦР колоний. Результаты показали, что 71% (191/269) колоний (названных BY-LZH-006) были оранжевыми в планшете для селекции после четырех раундов генетических манипуляций с помощью Cas-3P (фиг. S4). ПЦР-анализ колоний показал, что DPP1 , HO , Gal80 и Gal1 – 7 были успешно заменены на tHMG1 , crtE , crtYB и crtI соответственно (рис. , рис.4в). Плазмиды гРНК, полученные из P1, P2 и P3, были излечены с эффективностью 80%, 40% и 90% соответственно (рис. 4d). Анализ ВЭЖХ показал, что β-каротин продуцировался в штамме BY-LZH-006 (данные не показаны). Каждый раунд генетических манипуляций занимал всего 3–4 дня, и это было время, необходимое трансформантам для роста в планшете для отбора. Это было значительно короче, чем время каждого раунда генетических манипуляций, необходимых для традиционного метода (6–8 дней) [12]. Весь период четырех раундов генетических манипуляций занял всего 13 дней.Следовательно, Cas-3P можно удобно и эффективно использовать для непосредственного и последовательного нацеливания на один локус гена в S. cerevisiae .
Рис. 4
Последовательный однолокусный ген, нацеленный на Cas-3P для построения пути синтеза β-каротина. a Нативный мевалонатный путь в S. cerevisiae (желто-коричневый) и ненативный путь синтеза β-каротина из Xanthophyllomyces dendrorhous (оранжевый). Одиночные стрелки представляют собой одноэтапные преобразования.Двойные стрелки обозначают несколько шагов. Зеленые стрелки представляют сверхэкспрессированные гены. b Схематическое изображение замены DPP1 , HO , Gal1 – 7 и Gal80 на tHMG1 , crtE , crtI Y и экспрессионных кассет crtI Y и соответственно . Горизонтальные стрелки представляют разработанные праймеры для генотипирования. c Результаты генотипирования оранжевых трансформантов, идентифицированных с помощью ПЦР колоний.D: (слева) отверждение плазмиды гРНК, полученной из P1, плазмидой гРНК, полученной из P2, в BY-LZH-004; (в центре) отверждение плазмиды гРНК, полученной из P2, плазмидой гРНК, полученной из P3, в BY-LZH-005; (справа) Плазмида гРНК, полученная из P3, отверждение плазмидой гРНК, полученной из P1, в BY-LZH-006. HMG-CoA 3-гидрокси-3-метилглутарил-кофермент A, IPP изопентенилпирофосфат, DMAPP диметилаллилпирофосфат, FPP фарнезилдифосфат, 3-гидрокси-дифосфат 3-305-GGP6G3-GGP-G--тргеранил-3-G-5G-3GP -метилглутарил-коэнзим-А-редуктаза, crtE геранилгеранилпирофосфатсинтаза, crtYB фитоенсинтаза / ликопенциклаза, crtI фитоендезатураза
Рис.4
Последовательное нацеливание гена с одним локусом с помощью Cas-3P для построения пути синтеза β-каротина. a Нативный мевалонатный путь в S. cerevisiae (желто-коричневый) и ненативный путь синтеза β-каротина из Xanthophyllomyces dendrorhous (оранжевый). Одиночные стрелки представляют собой одноэтапные преобразования. Двойные стрелки обозначают несколько шагов. Зеленые стрелки представляют сверхэкспрессированные гены. b Схематическое изображение замены DPP1 , HO , Gal1 – 7 и Gal80 на tHMG1 , crtE , crtI Y и экспрессионных кассет crtI Y и соответственно .Горизонтальные стрелки представляют разработанные праймеры для генотипирования. c Результаты генотипирования оранжевых трансформантов, идентифицированных с помощью ПЦР колоний. D: (слева) отверждение плазмиды гРНК, полученной из P1, плазмидой гРНК, полученной из P2, в BY-LZH-004; (в центре) отверждение плазмиды гРНК, полученной из P2, плазмидой гРНК, полученной из P3, в BY-LZH-005; (справа) Плазмида гРНК, полученная из P3, отверждение плазмидой гРНК, полученной из P1, в BY-LZH-006. HMG-CoA 3-гидрокси-3-метилглутарил-кофермент A, IPP изопентенилпирофосфат, DMAPP диметилаллилпирофосфат, FPP фарнезилдифосфат, 3-гексилдифосфат 3-305-GGP-G-3-G-G-9-G-3-G-5G-3-G-G-306-гидроспран -метилглутарил-коэнзим-А-редуктаза, crtE геранилгеранилпирофосфатсинтаза, crtYB фитоенсинтаза / ликопенциклаза, crtI фитоэндезатураза
Оценка эффективности целевого гена 3P
Нацеливание на ген multiloci с помощью одной трансформации может значительно повысить эффективность работы строительства фабрики клеток в S.cerevisiae . Чтобы оценить, можно ли использовать Cas-3P для нацеливания на мультиплексированный ген с помощью одной трансформации, была исследована эффективность нацеливания на гены по двойным и тройным локусам, соответственно. Для проверки эффективности нацеливания на гены с двумя локусами, гены, кодирующие маркеры селекции устойчивости к генетицину (G418), были использованы для замены генов Gal1 – 7 и Gal80 в геноме, соответственно (рис. . 5а). Результаты показали, что 36.8% (112/304) синих трансформантов (названных BY-LZH-007) были получены путем совместной трансформации направляющей РНК gRNA_gal17 и gRNA_gal80 с линеаризованным P1 и соответствующими донорскими ДНК, тогда как синие трансформанты не были получены посредством трансформации без gRNA_gal17 и gRNA_gal80 (рис. 5б). ПЦР-анализ колоний показал, что направляющая РНК gRNA_gal17 и gRNA_gal80 была успешно собрана с линеаризованным P1 для создания кольцевой плазмиды, и Gal1 – 7 и Gal80 были успешно заменены MEL1 и G418 , соответственно (рис.S5A и B). Последовательные результаты были получены при использовании линеаризованных P2 (68/445) или P3 (94/361). Таким образом, с использованием Cas-3P были сконструированы две доставки гРНК и нацеливание на гены с двумя локусами с эффективностью 36,8%.
Рис. 5
Мультиплексные гены, нацеленные на Cas-3P. a Схематическая иллюстрация замены Gal1 – 7 и сайтов Gal80 кассетами экспрессии MEL1 и G418 , соответственно. Горизонтальные стрелки представляют разработанные праймеры для генотипирования. b (левая панель) Репрезентативный фенотип клеток, котрансформированных линеаризованным P1 и кассетами донорской ДНК с (+ гРНК) и без кассет гРНК (-gRNA) для оценки эффективности таргетинга гена с двумя локусами с помощью Cas-3P . (правая панель) Репрезентативный фенотип клеток, котрансформированных линеаризованным P1 и кассетами донорной ДНК с (+ гРНК) и без кассет гРНК (-gRNA) для оценки нацеливания гена с тремя локусами с помощью Cas-3P
Рис. 5
Мультиплексные гены, нацеленные на Cas-3P. a Схематическая иллюстрация замены Gal1 – 7 и сайтов Gal80 кассетами экспрессии MEL1 и G418 , соответственно. Горизонтальные стрелки представляют разработанные праймеры для генотипирования. b (левая панель) Репрезентативный фенотип клеток, котрансформированных линеаризованным P1 и кассетами донорской ДНК с (+ гРНК) и без кассет гРНК (-gRNA) для оценки эффективности таргетинга гена с двумя локусами с помощью Cas-3P .(правая панель) Репрезентативный фенотип клеток, ко-трансформированных линеаризованным P1 и кассетами донорской ДНК с (+ гРНК) и без кассет гРНК (-gRNA) для оценки нацеливания гена с тремя локусами с помощью Cas-3P
Для исследования эффективности При нацеливании на гены с тремя локусами гены HO , Gal80 и Gal1 – 7 гена BY-LZH-003 были заменены генами crtE , crtYB и crtI соответственно (рис. 4а, б).Результаты показали, что 8,2% (9/110) оранжевых трансформантов (названных BY-LZH-008) были получены путем трансформации трех направляющих РНК gRNA_HO, gRNA_gal17 и gRNA_gal80, линеаризованной плазмиды P1 и соответствующих донорских ДНК. Никакие оранжевые трансформанты не были получены посредством трансформации без gRNA_HO, gRNA_gal17 и gRNA_gal80 (фиг. 5b). ПЦР-анализ колоний показал, что gRNA_HO, gRNA_gal17, gRNA_gal80 и линеаризованная плазмида P1 были успешно собраны в кольцевую плазмиду (рис.S5C). Результаты ВЭЖХ показали, что β-каротин продуцировался в штамме BY-LZH-008 (данные не показаны). Последовательные результаты были получены при использовании P2 (10/160) или P3 (1/24). Таким образом, с использованием Cas-3P с эффективностью 8,2% были сконструированы три доставки гРНК и нацеливание на гены с тремя локусами.
Cas-3P, используемый в конструировании и оптимизации фабрики пачулоловых клеток путем нацеливания на мультиплексный ген
Было продемонстрировано, что Cas-3P допускает как последовательное, так и мультиплексное редактирование генов с помощью одной трансформации в S.cerevisiae . Совершенно необходимо построить клеточную фабрику в S. cerevisiae , которая включает в себя множество генов, которые необходимо сконструировать. Чтобы исследовать применимость Cas-3P в строительстве клеточных фабрик, он был применен при построении и оптимизации пути синтеза пачулола в S. cerevisiae путем комбинирования введения гетерогенного гена и оптимизации естественного метаболического пути дрожжевых клеток. (Рис. 6а, б). Чтобы освободить стадию ограничения скорости в пути MVA и увеличить метаболический поток в FPP, tHMG1 и IDI1 были интегрированы в сайт Gal80 с эффективностью 70% в первом раунде генных манипуляций, генерируя штамм BY-LZH-009 (рис.S6A). Впоследствии гены LPP1 и DPP1 дрожжевых клеток были совместно удалены с эффективностью 30%, чтобы блокировать побочный синтез фарнезола во втором раунде генных манипуляций, создавая штамм BY-LZH-010 ( Рис. S6B). Для дальнейшего увеличения метаболического потока к FPP и снижения метаболического потока от FPP к сквалену UPC2 – 1 (полудоминантный мутантный аллель, который увеличивает активность контрольного белка 2 захвата стерола, UPC2) был интегрирован в Gal1 – 7 сайт и нативный промотор гена ERG9 был заменен более слабым промотором P _HXT1, с эффективностью 20% в третьем раунде манипуляции с генами, с образованием штамма BY- ЛЖ-011 (рис.S6C). Потребовалось 10 дней, чтобы получить штамм BY-LZH-011 с помощью трех раундов генетических манипуляций с помощью Cas-3P. Плазмида пРНК с маркером селекции URA3 в штамме BY-LZH-009 была элиминирована с помощью 5-FOA, образуя штамм BY-LZH-012. Наконец, ген PTS был введен в форме плазмиды в штаммы BY-LZH-001, BY-LZH-012, BY-LZH-010 и BY-LZH011 для получения штамма BY-LZH013 (в качестве контроля), BY -LZH014, BY-LZH015 и BY-LZH016 соответственно. Анализ ГХ-МС показал, что выход пачулола увеличился от следового уровня в BY-LZH013 до 20 мг / л в штамме BY-LZH016 (рис.6в). Таким образом, фабрика клеток пачулола была успешно сконструирована с использованием Cas-3P посредством последовательного мультиплексированного редактирования генов.
Фиг. 6
Конструирование и оптимизация пути синтеза пачулола в S. cerevisiae с использованием Cas-3P. – Биосинтетический путь производства пачулола в S. cerevisiae. Одиночные черные стрелки обозначают одноэтапные преобразования. Черные двойные стрелки обозначают несколько шагов. Зеленые стрелки представляют собой сверхэкспрессированные гены.Синяя стрелка представляет ген с пониженной регуляцией. Красная стрелка представляет заблокированный ген. b Схематическое изображение создания пачулола в дрожжевых клетках путем вставки tHMG1 – IDI1 – Gal80 локусов и UPC2 – 1 – Gal1 – 7 knock-loci из LPP1 и DPP1 , а также замена P _ERG9 на P _HXT1.Горизонтальные стрелки представляют разработанные праймеры для генотипирования. c (слева) Титр пачулола, продуцируемый в разное время в штаммах BY-LZH-013, BY-LZH-014, BY-LZH-015 и BY-LZH-016, соответственно. (справа) Кривые роста штаммов BY-LZH-013, BY-LZH-014, BY-LZH-015 и BY-LZH-016. HMG-CoA 3-гидрокси-3-метилглутарил-коэнзим A, IPP изопентенилпирофосфат, DMAPP диметилаллилпирофосфат, IDI1 изопентенилпирофосфат-изомераза 93- 5H-93- 5H-дифосфат-трифосфат, 93- 5H-дипфосфат-изомераза 93- 5H-93-F30630 93- 5H-дифосфат-изомераза 93- 5H3 3-метилглутарил-коэнзим-А-редуктаза, ERG9 ген скваленсинтазы, LPP1 и DPP1 оба кодируют липидфосфатфосфатазы, PTS , пачулолсинтаза
Рис.6
Создание и оптимизация пути синтеза пачулола в S. cerevisiae с использованием Cas-3P. – Биосинтетический путь производства пачулола в S. cerevisiae. Одиночные черные стрелки обозначают одноэтапные преобразования. Черные двойные стрелки обозначают несколько шагов. Зеленые стрелки представляют собой сверхэкспрессированные гены. Синяя стрелка представляет ген с пониженной регуляцией. Красная стрелка представляет заблокированный ген. b Схематическое изображение создания пачулола в дрожжевых клетках путем вставки tHMG1 – IDI1 – Gal80 локусов и UPC2 – 1 – Gal1 – 7 knock-loci из LPP1 и DPP1 , а также замена P _ERG9 на P _HXT1.Горизонтальные стрелки представляют разработанные праймеры для генотипирования. c (слева) Титр пачулола, продуцируемый в разное время в штаммах BY-LZH-013, BY-LZH-014, BY-LZH-015 и BY-LZH-016, соответственно. (справа) Кривые роста штаммов BY-LZH-013, BY-LZH-014, BY-LZH-015 и BY-LZH-016. HMG-CoA 3-гидрокси-3-метилглутарил-коэнзим A, IPP изопентенилпирофосфат, DMAPP диметилаллилпирофосфат, IDI1 изопентенилпирофосфат-изомераза 93- 5H-93- 5H-дифосфат-трифосфат, 93- 5H-дипфосфат-изомераза 93- 5H-93-F30630 93- 5H-дифосфат-изомераза 93- 5H3 3-метилглутарил-коэнзим-А-редуктаза, ERG9 ген скваленсинтазы, LPP1 и DPP1 оба кодируют липидфосфатфосфатазы, PTS , пачулолсинтаза
Обсуждение
По сравнению с другими системами CRISPR / Cas9, применяемыми в S.cerevisiae , метод Cas-3P одновременно упростил процедуру построения обычных штаммов и позволил немедленное и последовательное мультиплексное редактирование генов без процесса индукции (Таблица 2). Наиболее важной характеристикой Cas-3P является конструкция и программа работы трех плазмидных остовов для экспрессии гРНК. Эта характеристика имеет два преимущества. Первый – это простота и многогранность Cas-3P. Все, что нам нужно в каждом раунде, – это подготовка кассет гРНК и донорской ДНК с помощью ПЦР без дополнительного построения плазмиды гРНК.Мощный HR в S. cerevisiae представляет собой надежную гарантию восстановления мультиплексной плазмиды гРНК. А второй придает Cas-3P непосредственность и преемственность. Повторное использование трех плазмидных остовов гРНК позволяет обойти процедуру лечения плазмиды гРНК индуктором перед следующим раундом генетических манипуляций.
Сравнение Cas-3P с различными методами редактирования генома на основе Cas9 у S. cerevisiae
Методы . CasEMBLR . CasHRA . Устранение зазоров . Кас-3П .
Хромосомная интеграция (количество / трансформация) 1–3 1 1–3 1–3
Эффективность 30,6% (3 x ) 58% ( 2 x ) 97% (1 x ) 87% (1 x ) 4.2% (3 x ) 8,2% (3 x ) 36,8% (2 x ) 75% (1 x )
Последовательное редактирование генома – + – +
Конструирование плазмиды gRNA + + – –
Индукция отверждения плазмиды gRNA + –
Ссылки [ 16] [41] [13] Это исследование
Методы . CasEMBLR . CasHRA . Устранение зазоров . Кас-3П .
Хромосомная интеграция (количество / трансформация) 1–3 1 1–3 1–3
Эффективность 30,6% (3 x ) 58% ( 2 x ) 97% (1 x ) 87% (1 x ) 4.2% (3 x ) 8,2% (3 x ) 36,8% (2 x ) 75% (1 x )
Последовательное редактирование генома – + – +
Конструирование плазмиды gRNA + + – –
Индукция отверждения плазмиды gRNA + –
Ссылки [ 16] [41] [13] Это исследование
Сравнение Cas-3P с различными методами редактирования генома на основе Cas9 в S.cerevisiae
Методы . CasEMBLR . CasHRA . Устранение зазоров . Кас-3П .
Хромосомная интеграция (количество / трансформация) 1–3 1 1–3 1–3
Эффективность 30,6% (3 x ) 58% ( 2 x ) 97% (1 x ) 87% (1 x ) 4.2% (3 x ) 8,2% (3 x ) 36,8% (2 x ) 75% (1 x )
Последовательное редактирование генома – + – +
Конструирование плазмиды gRNA + + – –
Индукция отверждения плазмиды gRNA + –
Ссылки [ 16] [41] [13] Это исследование
Методы . CasEMBLR . CasHRA . Устранение зазоров . Кас-3П .
Хромосомная интеграция (количество / трансформация) 1–3 1 1–3 1–3
Эффективность 30,6% (3 x ) 58% ( 2 x ) 97% (1 x ) 87% (1 x ) 4.2% (3 x ) 8,2% (3 x ) 36,8% (2 x ) 75% (1 x )
Последовательное редактирование генома – + – +
Конструирование плазмиды gRNA + + – –
Индукция отверждения плазмиды gRNA + –
Ссылки [ 16] [41] [13] Это исследование
При использовании системы CRISPR / Cas9 для нацеливания генов в дрожжах следует учитывать доставку Cas9, гРНК и донорской ДНК.Как правило, Cas9 конститутивно экспрессируется в дрожжах, а донорская ДНК котрансформируется с гРНК. Особое беспокойство вызывает то, что доставка гРНК в форме фрагмента или плазмиды является критическим параметром для мультиплексного редактирования генов [13]. В методе Cas-3P доставка пРНК была успешно сконструирована для одно-, двух- и тройного локусного нацеливания с использованием фрагмента плазмиды без конструкции плазмиды. Эффективность Cas-3P для постоянного нацеливания на один локус гена с использованием вставки гена α-галактозидазы для сине-белой селекции составила 75%.Впечатляющий результат, представленный в непрерывном нацеливании гена с одним локусом на tHMG1 , crtE , crtYB и crtI для синтеза β-каротина, заключался в том, что эффективность лечения плазмид gRNA с различными маркерами отбора была различной, которая варьировалась в диапазоне от 40% до 90% (рис. 3г). Было высказано предположение, что основной причиной были разные выбранные гРНК. В этом исследовании в каждом остове плазмиды (P1, P2 или P3) были сконструированы три сайта разрезания (рис. 1). Однако только один сайт разрезания в репликоне 2μ плазмиды gRNA был сконструирован с помощью метода CasHRA [41].Таким образом, вопрос о том, достаточно ли одного или двух сайтов разрезания для удаления соответствующей плазмиды гРНК, заслуживает дальнейшего исследования. Поскольку эффективность 40% мало влияет на систематичность метода Cas-3P, гРНК в этом методе не изменялась. Кроме того, ВЭЖХ-анализ β-каротина использовался только для оценки осуществимости Cas-3P, поэтому количественный анализ β-каротина в работе не проводился. Доставка двух гРНК и нацеливание на гены с двойным локусом были сконструированы с использованием Cas-3P с эффективностью 36.8%, в то время как доставка трех гРНК и нацеливание на гены трех локусов были сконструированы с использованием Cas-3P с эффективностью 8,2%. Хотя эффективность была немного ниже, чем у CasEMBLR (3 _X, 2 _X, 1 X ) и CasHRA (1 _X), считалось, что Cas-3P может иметь высокое значение. практического применения в инженерии клеточных фабрик благодаря удобному и последовательному нацеливанию на гены S. cerevisiae (Таблица 2).
Сообщалось об усилении продукции пачулола в условиях встряхиваемой колбы путем экспрессии слитого белка фарнезилдифосфатсинтазы (FPPS) дрожжей и PTS в S.cerevisiae [1]. При этом поток к пути MVA был усилен, а пути конкуренции FPP были нарушены в шасси S. cerevisiae с использованием метода Cas-3P, который длился всего 10 дней. После оптимизации метаболических потоков титр пачулола был увеличен до 20 мг / л в условиях встряхиваемой колбы. Оно могло бы быть выше, если бы FPPS и PTS ко-экспрессировались в S. cerevisiae , что заслуживает дальнейшего исследования.
В последние годы была открыта Cpf1, одиночная РНК-управляемая эндонуклеаза систем CRISPR / Cas класса 2, которая привлекла большое внимание благодаря своим характеристикам, которые отличаются от Cas9 [39].Он использует Т-богатый соседний с протоспейсером мотив и расщепляет ДНК через ступенчатый DSB. Примечательно, что Cpf1 обладает способностью обрабатывать свою собственную РНК CRISPR, которую можно использовать для проведения мультиплексного редактирования генома [40]. На основе метода Cas-3P также может быть разработана система Cpf-3P, которая, как ожидается, будет иметь преимущества в мультиплексном редактировании генома, что также заслуживает дальнейшего исследования.
Таким образом, в Cas-3P эффективное и удобное устранение вектора экспрессии gRNA позволило напрямую использовать дрожжевые клетки, содержащие правильную сборку, в следующем раунде сборки ДНК в порядке P1 – P2 – P3, который удобен для немедленного, мультиплексного и последовательного нацеливания на гены без дополнительных операций по конструированию плазмид и отверждению плазмид gRNA.Разработка метода Cas-3P обогатила современные инструменты генетической манипуляции и имеет большое значение для практического применения в инженерии фабрики клеток S. cerevisiae .
Благодарности
Работа выполнена при финансовой поддержке Национального фонда естественных наук Китая (№ 31500043), Шанхайского фонда естественных наук (№ 19ZR1473000), Фондов фундаментальных исследований для центральных университетов (№ 22221818014) и Открытого финансирования. Проект Государственной опорной лаборатории биореакторной техники.
Соблюдение этических норм
Конфликт интересов
Авторы заявляют, что у них нет конкурирующих интересов.
Список литературы
1.
Albertsen
L
,
Chen
Y
,
Bach
LS
,
Rattleff
S
,
Maury
J
,
Brix
99 N
99, J
,
Mortensen
UH
Направление потока на производство сесквитерпена в Saccharomyces cerevisiae путем слияния ферментов хозяина и гетерологичных ферментов
Appl Environ Microbiol
2011
77992
77992
Альтенбухнер
J
Редактирование генома Bacillus subtilis с помощью системы CRISPR-Cas9
Appl Environ Microbiol
2016
82
5421992 9992 9992 5421992 ,
Каррин
A
,
Джервис
AJ
,
Rattray
NJW
,
Swainston
N
,
Yan
C
,
R
Биоинформатика для синтетической биологии натуральных продуктов: интеграция в рамках цикла «Дизайн – Сборка – Тест»
Nat Prod Rep
2016
33
925
4.
Casini
A
,
Christodoulou
G
,
Freemont
PS
,
Baldwin
GS
,
Ellis
T
,
R2NA
дизайн 92 биологически нейтральные синтетические последовательности ДНК
Acs Synth Biol
2014
3
929
528
5.
Chee
MK
,
Haase
SB
генетический челнок манипуляции с Saccharomyces cerevisiae
G3-GENES GENOM GENET
2012
2
929
929
6.
Чанг
ME
,
Yeh
IH
,
Sung
LY
,
Wu
г.
Повышенная интеграция большой ДНК в хромосому E. coli с помощью CRISPR / Cas9
Biotechnol Bioeng
2017
114
172
183
7.
Dai
Z
,
B
,
,
Liu
Y
,
Shi
M
,
Wang
D
,
Zhang
X
,
Liu
T
,
Huang
L
X
L
L
Производство агликонов гинсенозидов в пекарских дрожжах
Sci Rep
2014
4
3698
388.
Дизайнерские штаммы с делециями, полученные из Saccharomyces cerevisiae. S288C. Полезный набор штаммов и плазмид для опосредованного ПЦР разрушения генов и других применений. (2010) Дрожжи 14: 115–132
9.
DiCarlo
JE
,
Norville
JE
,
Мали
P
,
Rios
X
,
Aach
Church
GM
Геномная инженерия в Saccharomyces cerevisiae с использованием систем CRISPR-Cas
Nucleic Acids Res
2013
41
4336
4343
362760710.
Ro
DK
,
Paradise
EM
,
Ouellet
M
,
Fisher
KJ
,
Newman
KL
,
Ndungu
Eachus
RA
,
Ham
TS
,
Kirby
J
,
Chang
MC
Производство предшественника противомалярийного лекарственного препарата артемизиновая кислота 2006 г. в модифицированных дрожжах
992992
992
940
11.
Энгельс
B
,
Dahm
P
,
Jennewein
S
Метаболическая инженерия биосинтеза таксадиена в дрожжах как первый шаг на пути к производству 10 таксола (паклитаксела)
201
206
12.
Gueldener
U
,
Heinisch
J
,
Koehler
GJ
,
Voss
D
A
Кассеты маркеров loxP для Cre-опосредованного нокаута множественных генов у почкующихся дрожжей
Nucleic Acids Res
2002
30
23
13.
Хорвиц
A
,
Уолтер
J
,
Шуберт
M
,
Кунг
S
,
Хокинс
K
,
Платт
D
Mahatdejkul-Meadows
T
,
Szeto
W
,
Chandran
S
Эффективная мультиплексная интеграция синергетических аллелей и метаболических путей в дрожжах с помощью CRISPR-Cas
2015
9 9992
96
14.
Hu
H
,
Wang
T
,
Chen
J
,
Yu
F
,
Liu
H
,
Zuo
99 Z
99,
Z
Вентилятор
H
Скрининг и идентификация белков, взаимодействующих с IL-24, с помощью дрожжевого двухгибридного скрининга, анализа Co-IP и FRET
Противораковые препараты
2016
27
318
327
15.
Hwang
WY
,
Fu
YF
,
Reyon
D
,
Maeder
ML
,
Tsai
SQ
,
Sander
Yeh
JRJ
,
Joung
JK
Эффективное редактирование генома рыбок данио с помощью системы CRISPR-Cas
Nat Biotechnol
2013
31
22793 36
Jakociunas
T
,
Rajkumar
AS
,
Zhang
J
,
Arsovska
D
,
Rodriguez
A
Jetre
CB
CB
CB
Nielsen
AT
,
Borodina
I
,
Jensen
MK
,
Keasling
JD
CasEMBLR: Cas9-фасилитированный 93
CasEMBLR: Cas9-фасилитированный 93
CasEMBLR. Acs Synth Biol
2015
4
1226
1234
17.
Kawai
S
,
Hashimoto
W
,
Murata
K
Трансформация Saccharomyces cerevisiae и других грибов: методы и возможный основной механизм 92eng3ug29
9
9
9
9
9
9
9
9
9
9
9
9
9
9
9
9
9
99 395
403
305608918.
Kondo
T
,
Tezuka
H
,
Ishii
J
,
Matsuda
F
Kond
O
Генная инженерия для усиления пути Эрлиха и изменения потока углерода для увеличения производства изобутанола из глюкозы Saccharomyces cerevisiae
J Biotechnol
2012
159
32
37
19.
Мали
P
,
Ян
L
,
Esvelt
KM
,
Aach
J
,
Guell
M
,
DiCarlo 9299E
Norville 9299E
Church
GM
РНК-управляемая инженерия генома человека с помощью Cas9
Наука
2013
339
823
826
2328772220.
Marienhagen
J Метаболическая инженерия микроорганизмов для синтеза растительных натуральных продуктов
J Biotechnol
2013
163
166
178
21.
Meadows
AL
,
Hawkins
KM
,
Tsegaye
Y
,
Antipov
E
,
Kim
Y
,
RETZ
Raetz
Тай
A
,
Mahatdejkul-Meadows
T
,
Xu
L
,
Zhao
L
,
Dasika
MS
,
Dasika
MS
,
Murarka
Murarka
,
Eng
D
,
Ленг
JS
,
Liu
CL
,
Wenger
JW
,
Jiang
H
,
Chao
L
L
Lai
J
,
Ganesan
S
,
Jackson
P
,
Mans
R
,
Platt
D
,
R eeves
CD
,
Saija
PR
,
Wichmann
G
,
Holmes
VF
,
Benjamin
K
,
Hill
PW
PW
AE
Переписывание метаболизма центрального углерода дрожжей для промышленного производства изопреноидов
Nature
2016
537
694
697
22.
Nielsen
J
,
Keasling
JD
Engineering Cellular Metabolism
Cell
2016
164
1185
1197
JD
JD
JD
JD
Полусинтетический артемизинин: модель использования синтетической биологии в фармацевтических разработках
Nat Rev Microbiol
2014
12
929
367
24.
Sander
JD
,
Joung
JK
Системы CRISPR-Cas для редактирования, регулирования и таргетинга геномов
Nat Biotechnol
2014
32
347
32
347992
C
,
Shabbir-Hussain
M
,
Frogue
K
,
Blenner
M
,
Wheeldon
I
Стандартизированная безмаркерная интеграция генов для разработки путей развития
Liprow
Synth Biol
2017
6
929
929
26.
Siddiqui
MS
,
Choksi
A
,
Smolke
CD
Система для мультилокусной хромосомной интеграции и спасения селекционных маркеров без трансформации
FEMS
1171
1185
27.
Смански
MJ
,
Бхатия
S
,
Чжао
D
,
Парк
Y
,
G
G
G 92 ,
Ciulla
D
,
Busby
M
,
Calderon
J
,
Nicol
R
,
Gordon
DB
,
Densmore
993
Функциональная оптимизация кластеров генов путем комбинаторного дизайна и сборки
Nat Biotechnol
2014
32
1241
1249
28.
Song
X
,
Huang
H
,
Xiong
ZQ
,
Ai
LZ
,
Yang
S
Gen
CRISPR-Cas Lactobacillus casei
Appl Environ Microb
2017
83
1259
1267
29.
Storici
F
,
Durham
CL
den3,
Durham
CL
den3,
DA
Хромосомные сайт-специфичные двухцепочечные разрывы эффективно нацелены на репарацию олигонуклеотидами в дрожжах
Proc Natl Acad Sci
2003
100
14994
14999
30.
Storici
F
,
Lewis
LK
,
Resnick
MA
Сайт-направленный мутагенез in vivo с использованием олигонуклеотидов
Nat Biotechnol
Wang
S
,
Dong
S
,
Wang
P
,
Tao
Y
,
Wang
Y
-Cas9 System
Appl Environ Microbiol
2017
83
217
233
32.
Westbrook
AW
,
Moo-Young
M
,
Chou
CP
Разработка набора инструментов CRISPR-Cas9 для комплексной инженерии Bacillus subtilis
ol 2016 Enhanced
82
4876
4895
4
333.
Wienert
B
,
Wyman
SK
,
Richardson
CD
,
Yeh
ak2992
CD
MJ
,
Morlock
M
,
Vu
JT
,
Kazane
KR
,
Watry
HL
,
Judge
LM
99,
Mare
Maresc M
,
Кукуруза
JE
Беспристрастное обнаружение нецелевых CRISPR in vivo с использованием DISCOVER-S eq
Наука
2019
929
286
289
6584.
Xie
W
,
Liu
M
,
Lv
X
,
Lu
W
,
Gu
J
,
Yu
H
Регулируемая конструкция
Путь биосинтеза каротина с помощью стратегии децентрализованной сборки в Saccharomyces cerevisiae
Biotechnol Bioeng
2013
111
125
133
35.
Xie
L
W
X
,
Xu
H
,
Yu
H
Последовательный контроль биосинтетических путей для сбалансированного использования промежуточных продуктов метаболизма в Saccharomyces cerevisiae
Metab Eng
992 8992 28992 28992
2015
36.
Xu
T
,
Li
Y
,
Shi
Z
,
Hemme
CL
,
Li
Y
,
Zhu
Y
,
Zhu
92strand
Y
,
He
Z
,
Zhou
J
Эффективное редактирование генома в Clostridium cellulolyticum с помощью CRISPR-Cas9 Nickase
Appl Environ Microbiol
2015
44992 44992
44992 81
Jiang
Yu
,
Chen
Biao
,
Duan
Chunlan
,
Sun
Bingbing
,
Yang
Junjie
,
Yang
Junjie
,2 Multi299 Sheng
Multi299 Shang
coli с помощью системы CRISPR-Cas9
Appl Environ Microbiol
2015
81
2506
2514
38.
Yao
X
,
Wang
X
,
Liu
Z
,
Liu
JL
,
Zhou
HB
,
Shen
XW
,
Wei
Y
,
Huang
ZJ
ZJ
Ван
Y
,
Nie
YH
,
Zhang
CC
,
Li
SL
,
Che ng
LP
,
Wang
QF
,
Wu
Y
,
Huang
PY
,
Sun
Q
,
Shi
LY
H
H
H
H
-опосредованная конечным соединением целевая интеграция с использованием CRISPR / Cas9
Cell Res
2017
27
801
814
551888139.
Zetsche
B
,
Gootenberg
JS
,
Abudayyeh
OO
,
Slaymaker
IM
,
Макарова
KS
ESC
E
E
SE
E
KS
E
Joung
J
,
van der Oost
J
,
Regev
A
,
Koonin
EV
,
Zhang
Fided
92lease
End Cpf1 с одним классом Система CRISPR-Cas
Ячейка
2015
163
759
771
2642222740.
Zetsche
B
,
Heidenreich
M
,
Mohanraju
P
,
Fedorova
I
,
Kneppers
J
,
992 NARO
J
,
992 Degennaro
Choudhury
SR
,
Abudayyeh
OO
,
Gootenberg
JS
Мультиплексное редактирование генов с помощью CRISPR – Cpf1 с использованием одного массива crRNA
Nat Biotechnol 2017
Nat Biotechnol 2017
41.
Zhou
J
,
Wu
R
,
Xue
X
,
Qin
Z
CasHRA (с помощью Cas9, гомологичная рекомбинационная сборка 92 -992 нуклеазной кислоты с помощью Cas9) 92 -992 Метод конструирования ДНК
-мега-9992 ДНК Рес
2016
44
124
133
Примечание издателя
Springer Nature сохраняет нейтралитет в отношении юрисдикционных претензий на опубликованных картах и институциональной принадлежности.
© Общество промышленной микробиологии 2020
LZH FILTER Car Новые продукты, самые популярные в мире! Battery Tester 1 Sys and Charging Circuit
LZH FILTER Автомобиль Новые продукты самого высокого качества популярны в мире! Battery Tester 1 Sys and Charging Circuit
LZH FILTER Автомобиль Новые продукты самого высокого качества популярны в мире! Battery Tester 1 Sys and Charging Circuit /gooding501135.html,LZH,and,Tester ,Charging, Car, ФИЛЬТР, Схема, Тестер, Аккумулятор ,desarrollo.bora-services.com, Автомобильная промышленность, Инструментальное оборудование, Диагностика, Тестовые измерения T, Sys, 1, 37 долларов США. LZH FILTER Тестер автомобильных аккумуляторов и 1 тестер цепей, Charging Sys. 1 Цепной тестер, Charging Sys Автомобильные инструменты Диагностика оборудования, Тестовые измерения T LZH FILTER Автомобиль Новые продукты, самые популярные в мире! Battery Tester 1 Sys and Charging Circuit /gooding501135.html,LZH,and,Tester ,Charging, Car, ФИЛЬТР, Схема, Тестер, Аккумулятор ,desarrollo.bora-services.com, Автомобиль, Инструментальное оборудование, Диагностика, Тестовые измерения T, Sys, 1, $ 37
$ 37
LZH FILTER Тестер автомобильного аккумулятора и 1 тестер цепи, Charging Sys
Убедитесь, что это подходит введя номер вашей модели.
Тестер автомобильных аккумуляторов: Этот тестер аккумуляторов подходит для свинцово-кислотных аккумуляторов 100-1100 CCA и быстро даст точные результаты в течение трех секунд.
Простота использования: простой и легкий в использовании, может предоставить вам всю информацию о состоянии батареи.Новички также могут легко использовать этот анализатор автомобильного аккумулятора, который является обязательным автомобильным инструментом для вашего автовладельца.
Защита безопасности: не требуется встроенная батарея, а электричество поступает непосредственно от аккумуляторной батареи транспортного средства. Непрерывное тестирование не повредит аккумулятор, обеспечивая безопасную работу для пользователей всех уровней.
Большой светодиодный дисплей: большой, легко читаемый дисплей с подсветкой ускоряет проверку и не влияет на показания даже в темноте, облегчая считывание данных.Понятно расположенная клавиатура и управление через меню упрощают работу с тестером аккумулятора.

Методы .	CasEMBLR .	CasHRA .	Устранение зазоров .	Кас-3П .
Хромосомная интеграция (количество / трансформация)	1–3	1	1–3	1–3
Эффективность	30,6% (3 x ) 58% ( 2 x ) 97% (1 x )	87% (1 x )	4.2% (3 x )	8,2% (3 x ) 36,8% (2 x ) 75% (1 x )
Последовательное редактирование генома	–	+	–	+
Конструирование плазмиды gRNA	+	+	–	–
Индукция отверждения плазмиды gRNA		+		–
Ссылки	[ 16]	[41]	[13]	Это исследование