Пост сигнализации: Посты сигнализации взрывозащищенные ПСВ-З, ПСВ-К, ПСВ-С, ПСВМ-С, ПСВ-Г, ПСВМ-Г, ПСВ-П
alexxlab | 15.01.1980 | 0 | Разное
Посты сигнализации взрывозащищенные ПСВ-З, ПСВ-К, ПСВ-С, ПСВМ-С, ПСВ-Г, ПСВМ-Г, ПСВ-П
Назначение
Посты предназначены для звуковой аварийной и предупреждающей сигнализации или размещения их в стационарных установках и на подвижных транспортных средствах. Посты с маркировкой PB Ex d I Mb предназначены для эксплуатации в угольных и сланцевых шахтах, опасных по газу и пыли. Посты с маркировкой 1 Ex d IIА T6 Gb, 1 Ex d IIB T6 Gb, 1 Ex d IIC T6 Gb, Ex tb IIIC T80°C Db, 2 Ex dе IIА T4 Gс, 2 Ex dе IIС T6 Gс предназначены для эксплуатации во взрывоопасных зонах. Конструкция постов ПСВМ позволяет дублировать звуковой сигнал световой индикацией на пультах управления, расположенных дистанционно от места установки постов.
Особенности
- В постах сигнализации есть возможность получать звуковые сигналы, отличающиеся частотой и прерывистостью.
- При необходимости можно обеспечить отключение звукового сигнала через 3 минуты после срабатывания.
Конструкция
Посты состоят из взрывонепроницаемой оболочки, образованной корпусом и крышкой. В корпусе ПСВ-З, ПСВ-К установлен электромагнитный механизм ударного действия, который посредством ударника и бойка воздействует на колпак звонка или колокола. В корпусе ПСВ и ПСВМ установлен электромагнитный механизм, который посредством сердечника воздействует на мембрану. Посты сигнализации ПСВ-П имеют пьезокерамическое устройство подачи звуковых сигналов. Посты ПСВМ и ПСВ-П имеют блоки электронного преобразования, которые обеспечивают в зависимости от подачи управляющих сигналов различное звучание поста. При одновременной подаче сигналов на несколько клемм, пост работает в непрерывном режиме звуковой сигнализации Пост ПСВ-П имеет тестовую кнопку, и возможность подключения различных по типоразмеру кабельных вводов. Контактные зажимы и зажимы заземления допускают присоединение проводов сечением до 2,5мм2.
ПСВ Х1 – Х2 – Х3 Х4 Х5 Х6
ПСВ – пост сигнализации взрывозащищенный
Х1 – индекс, указывающий на модернизированное исполнение постов с сиреной и горном: М
Для не модернизированных исполнений индекс не указывается
Х2 – тип исполнения:
С – сирена
Г – горн
З – звонок
К – колокол
П – пьезодинамик
Х3 – исполнения по номинальному напряжению:
переменного тока:
1 – 24В
2 – 36В
3 – 110В
4 – 127В
5 – 230В
6 – 400В
постоянного тока:
7 – 24В
8 – 110В
9 – 230В
Х4 – маркировка взрывозащиты:
1 – РВ Ex d I Мb
2 – 1 Ex d IIА T6 Gb
3 – 1 Ex d IIB T6 Gb
4 – 1 Ex d IIC T6 Gb
5 – 2 Ex dе IIА T4 Gс
6 – 2 Ex dе IIС T6 Gс
Х5 – режим работы
для постов ПСВ-С, ПСВ-Г, ПСВ-З и ПСВ-К не указывается.
для постов ПСВМ:
отсутствие индекса – повторно-кратковременный режим
4 – комплексный режим
для постов ПСВ-П:
1 – режим №1
2 – режим №2 (отключение звука через 3 мин.)
3 – режим №3 (12 сигналов по выбору потребителя)
Х6 – климатическое исполнение и категория размещения: У1, У3, В1, В5, УХЛ5, ХЛ1, ОМ1, Т1, Т5Пример формулировки заказа:
ПСВ-П-541 У1
что соответствует обозначению поста сигнализации звукового взрывозащищенного ПСВ-П с режимом работы 1 на номинальное напряжение переменного тока 230В с маркировкой взрывозащиты 1 Ex d IIC T6 Gb, Ex tb IIIС T80°C Db
ПСВ-З и ПСВ-К
Маркировка взрывозащиты 1 Ex d IIА T6 Gb, 1 Ex d IIB T6 Gb, 1 Ex d IIC T6 Gb, Ex tb IIIC T80°C Db, 2 Ex dе IIА T4 Gс, 2 Ex dе IIС T6 Gс, PB Ex d I Mb
Номинальное напряжение, В:
переменного тока (50 или 60 Гц) 24, 36, 110, 127, 230, 400
постоянного тока 24, 110, 230
Потребляемая мощность, ВА: 35±5
Уровень звукового давления сигнала, измеренный по акустической оси на расстоянии 1м (при 0,85-1,1 Uh), дБ:
для ПСВ-З 90±2
для ПСВ-К 94±2
Номинальный ток контактных соединений, А: до 6,0
Масса поста, кг:
для ПСВ-З 3,0
для ПСВ-К 3,4
ПСВ-С, ПСВМ-С, ПСВ-Г, ПСВМ-ГМаркировка взрывозащиты 1 Ex d IIА T6 Gb, 1 Ex d IIB T6 Gb, 1 Ex d IIC T6 Gb, Ex tb IIIC T80°C Db, 2 Ex dе IIА T4 Gс, 2 Ex dе IIС T6 Gс, PB Ex d I Mb
Номинальное напряжение, В:
переменного тока (50 или 60 Гц) 24, 36, 110, 127, 230, 400
постоянного тока 24, 110, 230
Потребляемая мощность, ВА: 35±5
Уровень звукового давления сигнала, измеренный по акустической оси на расстоянии 1м (при 0,85-1,1 Uh), дБ:
для исполнения «С» 102±2
для исполнения «Г» 106±2
Номинальный ток контактных соединений, А:
для ПСВ до 6,0
для ПСВМ до 3,0
Масса поста, кг:
переменного тока 2,1
постоянного тока 2,2
ПСВ-ПМаркировка взрывозащиты 1 Ex d IIА T6 Gb, 1 Ex d IIB T6 Gb, 1 Ex d IIC T6 Gb, Ex tb IIIC T80°C Db, 2 Ex dе IIА T4 Gс, 2 Ex dе IIС T6 Gс, PB Ex d I Mb
Номинальное напряжение, В:
переменного тока (50 или 60 Гц) 24, 36, 110, 127, 230, 400
постоянного тока 12, 24, 110, 230
Потребляемая мощность, ВА:
2 (в режиме №1 и №2)
2,5 (в режиме№3)
Уровень звукового давления сигнала, измеренный по акустической оси на расстоянии 1м (при 0,85-1,1 Uh), дБ: 107-117
Номинальный ток контактных соединений, А: до 6,0
Масса поста, кг: 5,5
Температура окружающей среды:
для исполнения У1, У3 – от -45°С до +40°С
для исполнения В1 – от – 60°С до + 50°С
для исполнения ОМ1, В5 – от – 40°С до + 45°С
для исполнения Т1 – от – 10°С до + 50°С
для исполнения ХЛ1 – от – 60°С до + 45°С
для исполнения УХЛ5 – от – 10°С до + 35°С
для исполнения Т5 – от – 1°С до + 35°С
Степень защиты от внешних воздействий: IP66
Номер технических условий: ТУ 4252-001-00213569-2005
Посты сигнализации общепромышленные из стали ПСО-С, ПСО-Г, ПСО-З, ПСО-К, ПСО-П
ОписаниеНазначение
Посты сигнализации типа ПСО(С, Г , З, К, П) предназначены для звуковой аварийной и предупреждающей сигнализации при размещении их в стационарных установках и на подвижных транспортных средствах, где по условиям эксплуатации наличие взрывоопасных смесей исключено. Посты ПСО-П-РН предназначены для эксплуатации в подземных выработках рудников и шахт, не опасных в отношении взрыва газа, пара или пыли и имеют маркировку РН1 рудничного нормального оборудования.
Особенности
- В постах сигнализации есть возможность получать звуковые сигналы, отличающиеся частотой и прерывистостью.
- ПСО-П имеет тестовую кнопку.
Конструкция
Посты ПСО-С и ПСО-Г состоят из корпуса и крышки. На крышке установлен электромагнитный механизм ударного действия, который посредством ударника и бойка воздействует на мембрану.
Посты ПСО-З и ПСО-К состоят из корпуса и крышки. В корпусе установлен электромагнитный механизм ударного действия, который посредством кронштейна ударника и бойка воздействует на колпак звонка или колокола. Посты имеют ввод для проведения гибкого или бронированного кабеля диаметром до 12мм. Контактные зажимы и зажимы заземления допускают присоединение двух проводов сечением до 2,5 мм2 каждый и рассчитаны на ток до 6А.
Пост сигнализации ПСО-П состоит из корпуса и крышки, которые скреплены между собой винтами. На крышке поста находится резонатор, который служит для подачи звуковых сигналов. На корпусе поста крепятся 4 ввода для подключения двух кабелей диаметром от 7 до 14 мм и двух кабелей диаметром от 11 до 18 мм. Внутри корпуса находится блок электронных преобразований, который служит для подачи звуковых сигналов в заданном режиме. Для подключения внешних кабелей от датчиков служат зажимы. Для удобства монтажа на крышке и корпусе находятся монтажные скобы в виде навесов.
Условные обозначенияПСО-Х1-Х2Х3Х4:
ПСО – пост сигнализации общего назначения;
Х1– тип исполнения: С – сирена; Г – горн; З – звонок; К – колокол;
Х2 – исполнения по номинальному напряжению:
1 – 24В; 2 – 36В; 3 – 110В; 4 – 127В; 5 – 230В; 6 -400В;
Постоянного тока:
7 – 24В; 8 – 110В; 9 – 230В; 10 – 12В.
Х3 – исполнение по режиму работы:
1 – непрерывный;
2 – повторно-кратковременный;
Х4 – климатическое исполнение и категория размещения по ГОСТ 15150-69: У1, ОМ1
Пример формулировки заказа:
ПСО-С-51 У1
что соответствует обозначению поста общепромышленного звукового в исполнении сирена на 230 В переменного тока, с непрерывным режимом работы, климатическим исполнением и категорией размещения У1.ПСО-П-Х1-Х2Х3Х4
ПСО-П – пост сигнализации общего назначения с применением пьезокерамического динамика;
Х1 – тип исполнения
– отсутствие индекса – общепромышленное исполнение;
– РН – рудничное нормальное исполнение с уровнем изоляции 1.
Х2 – Исполнение по номинальному напряжению:
Переменного тока:
1 – 24В; 2 – 36В; 3 – 127В; 4 -230В;
Х3 – исполнение по режиму работы:
1 – модулированный 1
2 – модулированный 2
Х4 – климатическое исполнение и категория размещения по ГОСТ 15150-69: У1, ОМ1
Пример формулировки заказа:
ПСО-П-41 У1
что соответствует обозначению поста общепромышленного звукового с пьезокерамическим динамиком на 230 В переменного тока, с режимом работы модулированный 1, климатическим исполнением и категорией размещения У1. Технические характеристикиСтепень защиты от внешних воздействий:
ПСО-С, ПСО-Г, ПСО-З, ПСО-К- IP54
ПСО-П, ПСО-П-РН- IP66
Температура окружающей среды: от – 50°С до + 50°С
Номинальное напряжение переменного тока частотой сети 50 или 60 Гц, В:
ПСО-С, ПСО-Г, ПСО-З, ПСО-К- 24, 36, 110, 127, 230, 400
ПСО-П, ПСО-П-РН- 24, 36, 127, 230
Номинальное напряжение постоянного тока, В:
ПСО-С, ПСО-Г, ПСО-З, ПСО-К- 12, 24, 110, 230
ПСО-П, ПСО-П-РН- по заявке заказчика
Уровень звукового давления, дБ: ПСО-С -102±2; ПСО-Г – 106±2; ПСО-З – 90±2; ПСО-К – 94±2; ПСО-П, ПСО-П-РН – 115±2
Потребляемая мощность, Вт:
ПСО-С, ПСО-Г, ПСО-З, ПСО-К- 35
ПСО-П, ПСО-П-РН- 5
Масса, кг:
ПСО-С, ПСО-Г, ПСО-З, ПСО-К- 1,9
ПСО-П, ПСО-П-РН- 2,6
Номер технических условий: ТУ 4252-001-00213569-2005
ДокументацияВзрывозащищенные посты сигнализации
Взрывозащищенные посты сигнализации серии СМ ПСЗ предназначены для предупреждения персонала световыми и звуковым сигналами, после срабатывания аварийной системы оповещения при превышении допустимого порога концентрации горючего вещества в воздухе.
Система СМ ПСЗ представляет собой набор закрепленных на раме взрывозащищенных звуковых, световых оповещателей, информационных табло и постов управления. Все взрывозащищенные компоненты системы крепятся на металлической раме красного цвета, проведен электромонтаж в соответствии с выбранной схемой (типовые схемы указаны ниже).
Соединительный кабель защищен гибким металлорукавом в ПВХ-оболочке. При необходимости защиты от внешних воздействий устанавливается защитный козырек. Для стабильной работы системы на объекте необходимо установить раму и подключить питание к заранее предусмотренным кабельным вводам. Размеры и конструкцию рамы можно изменять в зависимости от конфигурации, количества установленного на нее оборудования и требований заказчика.
Изделия разрабатываются индивидуально в соответствии с техническим заданием,согласованной схемой. Также существует набор типовых исполнений, которые представлены в данном в разделе.
Типовые взрывозащищенные посты СМ ПСЗ
Типовые взрывозащищенные посты сигнализации загазованности СМ ПСЗ представляют собой набор закрепленных на раме взрывозащищенных звуковых, световых оповещателей, информационных табло и постов управления. Взрывозащищенный кнопочный пост управления имеет две кнопки без фиксации, одна из которых при нажатии подает питание на все установленные на раме световые и звуковые оповещатели (опробование работоспособности всех оповещателей). Вторая кнопка при аварийной ситуации и уже работающей предупредительной или аварийной сигнализации отключает звуковой оповещатель, оставляя работающими световые сигнализаторы (съем звукового сигнала). Максимальный уровень звукового давления 125дБ при потребляемом токе 59/329мА в зависимости от напряжения питания. Использование сигнализаторов с таким высоким уровнем выходного сигнала (дБ) особенно оправдано на больших и/или шумных площадях, так как создают эффективную сигнализацию с охватом большой территории и как следствие оперативную реакцию персонала на аварийную ситуацию. Так, эффективная дальность сирены со звуковым давлением 125дБ составляет приблизительно 300 метров (при шумовом фоне 65дБ) , что в 10 раз дальше сирены со звуковым давлением 105дБ и соответственно в 100 раз шире область охвата. Кроме того, звуковые сигнализаторы на 125дБ в отличие от сигнализаторов на 110дБ имеют 2 стадии тревоги и 28 встроенных звуковых сигналов, благодаря чему можно организовать в одном изделии СМ ПСЗ предупредительную (при достижении загазованности 20%НПКР прерывистый звуковой сигнал) и аварийную (при достижении загазованности 50% НПКР непрерывный звуковой сигнал) сигнализацию. Для работы системы на объекте необходимо установить раму, подключить питающие кабели, для чего в посте управления предусмотренны 2 кабельных ввода, и синхронизировать с работой контроллера
Общая схема взрывозащищенных постов сигнализации загазованности СМ ПСЗ
* Расшифровку обозначений схем подключения звуквого взрывозащищенного сигнализатора смотрите в таблице 1.
Таблица 1 Типовые схемы для звуковых взрывозащищенных сигнализаторов при 24В
Номер схемы | Описание | Принцип | Схема | Кабельные вводы для питающего систему кабеля (в коробке-посту) |
01ПС |
1 стадия тревоги, 2-х проводное подключение |
Звуковой сигнал будет воспроизводиться при подаче питания |
1. под небронированный кабель 9,4-14,0мм и с креплением металлорукава с Ду22 – 1 шт 2. под небронированный кабель 13,5-20,0мм и с креплением металлорукава с Ду22 – 1 шт |
|
02ПС |
2 стадии тревоги, 2-х проводное подключение |
Стадийность достигается за счет смены полярности |
1. под небронированный кабель 9,4-14,0мм и с креплением металлорукава с Ду22 – 1 шт 2. под небронированный кабель 13,5-20,0мм и с креплением металлорукава с Ду22 – 1 шт |
|
03ПС |
2 стадии тревоги, 3-х проводное подключение |
Схема с общим “+” |
1. под небронированный кабель 9,4-14,0мм и с креплением металлорукава с Ду22 – 1 шт 2. под небронированный кабель 13,5-20,0мм и с креплением металлорукава с Ду22 – 1 шт |
|
04ПС | Схема с общим “-“ |
1. под небронированный кабель 9,4-14,0мм и с креплением металлорукава с Ду22 – 1 шт 2. под небронированный кабель 13,5-20,0мм и с креплением металлорукава с Ду22 – 1 шт |
||
05ПС | до 5 стадий тревоги с переключением без подачи напряжения | При подаче питания звуковой сигнал воспроизводиться не будет. Стадийность достигается за счет замыкания контактов нужной стадии |
|
1. под небронированный кабель 9,4-14,0мм и с креплением металлорукава с Ду22 – 1 шт 2. под небронированный кабель 13,5-20,0мм и с креплением металлорукава с Ду22 – 1 шт |
Таблица 2 Типовые схемы для звуковых взрывозащищенныx сигнализаторов при 220В |
||||
Номер схемы | Описание | Принцип | Схема | Кабельные вводы для питающего систему кабеля (в коробке-посту) |
01ПР |
1 стадия тревоги, 2-х проводное подключение |
Звуковой сигнал будет воспроизводиться при подаче питания |
1. под небронированный кабель 9,4-14,0мм и с креплением металлорукава с Ду22 – 1 шт 2. под небронированный кабель 13,5-20,0мм и с креплением металлорукава с Ду22 – 1 шт |
|
02ПР |
2 стадии тревоги, 3-х проводное подключение |
При подаче питания звуковой сигнал воспроизводиться не будет. Стадийность достигается за счет замыкания контактов нужной стадии |
|
1. под небронированный кабель 9,4-14,0мм и с креплением металлорукава с Ду22 – 1 шт 2. под небронированный кабель 13,5-20,0мм и с креплением металлорукава с Ду22 – 1 шт |
Габаритные размеры монтажной рамы* | |
Размеры типовой навесной рамы |
Размеры типовой рамы с опорой на землю |
|
* возможны отличные от представленных габаритные размеры монтажных рам, за консультацией обращайтесь в офис компании «Пепперс»
Используемые взрывозащищенные оповещатели:
Посты сигнализации взрывозащищенные ВЭЛАН ПСВ-З, ПСВ-К, ПСВ-С, ПСВМ-С, ПСВ-Г, ПСВМ-Г, ПСВ-П
ПСВ-З и ПСВ-К
Маркировка взрывозащиты 1 Ex d IIА T6 Gb, 1 Ex d IIB T6 Gb, 1 Ex d IIC T6 Gb, Ex tb IIIC T80°C Db, 2 Ex dе IIА T4 Gс, 2 Ex dе IIС T6 Gс, PB ExdI Mb
Номинальное напряжение, В:
- переменного тока (50 или 60 Гц) 24, 36, 110, 127, 230, 400
- постоянного тока 24, 110, 230
Потребляемая мощность, ВА: 35±5
Уровень звукового давления сигнала, измеренный по акустической оси на расстоянии 1м (при 0,85-1,1 Uh), дБ:
- для ПСВ-З 90±2
- для ПСВ-К 94±2
Номинальный ток контактных соединений, А: до 6,0
Масса поста, кг:
- для ПСВ-З 3,0
- для ПСВ-К 3,4
ПСВ-С, ПСВМ-С, ПСВ-Г, ПСВМ-Г
Маркировка взрывозащиты 1 Ex d IIА T6 Gb, 1 Ex d IIB T6 Gb, 1 Ex d IIC T6 Gb, Ex tb IIIC T80°C Db, 2 Ex dе IIА T4 Gс, 2 Ex dе IIС T6 Gс, PB ExdI Mb
Номинальное напряжение, В:
- переменного тока (50 или 60 Гц) 24, 36, 110, 127, 230, 400
- постоянного тока 24, 110, 230
- Потребляемая мощность, ВА: 35±5
Уровень звукового давления сигнала, измеренный по акустической оси на расстоянии 1м (при 0,85-1,1 Uh), дБ:
- для исполнения «С» 102±2
- для исполнения «Г» 106±2
Номинальный ток контактных соединений, А:
- для ПСВ до 6,0
- для ПСВМ до 3,0
Масса поста, кг:
- переменного тока 2,1
- постоянного тока 2,2
ПСВ-П
Маркировка взрывозащиты 1 Ex d IIА T6 Gb, 1 Ex d IIB T6 Gb, 1 Ex d IIC T6 Gb, Ex tb IIIC T80°C Db, 2 Ex dе IIА T4 Gс, 2 Ex dе IIС T6 Gс, PB ExdI Mb
PB Exdl
Номинальное напряжение, В:
- переменного тока (50 или 60 Гц) 24, 36, 110, 127, 230, 400
- постоянного тока 12, 24, 110, 230
Потребляемая мощность, ВА:
- 2 (в режиме №1 и №2)
- 2,5 (в режиме№3)
Уровень звукового давления сигнала, измеренный по акустической оси на расстоянии 1м (при 0,85-1,1 Uh), дБ: 107-117
Номинальный ток контактных соединений, А: до 6,0
Масса поста, кг: 5,5
Температура окружающей среды:
- для исполнения У1, У3 – от -45°С до +40°С
- для исполнения В1 – от – 60°С до + 50°С
- для исполнения ОМ1, В5 – от – 60°С до + 50°С
- для исполнения Т1 – от – 10°С до + 50°С
- для исполнения ХЛ1 – от – 60°С до + 45°С
- для исполнения УХЛ5 – от – 10°С до + 35°С
- для исполнения Т5 – от – 1°С до + 35°С
Степень защиты от внешних воздействий: IP66
Номер технических условий: ТУ 4252-001-00213569-2005
ПАСВ1-П Пост аварийной сигнализации с пьезокерамическими излучателями и индикаторами высокой яркости
- ВОЗМОЖНОСТЬ ПРОГРАММИРОВАНИЯ ЗВУКОВОГО И СВЕТОВОГО СИГНАЛА
- ГАРАНТИРОВАННАЯ СЛЫШИМОСТЬ И ВИДИМОСТЬ СВЕТОЗВУКОВОГО СИГНАЛА
- НАДЁЖНОСТЬ И ЛЁГКОСТЬ ПОДКЛЮЧЕНИЯ
Сертификаты соответствия
ТР ТС |
РАЗРЕШЕНИЕ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН |
СЕРТИФИКАТ СООТВЕТСТВИЯ ПОЖАРНОЙ БЕЗОПАСНОСТИ |
Назначение
Посты ПАСВ1-П предназначены для звуковой и световой аварийной и предупреждающей сигнализации при размещении их в стационарных установках и на подвижных транспортных средствах с маркировкой взрывозащиты 1ExsIICT6 и предназначены для эксплуатации во взрывоопасных зонах, наружных и внутренних установок согласно главе 7.3 «Правил устройства электроустановок», ГОСТ Р 51330.9 и другим нормативно-техническим документам, определяющим применяемость электрооборудования во взрывоопасных зонах.
Особенности
- В постe сигнализации есть возможность получать светозвуковые сигналы различной частоты и прерывистости.
- При необходимости можно обеспечить отключение звукового сигнала через 3 минуты после срабатывания.
Конструкция
На крышке коробки установлены пьезодинамик и светодиод с несколькими кристаллами разного цвета свечения. С внутренней стороны крышки пьезодинамик и светодиод залиты компаундом. Внутри корпуса так же находятся блок электронного преобразования и подсоединительные зажимы. В корпус установлен кабельный ввод и болты заземления.
Все характеристики в →PDF
Технические характеристики
Маркировка взрывозащиты | 1ExsllCT6 |
Степень защиты от внешних воздействий | IP67 |
Климатическое исполнение | В1,ОМ1 |
Температура окружающей среды | от -60°С до +50°С |
Номинальное напряжение: – переменного тока частотой сети 50 или 60 Гц | 24,36,127,220 В |
Потребляемая мощность не более | 2 Вт |
Уровень звукового давления сигнала по | 90-98 дБ |
Частотная характеристика сигналов: – первого режима – модулированный -1 – второго режима – модулированный – 2 | 1500-4500 Гц 2500-3500 Гц |
Яркость по оси не менее | 1500мкд |
Максимальный рабочий ток не более | 0,2 А |
Масса поста типа ПАСВ1-П-1Х1Х | 0,94 кг |
Условный ток короткого замыкания | 30 А |
Рабочее время работы постов ПАСВ1-П | не более 8 часов |
Номер технических условий | ТУ 4252-001-00213569-2005 |
Структура условного обозначения
ПАСВ1 – П-XI Х2-1X31X4X5
ПАСВ1-П – пост аварийной сигнализации взрывозащищенный
световой и звуковой с применением пьезокерамического динамика.
X1 – номинальное напряжение:
переменного тока -1 – 24В, 2 – 36В, 3 – 127В, 4 – 220В;
постоянного тока – 5 — 6В, 6 — 12В, 7 — 24В.
Х2 – режимы работы: 3 – совмещенный, 4 – совмещенный 1, 5 – совмещенный 2, 6 – совмещенный 3.
ХЗ – цвет свечения первого светового сигнализатора: Л – зеленый, Ж-желтый.
Х4 – цвет свечения второго светового сигнализатора: К – красный.
Х5 – климатическое исполнение В1,0М1.
Пример формулировки заказа;
что соответствует обозначению поста аварийной сигнализации светового и звукового взрывозащищенного, работающего в совмещенном – 2 режиме, на номинальное напряжение переменного тока 127В с одним источником света зеленого свечения и одним источником света красного свечения климатического исполнения В1:
для внутрироссийских поставок: ПАСВ1-П-35-1Л1К В1;
для поставок на экспорт: ПАСВ1-П-35-1Л1К В1 – Экспорт.
Режим работыГабаритные, установочные, присоединительные размеры, электрическая схема постов и таблица режимов работы соответствует параметрам, указанным далее по тексту.
Управляющие сигналы подаются с газоанализаторов, датчиков загазованности и иных приборов, определяющих ПДК загазованности данного объекта, находящихся непосредственно в зоне загазованности.
Посты ПАСВ1-П работают в следующих режимах:
Совмещенный режим (со световым источником 1-го цвета) – 3 ступени световой и звуковой сигнализации:
- – несущие частоты 1500-4500 Гц с частотой модуляции 1 Гц – для пьезокерамического динамика и повторнократковременный с частотой 1 Гц – для светового источника;
- – несущие частоты 2400-2900 Гц с частотой модуляции 2 Гц – для пьезокерамического динамика и повторнократковременный с частотой 2 Гц – для светового источника;
- – несущие частоты 2500-3500 Гц с частотой модуляции 4 Гц – для пьезокерамического динамика и непрерывный – для светового источника.
Совмещенный -1 режим (со световым источником 1-го цвета) -1 ступень световой и звуковой сигнализации:
несущие частоты 1500-4500 Гц с частотой модуляцией 1 Гц – для пьезокерамического динамика и повторнократковременный с частотой 1 Гц – для светового источника, с автоматическим отключением звукового сигнала через 3 минуты.
Совмещенный – 2 режим (со световым источником 2-х цветов) – 3 ступени световой и звуковой сигнализации:
- – несущие частоты 1500-4500 Гц с частотой модуляции 1 Гц – для пьезокерамического динамика и повторнократковременный с частотой 1 Гц – для светового источника 1-го цвета;
- – несущие частоты 2400-2900 Гц с частотой модуляции 2 Гц – для пьезокерамического динамика и повторнократковременный с частотой 2 Гц – для светового источника 1-го цвета;
- – несущие частоты 2500-3500 Гц с частотой модуляции 4 Гц – для пьезокерамического динамика и непрерывный – для светового источника 2-го цвета.
Совмещенный – 3 режим (со световым источником 2-х цветов) – 3 ступени световой и звуковой сигнализации:
- – несущие частоты 1500-4500 Гц с частотой модуляции 1 Гц – для пьезокерамического динамика и повторнократковременный с частотой 1 Гц – для светового источника 1-го цвета, с автоматическим отключением звукового сигнала через 3 минуты;
- – несущие частоты 2400-2900 Гц с частотой модуляции 2 Гц – для пьезокерамического динамика и повторнократковременный с частотой 2 Гц – для светового источника 1-го цвета, с автоматическим отключением сигнала через 3 минуты;
- – несущие частоты 2500-3500 Гц с частотой модуляции 4 Гц – для пьезокерамического динамика и непрерывный – для светового источника 2-го цвета.
Для режимов совмещенный, совмещенный – 2 и совмещенный – 3:1-я ступень является одновременно питанием платы.
Габаритные и присоединительные размеры Электрические схемы Электрическая схема соединений постов ПАСВ1-П-Х3-1Х В1 (режим – совмещенный) Электрическая схема соединений постов ПАСВ1-П-Х5-1Х1Х В1 (режим – совмещенный-2) и ПАСВ1-П-Х6-1Х1Х В1 (режим – совмещенный-3)Режим работы постов ПАСВ1-П-Х3-1Х (режим совмещенный)
№ клеммного | Обозначение | Назначение | Режим работы пьезокерамического динамика | Режим работы | Цвет светового |
1 | N | Нейтраль сети | Несущие частоты 1500-4500 Гц | Повторнократковременный | Красный |
2 | 1.ПИТ.1 | Первая ступень сигнализации | с частотой модуляции 1 Гц | 1 Гц | |
3 | L2 | Вторая ступень сигнализации | Несущие частоты 2400-2900 Гц | Повторнократковременный | Красный |
4 | L3 | Третья ступень сигнализации | Несущие частоты 2500-3500 Гц | Непрерывный | Красный |
Режим работы постов ПАСВ1-П-Х5-1Х1Х (режим совмещенный-2)
№ клеммного | Обозначение | Назначение | Режим работы пьезокерамического динамика | Режим работы | Цвет светового |
1 | N | Нейтраль сети | Несущие частоты 1500-4500 Гц | Повторнократковременный | Желтый |
2 | 1.ПИТ.1 | Первая ступень сигнализации | с частотой модуляции 1 Гц | 1 Гц | (зеленый) |
3 | L2 | Вторая ступень сигнализации | Несущие частоты 2400-2900 Гц | Повторнократковременный | Желтый (зеленый) |
4 | L3 | Третья ступень сигнализации | Несущие чапоты 2500-3500 Гц | Непрерывный | Красный |
Режим работы постов ПАСВ1-П-Х6-1Х1Х (режим совмещенный-3)
№ клеммного | Обозначение | Назначение | Режим работы пьезокерамического динамика | Режим работы | Цвет светового |
1 | N | Нейтраль сети | Несущие частоты 1500-4500 Гц | Повторнократковременный | Желтый |
2 | 1.ПИТ.1 | Первая ступень сигнализации | 1 Гц | (зеленый) | |
3 | L2 | Вторая ступень сигнализации | Несущие частоты 2400-2900 Гц | Повторнократковременный | Желтый (зеленый) |
4 | L3 | Третья ступень сигнализации | Несущие частоты 2500-3500 Гц | Непрерывный | Красный |
ПАСВ1-П-Х4-1Х
Режим работы постов ПАСВ1-П-Х4-1Х (режим совмещенный-1)
№ клеммного | Обозначение | Назначение | Режим работы пьезокерамического динамика | Режим работы | Цвет светового |
1 | N | Нейтраль сети | Несущие частоты 1500-4500 Гц | Повторнократковременный | Красный |
2 | К+) | Одна ступень сигнализации | 1 Гц |
Пост сигнальный ПС-1, ПС-2
Посты сигнальные ПС-1 и ПС-2 используются для световой и звуковой сигнализации в промышленных помещениях и за их пределами. Конструкция постов аналогична сигнальным индикаторам СС2/40. Основное отличие постов – это количество сигнальных ламп, соответственно для ПС-1- одна лампа, для ПС-2- две. Излучателями звуковых сигналов служат ревуны, звонки, сирены.
Цвет преломления изделий может быть красным, зеленым.
Область применения
Изделия применяются для подачи светового и сигнального оповещения в различных отраслях промышленности. Широко распространены на складах, где хранятся твердые, несгораемые материалы, лаки, растворители, краски, порошки и щелочные материалы.
Разновидность постов ПС-1, ПС-2
Пост ПС-1 со звонком
Внешний вид поста ПС-1 У2 со звонком
ПС-1-У2 с зеленой линзой
Пост ПС-1-У2 с сиреной
Звонок используемый в ПС-1
Пост ПС-1 с сиреной
Пост ПС-2 со звонком
Пост ПС-2 с сиреной
ПС-2-У2 с сиреной
Внешний вид сирены поста ПС-2-У2
Тип | ПС-1 | ПС-2 |
Напряжение, В | 220, 380 | |
Цвета плафонов | Зеленый, красный | |
Мощность, Вт | 1х40Вт | 2х40Вт |
Тип ламп | В220-230-40 | |
Звуковой источник | Сирена, звонок, ревун | |
Уровень защиты | IP44, IP54 | |
Габариты, мм | 700х250х170 | 1000х250х170 |
Масса, кг | 5 | 6 |
Условия эксплуатации
- Колебания температуры окружающего воздуха – от минус 45 до 40°С;
- Уровень относительной влажности воздуха 80% при температуре 15°;
- Невзрывоопасная окружающая среда, без агрессивный газов, пыли и паров.
Комплект поставки
- Пост (в зависимости от заказа ПС-1 или ПС-2)
- Лампа
- Паспорт
|
|
границ | Ретроградная передача сигналов митохондрий растений: посттрансляционные модификации вступают в стадию
Введение
Митохондрии растений являются центральными узлами преобразования энергии и окислительно-восстановительного гомеостаза и связаны с метаболическими путями из различных субклеточных компартментов. Следовательно, митохондрии идеально подходят для того, чтобы действовать как сенсоры энергетического и метаболического статуса растительной клетки (Sweetlove et al., 2007; Millar et al., 2011). Нарушения энергетического статуса клетки могут привести к изменению конфигурации митохондриальной активности, что, в свою очередь, оказывает глубокое влияние на другие клеточные компартменты, включая серьезные изменения в экспрессии ядерных генов (NGE) и фотосинтетической активности (Rhoads, 2011; Schwarzländer et al., 2012). Изменения в NGE, которые запускаются сигналами, происходящими из метаболических нарушений в органеллах, называются ретроградными ответами (RRs) и считаются важным средством настройки антероградной регуляции для сохранения метаболической пластичности (Rhoads, 2011). Однако до сих пор хорошо изученные RR были обнаружены в основном у дрожжей и животных, тогда как у растений убедительные доказательства точной природы конкретных ретроградных сигналов и их трансдукции в значительной степени отсутствуют. Это особенно верно для митохондриального RR (MRR), для которого пока могут быть идентифицированы только предполагаемые сигнальные кандидаты и один нижестоящий фактор транскрипции (ABI4) (Gray et al., 2004; Giraud et al., 2009). Трудности в выяснении природы RR могут быть связаны с их возможной сложностью. Недавно Leister (2012) определил характеристики ретроградных сигналов и теоретически исследовал различные сценарии того, как одиночные и множественные ретроградные сигналы могут передавать информацию в ядро изолированным или скоординированным образом. В целом можно выделить два типа ретроградных сигналов (рисунок 1):
РИСУНОК 1. Возможные функции PTM в митохондриальной ретроградной передаче сигналов. Когда внешний сигнал или стресс вызывают нарушения в метаболизме митохондрий, возможны несколько реакций, и ПТМ могут вносить свой вклад на нескольких уровнях. (1) Митохондриальный метаболизм адаптируется через регуляцию обратной связи, во время которой ферменты, катализирующие ПТМ, могут изменять ферментативную активность в ответ на изменения метаболического статуса. (2) Промежуточные продукты метаболизма генерируются как первичные ретроградные сигналы, которые либо проходят непосредственно в ядро, либо воспринимаются на границе митохондрий или в цитозоле, а затем транслируются во вторичные сигналы или сигнальные каскады.PTMs, вероятно, будут участвовать в генерации и передаче таких вторичных сигналов. Более того, PTM могут передавать сигналы через внутреннюю митохондриальную или ядерную мембрану. В PTM ядра гистонов факторы транскрипции или транскрипционные комплексы могут транслировать полученные из митохондрий сигналы в специфические изменения экспрессии генов.
1. Первичные или прямые ретроградные сигналы генерируются в органелле и либо пассивно диффундируют, либо активно транспортируются в ядро, где они модулируют NGE.Таким образом, первичные ретроградные сигналы, скорее всего, являются промежуточными продуктами метаболизма, генерируемыми метаболическими путями в соответствующих органеллах.
2. Вторичные или косвенные сигналы активируются первичными сигналами внутри или вне органеллы и перемещаются в ядро или активируют каскад сигнальных событий, которые в конечном итоге изменяют NGE.
Посттрансляционные модификации (PTMs) идеально подходят для интеграции сигналов и, таким образом, представляют собой вероятный механизм для передачи непрямых ретроградных сигналов.PTM, такие как фосфорилирование, играют ключевую роль в передаче сигналов и усилении цитозольных сигнальных каскадов. Следовательно, возможно, что первичные митохондриальные сигналы могут генерировать вторичные сигналы (Møller and Sweetlove, 2010) или активировать каскады передачи сигналов, которые проходят через цитозоль. Здесь мы обсуждаем доказательства того, что ПТМ, связанные с митохондриальной энергией и окислительно-восстановительным метаболизмом, происходящие как снаружи, так и внутри митохондрий, являются потенциальными ключевыми игроками в передаче непрямых сигналов MRR.Мы предполагаем, что последние технологические достижения в области масс-спектрометрии высокого разрешения и подготовки образцов позволят широко и в значительной степени объективно анализировать митохондриальные ПТМ и их динамику (Witze et al., 2007; Choudhary and Mann, 2010). Такой основанный на PTM анализ может помочь выяснить черный ящик MRR и выявить некоторые из его сигнальных компонентов.
Посттрансляционные модификации – свет в черном ящике митохондриальной передачи сигналов?
Посттрансляционные модификации обеспечивают мощный механизм для быстрого и временного изменения функций и местоположения белков в клетке, а также они способны предоставлять информацию регуляторным белкам, создавая сайты стыковки для доменов распознавания PTM (Deribe et al., 2010). ПТМ, которые являются динамическими, быстрыми и обратимыми, подходят для управления временными изменениями клеточного метаболизма и передачи сигналов. Интересно, что субстратами нескольких основных ферментов, модифицирующих ПТМ, являются либо центральные метаболиты, либо окислительно-восстановительные соединения, такие как, например, АТФ, ацетил-КоА, NAD + и глутатион, что позволяет предположить, что активность этих ферментов может быть напрямую связана к энергетическому статусу или окислительно-восстановительному статусу органелл.
Фосфорилирование
Хотя несколько митохондриальных ферментов, регулируемых фосфорилированием, хорошо известны, такие как пируватдегидрогеназа (Gemel and Randall, 1992), только недавно стала проявляться регуляторная роль фосфорилирования в обработке митохондриальных сигналов и регуляции метаболизма (Pagliarini and Dixon, 2006). ; Ито и др., 2007; Ющук и др., 2007; Фостер и др., 2009). Есть указания на то, что все основные пути передачи сигналов киназ у млекопитающих могут нацеливаться на митохондрии и влиять на функцию митохондрий (Horbinski and Chu, 2005; Pagliarini and Dixon, 2006). Недавние публикации описывают 77 фосфопротеинов в митохондриях мышечных клеток человека и 181 фосфопротеин из сердечных митохондрий мышей (Deng et al., 2011; Zhao et al., 2011). Однако, несмотря на значительные усилия, сообщается только о 22 фосфопротеинах для Arabidopsis (Ito et al., 2009) и 14, в основном различных, фосфопротеинов картофеля (Быкова и др., 2003). Весьма вероятно, что статус митохондрий и передача сигналов зависят от ткани и условий окружающей среды, что может объяснить, почему предполагаемые фосфопротеины оставались необнаруженными в исследованиях, сосредоточенных на культурах клеток или конкретных тканях. Как и в случае фрагментарного митохондриального фосфопротеома, доступные данные, описывающие митохондриальные протеинкиназы и фосфатазы у растений, немногочисленны (Heazlewood et al., 2004; Juszczuk et al., 2007). Несколько киназ и фосфатаз, прикрепленных к внешней митохондриальной мембране, были недавно идентифицированы, но их возможная роль в передаче сигналов митохондрий еще предстоит изучить (Duncan et al., 2011; Sun et al., 2012). Крупномасштабный двухгибридный скрининг дрожжей на предмет взаимодействия митоген-активируемых протеинкиназ (MAPKs) в рисе показывает, что эти киназы могут фосфорилировать митохондриальные белки (Singh et al., 2012). Lundquist et al. (2012) предположили, что семейство протеинкиназ ABC1K, которым до сих пор не уделялось должного внимания, могло бы в дальнейшем заполнить пробел митохондриальных киназ, но очевидно, что потребуются дополнительные экспериментальные работы.
Указанные выше точки указывают на то, что фосфорилирование может влиять на функцию митохондрий, но может ли оно также влиять на MRR, остается открытым вопросом. Первое доказательство того, что MRR растений действительно частично регулируется посредством фосфорилирования, получено из наблюдения, что цитрат-зависимая индукция митохондриальной альтернативной оксидазы может ингибироваться ингибитором протеинкиназы staurosporine (Djajanegara et al., 2002). Кроме того, Takahashi et al. (2003) продемонстрировали, что функциональные изменения в митохондриях табака, вызванные спермином, запускают MAPK-каскад и активируют специфические гены гиперчувствительного ответа.Однако оба пути еще не исследовались.
Митохондриальные сигналы могут активировать зависимые от фосфорилирования сигнальные каскады внутри или вне органелл, которые передают MRR. Серьезное подтверждение существования такого механизма было обнаружено у дрожжей, где «RTG-зависимый путь» представляет собой один из наиболее изученных MRR. Было показано, что нарушения митохондриальных функций у дрожжей приводят к снижению потенциалов митохондриальной мембраны, вызывая основанный на киназе ответ, который регулирует статус фосфорилирования и транслокацию специфических ТФ в ядро (Liu and Butow, 2006; Jazwinski, 2012).Кандидатами на фосфорилирование-зависимую передачу сигналов, участвующих в MRR у растений, являются киназы, связанные с SNF1 (SnRK), в частности цитозольный SnRK1, и мишень для протеинкиназ рапамицина (TOR). SnRK1 и TOR принадлежат к различным эволюционно консервативным семействам протеинкиназ, которые, вероятно, функционируют как главные регуляторы и сенсоры метаболизма энергии и питательных веществ во время роста и развития, а также в условиях истощающего энергию стресса (Polge and Thomas, 2007; Baena-González and Шин, 2008; Добренель и др., 2011; Гиллеберт и др., 2011; Ren et al., 2011; Xiong and Sheen, 2012). Хотя описаны некоторые важные модуляторы активности SnRK1 и TOR, основные метаболические сигналы, которые активируют эти киназы, остаются неизвестными (Baena-González and Sheen, 2008; Ghillebert et al., 2011; Xiong and Sheen, 2012). Интересно, что существует перекрытие в регулируемых транскриптах между SnRK1-опосредованными ответами и специфическими условиями митохондриальной дисфункции (Schwarzländer et al., 2012), и будет интересно выяснить, интегрирует ли SnRK1 метаболические сигналы из митохондрий, тем самым внося вклад в MRR.У дрожжей и млекопитающих передача сигналов TOR жизненно важна для поддержания митохондриального дыхания и участвует в MRR (Schieke and Finkel, 2006). Например, TOR млекопитающих (mTOR) взаимодействует с PGC1α (Cunningham et al., 2007), активатором транскрипции, регулирующим биогенез и активность митохондрий. Недавние результаты в Arabidopsis предполагают, что TOR может иметь сходную функцию у растений, но точные механизмы еще предстоит обнаружить (Leiber et al., 2010; Xiong and Sheen, 2012).
Ацетилирование лизина
Ацетилирование ε-аминогруппы остатков лизина на белках недавно стало основным PTM белков, которые могут соперничать с регуляторной ролью фосфорилирования (Choudhary et al., 2009; Norvell and McMahon, 2010). Долгое время исследования ацетилирования белков лизином были сосредоточены почти исключительно на гистонах и регуляции транскрипции. Однако было подтверждено, что ацетилирование лизином негистоновых белков является широко распространенной ПТМ у прокариот и эукариот, которая оказывает глубокое регулирующее воздействие на различные метаболические процессы и процессы развития (Close et al., 2010; Xing and Poirier, 2012). В результате ряда исследований стало очевидно, что ацетилирование лизина участвует в энергетическом гомеостазе и регуляции потока углерода путем прямого изменения NGE или активности ключевых метаболических ферментов, таких как глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназа и изоцитратдегидрогеназа в Salmonella enterica. (Wang et al., 2010) или митохондриальная ацетил-CoA-синтетаза 2 млекопитающих (Hallows et al., 2006; Schwer et al., 2006). Кроме того, Kim et al. (2006) продемонстрировали, что паттерны ацетилирования лизина варьируются в зависимости от статуса питания.Anderson и Hirschey (2012) оценили, что 35% всех митохондриальных белков млекопитающих имеют по крайней мере один сайт ацетилирования, и обнаружили, что пути, участвующие в выработке энергии, метаболизме жирных кислот, метаболизме сахара и метаболизме аминокислот, значительно обогащены ацетилированными белками. . Важный прогресс был также достигнут в идентификации лизин-ацетилированных негистоновых белков в Arabidopsis (Finkemeier et al., 2011; Wu et al., 2011). Эти два исследования описывают общее количество 125 белков, которые подлежат лизин-ацетилированию в Arabidopsis , причем цитохром c представляет собой единственный митохондриальный белок.В обоих исследованиях было идентифицировано только шесть общих белков (Xing and Poirier, 2012), что позволяет предположить, что общий охват был довольно низким и что более обширные скрининги могут идентифицировать гораздо большее количество лизин-ацетилированных белков в растениях.
Огромный потенциал ацетилирования лизина, действующего как метаболический сенсор и регулятор, заключается в химии ферментов, которые катализируют этот PTM. Лизинацетилтрансферазы (KAT) переносят ацетил-фрагмент от ацетил-КоА к целевым белкам.Это предполагает, что доступность центрального промежуточного метаболизма ацетил-КоА или соотношение ацетил-КоА / КоА может быть напрямую измерено с помощью KAT (Xing and Poirier, 2012). Поскольку ацетил-КоА находится в цитозоле и органеллах, но не может свободно диффундировать через мембраны, он должен синтезироваться и метаболизироваться независимо в каждом компартменте, что делает его хорошим индикатором местного углеродного статуса (Oliver et al., 2009). В Arabidopsis было идентифицировано по крайней мере 12 KAT по гомологии последовательностей, и было описано, что ряд из них влияет на различные процессы развития посредством ацетилирования гистонов (Pandey et al., 2002; Эрли и др., 2007; Сервет и др., 2010). Информация о KAT, которые ацетилируют негистоновые белки вне ядра, в значительной степени отсутствует. Был идентифицирован только один локализованный в митохондриях KAT, который ацетилирует лизиновые остатки белков, принадлежащих к дыхательной цепи транспорта электронов (ETC; Scott et al., 2012). Вполне вероятно, что существуют другие классы KAT, которые еще предстоит открыть (Anderson and Hirschey, 2012).
Напротив, имеется гораздо больше доказательств обратной реакции, катализируемой лизиндеацетилазами (KDACs), в частности KDAC класса III так называемых сиртуинов (для «гомолога регуляции молчащей информации 2»).Сиртуины отличаются от трех других классов деацетилаз своей зависимостью от NAD + в качестве субстрата и высвобождением O -ацетил-рибозы и никотинамида (NAM) в качестве побочных продуктов деацетилирования. Отношение NAD + / NADH отражает энергетический статус клетки, и несколько исследований показали, что условия голодания активируют сиртуины у дрожжей и млекопитающих, что приводит к транскрипционной и метаболической адаптации за счет деацетилирования гистонов, ТФ и метаболических ферментов (Zhong and Mostoslavsky , 2011; Houtkooper et al., 2012). Эти наблюдения привели к гипотезе о том, что ацетилирование белка может служить центральным переключателем между окислительным и ферментативным метаболизмом с ацетил-КоА, NAD + , KAT и NAD + -зависимые KDAC в качестве ключевых игроков (Guarente, 2011; Xing). и Пуарье, 2012). Хотя прямые доказательства отсутствуют, такая модель позволит интегрировать MRR (Verdin et al., 2010). Например, активность PGC1α (см. Выше) модулируется обратимым ацетилированием через KAT GCN5 и сиртуин 1 (SIRT1), в зависимости от клеточного ацетил-КоА и статуса NAD + (Canto and Auwerx, 2009).Кроме того, считается, что SIRT3 является основной митохондриальной деацетилазой у млекопитающих со многими мишенями, участвующими в митохондриальном метаболизме. Сюда входят центральные ферменты, такие как, например, комплекс I, II и III ETC, изоцитратдегидрогеназа и глутаматдегидрогеназа в TCA-цикле, митохондриальная ацетил-CoA-синтетаза и длинноцепочечная ацил-CoA-дегидрогеназа, которая участвует в жировой дистрофии. кислотное окисление (Anderson, Hirschey, 2012; Houtkooper et al., 2012). Из этих наблюдений возникла общая модель, предполагающая, что в условиях голодания SIRT3 активируется повышенными уровнями NAD + , стимулируя окислительный метаболизм и продукцию АТФ (Zhong and Mostoslavsky, 2011).Изменения цитозольного соотношения АМФ / АТФ могут восприниматься АМФ-активированной протеинкиназой (AMPK, гомолог SnRK1, упомянутого выше), которая способствует катаболизму и инактивирует энергоемкие пути (Verdin et al., 2010). Хотя растительный гомолог AMPK SnRK1 не регулируется аллостерически соотношением AMP / ATP (Ghillebert et al., 2011), он тесно связан с клеточным углеродным статусом. Следовательно, сиртуин-зависимый метаболический регуляторный путь кажется возможным у растений. Геном Arabidopsis кодирует два гена сиртуина, один из которых (AtSRT2) имеет семь различных форм сплайсинга.Однако субклеточная локализация и возможные функции метаболической регуляции еще предстоит определить. Помимо сиртуинов Arabidopsis экспрессирует не менее 16 KDAC других классов, функции которых только начали выясняться (Pandey et al., 2002; Hollender, Liu, 2008). Хотя было подтверждено, что некоторые из них деацетилируют гистоны в ядре, чтобы регулировать процессы развития (например, HDA6; Wu et al., 2008; Yu et al., 2011), другие, такие как HDA5, HDA8 и HDA14, оказались экспрессируется в цитозоле, хлоропластах или митохондриях и, по-видимому, участвует в ацетилировании негистоновых белков, таких как, например, α-тубулин в случае HDA14 (Alinsug et al., 2012; Tran et al., 2012). Зависимость от центральных метаболитов в качестве ко-субстратов и возможность прямого и обратимого влияния на NGE и ферментативную активность делают ацетилирование лизина многообещающим кандидатом для регуляции метаболизма растений на нескольких уровнях, включая MRR.
PTM, связанные с редокс-состоянием митохондрий
Активные формы кислорода (АФК) постоянно образуются как побочные продукты дыхательного метаболизма. Их продукция увеличивается в условиях высоких матричных соотношений NADH / NAD + или когда пул убихинона сильно снижен в сочетании с высоким мембранным потенциалом (Møller, 2001; Murphy, 2009).Следовательно, окислительно-восстановительное состояние митохондрий тесно связано с энергетическим метаболизмом митохондрий и определяется балансом АФК, продуцируемых метаболическими процессами, и доступностью НАДФН как восстанавливающего эквивалента для поддержания антиоксидантной системы. Система антиоксидантной защиты митохондрий играет ключевую роль в детоксикации пероксидов и, таким образом, является основной мишенью для воздействия на передачу сигналов окислительно-восстановительного потенциала. ПТМ на митохондриальных антиоксидантных ферментах растений еще не изучены подробно, но сайты фосфорилирования антиоксидантных ферментов были идентифицированы в нескольких исследованиях и ожидают дальнейшей функциональной характеристики (Nakagami et al., 2010).
Окислительные ПТМ белков, возникающие в результате увеличения производства АФК в митохондриях, могут быть необратимыми или обратимыми. Химия окислительных модификаций белков довольно сложна, и их полный потенциал еще не исследован. Необратимое окисление белков в митохондриях лучше всего охарактеризовано как карбонилирование, которое рассматривается как индикатор окислительного повреждения клетки (Møller et al., 2011). Кластер железо-сера фермента аконитазы цикла TCA, например, особенно склонен к окислительной инактивации, которая может активировать MRR в растениях за счет повышения уровней митохондриального цитрата (Gray et al., 2004; Роадс и Суббаия, 2007). Обратимые окислительные модификации происходят только в цистеиновых и метиониновых остатках белков, которые могут быть отменены сульфиредоксинами (в случае цистеинсульфиновых кислот), тиоредоксинами (TRX; в случае дисульфидов), глутаредоксинами (GRX; в случае дисульфидов и смеси глутатиона). дисульфиды) и метионинсульфоксидредуктазы (в случае метионинсульфоксидов). Дисульфиды, образующиеся при окислении цистеина, играют важную роль в регуляции активности ферментов и функций белков в различных метаболических процессах, а также в регуляции транскрипции и передаче сигналов у растений и животных (Foyer and Noctor, 2009; Konig et al., 2012; Мерфи, 2012). В матриксе митохондрий растений 50 TRX-связанных белков и 18 GRX-связанных белков были идентифицированы в результате различных метаболических процессов (Balmer et al., 2004; Rouhier et al., 2005). Однако подтверждение in vivo функциональной регуляции метаболизма митохондрий растений с помощью TRX и GRX все еще отсутствует. Дисульфидный протеом митохондрий растений был дополнительно оценен в исследовании с использованием диагонального гель-электрофореза (Winger et al., 2007), в ходе которого был идентифицирован 21 белок основных метаболических путей, которые в окислительных условиях образуют меж- или внутримолекулярные дисульфиды.Каталитические цистеины важны для активности многих ферментов, участвующих в метаболизме (например, цистеиновых протеаз, убиквитинлигаз и пероксидаз) и передачи сигналов (например, тирозинфосфатаз). S -Глутатионилирование – это обратимая ПТМ цистеина, которая рассматривается как механизм защиты окислительно-восстановительных цистеинов от необратимой инактивации, помимо его роли в передаче окислительно-восстановительных сигналов (Gallogly and Mieyal, 2007). И глициндекарбоксилаза, ключевой фермент фотодыхательного пути, а также галактонолактондегидрогеназа, главный фермент синтеза аскорбата, были инактивированы глутатионилированием в митохондриях растений (Leferink et al., 2009; Palmieri et al., 2010). Следовательно, глутатионилирование может играть роль во временной защите этих метаболических ферментов в условиях окислительного стресса. Метаболические изменения, возникающие в результате ингибирования этих ферментов, могут затем играть роль в MRR. Необратимо инактивированные белки могут деградировать во всех субкомпартментах митохондрий (Fischer et al., 2012). Недавняя работа в C. elegans продемонстрировала, что экспортер митохондриального пептида HAF-1 необходим для MRR (Haynes et al., 2010). Møller и Sweetlove (2010) предположили, что окислительно модифицированные пептиды, в частности, могут передавать специфическую информацию для регулирования MRR, индуцированного окислительным стрессом у растений. Новые протеомные подходы с использованием бифункциональных тиол-специфических реагентов алкилирования, связанных с эпитопной меткой, флуоресцентной или изотопной меткой, предоставят полезные инструменты для дальнейшего изучения функционального значения митохондриального окислительно-восстановительного протеома и его предполагаемой роли в регуляции MRR у растений (Held и Гибсон, 2012).
Направления будущего
Согласно недавнему углубленному биоинформатическому анализу, митохондриальный протеом растений содержит около 2500 белков (Cui et al., 2011). Многие из этих белков будут содержать несколько PTM разных типов, которые, следовательно, будут изменять функции белков или даже локализацию белков в митохондриях. Когда мы думаем о роли PTM в передаче сигналов, в первую очередь приходят на ум классические MAPK-каскады, основанные на фосфорилировании, которые часто инициируются рецепторными киназами.Однако также возможно, что различные типы PTM могут быть соединены последовательно или могут взаимодействовать посредством кодифицированных перекрестных помех. Недавнее исследование in silico продемонстрировало, что сайты ацетилирования лизина обладают большим потенциалом влиять на близлежащие сайты фосфорилирования, метилирования и убиквитинирования (Lu et al., 2011). Такая перекрестная помеха действительно наблюдалась в исследовании in vivo с использованием уменьшенной геномом бактерии Mycoplasma pneumonia e (van Noort et al., 2012). Делеция только двух протеинкиназ и уникальной протеинфосфатазы модулировала паттерны ацетилирования лизина, в то время как, в свою очередь, делеция только двух KAT оказывала влияние на фосфорилирование белка.Следовательно, возможно множество сценариев, которые включают основанные на фосфорилировании сигнальные каскады, регулируемые различными типами PTM. Также возможен и обратный сценарий, когда фосфорилирование или ацетилирование лизина регулируют активность метаболических ферментов, которые могут влиять на метаболическую передачу сигналов. Такие сложные перекрестные помехи на основе PTM демонстрируются, например, в регуляции активности митохондриальной супероксиддисмутазы марганца (MnSOD). MnSOD отвечает за разложение супероксида до перекиси водорода в митохондриальном матриксе.Активность MnSOD может быть изменена несколькими ПТМ, включая фосфорилирование, ацетилирование лизина и нитрование тирозина у млекопитающих (Yamakura et al., 1998; Hopper et al., 2006; Ozden et al., 2011), в то время как фосфорилирование, карбонилирование и окислительная деградация MnSOD наблюдалась у растений (Sweetlove et al., 2002; Kristensen et al., 2004; Juszczuk et al., 2007). Было показано, что удаление фосфорилирования и ацетилирования лизина из MnSOD увеличивает его активность, однако это происходит в разных физиологических условиях (Finley and Haigis, 2009; Foster et al., 2009; Фукаи и Ушио-Фукаи, 2011 г .; Озден и др., 2011). Следовательно, обе модификации, вероятно, связаны в кодифицированном перекрестном взаимодействии и будут влиять на митохондриальную окислительно-восстановительную передачу сигналов.
В будущих исследованиях потребуется ответить на несколько ключевых вопросов, чтобы полностью понять сложность и регуляцию митохондриального протеома в зависимости от факторов окружающей среды или метаболических сигналов: какова их последовательная организация ?, (2) Какова физиологическая роль различных ПТМ в отношении функции белков? и (3) Влияют ли разные ПТМ друг на друга? Для детального исследования этих вопросов и дальнейшего изучения роли PTMs в MRR будут необходимы сложные протеомные анализы, которые позволят разрешить во времени и всестороннюю инвентаризацию митохондриального протеома и его модификаций в условиях, запускающих MRR.Кроме того, подходы протеомики дробовика, которые анализируют фракционированные протеомы целых клеток, а не субпротеомы из изолированных органелл, могут быть более подходящими для такого типа анализа. Процедуры выделения митохондрий часто занимают несколько часов и могут иметь широкое влияние на митохондриальные ПТМ, такие как окислительные модификации. Несколько примеров основанной на PTM регуляции центральных митохондриальных белков у животных демонстрируют необходимость дальнейшего анализа функций PTMs в передаче сигналов митохондрий растений.Более того, автотрофные ткани растений принципиально отличаются от гетеротрофных тканей животных с точки зрения производства, потребления и гомеостаза энергии, и наиболее вероятно, что будут идентифицированы новые специфические для растений регуляторные механизмы.
Заявление о конфликте интересов
Авторы заявляют, что исследование проводилось при отсутствии каких-либо коммерческих или финансовых отношений, которые могут быть истолкованы как потенциальный конфликт интересов.
Благодарности
Приносим извинения всем коллегам, чьи работы не удалось процитировать из-за нехватки места.Эта работа была поддержана Deutsche Forschungsgemeinschaft, Германия (программа Emmy Noether FI-1655 / 1-1 и Research Unit 804).
Список литературы
Алинсуг, М. В., Чен, Ф. Ф., Ло, М., Тай, Р., Цзян, Л., и Ву, К. (2012). Субклеточная локализация HDA класса II в Arabidopsis thaliana : ядерно-цитоплазматическое перемещение HDA15 управляется светом. PLoS ONE 7, e30846. DOI: 10.1371 / journal.pone.0030846
Pubmed Аннотация | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Бальмер, Ю., Vensel, W.H., Tanaka, C.K., Hurkman, W.J., Gelhaye, E., Rouhier, N., et al. (2004). Тиоредоксин связывает окислительно-восстановительный потенциал с регуляцией основных процессов митохондрий растений. Proc. Natl. Акад. Sci. США 101, 2642–2647.
Pubmed Аннотация | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Чоудхари К., Кумар К., Гнад Ф., Нильсен М. Л., Рехман М., Вальтер Т. К. и др. (2009). Ацетилирование лизина нацелено на белковые комплексы и ко-регулирует основные клеточные функции. Наука 325, 834–840.
Pubmed Аннотация | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Close, P., Creppe, C., Gillard, M., Ladang, A., Chapelle, J.-P., Nguyen, L., et al. (2010). Возникающая роль ацетилирования лизина неядерных белков. Cell. Мол. Life Sci. 67, 1255–1264.
Pubmed Аннотация | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Цуй, Дж., Лю, Дж., Ли, Ю., и Ши, Т. (2011). Интегративная идентификация митохондриального протеома Arabidopsis и использование его функций через сеть взаимодействия белков. PLoS ONE 6, e16022. DOI: 10.1371 / journal.pone.0016022
Pubmed Аннотация | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Каннингем, Дж. Т., Роджерс, Дж. Т., Арлоу, Д. Х., Васкес, Ф., Мута, В. К., и Пуигсервер, П. (2007). mTOR контролирует окислительную функцию митохондрий посредством транскрипционного комплекса YY1-PGC-1 [agr]. Природа 450, 736–740.
Pubmed Аннотация | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Дэн, Н., Чжан, Дж., Цзун, К., Wang, Y., Lu, H., Yang, P., et al. (2011). Анализ фосфопротеома выявляет регуляторные участки в основных путях сердечных митохондрий. Мол. Клетка. Протеомика 10, M110.000117.
Pubmed Аннотация | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Джаджанегара И., Финнеган П. М., Матье К., Маккаб Т., Уилан Дж. И Дэй Д. А. (2002). Регуляция экспрессии альтернативного гена оксидазы в сое. Plant Mol. Биол. 50, 735–742.
Pubmed Аннотация | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Добренель, Т., Маркив, К., Сормани, Р., Моро, М., Моццо, М., Монтан, М. Х. и др. (2011). Регуляция роста и метаболизма растений киназой TOR. Biochem. Soc. Пер. 39, 477–481.
Pubmed Аннотация | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Дункан, О., Тейлор, Н. Л., Кэрри, К., Юбель, Х., Кубишевски-Якубяк, С., Чжан, Б. и др. (2011). Множество доказательств локализуют механизмы передачи сигналов, морфологии и биосинтеза липидов на внешней мембране митохондрий Arabidopsis . Plant Physiol. 157, 1093–1113.
Pubmed Аннотация | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Эрли К. В., Шук М. С., Брауэр-Толанд Б., Хикс Л. и Пикард К. С. (2007). Специфичность in vitro коактиватора гистоновых ацетилтрансфераз Arabidopsis : значение гиперацетилирования гистонов при активации генов. Plant J. 52, 615–626.
Pubmed Аннотация | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Финкемайер, И., Laxa, M., Miguet, L., Howden, A., and Sweetlove, L. (2011). В Arabidopsis лизин-ацетилированы белки различной функции и субклеточного расположения. Plant Physiol. 155, 1779–1790.
Pubmed Аннотация | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Фостер, Д. Б., Ван Эйк, Дж. Э., Марбан, Э., и О’Рурк, Б. (2009). Редокс-сигнализация и фосфорилирование белков в митохондриях: успехи и перспективы. J. Bioenerg. Биомембр. 41, 159–168.
Pubmed Аннотация | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Гиллеберт, Р., Суиннен, Э., Вен, Дж., Вандестин, Л., Рамон, М., Норга, К. и др. (2011). Указатель топлива и регулятор энергии АМПК / СНФ1 / СнРК1: устройство, функционирование и регулирование. FEBS J. 278, 3978–3990.
Pubmed Аннотация | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Жиро, Э., Ван Акен, О., Хо, Л. Х. М., и Уилан, Дж. (2009). Фактор транскрипции ABI4 является регулятором митохондриальной ретроградной экспрессии ALTERNATIVE OXIDASE1a. Plant Physiol. 150, 1286–1296.
Pubmed Аннотация | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Грей, Г. Р., Максвелл, Д. П., Вилларимо, А. Р., и Макинтош, Л. (2004). Митохондрия / ядерная передача сигналов об альтернативной экспрессии гена оксидазы происходит по разным путям с участием органических кислот и активных форм кислорода. Plant Cell Rep. 23, 497–503.
Pubmed Аннотация | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Хейнс, К. М., Янг, Ю., Блейс, С. П., Нойберт, Т. А., и Рон, Д. (2010). Экспортер матричного пептида HAF-1 сигнализирует о митохондриальном UPR путем активации фактора транскрипции ZC376.7 в C. elegans . Мол. Ячейка 37, 529–540.
Pubmed Аннотация | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Хизлвуд, Дж. Л., Тонти-Филиппини, Дж. С., Подагра, А. М., Дэй, Д. А., Уилан, Дж., И Миллар, А. Х. (2004). Экспериментальный анализ митохондриального протеома Arabidopsis подчеркивает сигнальные и регуляторные компоненты, обеспечивает оценку программ прогнозирования таргетинга и указывает на митохондриальные белки, специфичные для растений. Растительная клетка 16, 241.
Pubmed Аннотация | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Хелд, Дж. М., и Гибсон, Б. У. (2012). Регулирующий контроль или окислительное повреждение? Протеомные подходы к исследованию роли статуса окисления цистеина в биологических процессах. Мол. Клетка. Протеомика 11, R111.013037.
Pubmed Аннотация | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Хоппер, Р. К., Кэрролл, С., Апонте, А. М., Джонсон, Д. Т., Френч, С., Шен, Р. Ф. и др. (2006). Фосфопротеом митохондриального матрикса: эффект внемитохондриального кальция. Биохимия 45, 2524–2536.
Pubmed Аннотация | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Горбински К. и Чу К. Т. (2005). Сигнальные каскады киназ в митохондриях: вопрос жизни или смерти. Free Radic. Биол. Med. 38, 2–11.
CrossRef Полный текст
Ито Дж., Хизлвуд Дж. Л. и Миллар А. Х. (2007). Митохондриальный протеом растений и проблема определения посттрансляционных модификаций, ответственных за передачу сигналов и стрессовое воздействие на дыхательные функции. Physiol. Растение. 129, 207–224.
CrossRef Полный текст
Ито, Дж., Тейлор, Н. Л., Каслден, И., Векверт, В., Миллар, А. Х. и Хизлвуд, Дж. Л. (2009). Обзор митохондриального фосфопротеома Arabidopsis thaliana . Proteomics 9, 4229–4240.
Pubmed Аннотация | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Ющук И. М., Быкова Н. В. и Мёллер И. М. (2007). Фосфорилирование белков в митохондриях растений. Physiol. Растение. 129, 90–103.
CrossRef Полный текст
Ким, С. К., Спранг, Р., Чен, Ю., Сюй, Ю., Болл, Х., Пей, Дж. И др. (2006). Субстратное и функциональное разнообразие ацетилирования лизина, выявленное протеомным исследованием. Мол. Cell 23, 607–618.
Pubmed Аннотация | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Кониг, Дж., Мутурамалингам, М., и Дитц, К. Дж. (2012). Механизмы и динамика в регуляторной сети окислительно-восстановительного потенциала тиолов / дисульфидов: передатчики, датчики и мишени. Curr. Opin. Биол растений 15, 261–268.
Pubmed Аннотация | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Кристенсен Б. К., Аскерлунд П., Быкова Н. В., Эгсгаард Х. и Моллер И. М. (2004). Идентификация окисленных белков в матриксе митохондрий листьев риса методами иммунопреципитации и двухмерной жидкостной хроматографии-тандемной масс-спектрометрии. Фитохимия 65, 1839–1851.
Pubmed Аннотация | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Леферинк, Н.Г., Ван Дуйн, Э., Барендрегт, А., Хек, А. Дж., И Ван Беркель, В. Дж. (2009). Галактонолактондегидрогеназа требует окислительно-восстановительного тиола для оптимального производства витамина С. Plant Physiol. 150, 596–605.
Pubmed Аннотация | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Лейбер, Р.-М., Джон, Ф., Верхертбругген, Ю., Диет, А., Нокс, Дж. П., и Рингли, К. (2010). Путь TOR модулирует структуру клеточных стенок Arabidopsis . Растительная клетка 22, 1898–1908.
Pubmed Аннотация | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Лу З., Ченг З., Чжао Ю. и Волченбум С. Л. (2011). Биоинформатический анализ и прогнозирование перекрестных помех посттрансляционной модификации ацетилирования лизина. PLoS ONE 6, e28228. DOI: 10.1371 / journal.pone.0028228
Pubmed Аннотация | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Мёллер И. М. (2001). Митохондрии растений и окислительный стресс: транспорт электронов, оборот НАДФН и метаболизм активных форм кислорода. Annu. Rev. Plant Physiol. Завод Мол. Биол. 52, 561–591.
Pubmed Аннотация | Pubmed Полный текст
Мерфи, М. П. (2012). Митохондриальные тиолы в антиоксидантной защите и окислительно-восстановительной передаче сигналов: различные роли в глутатионилировании и других модификациях тиолов. Антиоксид. Редокс. Сигнал. 16, 476–495.
Pubmed Аннотация | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Накагами, Х., Сугияма, Н., Мочида, К., Дауди, А., Йошида, Ю., Тойода, Т., и другие. (2010). Крупномасштабная сравнительная фосфопротеомика позволяет идентифицировать консервативные сайты фосфорилирования у растений. Plant Physiol. 153, 1161–1174.
Pubmed Аннотация | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Норвелл, А., МакМмахон, С. Б. (2010). Восстание соперника. Наука 327, 964–965.
Оливер Д. Дж., Николау Б. Дж. И Вуртеле Э. С. (2009). Ацетил-КоА – жизнь в метаболическом звене. Plant Sci. 176, 597–601.
Озден, О., Парк, С. Х., Ким, Х. С., Цзян, Х., Колман, М. К., Шпиц, Д. Р. и др. (2011). Ацетилирование MnSOD направляет ферментативную активность в ответ на состояние питательных веществ клетки или окислительный стресс. Старение (Олбани, штат Нью-Йорк) 3, 102–107.
Pubmed Аннотация | Pubmed Полный текст
Пальмиери, М. К., Линдермайер, К., Бауве, Х., Штайнхаузер, К., и Дурнер, Дж. (2010). Регулирование глициндекарбоксилазы растений с помощью s-нитрозилирования и глутатионилирования. Plant Physiol. 152, 1514–1528.
Pubmed Аннотация | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Пандей Р., Мюллер А., Наполи К., Селинджер Д., Пикард К. С., Ричардс Э. и др. (2002). Анализ семейств гистонацетилтрансферазы и гистондеацетилазы Arabidopsis thaliana предполагает функциональную диверсификацию модификации хроматина среди многоклеточных эукариот. Nucleic Acids Res. 30, 5036–5055.
Pubmed Аннотация | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Рен, М., Qiu, S., Venglat, P., Xiang, D., Feng, L., Selvaraj, G., et al. (2011). Мишень рапамицина регулирует развитие и экспрессию рибосомной РНК через киназный домен в Arabidopsis . Plant Physiol. 155, 1367–1382.
Pubmed Аннотация | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Роадс, Д. М. (2011). «Ретроградная регуляция митохондрий растений», в Plant Mitochondria , ed. Ф. Кемпкен (Нью-Йорк: Springer), 411–437.
Rouhier, N., Villarejo, A., Srivastava, M., Gelhaye, E., Keech, O., Droux, M., et al. (2005). Идентификация мишеней глутаредоксина растений. Антиоксид. Редокс. Сигнал. 7, 919–929.
Pubmed Аннотация | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Шварцлендер, М., Кениг, А. К., Свитлав, Л. Дж., И Финкемайер, И. (2012). Влияние нарушения функции митохондрий на ретроградную передачу сигналов: метаанализ транскриптомных ответов. J. Exp. Бот. 63, 1735–1750.
Pubmed Аннотация | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Швер Б., Бункенборг Дж., Вердин Р. О., Андерсен Дж. С. и Вердин Э. (2006). Обратимое ацетилирование лизина контролирует активность митохондриального фермента ацетил-КоА синтетазы 2. Proc. Natl. Акад. Sci. США 103, 10224–10229.
Pubmed Аннотация | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Скотт И., Вебстер Б. Р., Ли, Дж. Х. и Сак М. Н. (2012). Идентификация молекулярного компонента программы митохондриальной ацетилтрансферазы: новая роль GCN5L1. Biochem. J. 443, 655–661.
Pubmed Аннотация | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Сервет, К., Конде Э. Сильва, Н., Чжоу, Д.-Х. и Конде, Н. (2010). Гистонацетилтрансфераза AtGCN5 / HAG1 является универсальным регулятором онтогенетической и индуцибельной экспрессии генов в Arabidopsis . Мол. Завод 3, 670–677.
Pubmed Аннотация | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Сингх Р., Ли, М.-О., Ли, Дж .-Э., Чой, Дж., Пак, Дж.Х., Ким, Э. Х. и др. (2012). Анализ взаимодействия митоген-активированной протеинкиназы риса с использованием дрожжевой двугибридной системы. Plant Physiol. 160, 477–487.
Pubmed Аннотация | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Сан, Ф., Кэрри, К., Ло, С., Мурча, М. В., Чжан, Р., Лоу, Ю. С. и др. (2012). AtPAP2 – это заякоренный в хвосте белок на внешней мембране хлоропластов и митохондрий. Завод Сигнал. Behav. 7, 927–932.
Pubmed Аннотация | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Sweetlove, Л.Дж., Фэйт, А., Нунес-Неси, А., Уильямс, Т., и Ферни, А. Р. (2007). Митохондрия: точка интеграции клеточного метаболизма и передачи сигналов. Crit. Rev. Plant Sci. 26, 17–43.
Pubmed Аннотация | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Sweetlove, L. J., Heazlewood, J. L., Herald, V., Holtzapffel, R., Day, D. A., Leaver, C. J., et al. (2002). Влияние окислительного стресса на митохондрий Arabidopsis и . Plant J. 32, 891–904.
Pubmed Аннотация | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Такахаши, Ю., Берберич, Т., Миядзаки, А., Со, С., Охаши, Ю., и Кусано, Т. (2003). Передача сигналов спермина в табаке: активация митоген-активированных протеинкиназ спермином опосредуется митохондриальной дисфункцией. Plant J. 36, 820–829.
Pubmed Аннотация | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Тран, Х. Т., Нимик, М., Уриг, Г., Темплтон, Г., Моррис, Н., Гурли, Р. и др. (2012). Arabidopsis thaliana гистондеацетилаза 14 (HDA14) представляет собой α-тубулиндеацетилазу, которая связывается с PP2a и обогащает фракцию микротрубочек предполагаемой гистон-ацетилтрансферазой ELP3. Plant J. 71, 263-272.
Pubmed Аннотация | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
van Noort, V., Seebacher, J., Bader, S., Mohammed, S., Vonkova, I., Betts, M.J., et al. (2012). Перекрестное взаимодействие между фосфорилированием и ацетилированием лизина в бактерии с редуцированным геномом. Мол. Syst. Биол. 8, 571.
Pubmed Аннотация | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Verdin, E., Hirschey, M. D., Finley, L. W. S., and Haigis, M. C. (2010).Сиртуиновая регуляция митохондрий: производство энергии, апоптоз и передача сигналов. Trends Biochem. Sci. 35, 669–675.
Pubmed Аннотация | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Wang, Q., Zhang, Y., Yang, C., Xiong, H., Lin, Y., Yao, J., et al. (2010). Ацетилирование метаболических ферментов координирует использование источника углерода и метаболический поток. Наука 327, 1004–1007.
Pubmed Аннотация | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Вингер, А.М., Тейлор, Н. Л., Хизлвуд, Дж. Л., Дэй, Д. А., и Миллар, А. Х. (2007). Идентификация внутри- и межмолекулярных дисульфидных связей в митохондриальном протеоме растений методом диагонального гель-электрофореза. Proteomics 7, 4158–4170.
Pubmed Аннотация | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Ву, К., Чжан, Л., Чжоу, К., Ю, Ч.-В., и Чайкам, В. (2008). HDA6 необходим для ответа жасмоната, старения и цветения у Arabidopsis . Дж.Exp. Бот. 59, 225–234.
Pubmed Аннотация | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Wu, X., Oh, M.-H., Schwarz, E., Larue, C.T., Sivaguru, M., Imai, B.S, et al. (2011). Ацетилирование лизина является широко распространенной модификацией различных белков в Arabidopsis . Plant Physiol. 155, 1769–1778.
Pubmed Аннотация | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Ямакура, Ф., Така, Х., Фудзимура, Т., и Мураяма, К. (1998).Инактивация супероксиддисмутазы марганца человека пероксинитритом вызывается исключительным нитрованием тирозина 34 до 3-нитротирозина. J. Biol. Chem. 273, 14085–14089.
Pubmed Аннотация | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Yu, C.-W., Liu, X., Luo, M., Chen, C., Lin, X., Tian, G., et al. (2011). HISTONE DEACETYLASE6 взаимодействует с ЦВЕТОЧНЫМ ЛОКУСОМ D и регулирует цветение у Arabidopsis . Plant Physiol. 156, 173–184.
Pubmed Аннотация | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Чжао, X., Леон, И. Р., Бак, С., Могенсен, М., Вжесински, К., Хойлунд, К. и др. (2011). Фосфопротеомный анализ функциональных митохондрий, выделенных из мышц покоящегося человека, показывает обширное фосфорилирование белковых комплексов и ферментов внутренней мембраны. Мол. Клетка. Протеомика 10, M110.000299.
Pubmed Аннотация | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Нетрадиционные посттрансляционные модификации в иммунологической передаче сигналов
Kawai, T. & Akira, S.Толл-подобные рецепторы и их взаимодействие с другими врожденными рецепторами при инфекции и иммунитете. Иммунитет 34 , 637–650 (2011).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Oeckinghaus, A., Hayden, M.S. И Гош, С. Перекрестные помехи в сигнальных путях NF-κB. Nat. Иммунол. 12 , 695–708 (2011).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
О’Ши Дж.J. & Plenge, R. Сигнальные молекулы JAK и STAT в иммунорегуляции и иммуноопосредованных заболеваниях. Иммунитет 36 , 542–550 (2012).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Мюллер, М.Р. и Рао, А. NFAT, иммунитет и рак: фактор транскрипции достигает зрелости. Nat. Rev. Immunol. 10 , 645–656 (2010).
PubMed Google ученый
Черный, J.К., Ван Речем, К. и Ветстин, Дж. Р. Динамика метилирования лизина гистонов: установление, регуляция и биологическое воздействие. Мол. Ячейка 48 , 491–507 (2012).
CAS PubMed Google ученый
Мартин, К. и Чжан, Ю. Разнообразные функции метилирования гистонового лизина. Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 6 , 838–849 (2005).
CAS PubMed Google ученый
Bossen, C., Mansson, R. & Murre, C. Топология хроматина и регуляция сборки рецепторов антигена. Annu. Rev. Immunol. 30 , 337–356 (2012).
CAS PubMed Google ученый
Канно, Ю., Вахеди, Г., Хирахара, К., Синглтон, К. и О’Ши, Дж. Дж. Транскрипционный и эпигенетический контроль спецификации Т-хелперных клеток: молекулярные механизмы, лежащие в основе обязательств и пластичности. Annu. Rev. Immunol. 30 , 707–731 (2012).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Натоли, Г. Поддержание клеточной идентичности посредством глобального контроля геномной организации. Иммунитет 33 , 12–24 (2010).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Кедр, Х. и Бергман, Ю. Эпигенетика развития гемопоэтических клеток. Nat. Rev. Immunol. 11 , 478–488 (2011).
CAS PubMed Google ученый
Bedford, M.T. Краткий обзор метилирования аргинина. J. Cell Sci. 120 , 4243–4246 (2007).
CAS PubMed Google ученый
Zurita-Lopez, C.I., Sandberg, T., Kelly, R. & Clarke, S.G. Человеческий протеин-аргининметилтрансфераза 7 (PRMT7) представляет собой фермент типа III, образующий омега-NG-монометилированные остатки аргинина. J. Biol. Chem. 287 , 7859–7870 (2012).
Bedford, M.T. и другие. Метилирование аргинина ингибирует связывание богатых пролином лигандов с доменами с гомологией Src 3, но не с WW. J. Biol. Chem. 275 , 16030–16036 (2000).
CAS PubMed Google ученый
Levy, D. et al. Метилирование лизина субъединицы NF-κB RelA с помощью SETD6 связывает активность гистон-метилтрансферазы GLP в хроматине с тонической репрессией передачи сигналов NF-κB. Nat. Иммунол. 12 , 29–36 (2011). Эта статья идентифицирует RelA (p65) как субстрат PKMT SETD6, который препятствует управляемой RelA транскрипции, и демонстрирует, что SETD6-зависимое метилирование RelA предотвращает его ассоциацию с активатором транскрипции GLP .
CAS PubMed Google ученый
Ea, C.K. И Балтимор Д. Регулирование активности NF-κB посредством монометилирования лизина p65. Proc. Natl. Акад. Sci. США 106 , 18972–18977 (2009).
CAS PubMed Google ученый
Lu, T. et al. Регулирование NF-κB посредством NSD1 / FBXL11-зависимого обратимого метилирования лизина p65. Proc. Natl. Акад. Sci. США 107 , 46–51 (2010).
CAS PubMed Google ученый
Lu, T. et al. Роль метилирования лизина NF-κB в дифференциальной регуляции генов. Proc. Natl. Акад. Sci. США 110 , 13510–13515 (2013).
CAS PubMed Google ученый
Yang, J. et al. Обратимое метилирование связанного с промотором STAT3 ферментами, модифицирующими гистоны. Proc. Natl. Акад. Sci. США 107 , 21499–21504 (2010).
CAS PubMed Google ученый
Бланше, Ф., Кардона, А., Летимье, Ф.А., Хершфилд, М.С. & Acuto, О. Костимулирующий сигнал CD28 индуцирует метилирование протеина аргинина в Т-клетках. J. Exp. Med. 202 , 371–377 (2005). Этот отчет демонстрирует, что метилирование аргинина индуцируется после колигирования TCR и CD28 .
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Фатман, Дж. У. и другие. NIP45 контролирует величину ответа Т-хелперных клеток 2 типа. Proc. Natl. Акад. Sci. США 107 , 3663–3668 (2010).
CAS Google ученый
Mowen, K.A., Schurter, B.T., Fathman, J.W., David, M. & Glimcher, L.H. Метилирование NIP45 аргинином модулирует экспрессию генов цитокинов в эффекторных Т-лимфоцитах. Мол. Ячейка 15 , 559–571 (2004).
CAS PubMed Google ученый
Инфантино, С.и другие. Метилирование аргинина рецептора антигена В-клеток способствует дифференцировке. J. Exp. Med. 207 , 711–719 (2010).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Stark, G.R. И Дарнелл, Дж. Э. Младший. Путь JAK-STAT в двадцать лет. Иммунитет 36 , 503–514 (2012).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Абрамович, С., Yakobson, B., Chebath, J. & Revel, M. Протеин-аргининметилтрансфераза связывается с внутрицитоплазматическим доменом цепи IFNAR1 в рецепторе интерферона типа I. EMBO J. 16 , 260–266 (1997).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Müller, P., Kuttenkeuler, D., Gesellchen, V., Zeidler, M.P. И Бутрос, М. Идентификация компонентов передачи сигналов JAK / STAT с помощью РНК-интерференции по всему геному. Nature 436 , 871–875 (2005).
PubMed Google ученый
Поллак, Б.П. и другие. Человеческий гомолог дрожжевых белков Skb1 и Hsl7p взаимодействует с киназами Jak и обладает активностью протеинметилтрансферазы. J. Biol. Chem. 274 , 31531–31542 (1999).
CAS PubMed Google ученый
Моуэн, К.A. et al. Метилирование STAT1 аргинином модулирует IFNα / β-индуцированную транскрипцию. Cell 104 , 731–741 (2001).
CAS PubMed Google ученый
Komyod, W., Bauer, U.M., Heinrich, P.C., Haan, S. & Behrmann, I. Метилированы ли STATS аргинином? J. Biol. Chem. 280 , 21700–21705 (2005).
CAS PubMed Google ученый
Ро, Дж., Choi, S., Seong, YR, Choi, J. & Im, DS Остаток аргинина-1493 в мотиве IV QRRGRTGR1493G геликазного домена NS3 вируса гепатита C важен для метилирования белка NS3 с помощью протеин-аргининметилтрансферазы 1. J .Virol. 75 , 8031–8044 (2001).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Chen, W., Daines, M.O. И Херши, Г. Метилирование STAT6 модулирует фосфорилирование STAT6, ядерную транслокацию и ДНК-связывающую активность. J. Immunol. 172 , 6744–6750 (2004).
CAS PubMed Google ученый
Iwasaki, H. et al. Нарушение протеина аргинин-N-метилтрансферазы 2 регулирует передачу сигналов лептина и вызывает похудание in vivo за счет потери метилирования STAT3. Circ. Res. 107 , 992–1001 (2010).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Duong, F.Х., Филипович М., Триподи М., Ла Моника Н. и Хайм М. Вирус гепатита С подавляет передачу сигналов интерферона за счет активации протеинфосфатазы 2А. Гастроэнтерология 126 , 263–277 (2004).
CAS PubMed Google ученый
Chen, D. et al. Регуляция транскрипции протеин-метилтрансферазой. Наука 284 , 2174–2177 (1999).
CAS PubMed Google ученый
Ли Ю.H. & Stallcup, M.R. Мини-обзор: метилирование аргинина белков негистоновых белков в регуляции транскрипции. Мол. Эндокринол. 23 , 425–433 (2009).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Covic, M. et al. Аргининметилтрансфераза CARM1 является промотор-специфическим регулятором экспрессии NF-κB-зависимых генов. EMBO J. 24 , 85–96 (2005). Эта статья показывает, что CARM1 регулирует экспрессию генов, кодирующих воспалительные молекулы .
CAS PubMed Google ученый
Anderson, P. Посттранскрипционные регулоны координируют инициирование и разрешение воспаления. Nat. Rev. Immunol. 10 , 24–35 (2010).
CAS PubMed Google ученый
Li, H. et al. Липополисахарид-индуцированное метилирование HuR, белка, стабилизирующего мРНК, с помощью CARM1. Коактиватор-ассоциированная аргининметилтрансфераза. J. Biol. Chem. 277 , 44623–44630 (2002).
CAS PubMed Google ученый
Ядав Н. и др. Специфические дефекты метилирования белков и нарушения экспрессии генов у мышей с дефицитом аргининметилтрансферазы 1, ассоциированных с коактиватором. Proc. Natl. Акад. Sci. США 100 , 6464–6468 (2003).
CAS PubMed Google ученый
Ли, Дж.и другие. Ассоциированная с коактиватором аргининметилтрансфераза 1 регулирует кроветворение плода и развитие тимоцитов. J. Immunol. 190 , 597–604 (2013).
CAS PubMed Google ученый
Куо, А.Дж. и другие. NSD2 связывает диметилирование гистона h4 по лизину 36 с онкогенным программированием. Мол. Ячейка 44 , 609–620 (2011).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Мартинес-Гарсия, Э.и другие. Гистон-метилтрансфераза MMSET переключает глобальное метилирование гистонов и изменяет экспрессию генов в t (4; 14) клетках множественной миеломы. Кровь 117 , 211–220 (2011).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
McCabe, M.T. и другие. Ингибирование EZh3 как терапевтическая стратегия лимфомы с мутациями, активирующими EZh3. Природа 492 , 108–112 (2012). Эта статья демонстрирует ингибирование мутантных онкогенных белков EZh3 с помощью селективных ингибиторов, что предполагает потенциальную терапевтическую стратегию для некоторых злокачественных новообразований .
CAS PubMed Google ученый
Chung, J. et al. Ингибирование протеин-аргининметилтрансферазы 5 (PRMT5) вызывает гибель клеток лимфомы за счет реактивации пути подавления опухолевого супрессора ретинобластомы и подавления репрессорного комплекса 2 (PRC2) polycomb. J. Biol. Chem. 288 , 35534–35547 (2013).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Pal, S.и другие. Низкие уровни miR-92b / 96 индуцируют трансляцию PRMT5 и метилирование h4R8 / h5R3 в лимфоме из клеток мантии. EMBO J. 26 , 3558–3569 (2007).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Wang, L., Pal, S. & Sif, S. Протеин-аргининметилтрансфераза 5 подавляет транскрипцию опухолевых супрессоров семейства RB в клетках лейкемии и лимфомы. Мол. Клетка. Биол. 28 , 6262–6277 (2008).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Лю Ф. и др. JAK2V617F-опосредованное фосфорилирование PRMT5 подавляет его активность метилтрансферазы и способствует миелопролиферации. Cancer Cell 19 , 283–294 (2011).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Хелин, К. и Дханак, Д. Белки хроматина и их модификации как мишени для лекарств. Природа 502 , 480–488 (2013).
CAS PubMed Google ученый
Cheung, N., Chan, L.C., Thompson, A., Cleary, M.L. & So, C.W. Онкогенез, зависимый от аргинин-метилтрансферазы. Nat. Cell Biol. 9 , 1208–1215 (2007). Эта статья показывает, что слияние PRMT1 с MLL достаточно, чтобы управлять злокачественными новообразованиями .
CAS PubMed Google ученый
О’Брайен, К.B. et al. CARM1 необходим для надлежащего контроля пролиферации и дифференцировки легочных эпителиальных клеток. Разработка 137 , 2147–2156 (2010).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Vossenaar, E.R., Zendman, A.J., van Venrooij, W.J. & Pruijn, G.J. PAD, растущее семейство цитруллинирующих ферментов: гены, особенности и участие в заболеваниях. Bioessays 25 , 1106–1118 (2003).
CAS PubMed Google ученый
Дьёрдь, Б., Тот, Э., Тарча, Э., Фалус, А., Бузас, Э.И. Цитруллинирование: посттрансляционная модификация здоровья и болезней. Внутр. J. Biochem. Cell Biol. 38 , 1662–1677 (2006).
PubMed Google ученый
Méchin, M.C. и другие. Обновленная информация о пептидиларгинин-деиминазах и деструкции в физиологии кожи и тяжелых заболеваниях человека. Внутр. J. Cosmet. Sci. 29 , 147–168 (2007).
PubMed Google ученый
Arita, K. et al. Структурная основа активации человеческого PAD4, индуцированной Ca 2+ . Nat. Struct. Мол. Биол. 11 , 777–783 (2004).
CAS PubMed Google ученый
Накаяма-Хамада, М. и др. Сравнение ферментативных свойств hPADI2 и hPADI4. Biochem. Биофиз. Res. Commun. 327 , 192–200 (2005).
CAS PubMed Google ученый
Foulquier, C. et al. Пептидиларгининдеиминаза типа 2 (PAD-2) и PAD-4, но не PAD-1, PAD-3 и PAD-6 экспрессируются в синовиальной оболочке ревматоидного артрита в тесной связи с воспалением тканей. Arthritis Rheum. 56 , 3541–3553 (2007).
CAS PubMed Google ученый
Аранджелович, С., Маккенни, К.Р., Леминг, С.С., Моуэн, К.А. АТФ индуцирует зависимое от аргининдезиминазы 2 цитруллинирование в тучных клетках через пуринергический рецептор P2X7. J. Immunol. 189 , 4112–4122 (2012).
Lee, H.J. et al. Пептидиларгининдезиминаза 2 подавляет ингибирующую активность киназы κB в макрофагах RAW 264.7, стимулированных липополисахаридами. J. Biol. Chem. 285 , 39655–39662 (2010).
CAS PubMed Google ученый
Перкинс, Н.D. Интеграция клеточных сигнальных путей с функцией NF-κB и IKK. Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 8 , 49–62 (2007).
CAS PubMed Google ученый
Kono, H. & Rock, K.L. Как умирающие клетки предупреждают иммунную систему об опасности. Nat. Rev. Immunol. 8 , 279–289 (2008).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Атараши, К.и другие. АТФ управляет дифференцировкой собственных пластинок Th27 клеток. Природа 455 , 808–812 (2008).
CAS PubMed Google ученый
Листер, М.Ф. и другие. Роль пуринергического рецептора P2X7 в воспалении. J. Inflamm. (Лондон) 4 , 5 (2007).
Google ученый
Flannagan, R.S., Cosio, G. & Grinstein, S.Антимикробные механизмы фагоцитов и стратегии уклонения от бактерий. Nat. Rev. Microbiol. 7 , 355–366 (2009).
CAS PubMed Google ученый
Nauseef, W.M. Как нейтрофилы человека убивают и разлагают микробы: комплексный взгляд. Immunol. Ред. 219 , 88–102 (2007).
CAS PubMed Google ученый
Бринкманн, В.и другие. Внеклеточные ловушки нейтрофилов убивают бактерии. Наука 303 , 1532–1535 (2004).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Hemmers, S., Teijaro, J.R., Arandjelovic, S. & Mowen, K.A. PAD4-опосредованное образование внеклеточной ловушки нейтрофилов не требуется для иммунитета против инфекции гриппа. PLoS ONE 6 , e22043 (2011).
Li, P.и другие. PAD4 необходим для антибактериального врожденного иммунитета, опосредованного внеклеточными ловушками нейтрофилов. J. Exp. Med. 207 , 1853–1862 (2010). Это первая статья, демонстрирующая важность PAD4 для формирования NET .
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Wang, Y. et al. Гиперцитруллинирование гистонов опосредует деконденсацию хроматина и образование внеклеточной ловушки нейтрофилов. J. Cell Biol. 184 , 205–213 (2009).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Buono, C. et al. Дефицит T-bet снижает атеросклероз и изменяет антиген-специфические иммунные ответы бляшек. Proc. Natl. Акад. Sci. США 102 , 1596–1601 (2005).
CAS PubMed Google ученый
Клареског, Л., Роннелид, Дж., Лундберг, К., Падюков, Л. и Альфредссон, Л. Иммунитет к цитруллинированным белкам при ревматоидном артрите. Annu. Rev. Immunol. 26 , 651–675 (2008).
CAS PubMed Google ученый
Garcia-Romo, G.S. et al. Сетчатые нейтрофилы являются основными индукторами продукции IFN типа I при системной красной волчанке у детей. Sci. Пер. Med. 3 , 73ra20 (2011).
PubMed PubMed Central Google ученый
Crome, S.Q., Wang, A.Y. И Левингс, М. Серия трансляционных мини-обзоров клеток Th27: функция и регуляция Т-хелперов 17 человека при здоровье и болезнях. Clin. Exp. Иммунол. 159 , 109–119 (2010).
Кидд, Б.А. и другие. Распространение эпитопа на цитруллинированные антигены на мышиных моделях аутоиммунного артрита и демиелинизации. Arthritis Res. Ther. 10 , R119 (2008).
PubMed PubMed Central Google ученый
Wood, D.D. и другие. Миелиновая локализация пептидиларгининдезиминаз 2 и 4: сравнение активностей PAD2 и PAD4. Lab. Инвестировать. 88 , 354–364 (2008).
CAS PubMed Google ученый
Москарелло, М.А., Прицкер, Л., Мастронарди, Ф. И Вуд, Д. Пептидиларгининдезиминаза: фактор-кандидат при демиелинизирующем заболевании. J. Neurochem. 81 , 335–343 (2002).
CAS PubMed Google ученый
Asaga, H., Akiyama, K., Ohsawa, T. & Ishigami, A. Повышенная и специфичная для типа II экспрессия пептидиларгининдезиминазы в активированной микроглии, но не в гиперпластических астроцитах после вызванной каиновой кислотой нейродегенерации у крыс головной мозг. Neurosci. Lett. 326 , 129–132 (2002).
CAS PubMed Google ученый
Sambandam, T. et al. Повышение уровня пептидиларгининдезиминазы II типа в гипоксических астроцитах. Biochem. Биофиз. Res. Commun. 325 , 1324–1329 (2004).
CAS PubMed Google ученый
Акияма, К., Сакураи, Ю., Асу, Х.& Сэншу, Т. Локализация пептидиларгининдезиминазы типа II в незрелых олигодендроцитах, специфичных для стадии, из полушария головного мозга крысы. Neurosci. Lett. 274 , 53–55 (1999).
CAS PubMed Google ученый
Musse, A.A. и другие. Сверхэкспрессия пептидиларгининдезиминазы 2 (PAD2) у трансгенных мышей приводит к потере миелина в центральной нервной системе. Dis Model Mech 1 , 229–240 (2008).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Raijmakers, R. et al. Экспериментальная индукция аутоиммунного энцефаломиелита у мышей с нокаутом пептидиларгининдезиминазы 2. J. Comp. Neurol. 498 , 217–226 (2006).
CAS PubMed Google ученый
Masson-Bessière, C. et al. Основными синовиальными мишенями аутоантител к антифлаггрину, специфичным для ревматоидного артрита, являются деиминированные формы α- и β-цепей фибрина. J. Immunol. 166 , 4177–4184 (2001). Это исследование показывает, что аутоантитела к кератину и филаггрину, обнаруженные у пациентов с РА, распознают эпитопы, содержащие цитруллин .
PubMed Google ученый
Hill, J.A. и другие. Артрит, индуцированный посттрансляционно модифицированным (цитруллинированным) фибриногеном у трансгенных мышей DR4-IE. J. Exp. Med. 205 , 967–979 (2008).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Кун, К.А. и другие. Антитела против цитруллинированных белков усиливают повреждение тканей при экспериментальном аутоиммунном артрите. J. Clin. Инвестировать. 116 , 961–973 (2006).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Lundberg, K. et al. Цитруллинированные белки обладают повышенной иммуногенностью и артритогенностью, и их присутствие в суставах, пораженных артритом, коррелирует с тяжестью заболевания. Arthritis Res. Ther. 7 , R458 – R467 (2005).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Suzuki, A. et al. Функциональные гаплотипы PADI4, кодирующие цитруллинирующий фермент пептидиларгининдеиминазу 4, связаны с ревматоидным артритом. Nat. Genet. 34 , 395–402 (2003). Эта статья идентифицирует PADI4 как ген, связанный с восприимчивостью к RA .
CAS PubMed Google ученый
Eyre, S. et al. Генетическое картирование с высокой плотностью выявляет новые локусы восприимчивости к ревматоидному артриту. Nat. Genet. 44 , 1336–1340 (2012).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Zhao, X. et al. Циркулирующие иммунные комплексы содержат цитруллинированный фибриноген при ревматоидном артрите. Arthritis Res. Ther. 10 , R94 (2008).
PubMed PubMed Central Google ученый
Yoshida, M. et al. Аутоиммунитет к цитруллинированному коллагену II типа при ревматоидном артрите. Мод. Ревматол. 16 , 276–281 (2006).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Джонс, Дж. Э., Кози, К.П., Накли, Б., Слэк-Нойес, Дж. Л. и Томпсон, П. Р. Протеин аргининдеиминаза 4 (PAD4): текущее понимание и будущий терапевтический потенциал. Curr. Opin. Drug Discov. Devel. 12 , 616–627 (2009).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Dwivedi, N. et al. Аутоантитела к синдрому Фелти связываются с деиминированными гистонами и внеклеточными ловушками нейтрофилов. Arthritis Rheum. 64 , 982–992 (2012).
CAS PubMed Google ученый
Förstermann, U. et al. Изоформы синтазы оксида азота. Характеристика и очистка от разных типов клеток. Biochem. Pharmacol. 42 , 1849–1857 (1991).
PubMed Google ученый
Benhar, M., Forrester, M.T. И Стамлер, Дж.С. Денитрозилирование белков: ферментативные механизмы и клеточные функции. Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 10 , 721–732 (2009).
CAS PubMed Google ученый
Цой Ю.Б. и другие. Молекулярные основы модуляции ионных каналов, связанных с рецептором NMDA, с помощью S-нитрозилирования. Nat. Neurosci. 3 , 15–21 (2000).
CAS PubMed Google ученый
Уэхара, Т.и другие. S-нитрозилированная протеин-дисульфид-изомераза связывает неправильную укладку белков с нейродегенерацией. Nature 441 , 513–517 (2006).
CAS PubMed Google ученый
Doulias, P.T. и другие. Структурное профилирование эндогенных остатков S-нитрозоцистеина выявляет уникальные особенности, которые учитывают различные механизмы S-нитрозилирования белка. Proc. Natl. Акад. Sci. США 107 , 16958–16963 (2010).
CAS PubMed Google ученый
Янг, Ю., Фанг, С., Дженсен, Дж. П., Вайсман, А.М. И Эшвелл, Дж. Д. Убиквитин-протеинлигазная активность IAP и их деградация в протеасомах в ответ на апоптотические стимулы. Наука 288 , 874–877 (2000).
CAS PubMed Google ученый
Накамура Т. и др. Транснитрозилирование XIAP регулирует каспазозависимую гибель нейрональных клеток. Мол. Ячейка 39 , 184–195 (2010). Эта статья демонстрирует, что NO реагирует с XIAP путем S-нитрозилирования его домена RING, что ингибирует его лигазу E3 и антиапоптотическую активность .
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Hara, M.R. et al. S-нитрозилированный GAPDH инициирует апоптотическую гибель клеток путем ядерной транслокации после связывания Siah2. Nat. Cell Biol. 7 , 665–674 (2005).
CAS PubMed Google ученый
Ryu, I.H. & Do, S.I. Денитрозилирование S-нитрозилированного OGT запускается при LPS-стимулированном врожденном иммунном ответе. Biochem. Биофиз. Res. Commun. 408 , 52–57 (2011).
CAS PubMed Google ученый
Seth, D. & Stamler, J.S. СНО-протеом: причинно-следственная связь и классификации. Curr. Opin. Chem. Биол. 15 , 129–136 (2011).
CAS PubMed Google ученый
MacMillan-Crow, L.A. & Thompson, J.A. Модификации тирозина и инактивация мутанта супероксиддисмутазы марганца активного центра (Y34F) пероксинитритом. Arch. Biochem. Биофиз. 366 , 82–88 (1999).
CAS PubMed Google ученый
Редондо-Хоркахо, М.и другие. Циклоспорин А-индуцированное нитрование тирозина 34 MnSOD в эндотелиальных клетках: роль митохондриального супероксида. Cardiovasc. Res. 87 , 356–365 (2010).
CAS PubMed Google ученый
Llovera, M., Pearson, J.D., Moreno, C. & Riveros-Moreno, V. Нарушение ответа на интерферон-γ в активированных макрофагах из-за нитрования тирозина STAT1 эндогенным оксидом азота. руб. J. Pharmacol. 132 , 419–426 (2001).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Birnboim, HC, Lemay, AM, Lam, DK, Goldstein, R. & Webb, JR Передний край: пептиды, ограниченные MHC класса II, содержащие ассоциированный с воспалением маркер 3-нитротирозин, ускользают от центральной толерантности и вызывают устойчивый клеточно-опосредованный иммунный ответ. J. Immunol. 171 , 528–532 (2003).
CAS PubMed Google ученый
Херцог, Дж., Маэкава, Ю., Чиррито, Т.П., Иллиан, Б.С. & Unanue, E.R. Активированные антигенпрезентирующие клетки отбирают и представляют химически модифицированные пептиды, распознаваемые уникальными CD4 Т-клетками. Proc. Natl. Акад. Sci. США 102 , 7928–7933 (2005).
CAS PubMed Google ученый
Nagaraj, S. et al. Измененное распознавание антигена является механизмом толерантности Т-лимфоцитов CD8 + при раке. Nat.Med. 13 , 828–835 (2007).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Кузаридес Т. Модификации хроматина и их функции. Cell 128 , 693–705 (2007).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Haberland, M., Montgomery, R.L. & Olson, E.N. Многие роли гистоновых деацетилаз в развитии и физиологии: значение для болезни и терапии. Nat. Преподобный Жене. 10 , 32–42 (2009).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Chi, H. & Flavell, R.A. Ацетилирование MKP-1 и контроль воспаления. Sci. Сигнал. 1 , pe44 (2008).
PubMed PubMed Central Google ученый
Чанг, Х.М. и другие. Для индукции экспрессии генов, стимулированной интерфероном, и противовирусных реакций требуется активность протеиндеацетилазы. Proc. Natl. Акад. Sci. США 101 , 9578–9583 (2004).
CAS PubMed Google ученый
Munshi, N. et al. Ацетилирование HMG I (Y) CBP отключает экспрессию IFN β, разрушая энхансому. Мол. Ячейка 2 , 457–467 (1998).
CAS PubMed Google ученый
Чен, Л.Ф., Му, Ю. и Грин, В.C. Ацетилирование RelA в отдельных сайтах регулирует различные ядерные функции NF-κB. EMBO J. 21 , 6539–6548 (2002).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Нусинзон, И. и Хорват, К.М. Интерферон-стимулированная транскрипция и врожденный противовирусный иммунитет требуют активности деацетилазы и гистондеацетилазы 1. Proc. Natl. Акад. Sci. США 100 , 14742–14747 (2003).
CAS PubMed Google ученый
Krämer, O.H. и другие. Ацетилирование Stat1 модулирует активность NF-κB. Genes Dev. 20 , 473–485 (2006).
PubMed PubMed Central Google ученый
Wang, R., Cherukuri, P. & Luo, J. Активация связывания и транскрипции ДНК, специфичной для последовательности Stat3, ацетилированием, опосредованным p300 / CREB-связывающим белком. J. Biol. Chem. 280 , 11528–11534 (2005).
CAS PubMed Google ученый
Юань, З.Л., Гуань, Ю.Дж., Чаттерджи, Д. и Чин, Ю.Э. Димеризация Stat3 регулируется обратимым ацетилированием одного остатка лизина. Наука 307 , 269–273 (2005). Эта статья демонстрирует, что STAT3 регулируется ацетилированием его остатков лизина .
CAS PubMed Google ученый
Бресник, Э.Х., Ли, Х.Ю., Фудзивара, Т., Джонсон, К. И Келес, С. Коммутаторы GATA как драйверы развития. J. Biol. Chem. 285 , 31087–31093 (2010).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Денглер, Х.С. и другие. Разные функции фактора транскрипции Foxo1 на различных стадиях дифференцировки В-клеток. Nat. Иммунол. 9 , 1388–1398 (2008).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Кердилес, Ю.M. et al. Foxo1 связывает хоминг и выживание наивных Т-клеток, регулируя L-селектин, CCR7 и рецептор интерлейкина 7. Nat. Иммунол. 10 , 176–184 (2009).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Кердилес, Ю.М. и другие. Факторы транскрипции Foxo контролируют развитие и функцию регуляторных Т-клеток. Иммунитет 33 , 890–904 (2010).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Хаякава, Ф.и другие. Функциональная регуляция GATA-2 ацетилированием. J. Leukoc. Биол. 75 , 529–540 (2004).
CAS PubMed Google ученый
Yamagata, T. et al. Ацетилирование GATA-3 влияет на выживание Т-клеток и возвращение во вторичные лимфоидные органы. EMBO J. 19 , 4676–4687 (2000).
CAS PubMed PubMed Central Google ученый
Калнан, Д.Р. и Брюне А. Код FoxO. Онкоген 27 , 2276–2288 (2008).
CAS PubMed Google ученый
Uhlmann, T. et al. Метод крупномасштабной идентификации метилирования аргинина белка. Мол. Клетка. Протеомика 11 , 1489–1499 (2012).
PubMed PubMed Central Google ученый
Промежуточное тело после опадения представляет собой внутриклеточную сигнальную органеллу, которая регулирует пролиферацию клеток
Промежуточные тела после опадения увеличивают пролиферацию клеток
Мы намереваемся определить функцию МБ после опадения и как / если они сигнализируют о влиянии на клеточные функции .С этой целью мы использовали клеточную линию HeLa, стабильно экспрессирующую MKLP1-GFP (хорошо зарекомендовавший себя маркер MB; дополнительный рис. 1D), что позволило нам использовать проточную цитометрию для обогащения интерфазных клеток, содержащих MB (+ GFP-MB), и сравнить их. в клетки HeLa без MB после отсасывания (-GFP-MB) (дополнительный рис. 1A-C). Чтобы определить, приводит ли накопление MB к изменениям в общей судьбе клеток, мы сравнили транскриптомы клеток + GFP-MB и –GFP-MB с использованием анализа mRNAseq. Интересно, что большинство активируемых генов, как известно, либо напрямую усиливают деление клеток, либо регулируют динамику актина и микротрубочек (рис.1а и дополнительные данные 1). Такие гены включают Ki67 , Aurora A , CenpE , ArhGAP11b и Plk1 , все из которых являются известными индикаторами пролиферации или гены, которые при сверхэкспрессии способствуют пролиферации клеток (для проверки qPCR см. Рис. 1E).
Хотя наш анализ транскриптома предположил, что накопление МБ после отсасывания увеличивает экспрессию генов, участвующих в пролиферации, он не исключил возможность того, что мы произвольно выбирали популяции, которые стохастически делились быстрее, тем самым накапливая больше МБ за счет быстрого деления.Чтобы решить эту проблему, мы разработали протокол очистки внеклеточных МБ после отсасывания, которые высвобождаются посредством симметричного отсечения от клеток HeLa, экспрессирующих MKLP1-GFP (рис. 1b, дополнительные рис. 2A, B). Поскольку ранее было показано, что одна из дочерних клеток может интернализовать МБ сразу после клеточного деления 9 , мы проверили, могут ли очищенные МБ в среде поглощаться другими интерфазными клетками. Мы добавили очищенные MB, содержащие MKLP1-GFP (GFP-MB), к клеткам HeLa и инкубировали в течение 3 часов с последующей промывкой средой для удаления любых несвязанных GFP-MB.Клетки HeLa легко усваивают очищенные GFP-MB (рис. 1c, дополнительный рис. 2D). Кроме того, клетки были способны интернализовать несколько МБ после отсоединения. Из всех ячеек, содержащих GFP-MB, 55,8% имели 1 МБ, 22,1% имели 2 МБ, 12,6% имели 3 МБ и 9,6% имели 4 МБ ( n = 95). Другие типы клеток, такие как клетки MDCK и клетки MDA-MB-231, также были способны интернализовать GFP-MB, очищенные из клеток HeLa (дополнительные рис. 2E и F).
Способность клеток интернализовать большие внеклеточные объекты обычно управляется механизмами, подобными фагоцитозу, и в настоящее время хорошо установлено, что эти подобные фагосомам органеллы обычно сливаются с лизосомами для быстрого разложения груза 21,22 .Чтобы проверить, быстро ли разрушаются GFP-MB, захваченные интерфазными клетками, мы инкубировали «подпитанные» клетки в течение различного количества раз и окрашивали их антителами против лизосомного / позднего эндосомного маркера CD63. Как и ожидалось, некоторые GFP-MB были окружены CD63-содержащей мембраной (рис. 1c), но даже через 24–48 часов после «кормления» мы все еще могли наблюдать MB, которые не были охвачены органеллами CD63 +, что указывает на то, что они не были деградировал до этого момента (рис. 1в, г). Чтобы дополнительно определить, могут ли интерфазные МБ удерживаться интерфазными клетками, мы инкубировали клетки HeLa в течение 3 часов с очищенными GFP-MB, а затем проследили судьбу этих МБ в течение 16 часов с помощью покадровой микроскопии.В то время как некоторые интернализованные МБ деградировали через несколько часов после интернализации (дополнительный рис. 2G, см. MB # 2), 57% интернализованных МБ GFP ( n = 14) все еще можно было наблюдать через 16 часов после инкубации ( Дополнительный рис. 2G, см. MB # 1).
Способность «подпитывать» интерфазные клетки МБ позволила нам напрямую проверить, могут ли МБ после отсасывания регулировать пролиферацию клеток, как предполагает наш анализ транскриптома. Мы «кормили» клетки HeLa GFP-MB, а затем анализировали их пролиферативную способность.Сначала мы инкубировали «подпитанные» клетки в течение 24 часов, а затем окрашивали на Ki67, классический маркер пролиферации. По сравнению с клетками -GFP-MB (клетки на том же покровном стекле, которые не интернализовали MB), клетки, содержащие два или более MB, имели значительно более высокие уровни Ki67 (рис. 2a). Затем мы окрашивали антитела к ацетилированному тубулину, чтобы оценить, сколько клеток в каждой популяции претерпевают митоз. Мы обнаружили, что более высокая фракция клеток, содержащих GFP-MB, находилась в митозе по сравнению с контрольными клетками, которые присутствовали на том же покровном стекле, но не интернализовали GFP-MB (рис.2б). Наконец, мы провели анализ клеточного цикла на основе проточной цитометрии, показавший, что клетки с GFP-MB имеют более высокое соотношение G2 / M к G1 (дополнительный рисунок 3G). Эти данные показывают, что интернализация GFP-MB стимулирует пролиферацию клеток HeLa.
Рис. 2Интернализация МБ после опадения стимулирует пролиферацию клеток. a, b Клетки HeLa инкубировали с очищенными GFP-MB в течение 3 часов с последующей промывкой и инкубацией в течение еще 24 часов. Затем клетки фиксировали и окрашивали анти-Ki67 (а ) или антиацетилированным тубулином (b ).Панель a показывает количественную оценку уровней Ki67 в каждой клетке, тогда как панель b показывает количественную оценку процента клеток в митозе (как определено по наличию митотического веретена). Показанные данные представляют собой средние значения и стандартные отклонения, полученные для 200 случайно выбранных клеток из трех независимых экспериментов для окрашивания Ki67 и четырех независимых экспериментов для количественной оценки митотического индекса (непарный двусторонний тест Стьюдента t ). Звездочки на изображениях ( и ) отмечают МБ после опадения. n показывает количество клеток, проанализированных для каждого состояния. c Клетки Hela, стабильно экспрессирующие mCherry-CAAX, получали MB, и клетки GFP-MB + идентифицировали с помощью флуоресцентной микроскопии. Неокормленные клетки использовали в качестве контроля. Клетки отслеживали с использованием чашек со стеклянным дном, а затем тестировали на их пролиферативную способность путем визуализации той же клетки через 7 дней после кормления. Показанные данные представляют собой средние значения и стандартные отклонения, полученные из четырех независимых экспериментов (непарный, двусторонний тест Стьюдента t ).d Клетки HeLa высевали при низкой плотности и выращивали в течение 72 часов с образованием колоний. Затем клетки инкубировали в течение 3 ч с очищенными GFP-MB. Затем способность интернализовать МБ быстро делящимися клетками (образованными большими колониями) сравнивали с медленно делящимися клетками (образованными небольшими колониями). Представленные данные представляют собой средние значения и стандартные отклонения, полученные в результате трех независимых экспериментов (непарный, двусторонний тест Стьюдента t ). и Клетки Hela с интернализованными GFP-MB выделяли путем сортировки в потоке.Затем клетки проверяли на их способность расти в мягком агаре. Представленные данные представляют собой средние значения и стандартные отклонения, полученные в результате трех независимых экспериментов (непарный, двусторонний тест Стьюдента t ). f Клетки MDA-MB-231 с интернализованными GFP-MB выделяли путем сортировки в потоке. Затем клетки проверяли на их пролиферативную способность. Представленные данные представляют собой средние значения и стандартные отклонения, полученные в трех независимых экспериментах (непарный, двусторонний t -тест Стьюдента)
Далее мы хотели определить, может ли накопление МБ после опадения также привести к увеличению пролиферации.Клетки HeLa, экспрессирующие mCherry-CAAX, высевали с низкой плотностью на чашки со стеклянным дном и питали GFP-MB. Идентифицировали отдельные клетки с GFP-MB или без них, и размер колонии оценивали через 7 дней. В соответствии с участием МБ в регуляции пролиферации, размер колоний, происходящих из клеток, содержащих GFP-MB, был больше, чем в контроле (клетки, которые не содержали GFP-MB; рис. 2c). Интернализация GFP-MB также увеличивает пролиферацию клеток MDA-MB-231, гарантируя, что эти эффекты не ограничиваются клетками HeLa (рис.2е). Для тестирования на онкогенность клетки, получавшие GFP-MB, сортировали в потоке в популяции с GFP-MB (+ GFP-MB) или без (-GFP-MB), а затем помещали в мягкий агар для тестирования на независимый от закрепления рост. Мы обнаружили, что через 14 дней после встраивания + GFP-MB имели более крупные и многочисленные колонии, чем -GFP-MB (рис. 2e, дополнительный рис. 5).
Наши данные показывают, что интернализация МБ приводит к увеличению пролиферативной способности. Однако альтернативная возможность состоит в том, что более быстро делящиеся клетки могут легче усваивать МБ.Чтобы проверить это, мы высевали клетки с очень низкой плотностью и позволяли им образовывать колонии. В этом анализе более крупные колонии представляют более быстро делящуюся субпопуляцию клеток HeLa, в то время как небольшие колонии представляют более медленно делящиеся клетки HeLa. Затем этим колониям скармливали GFP-MB и оценивали степень интернализации MB. Как показано на рис. 2d, клетки в больших колониях (быстрых делителях) интернализовали МБ с более низкой эффективностью. Затем мы проверили, может ли интернализация каких-либо крупных внеклеточных объектов (а не конкретно МБ) привести к повышенной пролиферации.Мы инкубировали клетки HeLa с флуоресцентными Escherichia coli BioParticles. Как показано на дополнительном рис. 2C, интернализация BioParticle не повторяет индуцированное MB увеличение пролиферации. Наконец, мы проверили, сохраняют ли + GFP-MB клетки более высокие скорости пролиферации после деградации MB. Чтобы определить это, мы инкубировали клетки HeLa с очищенными GFP-MB с последующей сортировкой клеток в популяции + GFP-MB и -GFP-MB. Клетки культивировали в течение 7 дней для гарантии разложения МБ с последующим измерением пролиферации.Как показано на дополнительном рис. 3В, не было различий в скоростях пролиферации, что свидетельствует о том, что клетки возвращаются к исходному состоянию пролиферации после того, как интернализованные МБ деградируют. Кроме того, также не было различий в интернализации очищенных GFP-MB, примененных к обеим популяциям клеток после 7-дневной инкубации (дополнительная фиг. 3A).
Для дальнейшего подтверждения того, что интернализация MB после опадения приводит к увеличению количества мРНК, необходимых для пролиферации, мы затем инкубировали клетки HeLa с очищенными GFP-MB с последующей сортировкой в потоке через 24 часа.Затем клетки с интернализованными GFP-MB или без них анализировали с помощью mRNAseq. В соответствии с нашей гипотезой, что интернализация постабсциссионных МБ приводит к стимуляции пролиферации, большая часть генов, которые, как известно, необходимы для пролиферации, были активированы (дополнительные данные 5A). Важно отметить, что гены, идентифицированные и проверенные в нашем первом анализе RNAseq, также были увеличены в клетках, содержащих интернализованные GFP-MB (дополнительные данные 5B). В совокупности эти данные показывают, что интернализованные МБ после опадения могут быть сигнальными органеллами, которые могут регулировать пролиферацию клеток и канцерогенный потенциал.В оставшейся части исследования мы будем называть эти сигнальные органеллы MB-содержащими сигнальными эндосомами или MBsomes.
Выступы, богатые актином, опосредуют интернализацию MB
Срединные тела, высвобождаемые во внеклеточное пространство во время симметричного отрыва, содержат мембранную оболочку, которая происходит из плазматической мембраны материнской клетки (рис. 1b) 9,16,23 . Следовательно, клетки могут интернализовать внеклеточные MB посредством слияния плазматической мембраны с мембранной оболочкой MB или путем поглощения MB посредством регулируемого, подобного фагоцитозу процесса, тем самым создавая двойные мембраносвязанные MBsomes.Чтобы проверить обе возможности, мы проанализировали интернализацию GFP-MB с использованием клеток HeLa, стабильно экспрессирующих mCherry-CAAX. Как показано на фиг. 3, GFP-MBs интернализуются посредством образования выступов, происходящих из плазматической мембраны (см. Стрелки на фиг. 3a). Чтобы лучше визуализировать эти мембранные выступы, мы инкубировали очищенные GFP-MB с клетками HeLa, а затем проанализировали MB, связанные с плазматической мембраной, с помощью 3D-томографии высокого разрешения. Как показано на рис. 3b, c, MB после отсоединения связываются с плазматической мембраной путем прикрепления к множественным выступам мембраны.
Рис. 3Внеклеточные МБ интернализуются по механизму, подобному фагоцитозу. a Клетки HeLa, стабильно экспрессирующие mCherry-CAAX, инкубировали с GFP-MB в течение 3 часов с последующей промывкой и инкубацией со средой при 37 o ° C в течение еще одного часа. Затем клетки фиксировали и анализировали под микроскопом. Стрелки указывают на мембранозные выступы, окружающие МБ во время интернализации. b, c Клетки HeLa инкубировали с GFP-MB в течение 3 часов. Затем клетки промывали и инкубировали еще 3 часа с последующим томографическим анализом.Стрелка в b (левое изображение) указывает на МБ. Стрелки в b указывают на электронно-плотную оболочку, связанную с сайтами, где MB связывается с интернализующейся клеточной плазматической мембраной. Правая панель в b показывает плазматическую мембрану и модель поверхности МБ, визуализированную на основе томографии. Панель в c показывает модель поверхности только для MB. Красным цветом отмечены участки взаимодействия МБ и плазматической мембраны. Масштабные полосы эквивалентны 500 нм. d – g Клетки HeLa инкубировали с GFP-MB в течение 3 часов.Затем клетки промывали и инкубировали еще 24 ч с последующим анализом CLEM / ЭМ тонких срезов. На панели e показано изображение МБ с большим увеличением, заключенное в рамку на изображении d . На панелях f и g показаны МБ из других ячеек. N-метки ядра. Черная стрелка указывает на внешнюю мембрану. Белая стрелка указывает на внутреннюю мембрану. Звездочками отмечены актин-подобные электронно-плотные пятна, связанные с интернализованными МБ. Масштабная линейка эквивалентна 1 мкм. Масштабные линейки на вставках и увеличенных изображениях эквивалентны 250 нм
Хотя наши данные демонстрируют, что МБ после опадения интернализуются по механизму, подобному фагоцитозу, а не напрямую сливаются с плазматической мембраной, все же возможно, что мембранная оболочка МБ может позже сливаются с мембранами эндоцитов, высвобождая МБ в цитоплазму.Чтобы проверить это, мы инкубировали клетки, экспрессирующие mCherry-CAAX, с GFP-MB с последующей промывкой и дополнительной 24-часовой инкубацией. Как показано на дополнительном рис. 3C, даже через 24 часа после интернализации мы все еще могли наблюдать содержащую mCherry-CAAX мембрану, окружающую МБ (дополнительный рис. 3E). Некоторые из этих мембраносвязанных MBs нацелены на деградацию, поскольку окружающая мембрана mCherry-CAAX также содержит лизосомальный маркер CD63 (рис. 1c, d). Однако, согласно нашим предыдущим данным, даже через 48 часов после кормления часть МБ окружена мембранами mCherry-CAAX, но не окрашивается на CD63 (рис.1c, d и дополнительный рис. 3C).
Поскольку флуоресценция GFP может быстро подавляться в кислых поздних эндосомах / лизосомах, возможно, что мы недооцениваем количество деградированных МБ. С этой целью мы скармливали клеткам HeLa GFP-MB и окрашивали клетки анти-CD63 и анти-GFP антителами через 24 часа. Удивительно, но мы смогли обнаружить флуоресценцию GFP во всех интернализованных МБ, даже если они были расположены в CD63-положительных поздних эндосомах / лизосомах (дополнительный рис. 4A). Эти данные снова предполагают, что МБ сохраняют мембранную оболочку, оставшуюся от делящейся клетки, по крайней мере в течение 24 часов и, вероятно, защищают MKLP1-GFP от подкисления.
Для дальнейшего подтверждения того, что постмитотические внеклеточные МБ были заключены в мембрану, оставшуюся от деления, МБ были выделены из клеток, экспрессирующих mCherry-CAAX, и окрашены антиацетилированными антителами к тубулину. Нам удалось показать, что mCherry-CAAX явно включает очищенные МБТ, богатые тубулином (дополнительный рисунок 3D). Наконец, мы создали клеточную линию HeLa, которая экспрессировала как mCherry-CAAX, так и MKLP1-GFP. МБ выделяли из этих клеток и «скармливали» нормальным клеткам HeLa; мы наблюдали, что сигнал MKLP1-GFP был охвачен mCherry-CAAX (дополнительный рис.3E).
Чтобы лучше локализовать интернализованные МБ, мы затем использовали корреляционную световую и электронную микроскопию (CLEM). С этой целью мы «кормили» клетки HeLa очищенными GFP-MB и фиксированными клетками путем замораживания под высоким давлением через 24 часа. Образцы были подготовлены для сохранения флуоресценции после заливки смолой для целевой электронной микроскопии тонких срезов. Флуоресценцию использовали для идентификации клеток, которые интернализовали МБ. Мы могли наблюдать интернализованные МБ, которые, по-видимому, окружены мембранами поглощающей клетки, а также мембраной от деления дочерней клетки (рис.3г – ж). В некоторых частях этих МБ мембраны были разделены достаточно далеко, чтобы увидеть, что мембраны, окружающие интернализованные МБ, по-видимому, состоят из внешней мембраны (вероятно, происходящей из интернализующей клетки) и внутренней мембраны (вероятно, ассоциированной с МБ мембраны) (рис. 3e– g; см. черные и белые стрелки). Взятые вместе, эти эксперименты предполагают, что внеклеточные МБ после отсасывания окружены мембраной, происходящей от делящейся клетки, и, будучи интернализованными, становятся еще более окруженными второй мембраной, происходящей из клетки, которая их поглотила.
Известно, что образование фагосомоподобных выступов плазматической мембраны управляется Rac1-зависимой локальной полимеризацией актина 22,24,25,26 . Предыдущие исследования подтвердили, что интернализация MB одной из дочерних клеток включает полимеризацию актина 9 . Кроме того, недавняя работа на эмбрионах C. elegans указывает на то, что Rac1 необходим для интернализации и деградации MB 16 . Таким образом, затем мы проверили, опосредует ли актин поглощение GFP-MB и образование MBsome, используя клетки HeLa, экспрессирующие LifeAct-mCherry.Как показано на рис. 4a, b, выступы и розетки актина можно легко наблюдать в местах интернализации GFP-MB. Сходные динамические актиновые розетки можно также наблюдать в месте интернализации GFP-MB с помощью покадровой микроскопии (Fig. 4c). Важно, что предварительная инкубация клеток с ингибитором Rac1 или цитохалазином D снижает интернализацию MB (фиг. 4d), дополнительно подтверждая, что Rac1-индуцированная полимеризация актина необходима для интернализации MB клетками HeLa после абсциссии (фиг. 4e).
Фиг.4Полимеризация актина опосредует фагоцитарную интернализацию МБ. a – c Клетки HeLa, стабильно экспрессирующие LifeAct-mCherry, инкубировали с GFP-MB в течение 3 часов. Затем клетки промывали и анализировали под микроскопом. Стрелки в a и b указывают на богатые актином выступы, окружающие MB во время интернализации. c Показывает покадровую динамику розетки актина во время интернализации MB. d Клетки HeLa, стабильно экспрессирующие LifeAct-mCherry, инкубировали с GFP-MB в течение 3 часов в присутствии или в отсутствие 10 мкМ цитохалазина D или 100 мкМ ингибитора Rac1.Затем клетки промывали и инкубировали еще 24 ч (без цитохалазина D или ингибитора Rac1). Количество клеток с интернализованными постмитотическими МБ определяли с помощью флуоресцентной микроскопии. Представленные данные представляют собой средние значения и стандартные отклонения, полученные в результате трех независимых экспериментов. n показывает количество клеток, проанализированных для каждого экспериментального условия (непарный двухсторонний тест Стьюдента t -тест). e Схематическое изображение предложенного механизма интернализации MB
PS и интегрины опосредуют пост-абсциссионное поглощение MB
Далее мы исследовали механизмы, необходимые для распознавания и интернализации MB.Чтобы идентифицировать белки MB, которые могут опосредовать этот процесс, мы выполнили протеомный анализ очищенных MB после отсоединения (дополнительные данные 2). Ранее опубликованный протеом MB использовал Triton-X 100 для извлечения MB из делящихся клеток, тем самым теряя мембранную оболочку в MB после опадения 27 . Мы проанализировали протеом постабсциссионных МБ, очищенных из среды в отсутствие детергентов (дополнительный рис. 2А). Как и ожидалось, протеомный анализ идентифицировал многие белки, которые, как известно, присутствуют в МБ, такие как тубулин, PLK1, MKLP1, Rab11, Rab35 и ESCRT-III (дополнительные данные 2).Важно отметить, что наш протеомный анализ MB также идентифицировал три белка, которые, как известно, опосредуют фагоцитоз, а именно CCN1, EDIL3 и MFG-E8 28,29,30 . Общность между этими тремя белками состоит в том, что все они могут действовать как молекулярные мостики, связываясь с PS и интегринами, и иногда их называют матричными рецепторами. PS, когда он экспрессируется на внешнем листке апоптотических клеток, может действовать как сигнал «съешь меня» для окружающих фагоцитов 31,32 . Одновременное связывание матрицеклеточных рецепторов с PS (на апоптотических телах) и интегринами (на фагоцитах) позволяет распознавать апоптотические тела, а также активировать механизм полимеризации актина, который приводит к поглощению апоптотических тел 28,30,33 .Важно отметить, что PS, как было обнаружено, обогащен MB во время цитокинеза, хотя неясно, находится ли он на внутренней или внешней листке плазматической мембраны 23 . Мы использовали очищенный рекомбинантный GST-меченный PS-связывающий фрагмент (PS-BD) из MFG-E8 (PS-BD; рис. 5a), чтобы проверить, обнаружен ли PS на внешней створке внеклеточных МБ. Как показано на фиг. 5f, PS присутствует во внешнем листке мембранной оболочки во внеклеточных очищенных GFP-MB. Затем мы проверили, обогащен ли PS во внешнем листке мембраны MB в клетках.Клетки инкубировали с GST-PS-BD, промывали, фиксировали и окрашивали анти-GST и анти-ацетилированными антителами к тубулину (для визуализации центрального веретена и МБ) (фиг. 5g). Примечательно, что мы обнаружили, что внеклеточные MB после опадения имеют высокие уровни PS в их наружной створке (фиг. 5g; звездочка) по сравнению с MB во время телофазы MB (фиг. 5g; стрелка). В то время как механизмы, которые опосредуют увеличение PS во внешней створке МБ после отсоединения, остаются неясными, наши данные предполагают, что МБ после отсоединения, вероятно, должны «созреть», чтобы позволить перевернуть PS на внешнюю створку, чтобы стать интернализацией – компетентный.Затем мы проверили, присутствует ли MFG-E8 в постабсцизионных МБ. В соответствии с нашими протеомными данными, MFG-E8 обогащен очищенными МБ после абсциссии по сравнению с клеточным лизатом (дополнительный рис. 2B). Как показано на дополнительном рис. 3F, мы также обнаружили, что MFG-E8 обогащен MB и сайтами контакта с плазматической мембраной, предполагая, что он может действовать как матрицеклеточный рецептор для распознавания MB.
Рис. 5PS, матрицеклеточные рецепторы и интегрины опосредуют связывание и интернализацию MB. – Рекомбинантный PS-связывающий домен из MFG-E8 (PS-BD) очищали и инкубировали с липосомами с или без PS. Затем липосомы осаждали центрифугированием и определяли уровни связанного PS-BD окрашиванием Кумасси. b , d , e Клетки HeLa или очищенные МБ предварительно инкубировали с рекомбинантным циклическим пептидом GST, PS-BD или RGD и связанным с ним RGE отрицательного контроля. Затем клетки инкубировали с МБ в течение 3 часов с последующей промывкой и инкубацией в течение 3 часов ( b и d ; для измерения связывания МБ) или 24 часов ( e для измерения интернализации МБ).Затем клетки фиксировали и подсчитывали количество МБ. Показанные данные представляют собой средние значения и стандартные отклонения, полученные в трех независимых экспериментах (односторонний дисперсионный анализ). c Клетки HeLa инкубировали в суспензии с RGD или его неактивным контрольным RGE. Затем клетки высевали на покровные стекла, покрытые фибронектином. Затем подсчитывали количество прикрепившихся клеток. Показанные данные представляют собой средние значения и стандартные отклонения, полученные в результате трех независимых экспериментов (односторонний дисперсионный анализ). f Очищенные GFP-MB инкубировали с рекомбинантным очищенным либо GST-PS-BD (левые панели), либо только GST (правые панели).Затем МБ осаждали центрифугированием, промывали, фиксировали и окрашивали антителами против GST (однофакторный дисперсионный анализ ANOVA). г клеток HeLa инкубировали с рекомбинантным очищенным GST-PS-BD, ресуспендированным в среде с добавлением сыворотки. Затем клетки промывали, фиксировали и окрашивали антителами против ацетилированного тубулина. Стрелка на изображениях указывает на митотический МБ. Звездочкой отмечены внеклеточные постмитотические МБ. Область в рамке отмечает часть изображения, показанную на вставках с большим увеличением ниже. Масштабная линейка на вставке эквивалентна 500 нм
Чтобы напрямую проверить, играют ли MFG-E8, PS и интегрины роли в распознавании и поглощении МБ, мы использовали два подхода.Во-первых, мы проверили необходимость PS для распознавания MB с помощью рекомбинантного GST-PS-BD, полученного из MFG-E8 (рис. 5a). Поскольку этот пептид MFG-E8 способен связываться с PS (на оболочке MB), но не с интегринами (на плазматической мембране HeLa), он должен ингибировать связывание и интернализацию MB. Чтобы проверить это, очищенные GFP-MB предварительно инкубировали с рекомбинантным GST-PS-BD, а затем «скармливали» клеткам HeLa. Для измерения связывания GFP-MB с плазматической мембраной клетки анализировали через 3 часа после кормления. Чтобы количественно определить количество интернализованных MBsomes, клетки анализировали через 24 часа после кормления.Как показано на фиг. 5b, e, GST-PS-BD ингибирует как связывание GFP-MB с плазматической мембраной HeLa, так и интернализацию и образование MBsomes, предполагая, что MB-ассоциированный PS играет роль во внеклеточном распознавании и поглощении MB.
Наш второй подход заключался в введении циленгитида (циклического пептида RGD) в клетки перед кормлением GFP-MB. Ранее опубликованные работы показали, что циленгитид предпочтительно связывается с парами интегринов αvβ3 и αvβ5 34,35 . Также известно, что эти пары интегринов связывают CCN1, EDIL3 и MFG-E8, матрицеклеточные рецепторы, идентифицированные в протеоме MB.Чтобы сначала подтвердить эффективность циленгитида в блокировании интегринов αvβ3 и αvβ5, мы предварительно обрабатывали клетки HeLa либо циленгитидом (называемым RGD), либо неактивным контрольным пептидом RGE. Затем клетки высевали на фибронектин, который, среди прочего, зависит от пар интегринов αvβ3 и αvβ5 для облегчения клеточной адгезии 35 . Клетки, обработанные RGD, были менее эффективны в связывании с фибронектином по сравнению с контролями RGE (фиг. 5c). Для оценки роли интегринов αvβ3 и αvβ5 в распознавании и поглощении GFP-MB клетки, выращенные на покрытых коллагеном покровных стеклах, предварительно обрабатывали контрольным пептидом RGD или RGE и инкубировали с очищенными GFP-MB.Еще раз клетки анализировали через 3 или 24 часа после кормления, чтобы проверить связывание GFP-MB с плазматической мембраной и интернализацию, соответственно. Как и в случае с GST-PS-BD, инкубация с пептидом RGD ингибировала связывание GFP-MB с плазматической мембраной (фиг. 5d), а также интернализацию и образование MBsomes (фиг. 5e).
Актин регулирует деградацию MBsome и передачу сигналов.
Остается неясным, как некоторые MBsomes уклоняются от деградации после интернализации. В настоящее время хорошо известно, что фагосомы обычно сливаются с лизосомами для разрушения их содержимого.Хотя молекулярный механизм, задерживающий деградацию MBsomes, остается неизвестным, мы заметили, что MBsomes часто (48% интернализованных MB) связаны с актиновыми пятнами (рис. 6a). Эти актиновые пятна являются не только свойством клеток HeLa, поскольку сходные пятна также можно было наблюдать в клетках MDA-MB-231 и 293T (дополнительные рисунки 2E и 4B). Эти актиновые пятна часто асимметричны и иногда имеют длинные актиновые хвосты, выступающие со стороны MBsome (Fig. 6b, Supplementary Fig. 4B).Кроме того, покадровая визуализация клеток HeLa, экспрессирующих LifeAct-mCherry, которым скармливали GFP-MB, показывает, что эти актиновые пятна и / или хвосты очень динамичны и постоянно полимеризуются / деполимеризуются на поверхности MBsome (рис. 6c, стрелки). . Динамическое образование этих асимметричных актиновых пятен коррелирует с перемещением MBsome в цитоплазме клетки (Fig. 6d and Supplementary Movie 3). Интересно, что электронно-плотные актин-подобные пятна также можно наблюдать около MBsomes, идентифицированных CLEM (рис.3д, звездочки).
Рис. 6Оболочки актина, связанные с MBsome, ингибируют деградацию MBsome. a , b Клетки HeLa инкубировали с очищенными GFP-MB в течение 3 часов. Затем клетки промывали и инкубировали еще 24 часа с последующей фиксацией и окрашиванием Alexa568-фаллоидином. Затем клетки визуализировали с помощью обычного эпифлуоресцентного микроскопа ( a ) или микроскопа сверхвысокого разрешения SIM ( b ). Стрелка в строке b указывает на участок актина, ассоциированный с MB. c , d Клетки, экспрессирующие mCherry-LifeAct, инкубировали с очищенными GFP-MB. Затем клетки промывали и инкубировали еще 24 часа. Динамику ассоциированного с MBsome актина ( c ) или внутриклеточную подвижность MBsome ( d ) анализировали с помощью покадровой микроскопии. Стрелки в c указывают на актин, ассоциированный с MB. Стрелки в d указывают на MBsomes. Прямоугольник в d отмечает часть изображения, которая использовалась для вставки в последний момент времени в покадровой серии.Шкала в коробке d соответствует 1 мкм. Клетки и HeLa сортировали в потоке на присутствие интернализованных GFP-MB через 24 ч после кормления. Затем клетки обрабатывали либо ДМСО, либо латрункулином А в течение 30 минут с последующей промывкой и инкубацией еще в течение 8 часов. Затем клетки фиксировали и анализировали на наличие MB-сомов (левая гистограмма) и CD63 + MB-сомов (правый график). Представленные данные представляют собой средние значения и стандартные отклонения, полученные в результате пяти независимых экспериментов (непарный двухсторонний тест Стьюдента t ). f Клетки HeLa сортировали в потоке на присутствие интернализованных GFP-MB через 24 часа после кормления. Затем клетки обрабатывали либо ДМСО, либо латрункулином А в течение 30 минут с последующей промывкой и инкубацией еще 72 часа для проверки пролиферации клеток. Представленные данные представляют собой средние значения и стандартные отклонения, полученные из шести независимых экспериментов (односторонний дисперсионный анализ). фагосома для предотвращения деградации лизосом 25 .В некоторых случаях эти бактерии способны перемещаться по клетке с помощью актин-зависимых механизмов 36 . Кроме того, недавно было показано, что сходные высокодинамичные оболочки актина могут также формироваться вокруг шариков, фагоцитируемых макрофагами, и что образование этих оболочек актина ингибирует слияние фагосом и лизосом 37 . Таким образом, мы исследовали, может ли потеря этих актиновых пятен привести к усилению деградации MBsome. С этой целью мы «скармливали» клетки HeLa GFP-MB с последующей промывкой и инкубацией в течение 20 часов, чтобы обеспечить интернализацию GFP-MB и образование MBsome.Затем клетки обрабатывали в течение 30 минут либо ДМСО, либо латрункулином А, агентом деполимеризации актина (LatA). (Рис. 6д). Затем клетки промывали и инкубировали еще 8 ч с последующей фиксацией. В соответствии с ролью актина в защите MBsomes от деградации, обработка LatA снижает количество MBsomes (Fig. 6e) и увеличивает количество MB, связанных с CD63-позитивными поздними эндосомами / лизосомами (Fig. 6e). Мы обнаружили, что лечение LatA может аннулировать эффекты индуцированной MBsome пролиферации из-за повышенной деградации MBsomes (рис.6е).
Интегрины EGFR и αVβ3 опосредуют передачу сигналов MBsome
Остающиеся у нас вопросы относятся к тому, как эти MBsomes передают сигналы для регуляции пролиферации клеток. Так как интернализованные МБ после отсасывания окружены двумя мембранами, передача сигналов может включать какой-то вид трансмембранного белка. Мы уже определили, что интегрины αvβ3 и / или αvβ5 важны для интернализации MBs после отсоединения, таким образом, мы затем поставили под вопрос, участвуют ли эти интегрины в передаче сигналов MBsome.Во-первых, мы проверили, присутствуют ли интегрины в сомах MB, используя антитела против интегрина αvβ3 или против αvβ5. Даже через 24 часа после интернализации MB сомы все еще содержали интегрины αvβ3, но не αvβ5 (рис. 7a, b). Чтобы определить, активированы ли все еще интернализованные интегрины αvβ3, мы окрашивали клетки антителами против фосфо-FAK, известного нижестоящего эффектора пути передачи сигнала интегрина. Как показано на фиг. 7c, d, MBsomes совместно локализованы с phospho-FAK, что указывает на то, что даже через 24 часа после интернализации интегрины αvβ3 все еще могут передавать сигналы от MBsomes.
Фиг.7αVβ3 и EGFR опосредуют передачу сигналов MBsome. a – d Клетки HeLa инкубировали с очищенными GFP-MB в течение 3 часов с последующей промывкой и еще одной инкубацией в течение 24 часов. Затем клетки фиксировали и окрашивали антителами против αVβ3 (a ), против αVβ5 (b ), антифосфо-FAK (d ). Панели в c показывают контрольное окрашивание, в которое не добавляли первичные антитела. Области, заключенные в рамку, отмечают часть изображения, показанную как изображение с большим увеличением на вставках справа.Масштабная линейка эквивалентна 1 мкм. Клетки и HeLa совместно инкубировали с очищенными GFP-MB и EGF-Alexa647 с последующей промывкой и еще одной инкубацией в течение 24 часов. Затем клетки фиксировали и анализировали совместную локализацию между MB и EGF. Стрелки указывают на MBsomes. f Клетки HeLa инкубировали совместно с очищенными GFP-MB и немеченым EGF с последующей промывкой и еще одной инкубацией в течение 24 часов. Затем клетки фиксировали и окрашивали антителами против фосфо-EGFR. Стрелки указывают на MBsomes. Масштабные линейки на вставках эквивалентны 2 мкм. г клеток HeLa инкубировали с очищенными GFP-MB. Затем клетки промывали и сортировали в потоке для разделения фракций с интернализованными GF-MB или без них. Затем равное количество клеток из каждой фракции высевали и инкубировали в течение 48 ч в присутствии или в отсутствие 10 мкМ ингибитора EGFR (эрлотиниба). Затем клетки снова промывали и инкубировали еще 48 часов с последующим подсчетом клеток для определения количества клеток. Представленные данные представляют собой средние значения и стандартные отклонения, полученные в трех независимых экспериментах (односторонний дисперсионный анализ)
Другая возможность состоит в том, что MB-сомы могут передавать сигналы через рецепторные тирозинкиназы (RTK).Было показано, что интегрины группируются с определенными RTK, особенно с EGFR 38,39 . Возможно, что после интернализации в MBsomes эти интегрин αvβ3 и кластеры EGFR могут оставаться активированными и передавать сигнал, влияющий на пролиферацию клеток. Чтобы проверить это, мы совместно инкубировали клетки HeLa с флуоресцентно меченными EGF (EGF-Alexa647) и GFP-MB. Затем клетки промывали и инкубировали в течение дополнительных 24 ч, чтобы дать возможность образования MBsome. 46,2% сомов MB все еще содержали EGF-Alexa647 через 24 часа, что позволяет предположить, что сомы MB могут содержать активные комплексы EGF-EGFR (рис.7д). В соответствии с этой идеей, MBsomes также колокализуется с активированным phospho-EGFR (Fig. 7f), и ни pEGFR, ни pFAK не могут быть обнаружены в очищенных постмитотических MBs (Supplementary Fig. 4C). Наконец, ингибирование EGFR с помощью эрлотиниба полностью блокировало индуцированное MB увеличение пролиферации клеток (фиг. 7g). Важно отметить, что наш анализ RNAseq показывает, что мРНК Cyclin B и Cyclin D активируются в клетках, содержащих интернализованные GFP-MB (дополнительные данные 4, 5B), и оба циклина, как известно, активируются во время индуцированной EGFR пролиферации.Взятые вместе, эти данные предполагают, что кластеризация RTK / интегрина и внутриклеточная активация могут быть одним из механизмов передачи сигналов MBsome, и что MBsome является органеллой, способной регулировать множество клеточных процессов, включая пролиферацию и зависящий от закрепления рост и выживание.
посттрансляционных модификаций рецепторов, связанных с G-белком, управляющих динамикой передачи сигналов в клетках в пространстве и времени
Визуальный обзор
Аннотация
G-белковые рецепторы (GPCR) представляют собой большое семейство, включающее> 800 рецепторов передачи сигналов, которые регулируют множество клеточных и физиологические реакции.GPCR участвуют во многих заболеваниях и представляют собой самый большой класс мишеней для лекарств. Хотя достижения в структуре и фармакологии GPCR улучшили открытие лекарств, регуляции функции GPCR с помощью различных посттрансляционных модификаций (PTM) уделялось минимальное внимание. Известно, что в клетках млекопитающих существует более 200 PTM, однако только о некоторых из них сообщалось о GPCR. Ранние исследования показали, что фосфорилирование является основным регулятором передачи сигналов GPCR, тогда как более поздние сообщения указали на функцию убиквитинирования, гликозилирования и пальмитоилирования в биологии GPCR.Хотя наши знания о фосфорилировании GPCR обширны, наши знания о модифицирующих ферментах, регуляции и функции других PTM GPCR ограничены. В этом обзоре мы предоставляем всесторонний обзор посттрансляционных модификаций GPCR, уделяя больше внимания новым открытиям. Мы обсуждаем субклеточное расположение и регуляторные механизмы, которые контролируют посттрансляционные модификации GPCR. Также представлены функциональные последствия недавно обнаруженных PTM GPCR на фолдинг рецептора, биосинтез, эндоцитарный транспорт, димеризацию, компартментализованную передачу сигналов и смещенную передачу сигналов.Далее выделены методы обнаружения и изучения PTM GPCR, а также перекрестных помех PTM. В заключение мы обсудим значение PTM GPCR для болезней человека и их важность для открытия лекарств.
Заявление о значении Посттрансляционная модификация рецепторов, связанных с G-белком (GPCR), контролирует все аспекты функции рецепторов; однако обнаружение и изучение различных типов модификаций GPCR ограничены. Полное понимание роли и механизмов, с помощью которых различные посттрансляционные модификации регулируют передачу сигналов и трафик GPCR, важно для понимания механизмов дисрегуляции при заболевании, а также для улучшения и уточнения разработки лекарств для GPCR.
Сноски
Эта работа поддержана Национальным институтом здравоохранения Национального института общих медицинских наук [Grants R35 GM GM127121, T32 GM007752] и Постдокторской премией Программы исследований связанных с табаком болезней Калифорнийского университета [T31FT1574].
https://doi.org/10.1124/pharmrev.120.000082.
- Авторские права © 2020 Американского общества фармакологии и экспериментальной терапии
Сигнал эпохи после Сноудена, новый iPhone блокирует N.S.A.
Джонатан Здзярски, исследователь безопасности, который преподавал правоохранительным органам курсы криминалистики по сбору данных с iPhone, считает, что система шифрования представляет собой серию шкафчиков. В более старой версии iOS всегда был по крайней мере один разблокированный шкафчик, в который Apple могла войти, чтобы захватить определенные файлы, такие как фотографии, историю звонков и заметки, в ответ на юридический ордер.
«Теперь они говорят:« Мы перестали пользоваться этим шкафчиком », – сказал г-н Здзярский.«Мы используем шкафчик, на котором на самом деле есть код, и если вы не знаете его, вы не сможете попасть внутрь. Если вы не отнесете к шкафчику кувалду, мы не доберемся до файлов ».
Новая система безопасности в iOS 8 защищает информацию, хранящуюся на самом устройстве, но не данные, хранящиеся в iCloud, облачном сервисе Apple. Таким образом, Apple по-прежнему сможет получать некоторую информацию о клиентах, хранящуюся в iCloud, в ответ на правительственные запросы.
Google также начал предоставлять своим пользователям больший контроль над своей конфиденциальностью.В телефонах с операционной системой Android от Google уже три года используется шифрование. Однако это не настройка по умолчанию, поэтому для шифрования своих телефонов пользователи должны зайти в свои настройки, включить его и подождать час или более, чтобы данные были зашифрованы.
Это должно измениться в следующей версии Android, выпуск которой запланирован на октябрь. По умолчанию у него будет шифрование, «поэтому вам даже не придется думать о его включении», – говорится в заявлении Google.
Представитель Google отказался комментировать слова Mr.Предположения Коми о том, что более надежное шифрование может помешать расследованиям правоохранительных органов.
Г-н Здзярский сказал, что опасения по поводу нового шифрования Apple, препятствующего соблюдению законов, кажутся чрезмерными. Он сказал, что у полиции еще есть много способов получить данные клиентов для расследования. В случае с жертвой похищения полиция по-прежнему может запрашивать информацию о записях звонков и информацию о геолокации у телефонных операторов, таких как AT&T и Verizon Wireless.
«Отказ от iPhone как одного источника, я не думаю, приведет к краху многих корпусов», – сказал он.«Существует множество других свидетельств из журналов вызовов, журналов электронной почты, iCloud, журналов Gmail. Они прослушивают весь Интернет ».
Уникальная передача сигналов MyD88 / TRAM после TLR2 / 6 распознавания консервативных вирусных архитектур приводит к противовирусному иммунитету и улучшению выведения вторичной бактериальной инфекции SBI). Недавно мы обнаружили, что противовирусный иммунный ответ, инициированный распознаванием экзогенного паттерна вирусной архитектуры, а именно паттерна повторяющихся белковых субъединиц (RPSP), приводит к улучшенному клиренсу
S.aureus во время SBI у мышей. RPSP, вероятно, консервативен во всех вирусах, что предполагает обобщенный способ распознавания вирусного паттерна, не специфичный для какого-либо одного вируса. Таким образом, мы идентифицировали RPSP как новый PAMP и обнаружили, что он распознается гетеродимером TLR2 / 6 на поверхности макрофагов. Мы обнаружили, что это распознавание RPSP происходит до интернализации частицы и независимо от вирусной инфекции. Известно, что TLR передают сигнал либо с поверхности клетки через MyD88 / Mal, либо с эндосомы через TRAM / TRIF для индукции воспалительных реакций или IFN типа I соответственно.Мы обнаружили, что по сравнению с макрофагами WT, макрофаги tram – / – демонстрируют сниженную интернализацию RPSP с помощью конфокальной микроскопии и проточной цитометрии. Однако блокирование закисления эндосом бафиломицином A1 не уменьшало гибель S. aureus макрофагами, обработанными RPSP. Это предполагает, что неканонический эндосомный сигнальный путь может быть индуцирован при воздействии RPSP. Действительно, используя мышей с нокаутом, мы обнаружили, что IFN типа I, а также передача сигналов MyD88 имеют решающее значение для улучшения S.aureus , габаритный пост РПСП. Наши результаты показывают, что распознавание RPSP TLR2 / 6 активирует уникальный внутриклеточный сигнальный путь, в частности комбинацию двух известных путей, что приводит к IFN-зависимому улучшению типа I в S. aureus , убивающем макрофаги.- Copyright © 2020 Американская ассоциация иммунологов, Inc.
Op-Ed: Tribalism and Virtue Signal in Post-COVID Vax Messaging
Недавно я принимал участие в дискуссии о том, как мы, в медицинских кругах, должны консультировать людей относительно ограничений после вакцинации, и получил некоторую негативную реакцию, которая переросла в личные нападки.Я считаю, что то, как профессионалы справляются с разногласиями во время глобального кризиса, иллюстрирует более широкие проблемы, с которыми мы сталкиваемся с трайбализмом, сигналом добродетели и политикой.
Медицина быстро превращается в область племен, и я усвоил это на собственном горьком опыте. За то, что я принял сторону дискуссии, меня обвинили в безразличии к смерти или в отсутствии мотивации. Оба они не соответствуют действительности. Атаки включали обрезанные, вырванные из контекста скриншоты моего канала Twitter без ссылки на мою статью, а также отметку моего работодателя в этих твитах.Я просто считаю, что люди имеют право выбирать риски, которые им подходят.
Немногие пытались опровергнуть мою точку зрения, и я считаю, что это из-за разрыва между тем, что говорят публично, и тем, что люди делают наедине. Я знаю, что некоторые вакцинированные люди рискуют, что не будут размещать рекламу в Твиттере. Между тем, я считаю, что этот призыв: «Несмотря на вакцинацию, я буду продолжать носить маску и дистанцироваться от общества» – это форма сигнала добродетели. Это еще больше делит нас на плохих людей (тех, кто распространяет COVID) и хороших людей (тех, кто борется с ним).Это было бесполезно на протяжении всей пандемии. Он освящает людей, которые имеют привилегию отстраняться от общества. И это разделяет людей, которые должны искать честность и золотую середину. Я считаю это простой человеческой реакцией на страх и тревогу.
Дебаты
Мое предложение прост: если человек получил вакцину и выполнил 2 дозы, и у него есть еще 14 дней, когда он чувствует себя хорошо, этот человек может ослабить некоторые ограничения. Они могут встретиться с другими вакцинированными людьми за ужином, расслабить маску наедине или даже обнять любимого человека.Несколько цепочек доказательств привели меня к этому месту.
Подведем итог: вакцина эффективна на 95%, но это относительная разница в заражении COVID с симптомами, а не абсолютная вероятность его заражения. Если вы получите обе дозы и через две недели почувствуете себя хорошо, вероятность того, что у вас не будет симптомов COVID после этого момента до конца исследования, составляла 99,92% в исследовании Moderna и 99,95% в Pfizer. Это восхитительно! Эти результаты были подтверждены в «реальном мире». Израиль только что сообщил, что если вы сделаете две прививки Pfizer и проведете семь дней, шанс не заразиться COVID-19 составляет 99.99%.
Во-вторых, частота тяжелых случаев COVID снизилась с 30 случаев в контрольной группе исследования Moderna до нуля в группе вмешательства. Был только один случай в группе вакцины Pfizer. Вакцина великолепно останавливает этот тяжелый и очень заразный исход. Наконец, есть свидетельства того, что скорость обнаружения вируса (бессимптомное носительство ПЦР) снижается на 60% при вакцинации. Поскольку вакцинация заставляет организм бороться с SARS-CoV-2, у вас значительно меньше шансов заболеть и меньше шансов заразить других.Некоторые спрашивают о новых вариантах, но данные Moderna обнадеживают.
В своем комментарии я предлагаю ослабить ограничения, я указываю, что никто не гонится за жизнью с нулевым риском. По сути, это мираж. Вместо этого мы все хотим разумной безопасности. Ослабление ограничений достаточно безопасно, и, по правде говоря, я знаю многих, многих, многих врачей, которые занимаются этим в частном порядке.
Наконец, все имеющиеся у нас доказательства в поддержку ограничений – например, маскировка наедине или отказ от обеда вместе в помещении – применимы только к непривитым людям.Людям, которые спрашивают у меня доказательства того, что снятие ограничений безопасно, я возражаю, запрашивая доказательства того, что ограничения дают какую-либо пользу для кого-то, кто уже вакцинирован.
Правда о медицине заключается в том, что наши инструменты в целом работают все менее и менее хорошо – вплоть до того, что перестают работать совсем, – поскольку риск плохих результатов становится все ниже и ниже. Это просто свойство жизни. Мы не знаем точно, насколько эти ограничения помогают, но, как бы то ни было, после вакцинации их количество значительно уменьшается.Ирония заключается в том, что из всех мер предосторожности, которые мы принимаем против вакцины, вакцинация приносит огромную пользу! Я считаю, что люди в Европе это понимают, вот их сообщение:
Диалог
По этим причинам я считаю, что строго по существу имеет смысл говорить об ограничениях после вакцинации. И правда в том, что врачи голосуют ногами. Многие встречаются наедине, чтобы выпить или поужинать с коллегами или навещают своих родителей, которых они не трогали с марта, и это, безусловно, будет продолжаться.
На днях на общественной радиостанции в Сан-Франциско я услышал историю о пожилых людях, которые плачут во время вакцинации и рассказывают, как они с нетерпением ждут возможности обнимать своих внуков. Нет мира, в котором риск равен 0%, и все эти люди производят свои собственные внутренние расчеты рисков. Стоит ли обнимать мать или внука при очень низком риске? Я считаю, что это вполне разумно.
Уроки службы трансплантации костного мозга
Когда я раньше работал в Орегонском университете здоровья и науки, в течение последних пяти лет я проходил там трансплантацию костного мозга.Эти пациенты часто покидали больницу с ослабленной иммунной системой. Часто спрашивали, что безопасно, и это требовало долгого личного разговора. Речь всегда шла о ценностях, и врачи никогда не занимали жесткую позицию, согласно которой в жизни нужно отказываться от вещей, например, объятия внуков, в погоне за нулевым риском. Мы просто старались дать совет и дать совет.
Сообщение #MedTwitter
Но теперь в социальных сетях существует мощный блок обмена сообщениями, который считает, что это сообщение не просто неправильное, а опасное, вредное и дезинформационное.Они предпочитают рассказ о том, что, несмотря на вакцинацию, они будут продолжать делать то, что делали раньше.
Некоторые из этих людей даже пытаются думать на шаг впереди. Что это будет значить, если мы скажем людям, что разумно отказаться от ношения масок, не будут ли они тогда игнорировать пандемию? Взять на себя новый риск? Люди будут лгать о вакцинации? Будут ли непривитые люди чувствовать себя обделенными, как будто мы не вместе? Или же, если мы скажем, что вакцинация – это путь к нормальной жизни, будет ли вакцина нужна больше людей? Сможет ли он преодолеть нерешительность?
Мне очень неудобно, что ученые фильтруют свои сообщения и интерпретацию данных с помощью этих мыслей.У нас нет навыков прогнозирования реакции людей на наши сообщения. И это принципиально ненаучно. Я не знаю, как сопоставить риск того, что люди лгут о вакцинации, и желание вакцинироваться, и никто этого не делает.
Если вы хотите, чтобы все продолжали маскироваться в магазинах – и я думаю, что это разумно – это может быть политика магазина. Но мы не должны искажать доказательства, чтобы сказать, что мы действительно обеспокоены тем, что вакцинированные люди распространяют вирус в магазинах. Другими словами, мы должны быть честными в том, почему мы хотим, чтобы люди это делали.Недавняя статья Джулии Маркус перекликается с этим тезисом.
В чем вред?
Стажер программы написал мне, что в его больнице было разослано электронное письмо, в котором говорится, что вакцинированным резидентам и товарищам (14 дней до последней дозы и бессимптомно) им не разрешают обедать вместе. Звучит как мелочь, но это важно.
Поставщики медицинских услуг на передовой сталкиваются с моральными страданиями. Товарищество со сверстниками – вот что поддерживало меня в течение шести тяжелых лет обучения в аспирантуре.Я не думаю, что польза от этой политики перевешивает вред. Другими словами, снижение теоретического и бесконечно малого риска распространения не перевешивает лишение трудолюбивых, эмоционально утомленных людей человеческого взаимодействия. И я считаю, что эта политика связана с жесткой позицией #MedTwitter, что такое взаимодействие небезопасно. Эта риторика имеет реальные последствия.
Общественные идеи против частных
Меня поражает разрыв между тем, что люди делают, и тем, что они говорят.Я написал эту шутку в Твиттере, чтобы проиллюстрировать ее, и, возможно, это объясняет некоторые ответы, которые я получил. Но шутка раскрывает основную истину: я сомневаюсь, что люди в частном порядке делают то, что публично предостерегают.
…. Теперь вернемся к упаковке
– Dr.Винай Прасад, доктор медицинских наук, доцент (@VPrasadMDMPH) 21 января 2021 г.И у некоторых вакцинированных людей может развиться COVID-19
Я хочу прояснить: я верю, что даже после массовой вакцинации вполне вероятно, что у кого-то однажды после вакцинации разовьется COVID-19. Также возможно, что вакцинированный человек в конечном итоге передаст SARS-CoV-2 другому человеку. Однако тот факт, что такой результат почти наверняка произойдет, когда размер выборки достигнет десятков миллионов, не означает, что польза от продолжающихся ограничений перевешивает вред в будущем или в настоящий момент.
Единая система обмена сообщениями
Некоторые критики считали, что я не должен даже придерживаться своих взглядов, чтобы публика не запуталась. Во время кризиса нам нужен единый обмен сообщениями. Я бы сказал, что это возможно и желательно со стороны CDC или федерального правительства и правительства штатов, но это невозможно со стороны всех ученых на Земле.
В эпоху социальных сетей некоторые ученые – благонамеренные и умные люди – не согласятся с политикой или резюме других ученых.Они почти наверняка скажут это где-нибудь и когда-нибудь. В современном мире, где рухнула стена между академическим сообществом и реальным миром, выбор – либо единообразие и замалчивание некоторых взглядов, либо множественность голосов и смешанные идеи. Я думаю, что в свободном обществе нет сомнений в том, что последнее – единственно возможный выбор.
Эти взгляды принадлежат мне, а не моей организации.
Виней Прасад, доктор медицины, магистр здравоохранения, гематолог-онколог и адъюнкт-профессор медицины Калифорнийского университета в Сан-Франциско, автор книги Злокачественное новообразование: как плохая политика и недостоверные доказательства вредит людям с раком .
Последнее обновление 28 января 2021 г.
Пожалуйста, включите JavaScript, чтобы просматривать комментарии от Disqus. .