Р 63 4б: Пилорама рамная Р63-4Б (4х-ступенчатый механизм подачи)

alexxlab | 20.08.2020 | 0 | Разное

Содержание

Пилорама рамная Р63-4Б (4х-ступенчатый механизм подачи)

Пилорама рамная Р63-4Б предназначена для продольной распиловки брёвен и брусьев различных пород древесины на пиломатериалы.

Распиловка бревен осуществляется возвратно-поступательным перемещением пильной рамки с укрепленным на ней поставом (набором) пил по направляющим.
Движение к пильной рамке передается от главного вала шатуном.

Пилорамы Р63-4Б могут применяться как станок первого ряда в лесопильных цехах большой мощности, так и на малых производствах.

Устанавливается в лесопильных цехах высокой производительности. Также пилорама может быть использована на временных и стационарных лесопильных предприятиях и строительных площадках, однако требует фундамента. Основой конструкции лесопильной рамы является сварная цельная станина с расположенными на ней узлами. Компоновка двухшатунная. Подача и прижим сырья электромеханический.

Пилорама Р63-4Б комплектуется четырёхскоростной коробкой передач. Распиловка брёвен осуществляется возвратно-поступательным перемещением пильной рамки с укреплённым на ней поставом (набором) пил по направляющим. Движение к пильной рамке передаётся от главного вала шатуном. Подача распиливаемого бревна осуществляется системой мощных литых рифлёных подающих роликов (рябух) со скоростью до 6,5 м/мин, что обеспечивает высокую производительность пилорамы. Производительность, при условии механизации процесса пиления, среднем диаметре бревна в вершине 260 мм, величине посылки 6 мм на один двйной ход пильной рамки, количестве пил в поставе-6, пиление брусово-развальным способом, достигает порядка 6м.куб/час по сырью.

Отличительные особенности рамной пилорамы Р63-4Б:

  • 4х-ступенчатый механизм подачи
  • Сварная станина
  • Электромеханический прижим верхней подающей рябухи
  • Мощная ступенчатая механическая коробка скорости подачи
  • Высокая производительность
  • Устойчивость в работе при низких температурах
  • Надежность и простота в эксплуатации

ХарактеристикаР63-4Б
Размеры распиливаемого материала, мм: 
- диаметр530
- длина3000-7500
Ширина просвета пильной рамки, мм630
Ход пильной рамки, мм400
Наибольшее число устанавливаемых пил, шт12
Толщина пил, мм2,2-2,45
Наименьшее устанавливаемое расстояние между пилами, мм18
Число двойных ходов пильной рамки в минуту285
Подача материала на один двойной ход пильной рамки, мм3-22
Производительность по сырью, м3/час8-10
Количество эл/двигателей, шт4
Суммарная мощность, кВт44,4
Габарит с околорамным оборудованием, мм4232х2615х3000
Масса Р63-4Б (4 скор) Р63-4Б рамы с комплектующими, кг6 000

Комплект поставки

  • захват верхние и нижние по 8 шт.
  • ползуны:комплект на раме и комплект (4+4 дополнительно)
  • установочная линейка
  • уклономер.

Опции за доп. плату

  • четыре ручные тележки

Отгрузочные габариты:

1 место пильный узел 3300*1600*1470 – 7,7616 куб.м.
Вес брутто 4130 кг с упаковкой лежа(поддон)

2 место ящик 2400*1570*1190 – 4,484 куб.м.
Вес брутто 2150 кг.

Тележки
3 место 1001 1030*960*760 – 215 кг., -0,75 куб.м.
4место 1101 1030*800*760 – 205 кг.,- 0,63 куб.м.
5 место 1201 860*430*520 – 90 кг., - 0,19 куб.м.
6 место 1301 770*430*410 – 75 кг.- 0,14 куб.м.
Места 3-6 без упаковки.

Возможны различные варианты комплектации дополнительным околорамным оборудованием: механизированными тележками, приёмными рольгангами, ножевым аппаратом.

Для удаления опилок, в конструкции фундамента спроектированы ниши в которые падают опилки. Для облегчения ручного труда можно установить транспортер для удаления опилок из зоны раскроя.

Для заточки пил используются заточные станки для рамных пил.(ручной заточной станок 40т.р.)

Средний ресурс пил без перезаточки - 1 смена.


Отзывы о Р63-4Б (4 скор):

Отзывов пока нет, но ваш может быть первым.
Оставить отзыв

Рамные пилорамы : Р63-4Б

Пилорама Р-63-4Б предназначена для продольной распилки брёвен и брусьев различных пород древесины на пиломатериалы. Может применяться как станок первого ряда в лесопильных цехах большой мощности, так и на малых производствах.

Р63-4Б Цена:

Модификатор цены:

Основная цена с НДС:

Цена со скидкой:

Цена: 1100000,00 руб

Цена без скидки: 1100000,00 руб

Скидка:

Сумма налога:

Описание

Пилорама рамная Р63-4Б предназначена для продольной распиловки брёвен и брусьев различных пород древесины на пиломатериалы. Распиловка бревен осуществляется возвратно-поступательным перемещением пильной рамки с укрепленным на ней поставом (набором) пил по направляющим. Движение к пильной рамке передается от главного вала шатуном. 

Пилорама Р63-4Б может применяться как станок первого ряда в лесопильных цехах большой мощности, так и на малых производствах.

Отличительные особенности пилорамы Р63-4Б:

  • Литая чугунная станина
  • Электромеханический прижим верхней подающей рябухи
  • Мощная ступенчатая механическая коробка скорости подачи
  • Высокая производительность
  • Устойчивость в работе при низких температурах
  • Надежность и простота в эксплуатации.

Технические характеристики пилорамы Р63-4Б:

Наименование характеристикиЗначение  

Размеры распиливаемого материала, мм:

    

- диаметр

530

- длина

3000…7500

Ширина просвета пильной рамки, мм

630

Ход пильной рамки, мм

400

Наибольшее число устанавливаемых пил, шт

12

Число двойных ходов  пильной рамки в минуту

285

Подача материала на  один двойной ход пильной рамки, мм

3-22

Производительность по сырью, м3/час

8-10

Количество электродвигателей, шт

4

Суммарная мощность, кВт

44,4

Габарит с околорамным оборудованием, мм

4232х2615х3000

Масса рамы с комплектующими, кг

6 000

 

Запчасти для пилорамы Р63-4Б — Пилоточ Красноярск

Описание товара

Блок шестерен для пилорамы

  • Блок шестерен 16, 21 20016117
  • Блок шестерен 30,46,18 2316108
  • Блок шестерен 21,23,27 2316112
  • Блок шестерен 21,27 4Б17109
  • Блок шестерен 20,44 4Б17111
  • Блок шестерен 16,17 4Б17112

Шестерни для пилорамы

  • Шестерня 17 2016118
  • Шестерня 74 2016121
  • Шестерня 72 2016123
  • Шестерня 60 2016125
  • Шестерня 70 4Б17130
  • Шестерня 23 4Б17113
  • Шестерня 46 4Б17114
  • Шестерня 42 ворота 2304013
  • Шестерня 68 ворота 2304016
  • Шестерня 23 2316107
  • Шестерня 44 2316109

Валы для пилорам

  • Вал рябух нижний 2006106
  • Вал рябух верхний 2303113
  • Вал промежуточный коробки скоростей (9ск.) 2016111
  • Вал промежуточный коробки скоростей шлиц (9ск.) 2016112
  • Вал выходной коробки скоростей (9ск.) 2016606
  • Вал входной коробки скоростей (9ск.) 2016615
  • Вал 4Б17105
  • Вал 4Б17106
  • Вал 4Б17107
  • Вал выходной коробки скоростей (4ск.) 4Б17108
  • Вал коренной 4Б02101

Пилы рамные

  • Пила рамная 1250х180х2,5/2,2
  • Пила рамная со стеллитовыми напайками 1250х180х2,5/2,2
  • Пила рамная 1250х160х1,6 стеллит. GASS (заказ)
  • Пила рамная 1250х180х2,5 со стеллит. напайками

Запасные части для лесопильных станков

  • Винт 2304011
  • Гайка бронзовая 2303204
  • Захват верхний 2319100
  • Захват нижний 2319200
  • Захват верхний винтовой 4Б30100
  • Звездочка выходная 4Б16111
  • Коробка скоростей 9-ти ск./ 4-х скор. 4Б16100/4Б17100
  • Механизм подачи (без электродвигателя) 4Б18000/4Б17000
  • Направляющая призматическая 2001203
  • Направляющая плоская 2001402
  • Палец конусный шатунный 2702016
  • Ползун призматический (из 2-х половинок) 2005122
  • Ползун плоский (из 2-х половинок) 2005131
  • Пружина 2303017
  • Рябуха 2006105
  • Рябуха стальная (шипованная)
  • Рамка пильная 4Б05110
  • Редуктор Ц2У125-25 2716101
  • Струбцина 2005200
  • Шатун сварной 2003001
  • Электрошкаф 4Б80100
  • Цепь ПР-38,1 п/м
  • Ремни клиновидные Д6300

 

на Объявления ,


Объявление закрыто

В можете найти объявление похожее на это в нашем каталоге

Перейти в каталог

Продается-

Пилорама Р-63 4Б

(РАМА ЛЕСОПИЛЬНАЯ Р-63 4Б)

*

ПОЛНОСТЬЮ В РАБОЧЕМ СОСТОЯНИИ!

ОБСЛУЖЕНА.

*

год выпуска- 1996

*

В КОМПЛЕКТЕ- ВСЕ НЕОБХОДИМОЕ ДЛЯ РАБОТЫ.

*

ФОТО от 12.01.18г. ИМЕННО ЭТОЙ ПИЛОРАМЫ.

НАЛИЧНЫЙ И БЕЗНАЛИЧНЫЙ РАСЧЕТ.

*

ПОМОЩЬ С ПОГРУЗКОЙ И ОТПРАВКОЙ В РЕГИОН.

*

Техническая характеристика лесопильной рамы:

Просвет пильной рамки — внутреннее расстояние между вертикальными стойками пильной рамки. Просвет определяет наибольший диаметр бревен, которые можно распиливать на раме. По ширине просвета лесопильные рамы подразделяются на узкопросветные (до 500 мм), среднепросветные (до 800 мм) и широкопросветные (до 1100 мм).

Высота хода пильной рамки — расстояние, проходимое пильной рамкой сверху вниз за полный оборот коренного вала. Одноэтажные рамы строятся высотой от 220 до 410 мм, двухэтажные — до 700 мм.

Скорость вращения коленчатого (коренного) вала рамы, или число двойных ходов пильной рамки в минуту, колеблется от 210 до 450. Рамы с меньшим просветом имеют более легкую пильную рамку и соответственно большую частоту вращения.

Мощность привода определяет тип и потребную мощность электродвигателя и возможную производительность рамы.

Система механизмов подачи характеризует способ продвижения бревна в процессе распиловки. Есть два вида подачи и две системы механизмов подачи: непрерывная и толчковая:

Непрерывная подача - бревно продвигается в раму непрерывно во время холостого и рабочего ходов пильной рамки

Толчковая подача делится на одно- и двухтолчковую:

Однотолчковая подача — подача (толчок) только за рабочий или только за холостой ход

Двухтолчковая подача — один толчок происходит за рабочий, другой — за холостой ход пильной рамки

Похожие объявления в разделе

Инструкция по эксплуатация пилорамы р 63 :: menmasaxse

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Производителем рамы лесопильной Р63 4Б является Даниловский завод деревообрабатывающих. При использовании качественных рамных пил и соблюдении технологических норм их подготовки и эксплуатации. Порядок работы на пилораме Р63 4Б. Пилорама р Подробнее о пилорама р 63 инструкции по эксплуатации. Рамная, одноэтажная, ф до 530 мм. Высокая производительность. Форма заявления в школьный лагерь.80 4 руководство по ремонту и эксплуатации автомобиля.21:12. Пилорама р 63 инструкция по эксплуатации. ОБЩИЕ СВЕДЕНИЯ О СТАНКЕ ленточная пилорама спектр70. Форма заявления в школьный лагерь.80 4 руководство по ремонту и эксплуатации автомобиля.21:12. Удивляюсь Вашей расторопностью, торгуя пилорами Р63Вы. Есть руководство по эксплуатации р63 4б там схема есть чёрно белая. Пилорамы ленточные и рамные, лесопильное оборудование. Пилорама Р 80 2 Может быть использована на временных и стационарных лесопильных предприятиях и строительных.

Площадках. Проверено через. Образец заполнения заявления по форме 2 2 учет. Если у кого нибудь есть инструкция по эксплуатации пилорамы Р 63, поделитесь пожалуйста. Описание Лесопильной Рамы Р63 4Б. Надежность и простота в эксплуатации. Здравствуйте, нужна инструкция по эксплуатации пилорамы р 63. Лесопильная рама Р63 4Бпрофессиональная вертикальная одноэтажная пилорама. Рама лесопильная вертикальная одноэтажная Р63 4Б. Скачать руководство по эксплуатации пилорамы р 63 Скачать файл. Испытанный бесплатный сайт предоставляет возможность загрузить руководство по эксплуатации пилорамы р 63 бесплатно. Рама лесопильная вертикальная одноэтажная модели Р63 4Б 4 ступенчатая, наибольший диаметр распиливаемого. Пилорамы ленточные и рамные, лесопильное оборудование. Пилорама Р 80 2 Может быть использована на временных и стационарных лесопильных предприятиях и строительных площадках. Пилорамы рамные: паспорта, техническая документация, методические указания, технико экономические обоснования. Оборудование, руководства по эксплуатации станков, различные методические указания, техническую. Схема электрическая принципиальная лесопильной рамы Р63 4Б.

Надежность и простота в эксплуатации. Ученик 172, на голосовании 1 год назад. Руководство по эксплуатации пилорамы р63. Инструкция по настройке пилорамы р 63 них появлялось не помню только куда и. Инструкция по эксплуатации1 шт. Сборник Задач По Сопротивлению Материалов Качурин Решебник Онлайн. На этой странице. На новый рынок, Россия, 07, 2012, позволивший дистрибьюторской компании выйти в новый для нее сегмент средств автоматической идентификации. Рамная пилорама Р 63, рама р63, рама р 63, рама р 63, рама р63. Поделиться. Описание. Отличительные. Порядок работы на пилораме Р63 4Б. В процессе эксплуатации проверку производить еженедельно. Лесопильная рама Р63 4Бпрофессиональная вертикальная одноэтажная пилорама. Рама лесопильная вертикальная одноэтажная Р63 4Б. Заказать пилораму Р63 4Б. Коментарии: Отзывы11. Инструкция по эксплуатации 307 . Мои сайты Видео ролики, которые можно просмотреть прямо сейчас. Пилорама Р 63. Паспорт, схемы, описание, характеристики.

 

Вместе с Инструкция по эксплуатация пилорамы р 63 часто ищут

 

пилорама р-63 видео.

пилорама р 63 инструкция.

пилорама р 63 настройка.

пилорама р-63 цена.

пилорама р-63 технические характеристики.

пилорама р 63 паспорт.

пилорама р 63 запчасти.

пилорама р-63 установка пил

 

Читайте также:

 

1 предприятие инструкция по заполнению

 

Директор по маркетингу должностная инструкция

 

Инструкция выращивания кристаллов

 

Фреш-Джоб — Вакансии и база резюме в России

Продавец в магазине разливного пива

Москва

В магазин разливного пива требуется продавец.Обязанности: продажа разливных напитков и закусок к пиву. уборка помещения.Требования: Продавец должен быть общительный и умеющий правильно предлагать и рекламировать продаваемый товар.Условия: график работы оговаривается 7/7 или 6/1 или 5/2. Магазин работает с 11 до 23. Каждый день. Зарплата : оклад

Сегодня в 05:35

45 000

Node.js разработчик

Иркутск

Требуется node.js разработчик в г. Иркутск. Кто нам нужен? В направлении разработки у нас есть внешние заказчики и внутренние продукты. И тех и других проектов становится больше. Поэтому мы постепенно расширяем отдел и ищем программиста, который готов решать различные задачи — от создания лендингов до разработки высоконагруженных проектов и

Сегодня в 05:35

Сегодня в 05:35

Ведущий геодезист (геодезист)

Иркутск

Ищем ведущий геодезист в г. Иркутск. Обязанности: Строительный контроль, работа с приборами, проверка геодезических работ. Проверка геодезических исполнительных схем. Своевременное предоставление необходимой информации. Требования: Опыт работы геодезистом от 3-х лет в сфере строительства Готовность к работе на участке строительства

Сегодня в 05:34

Сегодня в 05:34

Специалист на производство

Иркутск

Ищем специалист в г. Иркутск. Обязанности: Полная сборка рекламы на производстве, монтаж рекламных конструкций, растяжка баннеров, работа с пленкой, монтаж интерьерной рекламы Требования: Опыт работы в данной сфере приветствуется. Умение работать с ручным инструментом, знание электрики (желательно) Условия: Полный рабочий день

Сегодня в 05:32

25 000

Массажистка / массажист

Иркутск

В компанию требуется массажистка в г. Иркутск. Обязанности: Массаж:- классический;- антицеллюлитный;- лимфодренажный;- уход по телу (обертывания, пилинг и т. д.) Требования: - обязательное наличие медицинского образования;- опыт работы от 1 года;- владение различными техниками массажа; Условия: - работа в отделении спа-терапии медицинского

Сегодня в 05:32

Сегодня в 05:32

Оператор 1С

Иркутск

Открыта вакансия "оператор" в г. Иркутск. Обязанности: прием звонков обработка заявок оформление расходных документов Требования: знание 1С Условия: график 5/2 с 9.00 - 18.00 (суббота, воскрессение выходные) работа в офисе з/п от 25 000 до 29 000

Сегодня в 05:32

25 000

Водитель-экспедитор

Бийск

На доставку питьевой бутилированной воды "Горный источник" по г.Бийску требуются водитель-экспедиторОбязанности:Доставка воды по городу Бийску Управление автомобилем, поддержание автомобиля в исправном техническом состоянии Работа с клиентами Оформление документов Ведение отчетности Требования: Уверенное вождение Водительское удостоверение

Сегодня в 05:31

45 000

Охранник

Воронеж

В крупную организацию требуется охранник. График работы сменный 1/3 . Организация охраны объекта , пропускной внутриобъектовый режим. Видеонаблюдение. Оплата по результатам собеседования. Требования к кандидатам: коммуникабельность, ответственность, стрессоустойчивость, добросовестное отношение к

Сегодня в 05:30

16 000

Бухгалтер

Иркутск

Открыт набор на вакансию бухгалтер в г. Иркутск. Обязанности: Обязанности бухгалтера: - Работа в 1С со счетами 60, 62, 10, 71, 50. - Формирование кассовой книги - Выставление документов покупателям - Контроль наличия оригиналов документов от поставщиков и покупателей, организация возврата документов поставщикам - Работа с контур Диадок, контур

Сегодня в 05:30

35 000

Слесарь по эксплуатации и газовому оборудованию

Бодайбо

На работу требуется слесарь в г. Бодайбо. Обязанности: Обслуживание и ремонт резервуаров (газгольдеров), газопроводов, технических устройств объектов использующих СУГ, СПГ, газопотребляющего оборудования горелки ГГВ, ГСП, ИЖК, регулирующей аппаратуры, клапанов ПСК, насосов, вентиляторов. Требования: Наличие соответствующего

Сегодня в 05:29

Сегодня в 05:29

Продавец-консультант

Десногорск

Офис продаж – «визитная карточка» нашего бизнеса! И ты можешь стать частью передовой команды! Чем ты будешь заниматься: · Продавать инновационные продукты и услуги Компании, делающие жизнь людей проще и лучше: крутые девайсы, смартфоны и аксессуары к ним! · Делиться своей экспертизой и знаниями, консультируя клиентов и помогая им решать самые

Сегодня в 05:29

30 000

Инженер механик по планированию (оборудование ЗИФ)

Иркутск

Открыта вакансия "инженер механик" в г. Иркутск. Обязанности: Подготовка технической информации, необходимой для работы по разработке планов выполнения ТО и Р оборудования ЗИФ. Формирование отчетности по работе оборудования за период; Аналитика простоев, формирование предупреждающих мероприятий; Аналитика работы узлов и агрегатов

Сегодня в 05:29

Сегодня в 05:29

Инженер-технолог

Казань

Мы рады Вам предложить: - График работы с 7:00-16.00, Пн-Пт - Оформление по ТК РФ; - Достойную заработную плату; - Возможность переработок + Премии; - Оплачиваемый отпуск; - Дружный коллектив; - Возможность профессионального развития и успешного карьерного роста; - Обучение за счет компании; - Премия, которая зависит только от личного

Сегодня в 05:28

45 000

Администратор автосалона (Лексус, Иркутск)

Иркутск

В компанию требуется администратор автосалона в г. Иркутск. Обязанности: Создание доброжелательной и комфортной обстановки для всех гостей Лексус Центр Иркутск. Встреча гостей, предоставление необходимой информации о работе Центра. Прием телефонных звонков, распределение звонков по направлениям. Требования: Уверенный пользователь ПК,

Сегодня в 05:28

30 000

Начальник строительно-испытательной лаборатории

Иркутск

Ищем начальник строительно-испытательной в г. Иркутск. Обязанности: Руководство лабораторией. Участие в комиссиях при проверке СМР. Испытания строительных материалов (грунт, щебень, песок, ПГС, строительные растворы, бетоны, цемент, асфальтобетонные смеси и керны). Проверка и выдача заключений по испытаниям. Ведение лабораторных журналов.

Сегодня в 05:27

Сегодня в 05:27

Парикмахер

Иркутск

Требуется парикмахер в г. Иркутск. SPA центр "Весна" приглашает Мастера-парикмахера Должностные обязанности: Оказание парикмахерских услуг: стрижки, окрашивание, укладки Требования: Опыт работы на материалах фирмы L'Oréal (желателен) Мы предлагаем: Высокий уровень дохода (оклад + %) Работа в одном из престижных SPA- центров города

Сегодня в 05:27

Сегодня в 05:27

Слесарь по эксплуатации и газовому оборудованию

Иркутск

Примем на работу слесарь в г. Иркутск. Обязанности: Обслуживание и ремонт резервуаров (газгольдеров), газопроводов, технических устройств объектов использующих СУГ, СПГ, газопотребляющего оборудования горелки ГГВ, ГСП, ИЖК, регулирующей аппаратуры, клапанов ПСК, насосов, вентиляторов. Требования: Наличие соответствующего свидетельства

Сегодня в 05:27

Сегодня в 05:27

Продавец-консультант Волжский

Волжский

Ты заряжен энергией и хочешь превратить ее в деньги? Приходи работать в Связной! Мы твой лучший выбор: Официальная зарплата и оформление по ТК РФ Неограниченная премия по результатам работы Гибкий график работы Корпоративное обучение за счет компании Оплачиваемая стажировка Возможность быстрого карьерного роста Скидки на товары и авиабилеты

Сегодня в 05:27

38 000

Ведущий инженер АСУ ТП (г. Билибино)

Билибино

В компанию требуется ведущий инженер в г. Билибино. ООО "Энергоцентр Билибино" (принадлежит Билибинскому району Чукотки) является заказчиком-застройщиком проектирования и строительства энергоблока с дизель-генераторными установками (ДГУ) в городе Билибино Чукотского автономного округа. Обязанности: работа в составе проектной группы в

Сегодня в 05:27

130 000

Специалист видеонаблюдения (улица Сергеева)

Иркутск

Требуется специалист видеонаблюдения в г. Иркутск. "ЛЕНТА", одна из крупнейших федеральных розничных сетей России, приглашает на должность Специалист видеонаблюденияОбязанности выявление и предотвращение материальных потерь в гипермаркете выборочное участие в проверках бизнес-процессов, осуществляемых в гипермаркете выявление и фиксирование лиц,

Сегодня в 05:26

44 400

Водитель такси

Пушкино

Требуемый опыт работы: не требуется Полная занятость, полный день ПРИГЛАШАЕМ ВОДИТИЛЕЙ ДЛЯ РАБОТЫ в Yandex Taxi! Наш таксопарк ОФИЦИАЛЬНЫЙ представитель YANDEX такси в г.Пушкино!!! Автомобиль брендирован yandex. (с короной!!!) Абсолютный приоритет. Первый день аренды бесплатно! Приоритет в аэропорт Шереметьево. Обеспечение заказами

Сегодня в 05:26

60 000

Менеджер по продажам Прохладный

Прохладный

Ты заряжен энергией и хочешь превратить ее в деньги? Приходи работать в Связной! Мы твой лучший выбор: Официальная зарплата и оформление по ТК РФ Неограниченная премия по результатам работы Гибкий график работы Корпоративное обучение за счет компании Оплачиваемая стажировка Возможность быстрого карьерного роста Скидки на товары и авиабилеты

Сегодня в 05:25

30 000

Специалист по продаже недвижимости

Иркутск

На работу требуется специалист в г. Иркутск. «Этажи» – лидер на рынке недвижимости и одна из крупнейших риелторских компаний страны. 20 лет работы, больше ста городов страны. Более пятидесяти партнеров среди застройщиков и банков. По версии Сбербанка и ВТБ наша компания – агентство недвижимости №1 в России, а также она входит в ТОП-50 рейтинга

Сегодня в 05:25

75 000

Врач здравпункта

Певек

В компанию требуется врач здравпункта в г. Певек. Обязанности: Обеспечение круглосуточной работы здравпункта Оказание квалифицированной медицинской помощи Своевременная организация транспортировки больных, нуждающихся в стационарном лечении Контроль в решении вопросов о нетрудоспособности работников Проведение лечебных процедур, эксплуатация

Сегодня в 05:25

145 000

Водитель легкового автомобиля, такси

Братск

Ищем водитель легкового в г. Братск. Любите свой город и знаете оптимальные маршруты для передвижения на автомобиле?Помогайте другим добираться быстро и с комфортом! Взамен получаете:- Стабильное сотрудничество с самым известным сервисом Яндекс GO- Собственный «офис на колёсах». Вся информация по передвижению и доходах в одном мобильном приложении

Сегодня в 05:25

76 000

Академический директор сети (Director of Studies/Заведующий учебной частью), г. Ессентуки

Иркутск

Примем на работу академический директор в г. Иркутск. Требуемый опыт работы: 3-6 лет Полная занятость, полный день В связи с реструктуризацией кадров в федеральную сеть языковых школ требуется академический директор. Работа в курортном городе Ессентуки. Немного о Лондон Экспресс: крупнейшая федеральная сеть языковых школ с филиалами по всей

Сегодня в 05:25

70 000

Администратор/менеджер по Заказам

Рязань

Трeбуетcя aдминистpатор в студию детских праздников FUNNY ROOM Студия pacпoлoжена на Право-Лыбедская 27 Грaфик рaботы сменный по меры праздников З/П - 1000 р./день + % от ком.заказов Tрeбoвания: Oбщительность, доброжелательность и гостеприимность, стрессоустойчивость. Приятная внешность Если Вы готовы любить наших гостей также как любим

Сегодня в 05:25

10 000

Частный охранник

Анапа

Рассматриваем кандидатов на должность частного охранника. Требования: - Ответственность, стрессоустойчивость, внимательность, опрятность и грамотная речь; - Наличие опыта работы желательно но не является обязательным условием; - Наличие удостоверения ; - НЕ предоставляем проживание, питание и вахту. Обязанности: - Охрана объекта. -

Сегодня в 05:24

1 800

Повар-универсал

Воронеж

Обязанности: Разделка мяса, птицы, рыбы Приготовление заготовок, начинок, полуфабрикатов. Изготовление полуфабрикатов по технологическим картам в соответствии с плановым заданием Соблюдение технологических инструкций, рецептур ⁣⁣⠀ Карьерный рост.⁣⁣⠀ ⁣⁣⠀ Требования:⁣⁣⠀ Ответственность,Аккуратность. Чистоплотность. Пунктуальность.

Сегодня в 05:24

35 000

Косметолог

Иркутск

На работу требуется косметолог в г. Иркутск. Обязанности: - консультация клиентов; - проведение аппаратных косметологических процедур по уходу за лицом: чистки, пилинги, массаж, мезотерапия; - инъекционное моделирование лица; Требования: - медицинское образование; - опыт работы от 3 лет по данной специальности; Мы предлагаем: - высокий

Сегодня в 05:23

Сегодня в 05:23

Персональный сайт - Запчасти к лесопильной раме Р63-4Б, блок шестерен, вал рябух, вал коренной, винт,гайка бронзовая, захват верхний нижний, ползун призматический плоский

Запасные части к лесопильной раме Р63-4Б

1 Блок шестерен 16, 21

2 Блок шестерен 30, 46,   18

3 Блок шестерен 21, 23,   27

4 Блок шестерен 21, 27

5 Блок шестерен 20, 44

6 Блок шестерен 16, 17

7 Вал рябух нижний

8 Вал рябух верхний

9 Вал промежуточный коробки скоростей (9ск)

10 Вал промежуточный коробки скоростей шлиц (9ск)

11 Вал выходной коробки скоростей (9ск)

12 Вал входной коробки скоростей (9ск)

13 Вал входной шлицевой коробки скоростей (4ск)

14 Вал промежуточный шлицевой коробки скоростей 

15 Вал промежуточный коробки скоростей (4ск)

16 Вал выходной коробки скоростей (4ск)

17 Вал коренной

18 Винт

19 Гайка бронзовая

20 Захват верхний г.Данилов / г.Н.Новгород

21 Захват нижний г.Данилов / г.Н.Новгород

22 Захват верхний винтовой

23 Звездочка выходная

24 Коробка скоростей (9ск) (9-ти скор.) (4-х скор.)

25 Механизм подачи (без электродвигателя)

26 Направляющая призматическая

27 Направляющая плоская

28 Палец конусный шатунный

29 Ползун призматический пласт./текстолит (2пол)

30 Ползун плоский пласт./текстолит (2пол)

31 Подвеска пил РТ36.19.000

32 Пружина

33 Пульт

34 Рябуха

35 Рамка пильная

36 Редуктор Ц2У125-25

37 Струбцина

38 Шестерня 17

39 Шестерня 74

40 Шестерня 72

41 Шестерня 60

42 Шестерня 70

43 Шестерня 23

44 Шестерня 46

45 Шестерня 42 ворота

46 Шестерня 68 ворота

47 Шестерня 23

48 Шестерня 44

49 Шатун кованный

50 Шатун сварной

51 Электрошкаф

52 Цепь ПРЛ-38,1

53 Пила рамная 1250*180*2,5 (2,2)

54 Пила рамная со стелитовыми напайками 1250*180*2,2 (2,5)

55 Пила рамная 1250*180*2,45 

56 Ремни клиновидные ДГ 6300

57 Ремнь плоский ТК 200-2 150/6

58 Винт когтей 

59 Маховик

60 Цепь к бревнотаске

Аллея боевых птиц: Bell P-63 Kingcobra


(Источник фото неизвестен. Свяжитесь с нами, если вы заслуживают похвалы.)

История: Близкий родственник P-39 Airacobra, Kingcobra был больше и быстрее своего ребенка. сестра. На прочной и способной Kingcobra летали в основном русские на востоке страны. Фронт Второй мировой войны.

На начальном этапе разработки Р-39 эксперименты были направлены на улучшение его характеристик. аэродинамика.P-39D использовался в качестве отправной точки для трех прототипов, каждый с новым ламинарное крыло и оперение. Три экспериментальных самолета получили обозначение XP-39E . Они были оснащены двигателями Allison, потому что поршневой двигатель с перевернутым V-образным вырезом из Continental был ненадежным. Два прототипа были потеряны во время оценки Воздушный корпус армии США и немного измененный дизайн XP-63A , был построен.Двигатель Allison в XP-63A имел возможность аварийного впрыска воды. это могло увеличить доступную мощность до 1500 л.с. на короткий период времени. Изготовление P-63 Kingcobra для USAAC начался в октябре 1943 года, и почти 3300 самолетов были выпускался до конца войны. По ленд-лизу россияне купили 2400 Kingcobras, и еще 300 были доставлены «Свободной Францией». Остальные были ограничены тренировочные эскадрильи в США USAAF.

Около 300 Р-63 были превращены в РП-63 Летающие цели для практика воздушного боя с хрупкими пулями. С них сняли всю броню и вооружение. Самолеты, а обшивка из дюраля защищала крылья, фюзеляж и хвостовое оперение. Пуленепробиваемые стекла была установлена ​​стальная решетка над воздухозаборником, защищена стальная гильза. выхлопные трубы. Также был установлен гребной винт с толстыми полыми лопастями. Когда хит был засчитан, в кабине загорелась красная лампочка, указывающая, где был произведен выстрел из Р-63.

Производство P-63 закончилось в день VJ. Сегодня в полете осталось всего полдюжины P-63.

Псевдонимы: Pinball (вариант RP-63)

Технические характеристики:
Двигатель: Один рядный поршневой двигатель Allison V-1710-93 мощностью 1325 л.с.
Вес: пустой 6,375 фунтов, макс. Взлет 10 500 фунтов.
Размах крыла: 38 футов. 4 дюйма
Длина: 32 фута. 8 дюймов
Высота: 12 футов.7 дюймов
Производительность:
Максимальная скорость при 25000 футов: 410 миль / ч
Крейсерская скорость: 378 миль / ч
Потолок: 43000 футов
Дальность: 450 миль (2200 миль в конфигурации с паромом)
Вооружение:
Один 37-мм М4 пушка
Два на носу 12,7-мм (0,5 дюйма) пулеметы
До трех 522-фунтовые бомбы

Количество построек: ~ 3,300

Номер по-прежнему годен к полетам: 3

Ссылки:
Справочная страница AeroWeb P-63
CAF Крыло Дикси - Восстановление P-63
CAF West Houston Squadron - P-63F Page
«Кобры над тундрой» книга
USAF Museum - P-63 Страница исследования


Рекомендуемая книга P-63 King Cobra от Amazon.com:


[Вернуться на главную аллею боевых птиц Страница]


Весь текст и фотографии Copyright 2016 The Doublestar Group, если не указано иное.
Вы можете использовать эту страницу только в личных некоммерческих справочных целях.


Белл P-63 Kingcobra

Bell P-63 Kingcobra


U.S. Истребитель и наземная атака

Кингкобра P-63 эскадрильи Призраков.

Источник изображения: компакт-диск Призрачной эскадрильи ВВС Конфедерации производства Corel. Фотографии Билла Крампа.

Развитый от более раннего Bell P-39 Airacobra, P-63 отличался крыльями с ламинарным потоком и более мощная версия двигателя Allison V-12 с жидкостным охлаждением, объединение которых обеспечивает более высокую скорость.Ни P-39, ни P-63 не были успешными как высотные истребители, но оба нашли их ниша как штурмовики.

И P-39, и более поздний P-63 были необычны в дизайн и внешний вид по сравнению с другими современными американскими истребителями. С двигателем установленный за кабиной, гребной винт приводился в движение длинным карданным валом, который проходил через под пилотом и между его ног. В кабине также были двери, похожие на автомобильные, укомплектован опускающимися окнами на многих моделях.Наконец самолет сел на трехколесный велосипед. шасси, с передним колесом вместо более обычного хвостового колеса.

Опытный образец Kingcobra, XP-63A был первым совершил полет 26 апреля 1943 года, а поставки серийных P-63A начались в октябре того же года. Было построено более 3300 P-63 всех типов, но более 2400 отправились в Россию и еще 300 - военно-воздушным силам Свободной Франции. Маловероятно, что какие-либо Р-63 использовались в боевые действия USAAF.

со стрельбой из 37-мм автоматической пушки. через коленчатый вал двигателя, P-63 наносил мощный удар при использовании в качестве грунта. штурмовик, артиллерийские снаряды способны уничтожать вражеские грузовики, поезда и даже танки всего несколькими попаданиями.Ранние версии Kingcobra имели только 30 снарядов. боеприпасы для пушки, но в более поздних версиях он был увеличен до 58.

Наверное, самое странное использование истребителя. поставлялся с модификацией ряда P-63 для Operation Pinball, оснащенных дополнительными толстая обшивка поверх фюзеляжа, пуленепробиваемое стекло кабины и сталь решетки и ограждения над воздухозаборниками двигателя и радиаторами охлаждающей жидкости.

Эта «броня» позволяла пинбол самолет, по которому будут стрелять воздушные артиллеристы на тренировке, со специальным хрупким (ломким) пули.Идея заключалась в том, чтобы артиллеристы тренировались в стрельбе вживую. быстро движущиеся самолеты атакуют их учебные бомбардировщики. Предполагалось, что каждая хрупкая пуля для продвижения счетчика попаданий в самолет-цель, показывающего, как часто наводчик находился на цель. Кроме того, фонарь, установленный в носовой части гребного винта, должен был мигать с каждым ударом!

Технические характеристики
Один пилот

One Allison V-1710-93 / 95 Двигатель
V-12 с наддувом, рядный
с жидкостным охлаждением 1325 л.с. при 3000 об / мин

Одна 37-мм пушка
Четыре.Пулеметы 50 калибра
До 1500 фунтов бомб

Макс. Скорость 408 миль / ч на высоте 25000 футов
Крейсерская скорость 378 миль / ч
Посадочная скорость 100 км / ч

Набор высоты на 25000 футов за 7,3 минуты
Практический потолок 43000 футов

Длина 32 фута 8 дюймов
Высота 12 футов 7 дюймов
Размах крыла 38 '4 "

Макс. Вес 10500 фунтов
Масса пустого 6,375 фунтов

Обычное топливо 126 галлонов
Максимум.Топливо 451 галлон

Нормальная дальность полета 450 миль
Максимальная дальность 2200 миль

CAF Dixie Wing P-63A Летит!

Красивый силуэт Bell P-63 Kingcobra. (Фото Джона Уилхоффа) Красивый силуэт Bell P-63 Kingcobra. (Фото Джона Уилхоффа)

Морено Агуари и Стивен Чапис

После более чем 40 лет с момента его последнего полета, 16 лет восстановления, пострадавшего от наводнения на реке Миссисипи в 1993 году и бесчисленных человеко-часов преданными добровольцами CAF Dixie Wing, памятными военно-воздушными силами (CAF) Дикси Винг Белл П. -63A-6 Kingcobra с серийным номером 42-68941 впервые вылетел в субботу 18 февраля 2017 года.Сразу после 13:00 по местному времени пилот Джим Дейл вылетел из регионального аэропорта Атланты, где располагается «Крыло Дикси». С момента получения сертификата летной годности несколько месяцев назад у него была возможность летать, но каждый раз что-то мешало, и рейс всегда откладывался.

Для этого важного испытательного полета Dixie Wing попросил опытного пилота Джима «Джей Ди» Дейла выполнить важнейший первый полет после восстановления. Джей Ди - директор по техническому обслуживанию коллекции Lewis Air Legends и лучший пилот P-63 в США.Первый полет С. Джима на «Кингкобре» совершился на самолете P-63 Pretty Polly из музея авиации Палм-Спрингс. Джим начал летать очень рано под присмотром своего отца, бывшего пилота B-29. Он приобрел опыт работы с историческими самолетами, работая на Стива Хинтона в «Мекке» боевых птиц, Чино, Калифорния. На сегодняшний день у Дейла более 6000 часов в боевых птицах.

Джим Дейл поднимает палец вверх после первого удачного полета. «Крыло Дикси» использовало имена Боба Бутиллера и Текса Лейтона, которые были двумя последними руководителями проекта во время реставрации.К сожалению, они оба летели на Запад раньше, чтобы увидеть полет P-63. (Фото Джея Бесса)

«Это был очень успешный испытательный полет, ребята из Dixie Wing проделали феноменальную работу, потребовалось много упорства, чтобы продержаться в этом проекте в течение 16 лет. Полет был отличным, никаких серьезных проблем, о которых нужно было сообщить, только незначительные изменения. Самолет был немного тяжелым с левым крылом, а органы управления немного тяжелыми, но ничего, что не может быть легко исправлено. Обрезки были отличными, легкими и быстро реагирующими ». Сказал Джим после первого полета.После первого полета Дейл и команда Dixie Wing провели разбор полетов и рассмотрели некоторые незначительные проблемы, возникшие в первом полете. По рекомендации Джима была произведена небольшая корректировка настроек числа оборотов гребного винта. Чуть позже 16:00 был проведен второй испытательный полет. На этот раз Джим пролетел немного дольше (около 25 минут), не столкнувшись с какими-либо серьезными проблемами. В воскресенье, 19 февраля, было выполнено еще три полета, и самолет снова показал себя отлично.

JD посадил Kingcobra после пятого и последнего полета дня. С субботы по воскресенье самолет налетал чуть более 3 часов. (Фото Чарльза Бёрчера)

Этот самолет Kingcobra присоединился к CAF, когда он был приобретен Уильямом Р. Роджерсом и Олином К. Крэбтри, оба из Роллинг-Форк, штат Миссисипи, 21 июня 1967 года. Последний сертификат летной годности этого самолета был выдан 21 июня 1967 года. 5 июня 1975 года, в то время мистер Роджерс был очень болен и хотел передать самолет в дар CAF, но скончался до того, как были завершены оформление документов.Однако его желание было хорошо известно, поэтому 5 октября 1975 года полковник «Левша» Гарднер направил самолет из Миссисипи в Харлинген, что было его последним известным рейсом.

В течение следующих двух десятилетий самолет был центром судебной тяжбы, а затем в 1995 году, когда он был принят на вооружение крыла Миссури, самолет был поврежден и несколько частей были потеряны, когда река Миссисипи вышла из берегов. Вскоре после этого Dixie Wing принял на вооружение подбитый P-63, который в декабре 1996 года был доставлен в Грузию.Реставрация, начавшаяся в 1999 году, шла медленно и неуклонно и часто затруднялась из-за отсутствия деталей, которые приходилось собирать с других самолетов или вручную делать в соответствии с исходными спецификациями.

Это был долгий путь, но благодаря неустанным усилиям преданных делу добровольцев этот редкий кусок истории авиации снова поднялся в небо, потому что в отличие от многих современных боевых птиц, которые вели довольно обычную жизнь во время своей военной карьеры, эта Kingcobra имеет значительную ценность. история летных испытаний.Он выкатился с завода Bell в Ниагара-Фолс 24 февраля 1944 года, где был официально принят ВВС США под номером 42-68941. Однако он был оставлен Bell в качестве испытательного самолета и предположительно использовался для тестирования модификаций, которые были обнаружены на более поздних моделях Kingcobra. Когда в январе 1945 года его служба в Bell была завершена, самолет был передан Исследовательскому центру Эймса Национального консультативного комитета по аэронавтике (NACA) в Моффет-Филд в Маунтин-Вью, Калифорния. Dixie Wing P-63 был одним из двух Kingcobras, назначенных Эймсу, и использовался в нескольких исследовательских программах.

Этот P-63 служил в качестве испытательного самолета Bell до января 1945 года, когда он был передан Национальному консультативному комитету по аэронавтике (NACA), предшественнику нынешнего НАСА. Фотография раскрашена Лео Детерманом.

. Самое главное, что Крыло получило очень важную фотографию того периода, когда она была в NACA, которая точно показывает, как Kingcobra выглядела во время летных испытаний в Эймсе. Это дает Dixie Wing уникальную возможность, не похожую ни на что другое в CAF; чтобы воздать должное преданности делу и самопожертвованию сотен безымянных летчиков-испытателей, которые каждый день выкладывают свои шкуры на кон, чтобы выйти за пределы конверта.

Волонтеры Dixie Wing, работавшие над реставрацией, позируют для официального фото после первого полета.

Посетите www.dixiewing.org, чтобы узнать больше о CAF Dixie Wing.

p63 является маркером базальных клеток простаты и необходим для развития простаты

Am J Pathol. 2000 Dec; 157 (6): 1769–1775.

, * † , * , * , * , * , * , , § , и * †

Sabina Signoretti Институт рака Фарбера, Бостон, Массачусетс; Отделение патологии,

Дэвид Уолтрегни

Институт рака Дана-Фарбер, Бостон, Массачусетс; Отделение патологии,

Джеймс Дилкс

Институт рака Дана-Фарбер, Бостон, Массачусетс; Отделение патологии,

Бет Исаак

Институт рака Дана-Фарбер, Бостон, Массачусетс; Отделение патологии,

Дуглас Лин

Институт рака Дана-Фарбер, Бостон, Массачусетс; Отделение патологии,

Леви Гарравэй

Институт рака Дана-Фарбер, Бостон, Массачусетс; Департамент патологии,

Энни Янг

Гарвардская медицинская школа, Бостон, Массачусетс; и Департамент патологии, §

Родольфо Монтирони

Университет Анконы, Анкона, Италия

Фрэнк МакКеон

Гарвардская медицинская школа, Бостон, Массачусетс; и Департамент патологии, §

Massimo Loda

Институт рака Дана-Фарбер, Бостон, Массачусетс; Отделение патологии,

Отделение онкологии взрослых, *

Институт рака Дана-Фарбер, Бостон, Массачусетс; отделение патологии,

Бригам и женская больница, Бостон, Массачусетс; и Департамент клеточной биологии,

Гарвардская медицинская школа, Бостон, Массачусетс; и Департамент патологии, §

Университет Анконы, Анкона, Италия

Авторское право © 2000, Американское общество следственной патологии Эта статья цитируется в других статьях в PMC.

Abstract

Гомолог p53 p63 кодирует различные изотипы, способные либо трансактивировать репортерных генов p53 ( TAp63 ), либо действовать как p53 -доминантно-негативные ( ΔNp63 ). p63 экспрессируется в базальных клетках многих эпителиальных органов, и его инактивация зародышевой линии у мышей приводит к агенезу таких органов, как придатки кожи и грудь. Здесь мы показываем, что базальные клетки простаты, но не секреторные или нейроэндокринные клетки, экспрессируют p63.Кроме того, базальные клетки предстательной железы в культуре преимущественно экспрессируют изотип ΔNp63α. Напротив, белок p63 не обнаруживается в аденокарциномах простаты человека. Наконец, что наиболее важно, мыши p63 (- / -) не развивают простату. Эти результаты показывают, что p63 необходим для развития простаты, и подтверждают гипотезу о том, что базальные клетки представляют и / или включают стволовые клетки простаты. Кроме того, наши результаты показывают, что иммуногистохимия p63 может быть ценным инструментом в дифференциальной диагностике доброкачественных и злокачественных поражений простаты.

p63 является недавно клонированным гомологом гена-супрессора опухоли p53 . 1-4 В отличие от p53 , ген p63 кодирует по крайней мере шесть основных изотипов. 4 Три изотипа ( TAp63 α, TAp63 β и TAp63 γ) содержат трансактивирующий (TA) домен и способны трансактивировать репортерных генов p53 и индуцировать апоптоз. Напротив, три других изотипа ( ΔNp63 α, ΔNp63 β и ΔNp63 γ) транскрибируются с внутреннего промотора, локализованного в интроне 3, не имеют домена ТА и действуют как доминантно-отрицательные для подавления трансактивации посредством оба изотипа p53 и TAp63 . p63 избирательно экспрессируется в компартменте базальных клеток различных эпителиальных тканей. 4,5 Кроме того, у мышей с дефицитом p63 обнаруживаются серьезные дефекты в развитии эпителиальных органов, которые экспрессируют белок p63, а именно агенез плоского эпителия, молочных желез, слюнных и слезных желез. 6,7 В целом эти результаты предполагают, что p63 может быть важным для поддержания популяции стволовых клеток в различных эпителиальных тканях.

Знания о молекулярных событиях, лежащих в основе развития простаты, ограничены.Нормальный эпителий простаты состоит из трех разных типов клеток: секреторных, базальных и нейроэндокринных. Подмножество клеток, которые морфологически и иммунофенотипически являются промежуточными между базальными и секреторными клетками, также было идентифицировано в нормальном эпителии простаты. 8-11 Это наблюдение привело к гипотезе о том, что базальные клетки представляют собой предшественников секреторных клеток. В противоположность этой гипотезе, исследования кинетики клеток в простате крыс предполагают, что базальные и секреторные клетки представляют собой независимые клоны, обладающие способностью к самообновлению. 12,13 Следовательно, существование стволовых клеток простаты, способных давать начало как базальным, так и секреторным клеткам, остается весьма спорным.

Ранее мы показали, что базальные клетки простаты человека и мыши экспрессируют белок p63 (см. Yang et al., , 4, , и данные не представлены). Этот результат предполагает, что p63 может играть критическую роль в развитии простаты, поддерживая популяцию стволовых клеток простаты. Однако, поскольку простата мыши начинает развиваться только в течение последних нескольких дней беременности 14,15 и p63 (- / -) мыши умирают при рождении, оценка развития простаты у этих мышей требует очень точного морфологического анализа и в настоящее время в литературе нет данных.

В настоящем исследовании мы впервые подтвердили, что p63 представляет собой селективный маркер базальных клеток в эпителии предстательной железы, анализируя экспрессию p63 в ряде нормальных клеток предстательной железы и в нормальных базальных клетках предстательной железы PrEC. Во-вторых, поскольку было продемонстрировано, что рак простаты экспрессирует маркеры секреторных клеток и обычно отрицателен для маркеров базальных клеток, 16,17 мы проанализировали экспрессию p63 в серии из 130 карцином простаты и в клеточных линиях рака простаты.Наконец, чтобы оценить роль p63 в развитии простаты, мы гистологически проанализировали периуретральную область на 1-й день у самцов мышей p63 (- / -).

Наши результаты показывают, что p63 является надежным маркером базальных клеток простаты и что изотип ΔNp63α наиболее широко представлен в нормальных базальных клетках простаты (PrEC). Поскольку белок p63 неизменно не обнаруживается при раке простаты, мы предполагаем, что экспрессия p63 может использоваться в дифференциальной диагностике доброкачественных и злокачественных поражений простаты.Наконец, что наиболее важно, наши результаты показывают, что экспрессия p63 необходима для нормального развития простаты мыши, предполагая, что p63-позитивные базальные клетки могут представлять / включать стволовые клетки простаты.

Материалы и методы

Образцы простатэктомии и линии клеток простаты

Это исследование было проведено после одобрения Институционального наблюдательного совета Института рака Даны Фарбер и Бригама и женской больницы.

Сто тридцать образцов рака простаты были извлечены из файлов отделений патологии Бригама и женской больницы, Медицинского центра Бет Исраэль Дьяконисса, Бостон, Массачусетс, и Университета Анконы, Италия, и использованы в экспериментах по иммуногистохимии. .Проанализированные пациенты с раком простаты включали 29 пациентов, получавших терапию полной андрогенной аблацией в течение 3 месяцев до операции (депо Золадекс каждые 28 дней плюс Касодекс 50 мг / день в течение 12 недель) и 101 пациент, которые не получали никакого лечения до операции.

Нормальные базалоидные клетки предстательной железы PrEC (Clonetics, Walkersville, MD) и линии клеток рака предстательной железы LNCaP, PC3 и DU145 (ATCC, Rockville, MD) использовали в экспериментах по иммуногистохимии, иммуноблоттингу и полимеразной цепной реакции (ПЦР) в реальном времени. .Клетки PC3 также использовали для экспериментов по трансфекции. Нормальные стромальные клетки предстательной железы PrSC (Clonetics) использовали в экспериментах по иммуноблоттингу.

Иммуногистохимия

Иммуноокрашивание проводилось во всех образцах тканей и залитых в парафин клеточных линиях с использованием антитела 4A4 против p63, которое распознает все шесть изотипов p63. 4 Подмножество из 58 образцов было дважды иммуноокрашено на p63 и HMWCK (34βE12; DAKO, Carpinteria, CA). Двойное иммуноокрашивание на p63 и хромогранин A (Novocastra Laboratories Ltd., Ньюкасл-он-Тайн, Великобритания) было выполнено в 10 образцах.

Для иммуноокрашивания p63 срезы размером 5 мкм депарафинизировали, регидратировали и подвергали микроволновой обработке в 10 ммоль / л цитратном буфере, pH 6,0 (BioGenex, San Ramon, CA) в печи мощностью 750 Вт в течение 15 минут. Слайдам давали остыть при комнатной температуре в течение 30 минут. Антитело 4A4 (разведение 1:50) наносили при комнатной температуре на 2 часа в автоматическом красителе (Optimax Plus 2.0 bc; BioGenex, San Ramon, CA). Этапы обнаружения выполнялись прибором с использованием набора MultiLink-HRP (BioGenex).Пероксидазную активность локализовали с помощью 3,3-диаминобензидина или 3,3-диаминобензидин-никельхлорида. Стандартизированные сроки разработки позволили точно сравнить все образцы.

Для экспериментов с двойным иммуноокрашиванием срезы тканей затем инкубировали со вторым антителом (анти-HMWCK или антихромогранином A) в разведении 1:50 в течение 30 минут. Детектирование проводили с использованием стрептавидина, конъюгированного с щелочной фосфатазой, и нового фуксина (BioGenex).

Замена первичного антитела фосфатно-солевым буфером (PBS) служила в качестве контроля с отрицательным окрашиванием.

Иммуноблот-анализ

Клетки PrEC, PrSC, LNCaP, PC3 и DU145 лизировали в 200 мкл лизирующего буфера (50 ммоль / л Трис, pH 7,5, 250 моль / л NaCl, 0,1% Triton X-100, 1 ммоль / Л этилендиаминтетрауксусной кислоты, 50 ммоль / л NaF, 0,1 ммоль / л Na 3 VO 4 ), содержащего 1 ммоль / л дитиотреитола, 1 ммоль / л фенилметилсульфонилфторида и коктейль ингибиторов протеазы (Boehringer Mannheim, Indianapolis, IN ). Иммуноблоттинг выполняли, как описано ранее 18 , с использованием антитела 4A4 против p63 при разведении 1: 250.

Трансфекция клеток

Клетки PC3 поддерживали в питательной среде F-12 с добавлением 8% фетальной бычьей сыворотки (Life Technologies, Inc., Gaithersburg, MD). Вектор pCDNA3, кодирующий изотип ΔNp63α ΔNp63α изотипа 4 , меченный эпитопом myc, трансфицировали в клетки PC3 с использованием реагента для трансфекции FuGENE 6 (Boehringer Mannheim) в соответствии с указаниями производителя. Вкратце, клетки PC3 инкубировали при 37 ° C в колбе на 250 мл с раствором, состоящим из 20 мкг ДНК, 30 мкл реагента для трансфекции FuGENE 6 и питательной среды F-12 с добавлением 8% фетальной бычьей сыворотки.Клетки собирали через 24 часа после трансфекции.

Количественная ПЦР в реальном времени (Taqman PCR)

Экстракция РНК и обратная транскрипция (RT)

Суммарную РНК экстрагировали из клеток PrEC, LNCaP, PC3 и DU145 с использованием мини-набора RNeasy (Qiagen, Chatsworth, CA) в соответствии с инструкциями производителя. Для синтеза кДНК 1 мкг общей РНК подвергали обратной транскрипции в 20 мкл реакционной смеси, содержащей 250 мкмоль / л каждого дНТФ, 20 ед. Ингибитора РНКазы, 50 ед. Обратной транскриптазы MuLV, 2.5 мкмоль / л случайных гексамеров и 1 × буфер (1,5 ммоль / л MgCl 2 ) (все реагенты были приобретены у PE Applied Biosystems, Foster City, CA). Реакционную смесь инкубировали при 42 ° C в течение 45 минут и затем денатурировали при 99 ° C в течение 5 минут. Для каждого образца также проводили контрольную реакцию, не содержащую фермент обратной транскриптазы.

ПЦР в реальном времени

Специфические праймеры и наборы зондов для TAp63 и изотипов ΔNp63 (рис. 1) были разработаны из последовательностей в базе данных GenBank с использованием Primer Express 1.0 (PE Applied Biosystems). Праймеры и зонды гибридизации охватывают интрон, чтобы исключить отжиг с геномной ДНК. Ген глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназы домашнего хозяйства (GAPDH) использовали в качестве эндогенного контроля для стандартизации количества РНК в каждой реакции (контрольные реагенты Taqman GAPDH). Все праймеры и зонды были синтезированы PE Applied Biosystems. ПЦР проводили на образцах кДНК с использованием детектора последовательности ABI PRISM 7700 (PE Applied Biosystems). Набор реагентов Taqman PCR Core (PE Applied Biosystems) использовали в соответствии с протоколом производителя со следующими модификациями: dUTP был заменен на dTTP, а инкубация с AmpErase была исключена.Для каждого тестируемого образца реакцию ПЦР проводили в объеме 50 мкл, содержащем 2 мкл реакции кДНК (что эквивалентно 100 нг матричной РНК) и 2,5 ед. AmpliTaq Gold. Олигонуклеотидные праймеры и флуорогенные зонды добавляли до конечной концентрации 100 нмоль / л каждый. Этап амплификации состоял из 60 циклов при 94 ° C в течение 45 секунд, 54 ° C в течение 45 секунд и 64 ° C в течение 1 минуты.

Последовательности, размеры ампликонов и локализация экзонов праймеров и зондов, используемых для эксперимента Taqman® PCR.

В каждом эксперименте дополнительные реакции с семью последовательными двукратными разведениями кДНК PrEC в качестве матрицы были выполнены с каждым набором праймеров и зондов ( TAp63 , ΔNp63 и GAPDH) на том же 96-луночном планшете для создания стандартных кривых. , который связывает пороговый цикл ( C T ) с количеством входных данных шаблона. Все образцы амплифицировали в трех экземплярах. Относительное количество каждого транскрипта p63 в каждой клеточной линии определяли с использованием метода стандартной кривой и путем нормализации уровней экспрессии мРНК GAPDH, как подробно описано в бюллетене пользователя системы обнаружения последовательностей ABI PRISM No.2 (PE Applied Biosystems) и в других местах. 19 Также рассчитывалась эффективность амплификации транскриптов ΔNp63 и TAp63. Поскольку они были примерно одинаковыми (кривая относительной эффективности TA / ΔN имела значение наклона 0,91), уровни транскриптов ΔNp63 и TAp63 можно было сравнивать с разумной точностью.

Анализ простаты p63 (- / -) и новорожденных мышей дикого типа.

p63 (- / -) мышей получали, как описано ранее. 6 Анализировали периуретральную область новорожденных самцов мышей p63 (- / -) и новорожденных самцов мышей B57Bl / 6 дикого типа (контроль).В частности, хвостовая часть каждого животного была разрезана вдоль корональной плоскости, зафиксирована в 10% забуференном формалине и залита парафином. Гистологическое исследование проводили на парафиновых срезах, окрашенных гематоксилином и эозином. Исследовали коронковые срезы по всей длине уретры. Кроме того, периуретральная область как новорожденных p63 (- / -), так и самцов мышей дикого типа была иммуноокрашена на p63, как описано в разделе «Иммуногистохимия».

Результаты

Белок p63 избирательно экспрессируется в ядрах базальных клеток нормальной предстательной железы

Образцы простатэктомии

Сначала мы определили экспрессию белка p63 в нормальной ткани простаты.Все образцы простатэктомии показали универсальное иммуноокрашивание p63 ядер базальных клеток, тогда как секреторные клетки были неизменно отрицательными (рис. 2а).

a: Нормальная предстательная железа демонстрирует избирательную ядерную экспрессию p63 в базальных клетках. b: Двойное иммуноокрашивание на p63 (черное ядерное окрашивание) и хромогранин A (красное цитоплазматическое окрашивание): нейроэндокринные клетки не экспрессируют p63. c: Двойное иммуноокрашивание на p63 (черное ядерное окрашивание) и HMWCK (красное цитоплазматическое окрашивание): большинство базальных клеток коэкспрессируют p63 и HMWCK.Подмножество базальных клеток экспрессирует только p63. d: Простата с гиперплазией базальных клеток, дважды иммуноокрашенная на p63 (коричневое ядерное окрашивание) и HMWCK (красное цитоплазматическое окрашивание): идентифицируется подмножество p63-положительных и HMWCK-отрицательных базальных клеток. e: Диспластические клетки из желез с интраэпителиальной неоплазией предстательной железы высокой степени являются отрицательными по экспрессии p63, тогда как может быть идентифицирован край остаточных p63-положительных базальных клеток. f: Клетки рака простаты не экспрессируют p63 ( слева, ), тогда как соседняя нормальная предстательная железа ( справа, ) показывает экспрессию p63 в базальных клетках.

Чтобы оценить экспрессию p63 в нейроэндокринных клетках и проверить совместную экспрессию p63 и HMWCK в базальных клетках, было выполнено двойное иммуноокрашивание на p63 / хромогранин A и p63 / HMWCK, соответственно. Нейроэндокринные клетки не экспрессировали белок p63 (рис. 2b). Двойное иммуноокрашивание на p63 и HMWCK показало совместную локализацию двух антигенов в большинстве базальных клеток. Однако было идентифицировано меньшинство (от ~ 1 до 5%) p63-положительных / HMWCK-отрицательных базальных клеток (рис. 2, c и d).

Нормальные клетки простаты (PrEC и PrSC)

Клетки PrEC и PrSC представляют собой коммерчески доступные нормальные базальные и стромальные клетки простаты, соответственно.Мы подтвердили с помощью иммуногистохимии базальный фенотип клеток PrEC (положительность для HMWCK и отрицательность для рецептора андрогена и простатоспецифического антигена) (Signoretti and Loda, неопубликованные данные).

По данным иммуногистохимии 80% клеток PrEC экспрессировали белок p63 в ядрах (рис. 3а). Иммуноблот-анализ лизата клеток PrEC с антителом против p63 показал основную полосу при ~ 80 кД и более слабую полосу при ~ 60 кД (рис. 3e). Напротив, клетки PrSC были отрицательными по экспрессии p63 при иммуноблоттинге (не показано).Иммуноблоттинг клеток PC3, трансфицированных вектором экспрессии млекопитающих, кодирующим изотип ΔNp63, меченный эпитопом myc, генерировал полосу, которая мигрировала немного медленнее, чем полоса 80 кДа, полученная с клетками PrEC (не показано). Эти результаты согласуются с нашими предыдущими данными, полученными на первичных кератиноцитах крайней плоти человека. 4 В совокупности наши результаты позволяют предположить, что ΔNp63α является преобладающим изотипом p63 в клетках PrEC.

a: p63 белок экспрессируется в ядрах ~ 80% нормальных базальных клеток PrEC простаты по данным иммуногистохимии.Клетки LNCaP ( b ), PC3 ( c ) и DU145 ( d ) не экспрессируют белок p63. e: Иммуноблоттинг лизата клеток PrEC ( дорожка 1 ) с антителом против p63 показывает основную полосу при ~ 80 кД и более слабую полосу при ~ 60 кД. Клетки LNCaP (, дорожка 2, ), PC3 (, дорожка 3, ) и DU145 (, дорожка 4, ) отрицательны по экспрессии белка p63 при иммуноблоттинге.

Белок p63 не экспрессируется при интраэпителиальной неоплазии предстательной железы и инвазивном раке простаты

Образцы простатэктомии

Затем мы исследовали экспрессию белка p63 при 130 раках простаты человека.Экспрессию HMWCK одновременно анализировали в подгруппе из 58 случаев с помощью двойного иммуноокрашивания.

Интраэпителиальная неоплазия предстательной железы высокой степени была обнаружена в 48 из 130 образцов простатэктомии. Во всех случаях интраэпителиальной неоплазии предстательной железы диспластические клетки были отрицательными как для p63, так и для HMWCK, но можно было идентифицировать край остаточных p63-положительных базальных клеток (рис. 2e).

Сто двадцать шесть из 130 (97%) инвазивных опухолей простаты были отрицательными для p63 (рис. 2f), тогда как в четырех случаях <1% клеток были положительными как для p63, так и для HMWCK (не показано).Напротив, в трех случаях меньшая часть клеток (<5%) была положительной для HMWCK, но отрицательной для p63 (не показано).

Клеточные линии рака простаты (LNCaP, PC3, DU145)

По данным иммуноблоттинга и иммуногистохимического анализа клетки LNCaP, PC3 и DU145 были отрицательными по экспрессии белка p63 (рис. 3, b – e).

ΔNp63 является наиболее распространенным изотипом p63 в клетках PrEC

Иммуноблот-анализ показал, что ΔNp63α, вероятно, представляет собой наиболее распространенный белок p63 в клетках PrEC, тогда как линии клеток опухоли простаты отрицательны по экспрессии p63.Чтобы исследовать относительное количество изотипов p63 на уровне РНК, уровни транскриптов ΔNp63 и TAp63 сравнивали в клетках PrEC, LNCaP, PC3 и DU145 с помощью относительной количественной ПЦР в реальном времени (TaqMan-PCR). По сравнению с клетками PrEC и после нормализации уровней мРНК GAPDH уровни мРНК ΔNp63 были по крайней мере в 2000 раз ниже в клетках PC3 и не определялись в клетках LNCaP и DU145. Уровни мРНК TAp63 были сходными в клетках PrEC и PC3 (соотношение PC3 / PrEC = 1,3) и были значительно ниже в клетках LNCaP и DU145 с 14-кратным и 7-кратным снижением соответственно.Реакции, в которых не использовали фермент обратной транскриптазы, не приводили к значительной амплификации (данные не показаны). Эти результаты показывают, что транскрипты ΔNp63 практически отсутствуют в клеточных линиях рака простаты, тогда как уровни мРНК TAp63 обнаруживаются в различных количествах во всех трех протестированных линиях раковых клеток.

В клетках PrEC пороговый цикл (C T ) для амплификации ΔNp63 был значительно ниже по сравнению с C T для TAp63 (23 против 30, когда 100 нг РНК использовались в качестве матрицы. ) (не показано), что указывает на то, что транскрипты ΔNp63 экспрессируются на значительно более высоких уровнях, чем транскрипты TAp63 в этих клетках.

p63 необходим для нормального развития простаты у мышей

Гистологическое исследование всей длины уретры новорожденных p63 (- / -) самцов мышей выявило отсутствие простаты. В частности, никакие протоки или эпителиальные зачатки не могут быть идентифицированы ни в вентральной, ни в дорсолатеральной области периуретральной мезенхимы (Figure 4b). Напротив, у контрольных мышей эпителиальные структуры присутствовали как в вентральной, так и в дорсолатеральной частях периуретральной области (рис. 4а).Эпителиальные структуры состояли как из твердых зачатков, так и из мелких желез. По данным иммуногистохимии, как уротелиальные, так и базальные клетки простаты мышей дикого типа экспрессировали белок p63 (рис. 4а, вставка). Напротив, экспрессия p63 не могла быть обнаружена ни в эпителиальных, ни в стромальных клетках мышей p63 (- / -) (рис. 4b, вставка).

a: Венечный разрез периуретральной области мыши дикого типа показывает присутствие зачатков предстательной железы ( стрелок ) как в вентральной ( V ), так и в дорсолатеральной периуретральной области. Стрелки указывают на семявыбрасывающие протоки. По данным иммуногистохимии, базальные уротелиальные клетки и клетки простаты экспрессируют p63 ( вставка ). b: Венечный срез периуретральной области мыши p63 (- / -) показывает полное отсутствие простатических протоков или почкующихся структур как в вентральной ( V ), так и в дорсолатеральной области периуретральной мезенхимы. Экспрессия p63 не могла быть обнаружена ни в эпителиальных, ни в стромальных клетках с помощью иммуногистохимии ( вставка ).Выхлопные протоки ( стрелки ) находятся в задней периуретральной области. Отделенные уротелиальные клетки присутствуют в просвете уретры.

Обсуждение

Как ранее было продемонстрировано в системе кроветворения, рак возникает из клеток, задержанных на различных стадиях дифференцировки. 20 В результате идентификация стволовых клеток и последующих стадий дифференцировки в нормальных тканях является важным шагом в понимании механизмов, участвующих в неопластической трансформации.

В нормальном эпителии простаты родственные связи между секреторными, базальными и нейроэндокринными клетками, а также существование общего предшественника все еще остаются предметом споров. Подавляющее большинство рака простаты экспрессируют маркеры секреторных клеток, такие как рецептор андрогена и специфический антиген простаты, и отрицательны для маркеров базальных клеток. 16,17 Следовательно, общепринято считать, что рак простаты возникает в результате злокачественной трансформации секреторных клеток.Однако карциномы простаты могут также экспрессировать гены, характерные для базальных клеток. 17,21-25 Таким образом, клетка, из которой возникает рак простаты, до сих пор неизвестна.

Ген p63 экспрессируется исключительно в базальных клетках нескольких эпителиальных органов и, как предполагается, играет важную роль в поддержании компартмента стволовых клеток в этих органах. 4,6,7 Здесь, в большой серии образцов предстательной железы, мы подтверждаем, что белок p63 избирательно экспрессируется в ядрах базальных клеток нормальной предстательной железы.Кроме того, мы показываем, что гомозиготная инактивация этого гена у мышей приводит к агенезу простаты.

Поскольку p63 избирательно экспрессируется в базальных клетках простаты взрослых и не обнаруживается в стромальных клетках простаты взрослых как in vivo , так и in vitro , дефект развития простаты у p63 (- / -) мышей, вероятно, приписывают к эпителиальному компоненту. Однако p63 может иметь важное значение либо для поддержания популяции эпителиальных стволовых клеток простаты, либо для поддержания популяции базальных клеток, которые не представляют собой компартмент стволовых клеток как таковой , но важен для развития простаты (например, передачи сигналов в окружающую мезенхиму).

Мышь p63 (- / -) является первой инженерной моделью на животных, демонстрирующей агенез простаты. Дальнейшие манипуляции с этой моделью на животных, безусловно, предоставят уникальный инструмент для изучения развития, дифференциации и неопластической трансформации простаты.

В базальных клетках простаты, выращенных in vitro , преимущественно экспрессируемым изотипом p63 является ΔNp63α, в котором отсутствует трансактивирующий домен. Было показано, что этот изотип действует как доминантно-отрицательный при трансактивации как TAp63 , так и p53 . 4 Ранее мы показали, что дифференцировка кератиноцитов in vitro связана с подавлением транскриптов ΔNp63. 5 Поскольку секреторные клетки не экспрессируют p63, мы предполагаем, что подавление изотипа ΔNp63α может потребоваться для дифференцировки базальных клеток в секреторные. Эти находки интересны тем, что р53-опосредованная транскрипционная активность увеличивается во множестве дифференцирующихся клеток, включая мышечные клетки и кератиноциты, несмотря на неизменные 26 или снижение уровней белка p53. 27 Кроме того, трансфекция мутантного p53 27 или доминантно-отрицательного p53 26 приводит к отсутствию p53 -зависимой трансактивации и дифференцировки, что позволяет предположить, что транскрипция p53 -регулируемых генов возможна. необходимо для дифференциации. Однако, поскольку терминальная дифференцировка происходит в p53 (- / -) клетках, гомологов p53 , включая TAp63 , могут иметь перекрывающиеся функции с функциями p53 при дифференцировке.В целом, эти данные предполагают, что облегчение доминантно-отрицательной функции ΔNp63 в базальных клетках может быть необходимо для активации p53 -зависимого генного транскрипционного аппарата, необходимого для дифференцировки этих клеток в секреторные клетки.

Мы продемонстрировали, что p63 не экспрессируется при карциноме простаты. Это открытие подтверждает гипотезу о том, что карциномы простаты имеют секреторный фенотип. Поскольку мы показали, что p63 экспрессируется практически во всех базальных клетках, включая субпопуляцию клеток, отрицательную по HMWCK, иммуногистохимия p63 может быть ценным инструментом для дифференциальной диагностики доброкачественных и злокачественных поражений простаты.

В заключение, маркер базальных клеток p63 важен для развития простаты у мышей, что позволяет предположить, что базальные клетки простаты могут представлять и / или включать стволовые клетки простаты. Кроме того, из-за универсальной экспрессии p63 базальными клетками иммуногистохимия p63 может быть полезным дополнением к морфологическому анализу в условиях хирургической патологии простаты.

Сноски

Запросы на перепечатку направляйте Массимо Лода, отделение онкологии взрослых, Институт рака Даны Фарбер, Дана 740B, 44 Binney St., Бостон, Массачусетс 02215. Электронная почта: .ude.dravrah.icfd @ adol_omissam

При поддержке грантов CaPCURE, Национального института рака (Калифорния, 81755–03) и Министерства обороны (DAMD 17 98-8574).

Ссылки

1. Osada M, Ohba M, Kawahara C, Ishioka C, Kanamaru R, Katoh I, Ikawa Y, Nimura Y, Nakagawara A, Obinata M, Ikawa S: Клонирование и функциональный анализ человеческого p51, который структурно и функционально похож на p53. Nat Med 1998, 4: 839-843 [PubMed] [Google Scholar] 2. Senoo M, Seki N, Ohira M, Sugano S, Watanabe M, Inuzuka S, Okamoto T, Tachibana M, Tanaka T, Shinkai Y, Kato H: второй родственный p53 белок, p73L, с высокой гомологией с p73.Biochem Biophys Res Commun 1998, 248: 603-607 [PubMed] [Google Scholar] 3. Trink B, Okami K, Wu L, Sriuranpong V, Jen J, Sidransky D: новый гомолог p53 человека. Nat Med 1998, 4: 747-748 [PubMed] [Google Scholar] 4. Yang A, Kaghad M, Wang Y, Gillett E, Fleming MD, Dotsch V, Andrews NC, Caput D, McKeon F: p63, гомолог p53 в 3q27-29, кодирует несколько продуктов с трансактивирующими, вызывающими смерть и доминантными отрицательная деятельность. Mol Cell 1998, 2: 305-316 [PubMed] [Google Scholar] 5. Парса Р., Ян А., МакКеон Ф, Грин Х: Ассоциация p63 с пролиферативным потенциалом в нормальных и неопластических кератиноцитах человека.J Invest Dermatol 1999, 113: 1099-1105 [PubMed] [Google Scholar] 6. Yang A, Schweitzer R, Sun D, ​​Kaghad M, Walker N, Bronson RT, Tabin C, Sharpe A, Caput D, Crum C, McKeon F: p63 необходим для регенеративной пролиферации конечностей, черепно-лицевого и эпителиального развития. Nature 1999, 398: 714-718 [PubMed] [Google Scholar] 7. Mills AA, Zheng B, Wang XJ, Vogel H, Roop DR, Bradley A: p63 является гомологом p53, необходимым для морфогенеза конечностей и эпидермиса. Nature 1999, 398: 708-713 [PubMed] [Google Scholar] 8.Verhagen AP, Aalders TW, Ramaekers FC, Debruyne FM, Schalken JA: Дифференциальная экспрессия кератинов в базальном и просветном отделах эпителия предстательной железы крыс во время дегенерации и регенерации. Простата 1988, 13: 25-38 [PubMed] [Google Scholar] 9. Jones EG, Harper ME: Исследования пролиферации, секреторной активности и экспрессии рецепторов эпидермального фактора роста в культурах эксплантатов доброкачественной гиперплазии предстательной железы. Простата 1992, 20: 133-149 [PubMed] [Google Scholar] 10. Peehl DM, Leung GK, Wong ST: Экспрессия кератина: мера фенотипической модуляции эпителиальных клеток предстательной железы человека факторами ингибирования роста.Cell Tissue Res 1994, 277: 11-18 [PubMed] [Google Scholar] 11. Робинсон EJ, Neal DE, Collins AT: Базальные клетки являются предшественниками клеток просвета в первичных культурах дифференцирующегося эпителия предстательной железы человека. Prostate 1998, 37: 149-160 [PubMed] [Google Scholar] 12. English HF, Santen RJ, Isaacs JT: Ответ железистых и базальных эпителиальных клеток вентральной простаты крысы на отмену и замену андрогенов. Простата 1987, 11: 229-242 [PubMed] [Google Scholar] 13. Эванс Г.С., Чендлер Дж.А.: Исследования пролиферации клеток в простате крыс: II.Влияние кастрации и андроген-индуцированной регенерации на пролиферацию базальных и секреторных клеток. Простата 1987, 11: 339-351 [PubMed] [Google Scholar] 14. Cunha GR, Donjacour AA, Cooke PS, Mee S, Bigsby RM, Higgins SJ, Sugimura Y: Эндокринология и биология развития простаты. Endocr Rev 1987, 8: 338-362 [PubMed] [Google Scholar] 15. Бхатия-Гаур Р., Донжакур А.А., Шаволино П.Дж., Ким М., Десаи Н., Янг П., Нортон С.Р., Гридли Т., Кардифф Р.Д., Кунха Г.Р., Абате-Шен С., Шен М.М.: роли для Nkx3.1 в развитии простаты и раке. Genes Dev 1999, 13: 966-977 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 16. Nagle RB, Ahmann FR, McDaniel KM, Paquin ML, Clark VA, Celniker A: Цитокератиновая характеристика карциномы предстательной железы человека и производных от нее клеточных линий. Cancer Res 1987, 47: 281-286 [PubMed] [Google Scholar] 17. Лю А.Ю., True LD, LaTray L, Nelson PS, Ellis WJ, Vessella RL, Lange PH, Hood L, van den Engh G: межклеточное взаимодействие в регуляции генов простаты и цитодифференцировке. Proc Natl Acad Sci USA 1997, 94: 10705-10710 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 18.Pagano M, Tam SW, Theodoras AM, Beer-Romero P, Del Sal G, Chau V, Yew PR, Draetta GF, Rolfe M: роль пути убиквитин-протеасома в регулировании количества циклин-зависимого ингибитора киназы p27. Science 1995, 269: 682-685 [PubMed] [Google Scholar] 19. Финк Л., Сигер В., Эрмерт Л., Ханце Дж., Шталь У., Гриммингер Ф., Куммер В., Боле Р. М.: Количественная ОТ-ПЦР в реальном времени после отбора клеток с помощью лазера. Nat Med 1998, 4: 1329-1333 [PubMed] [Google Scholar] 20. Сойерс CL, Денни CT, Витте ON: Лейкемия и нарушение нормального кроветворения.Cell 1991, 64: 337-350 [PubMed] [Google Scholar] 21. McDonnell TJ, Troncoso P, Brisbay SM, Logothetis C, Chung LW, Hsieh JT, Tu SM, Campbell ML: Экспрессия протоонкогена bcl-2 в простате и ее связь с возникновением андроген-независимого рака простаты. Cancer Res 1992, 52: 6940-6944 [PubMed] [Google Scholar] 22. Colombel M, Symmans F, Gil S, O’Toole KM, Chopin D, Benson M, Olsson CA, Korsmeyer S, Buttyan R: Обнаружение подавляющего апоптоз онкопротеина bc1–2 в гормонорезистентных раках предстательной железы человека.Am J Pathol 1993, 143: 390-400 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 23. Pisters LL, Troncoso P, Zhau HE, Li W, von Eschenbach AC, Chung LW: экспрессия протоонкогена c-met в доброкачественных и злокачественных тканях предстательной железы человека. J Urol 1995, 154: 293-298 [PubMed] [Google Scholar] 24. Reiter RE, Gu Z, Watabe T, Thomas G, Szigeti K, Davis E, Wahl M, Nisitani S, Yamashiro J, Le Beau MM, Loda M, Witte ON: Антиген стволовых клеток простаты: сверхэкспрессируемый маркер клеточной поверхности при раке простаты . Proc Natl Acad Sci USA 1998, 95: 1735-1740 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 25.Gu Z, Thomas G, Yamashiro J, Shintaku IP, Dorey F, Raitano A, Witte ON, Said JW, Loda M, Reiter RE: Экспрессия антигена стволовых клеток простаты (PSCA) увеличивается с высоким показателем Глисона, поздней стадией и метастазами в кости в рак простаты. Онкоген 2000, 19: 1288-1296 [PubMed] [Google Scholar] 26. Тамир Y, Бенгалия. Белок E: p53 активируется во время дифференцировки мышц и вместе с MyoD участвует в транскрипции гена креатинкиназы в мышцах. Онкоген 1998, 17: 347-356 [PubMed] [Google Scholar] 27.Weinberg WC, Azzoli CG, Chapman K, Levine AJ, Yuspa SH: р53-опосредованная транскрипционная активность увеличивается в дифференцирующихся эпидермальных кератиноцитах в сочетании со сниженным содержанием белка р53. Онкоген 1995, 10: 2271-2279 [PubMed] [Google Scholar]

С-конец p63 важен для целостности ооцитов мышей

Генерация Δ13p63 гетерозиготных мышей и поддержание колонии мышей

Экзон P63 Были созданы мыши с флоксированным аллелем 13 от Ozgene (Ozgene Pty Ltd, Бентли, Австралия), и флоксовая / + колония была амплифицирована путем скрещивания с мышами C57Bl / 6J дикого типа.Гетерозиготных мышей floxed / + скрещивали с гомозиготными мышами Tg (CMV-cre) 1Cgn 59 для получения аллеля с делецией 13 экзона p63 (Δ13p63). Гетерозиготных мышей Δ13p63 / CMV-Cre подвергали обратному скрещиванию с мышами C57Bl / 6J дикого типа для потери аллеля CMV-Cre. Полученных чистых гетерозиготных мышей Δ13p63 скрещивали, как описано в таблице S1. Трансгенный p-70 GFP / c-Kit . 60 самок мышей скрещивали с гетерозиготными мышами-самцами Δ13p63 для получения гетерозиготных яичников p-70 GFP / c-Kit Δ13p63. Генотипы мышей оценивали с помощью ПЦР с использованием праймеров, перечисленных в дополнительной таблице 1.Мышей разводили в доме и помещали в комнату колонии мышей с контролируемой температурой и светом (12-часовой цикл свет / темнота) и имели свободный доступ к пище и воде. Все эксперименты были одобрены Комитетом по уходу и использованию животных (IACUC) и проводились в соответствии с итальянскими и европейскими правилами (D.L.116 / 92; C.E. 609/86; Европейская директива 2010/63 / EU). Лицензия на эксперименты на мышах № 817 / 2016PR (Министерство здравоохранения Италии).

Клеточные культуры, трансфекции и люциферазные тесты Waltham, MA, USA) и 1% пенициллин / стрептомицин (Thermo Fisher, Waltham, MA, USA) при 37 ° C в увлажненной атмосфере с 5% (об. / Об.) CO

2 в воздухе.

Всего 1,2 × 10 5 клеток HEK293 высевали в 12-луночные чашки за 24 ч до трансфекции. Всего 100 нг векторов pGL3, 300 нг векторов экспрессии трансактиваторов и 10 нг вектора люциферазы Renilla pRL-CMV (Promega, Мэдисон, Висконсин, США) котрансфицировали с использованием Effectene Reagent (Qiagen, Hilden, Германия) в соответствии с инструкциями производителя. протокол. Векторы pGl3, содержащие p63-чувствительные элементы в промоторах ENV и BPAG1 61 .

Puma и Noxa p63-чувствительные элементы, описанные до 14 , амплифицировали с помощью ПЦР из геномной ДНК человека и клонировали в векторе pGL3basic (Promega, Мэдисон, Висконсин, США).Относительные активности люцифераз измеряли через 24 часа после трансфекции с использованием системы анализа двойных люциферазных репортеров (Promega, Мэдисон, Висконсин, США). Световое излучение измеряли в течение 10 с с помощью люминометра Lumat LB9507 (EG&G Berthold, Wildbad, Германия). Эффективность трансфекции нормализовали по активности люциферазы Renilla.

Всего 0,8 × 10 5 клеток h2299 высевали в 12-луночный планшет за 24 ч до трансфекции. 267 нг векторов Puma 4xBS2WT-Luc 62 (любезный подарок от Б.Vogelstein), pcDNA3 и pRL-CMV котрансфицировали с использованием Lipofectamine® 2000 в соответствии с инструкциями производителя и выращивали в течение 24 часов. Относительную активность люциферазы измеряли, как описано ранее. Измерения проводили на многомодовом считывающем устройстве для микропланшетов Tecan Spark (Tecan, Männedorf, Швейцария). Всего за 24 ч до трансфекции засевали 4 × 10 5 клеток h2299. Такое же количество экспрессионных векторов TAp63α и TAp63β, меченных НА, или пустого вектора, что и в контроле, котрансфицировали с использованием Effectene Reagent (Qiagen, Hilden, Германия) в соответствии с протоколом производителя.Через 24 часа после трансфекции среду удаляли и заменяли полной свежей средой. Добавляли 10 мкМ MG132 или ДМСО в качестве контроля. Через 1 час начинали обработку циклогексимидом (50 мкг / мл) и отбирали образцы через 0, 2, 4, 6 и 8 часов.

Первичные кератиноциты мышей выделяли из кожи новорожденных мышей и собирали в условиях пролиферации. На короткое время новорожденных мышей умерщвляли, эпидермисы отделяли от дермы инкубацией в течение ночи в трипсине, затем их измельчали ​​ножницами, растирая пипеткой несколько раз.Отдельные клетки фильтровали через сетчатый фильтр для клеток 100 мкм (Corning, Glendale, AZ, USA), центрифугировали при 700 об / мин в течение 7 минут и, наконец, высевали на чашки, покрытые коллагеном из хвоста крысы (Corning, Glendale, AZ, USA), в среде с низким содержанием кальция. : EMEM 06-174G (LONZA Bioscience, Базель, Швейцария), 8% хелатный FBS, раствор антибиотика / антимикотика (Sigma, Сент-Луис, Миссури, США) и 0,05 мМ CaCl 2 . Через 24 часа адентные клетки промывали трижды в PBS, а затем собирали для обработки по желанию.

Экстракция РНК и анализ ПЦР в реальном времени

Общая РНК была выделена из тканей мыши с помощью RNeasy Mini Kit (Qiagen, Hilden, Германия) и ретранскрибирована с помощью системы обратной транскрипции GoScript (Promega, Мэдисон, Висконсин, США) в соответствии с протоколом производителя . ПЦР в реальном времени выполняли с использованием GoTaq qPCR Master Mix (Promega, Мэдисон, Висконсин, США). Используемые праймеры перечислены в дополнительной таблице 1. Экспрессия каждого гена была определена из порогового цикла (Ct), а относительные уровни экспрессии были рассчитаны с использованием метода 2 - ΔΔCt после нормализации в отношении экспрессии β-актина как ген домашнего хозяйства.Полуколичественная ПЦР с конечной точкой выполнялась с использованием полимеразы GoTaq (Promega, Мэдисон, Висконсин, США) в соответствии с протоколом производителя. Используемые праймеры перечислены в дополнительной таблице 1.

Гистология и иммунофлуоресценция

Свежевыделенные образцы кожи и тимуса мыши помещали в ОКТ (Bio-Optica, Милан, Италия), делали криосрезы (10 мкм) и фиксировали срезы в 4% параформальдегиде для 10 минут при комнатной температуре. Семенники и яичники фиксировали непосредственно в 4% параформальдегиде (12–16 ч), затем заливали парафином и окрашивали H / E или PAS в соответствии со стандартными процедурами.

Для иммунофлуоресцентного (IF) окрашивания криосрезы (10 мкм) фиксировали в 4% параформальдегиде в течение 10 минут при комнатной температуре. Неспецифические антигены блокировали инкубацией в 5% козьей сыворотке в PBS в течение 1 ч во влажной атмосфере при комнатной температуре. Затем срезы инкубировали с первичными антителами в течение 2 ч при комнатной температуре. Затем срезы трижды промывали PBS и инкубировали в течение 1 ч с соответствующими вторичными антителами, конъюгированными с Alexa Fluor 488 или 568 (Thermo Fisher, Waltham, MA, USA) и DAPI.Затем слайды монтировали с использованием Prolong Antifade (Thermo Fisher, Waltham, MA, USA). IF-изображения получали с помощью конфокального лазерного микроскопа Nikon A1 (Nikon, Токио, Япония).

Для подсчета фолликулов целые яичники P1 были разделены и окрашены первичным антителом против MSY2. Все MSY2-положительные ооциты подсчитывали в каждом пятом срезе по всему яичнику, и среднее общее количество ооцитов / срезов умножали на общее количество срезов каждого яичника.

Каталожные номера и источники первичных антител были следующими: анти-K5 (PRB-160P BioLegend; Сан-Диего, Калифорния, США; 1/1000), Troma-1 (анти-K8, Банк гибридных исследований развития, Айова-Сити , IA, США; 1/2000), анти-K14 (PRB-155P BioLegend; Сан-Диего, Калифорния, США; 1/1000), анти-K10 (PRB-159P BioLegend; Сан-Диего, Калифорния, США; 1/1000 ), анти Ki67 (-D3B5 Cell Signaling Technologies, Дэнверс, Массачусетс, США; 1/200), анти-β4 интегрин (611232, BD Biosciences, Сан-Хосе, Калифорния, США), анти-p63 (D9L7L, Cell Signaling Technologies, Данверс, Массачусетс, США; 1/200) и Msy2 (A12 Santa Cruz Biotechnologies, Даллас, Техас, США; 1: 2000).

Культура яичников

Яичники собирали в точке P1 у мышей p-70 GFP / c-Kit и культивировали в четырехлуночных планшетах для культивирования тканей в 0,3 мл α-MEM с добавлением 10% FBS, L-глутамина, пенициллина-G , стрептомицин, пировиноградная кислота, N-ацетил-L-цистеин и добавка жидкой среды ITS при 37 ° C в 5% CO 2 в течение максимум 7 дней; среду меняли каждые 2 дня. В экспериментах, в которых наблюдали за динамикой дегенерации ооцитов в присутствии 50 мкМ Z-VAD-FMK или DSMO, чтобы способствовать диффузии ингибитора, каждый яичник разрезали на четыре части и культивировали в течение 4 дней в описанных условиях. выше, за исключением того, что среду меняли каждый день.Затем яичники и фрагменты были проанализированы для получения конфокальных изображений с 3D-рендерингом. Z-стеки были получены через каждые 5 мкм, всего 300 мкм, а 3D-рендеринг был выполнен с помощью программного обеспечения NIS Elements (Nikon, Токио, Япония) с использованием алгоритма альфа-смешивания. Чтобы оценить количество ооцитов в эксперименте с обработкой Z-VAD, суммарную интенсивность флуоресценции GFP на фрагмент количественно определяли для каждой временной точки (от P1 до P4) с использованием программного обеспечения NIS Elements. Значения интенсивности на фрагмент для каждой временной точки были нормализованы к значениям интенсивности на P1.Коэффициент Пирсона (R) был рассчитан для подтверждения корреляции между интенсивностью флуоресценции GFP и количеством ооцитов. Подсчитанные вручную ооциты на Р4 использовали для корреляционного анализа.

Вестерн-блоттинг

Экстракты клеток и тканей разделяли на SDS-полиакриламидных гелях и наносили на Hybond P, PVDF-мембрану (GE Healtcare Chicago, IL, USA). Мембраны блокировали 5% обезжиренным сухим молоком PBST, инкубировали с первичными антителами в течение 2 ч при комнатной температуре, промывали и гибридизовали с конъюгированными с пероксидазой вторичными антителами в течение 1 ч при комнатной температуре (козьи антикроличьи или козьи антимышиные, Biorad Геркулес, Калифорния, США).Обнаружение выполняли с помощью набора для хемилюминесценции ECL (Perkin Elmer, Waltham, MA, USA). Используемые антитела: анти-p63α (D2K8X, Cell Signaling Technologies, Danvers, MA, США; разведение 1/500), анти-p63 (D9L7L). , Cell Signaling Technologies, Данверс, Массачусетс, США; 1/250), анти-GAPDH (клон 6C5, Merck Millipore, Дармштадт, Германия), анти-HA.11 (Biolegend, Сан-Диего, Калифорния, США; 1/500) и анти-βактин (AC-15, Sigma, Сент-Луис, Миссури, США; 1/5000).

Необрезанные блоты для вестернов и других блотов можно найти в файле исходных данных.

Экспрессия in vitro и клеток млекопитающих с последующим синим нативным PAGE (BN-PAGE)

Для BN-PAGE различные изоформы / мутанты p63 экспрессировались либо в клетках h2299, либо с использованием системы лизата связанных ретикулоцитов TNT® T7 (Promega, Мэдисон, Висконсин, США) в соответствии с протоколом производителя. Для экспрессии в клетках h2299 клетки трансфецировали, собирали и лизировали в буфере для лизиса 1 × BN-PAGE (50 мМ Tris pH 8,0, 100 мМ NaCl, 20 мМ CHAPS, 0,5 мМ TCEP, 2 мМ MgCl 2 , 1 × cOmplete (Roche, Базель, Швейцария) и 1 × PhosSTOP (Roche, Базель, Швейцария) с добавлением 1 мкл бензоназы (Merck) на льду в течение 1 часа.К супернатанту добавляли 3 × Native PAGE буфер для образцов (60% глицерина об. / Об., 15 мМ кумасси G250), и образцы анализировали с использованием гелевой системы BN-PAGE Novex 3–12% Bis-Tris (Life Technologies) в соответствии с инструкции производителя. В катодный буфер добавляли 0,002% кумасси G250, и разделение проводили при 4 ° C в течение 60 минут при 150 В, а затем 60 минут при 250 В. BN-PAGE переносили на PVDF-мембрану 0,45 мкм с использованием резервуара. метод блоттинга от Life Technologies (модуль блоттинга XCell II) в соответствии с инструкциями производителя.Белки переносили при 30 В в течение 105 мин при 4 ° C с предварительно охлажденными буферами для переноса 1 × NuPAGE TM . После переноса мембрану инкубировали 15 мин в 8% уксусной кислоте, а затем обесцвечивали 100% метанолом. Для экспрессии in vitro 20 мкл лизата ретикулоцитов смешивали с 1 мкг ДНК в общем объеме 25 мкл. После 90 минут при 30 ° C 20 мкл реакционной смеси смешивали со 100 мкл 2 × нативного буфера для PAGE в общем объеме 200 мкл. Затем 10 мкл этой смеси смешивали с 5 мкл 3 × нативного загрузочного буфера для PAGE (60% глицерина и 15 мМ Coomassie G250).Впоследствии для нативного PAGE и вестерн-блоттинга использовали всего 7,5 мкл каждого конечного образца, как описано ранее 29 . Изоформы / мутанты p63 были обнаружены с использованием N-концевой Myc-Tag (антитело против Myc 4A6, Millipore, Берлингтон, Массачусетс, США) или p63-специфического антитела (ab124762, Abcam, Кембридж, Великобритания).

In silico анализ склонности к агрегации

Алгоритм TANGO (http://tango.crg.es/) был использован для исследования склонности к β-агрегации у мутантов p63α дикого типа и синдромальных онтогенетических мутантов.Для анализа были выбраны следующие параметры: pH 7,2, температура 4 ° C и ионная сила 0,15 M.

Статистика и воспроизводимость

Данные представлены как отдельные значения и / или средние значения ± стандартное отклонение (SD), если не указано иное. . Достоверность экспериментальных результатов оценивали с помощью теста Стьюдента t , различия с p <0,05 считались достоверными. Статистические данные по непарному тесту Стьюдента t , критерию хи-квадрат и корреляционному анализу Пирсона выполнялись с помощью GraphPad Prism 7.0 (GraphPad Software Inc., Сан-Диего, Калифорния, США). Все эксперименты проводились не менее трех раз.

Сводка отчетов

Дополнительная информация о дизайне исследований доступна в Сводке отчетов по исследованиям природы, связанной с этой статьей.

Рассечение ландшафта связывания ДНК и регуляторной сети генов p63 и p53

Существенных изменений:

1) «Примечательно, что когда мишени DREAM уже были подавлены посредством обработки Nutlin в клетках MCF10A, потеря p63 снизила их экспрессию еще больше (Рисунок 3C) (Karsli Uzunbas et al., 2019), что указывает на возможный кумулятивный эффект, не зависящий от регуляторных функций p53, как предлагалось ранее (McDade et al., 2014). «Эта концепция неубедительна. На рисунке 3C действительно показаны условия shp63 и shp63 / Nutlin. В тексте вы упоминаете эффект только Nutlin, который не показан на графике. Пожалуйста, объясните. Более того, почему вы выдвигаете гипотезу о «возможном кумулятивном эффекте, который не зависит от регуляторных функций p53»? MCF10A должен иметь TP53 дикого типа.Итак, почему исключить влияние Nutlin на p53?

Мы благодарим рецензентов за замечание и пользуемся этой возможностью, чтобы добавить визуализацию и улучшить описание наших результатов и лежащих в их основе данных. Как правильно заметил автор обзора, клетки MCF10A обладают функциональным p53 дикого типа, в котором гены-мишени DREAM подавляются после индукции p53 обработкой Nutlin. Разница, отображаемая в shControl по сравнению с shp63 в обработанных Nutlin клетках MCF10A, указывает на то, что, хотя p53 активен в этих клетках, что приводит к активации DREAM и репрессии его мишеней, мы обнаружили, что эти гены дополнительно подавляются после истощения p63.Насколько мы понимаем, это указывает на кумулятивный эффект p53-зависимой активации DREAM и потерю активности активатора p63 на мишенях DREAM, что в значительной степени влияет на гены клеточного цикла. Следуя комментарию рецензентов, мы добавили новый рисунок 3D, который лучше визуализирует этот эффект, и улучшили описание в соответствующем параграфе результатов:

«Примечательно, что большинство наборов данных о p63-зависимой экспрессии гена было получено из клеток, в которых p63 был сверхэкспрессирован или истощен, без дополнительных обработок.[…] Поразительно, что истощение p63 снижает их экспрессию еще больше, не влияя на уровни CDKN1A (p21) (рис. 3D), что указывает на возможный кумулятивный эффект, не зависящий от регуляторных функций p53 ».

Кроме того, мы расширили обсуждение этого явления в разделе «Обсуждение»:

«Помимо косвенных эффектов, мы также предсказали, что множественные гены клеточного цикла являются прямыми мишенями для p63 (Таблица 1). […] В дополнение к роли p63 в непосредственном управлении экспрессией некоторых генов клеточного цикла, весь набор генов клеточного цикла может впоследствии косвенно активироваться через пролиферативные мишени p63.”

2) Рисунок 9: Выражается ли идентифицированная сигнатура p63 по-разному относительно состояния p63 (сверхэкспрессированного и / или амплифицированного) в общедоступных наборах данных HNSC с данными экспрессии и генома? Кроме того, на рисунке 9, является ли идентифицированная сигнатура прогностической специфичностью для HNSC, а не для других типов SCC?

Мы определенно считаем, что рецензент поднимает здесь два важных вопроса. Однако ниже мы хотели бы утверждать, что сложность этого вопроса лучше всего рассматривать в независимых исследованиях.

В контексте первоначально представленной рукописи мы не исследовали корреляцию между экспрессией p63 и уровнями набора из 28 генов. HNSC был выбран из-за его известной зависимости от p63 и доступности большого набора данных через TCGA. Целью этого краткого анализа было проверить и продемонстрировать потенциал генов, которые, как мы определили, часто активируются p63. Таким образом, уже в исходной версии рукописи мы только пришли к выводу, что «этот набор из 28 генов может содержать особенно многообещающие кандидаты для терапевтических вмешательств и для использования в качестве биомаркеров».Следовательно, мы отметили, что, хотя это и интересно, «это открытие требует более детальной оценки повсеместных генов p63 / SCC в качестве биомаркеров в будущем». (Раздел результатов).

Чтобы дополнительно прояснить, что мы не идентифицировали сигнатуру для прогностических целей, мы добавили в раздел «Обсуждение»:

«Мы представили демонстрационный пример» и заменили «генную подпись» на «набор генов».

Мы действительно разделяем волнение по поводу потенциальных прогностических сигнатур на основе гена-мишени p63 для HNSC и других типов SCC.Тем не менее, разработка значимой прогностической генной сигнатуры требует целого исследования, выходящего за рамки этой работы и не в рамках нашей основной экспертизы. Тем не менее, чтобы ответить на вопросы рецензента, мы исследовали взаимосвязь между экспрессией набора из 28 генов с уровнями p63 на новых рисунках 8C, D и рисунке 8 - приложение к рисунку 1:

«Экспрессия набора из 28 генов положительно коррелировала с экспрессией p63, когда экспрессия p63 была довольно низкой (FPKM <20), но показывала насыщение и отсутствие дальнейшей корреляции, когда экспрессия p63 была высокой (FPKM> 20; Фиг.8C, D и Рисунок 8 - приложение к рисунку 1).Это указывает на то, что уровни p63 влияют на набор 28 генов переключателем, когда насыщение p63-зависимой активации быстро достигается в клетках HNSC ».

3) Чтобы увеличить долгосрочное использование этой работы для будущих исследований, могут ли авторы указать ген и последовательность ДНК элемента ответа в таблице 3, поскольку указанное положение может измениться с обновлением последовательности генома человека ( ГРЧ48)?

Следуя комментарию рецензентов, мы добавили последовательность ДНК p63RE и гены, связанные с соответствующими пиками, в дополнительный файл 3.Примечательно, что для того, чтобы сделать наш анализ современным, все наши данные и последующий анализ уже основаны на текущей версии генома человека hg38 / GRCh48.

4) Авторы сообщают, что количество сайтов связывания p63 в геноме намного больше, чем количество сайтов связывания p53. Это потому, что базальный уровень p63 намного выше, чем базальный уровень p53? Могут ли авторы прокомментировать относительное количество молекул p63 и p53 на клетку? Или возможно, что это различие связано с тем, что p63 требует более коротких последовательностей в ДНК и поддерживается рядом кофакторов?

Благодарим рецензента за это важное замечание.Мы включили этот вопрос в описание наших данных. Все данные ChIP-seq для p63 и p53 получены из клеток с высоким базальным уровнем p63 и стимулированным / индуцированным уровнями p53, соответственно. Таким образом, хотя базальные уровни p53 в большинстве этих клеток низкие, они были активированы / индуцированы до экспериментов с ChIP. Наше обоснование состоит в том, что уровни как p63, так и p53 достаточно высоки, чтобы занимать наиболее релевантные сайты связывания в геноме. Поскольку количество молекул p63 или p53 не оценивалось ни в одном из первоначальных исследований, мы, к сожалению, не можем дать каких-либо подробностей.Чтобы прояснить это, мы добавили пояснительное предложение в начале соответствующего параграфа результатов:

«Примечательно, что данные о p63 и p53 были собраны для клеток с сильной базовой экспрессией p63 и стимулированной экспрессией p53, соответственно».

Кроме того, наши результаты предполагают, что p63 требует полноразмерных последовательностей узнавания, которые, однако, могут более сильно отклоняться от канонического мотива по сравнению с p53. Наша интерпретация результатов заключается в том, что способность p63 распознавать большее разнообразие мотивов лежит в основе его способности связываться с гораздо большим количеством сайтов в геноме по сравнению с p53.Чтобы прояснить это для читателя, мы добавили каждое дополнительное предложение в разделы «Результаты» и «Обсуждение»:

«Этот более широкий репертуар связывания, скорее всего, лежит в основе способности p63 взаимодействовать со значительно большим количеством сайтов связывания, чем p53».

«Примечательно, что способность p63 связываться с большим разнообразием мотивов узнавания, скорее всего, лежит в основе заметно большего количества p63 по сравнению с сайтами связывания p53 в геноме».

https://doi.org/10.7554/eLife.63266.sa2

залов судебных заседаний по местонахождению - контакты и местонахождение

Язык: EnglishEspañolTiếng Việt 한국어 中文 հայերեն

Судебные залы по местоположению

Здание суда аэропорта
Отдел Этаж Комната DEPS Телефон
30 3 302 (310) 725-3040
31 3311 Y (310) 725-3041
70 7701 Y (310) 725-3096
71 7703 Y (310) 725-3097
72 7 708 Y (310) 725-3098
73 7710 Y (310) 725-3043
80 8 801 Y (310) 725-3015
81 8 803 (310) 725-3090
82 8 808 Y (310) 725-3042
83 8810 Y (310) 725-3091
90 9 901 Y (310) 725-3044
92 9 908 Y (310) 725-3046
93 9910 Y (310) 725-3047

Альфред Дж.Центр ювенальной юстиции МакКортни
Отдел Этаж Комната DEPS Телефон
426 2 1250 (661) 483-5926
427 2 1251 (661) 483-5927
428 1 1193 (661) 483-5986

Здание суда Альгамбры
Отдел Этаж Комната DEPS Телефон
1 2 200 Y (626) 293-2101
2 2210 (626) 293-2102
3 3 300 (626) 293-2103
4 3 310 Y (626) 293-2104
5 3320 Y (626) 293-2105
T 3 330 Y (626) 293-2108
В 4430 (626) 293-2167
Вт 4417 Y (626) 293-2109
X 4 405 Y (626) 293-2119

Здание суда Беллфлауэр
Отдел Этаж Комната DEPS Телефон
1 2 241 (562) 345-3301
2 2 246 (562) 345-3302
3 3341 Y (562) 345-3303
4 3 346 Y (562) 345-3304
5 4441 Y (562) 345-3305
6 4 446 Y (562) 345-3306

Здание суда Беверли-Хиллз
Отдел Этаж Комната DEPS Телефон
205 2205 Y (310) 281-2425
207 2 207 Y (310) 281-2427
304 3 304 (310) 281-2408

Здание суда Бербанка
Отдел Этаж Комната DEPS Телефон
1 1101 Y (818) 260-8401
2 1 102 Y (818) 260-8402
3 1103 Y (818) 260-8403
A 2 203 (818) 260-8412
B 2 204 (818) 260-8422
С 2205
G 2220 Y (818) 260-8414

Здание суда Каталины
Отдел Этаж Комната DEPS Телефон
1 1 (562) 256-1561

Здание суда центрального подчинения
Отдел Этаж Комната DEPS Телефон
80 2 201 (213) 617-5680
81 2 207 (213) 617-5681
82 2214 (213) 617-5682
83 2220 (213) 617-5683

Здание суда Чатсуорта
Отдел Этаж Комната DEPS Телефон
F40 Нижний уровень L600 (818) 407-2240
F41 Нижний уровень L400 (818) 407-2241
F43 1 1600 (818) 407-2243
F44 1 1800 (818) 407-2244
F46 2 2400 (818) 407-2246
F47 2 2450 (818) 407-2247
F48 2 2600 (818) 407-2248
F49 2 2650 (818) 407-2249
F50 2 2800 (818) 407-2250
F51 2 2850 Y (818) 407-2251

Центр уголовного правосудия Клары Шортридж Фольц
Отдел Этаж Комната DEPS Телефон
30 5 5-307 (213) 628-7730
31 3 3-314 Y (213) 628-7731
32 3 3-319 Y (213) 628-7732
33 3 3-317 Y (213) 628-7733
34 3 3-313 Y (213) 628-7734
35 3 3-311 Y (213) 628-7735
36 3 3-307 Y (213) 628-7736
37 3 3-305 Y (213) 628-7737
38 3 3-303 Y (213) 628-7738
40 5 5-309 (213) 628-7740
41 3 5-312 Y (213) 628-7741
42 3 3-310 Y (213) 628-7742
43 3 3-304 Y (213) 628-7743
44 3 3-302 (213) 680-7644
45 7 7-312 Y (213) 628-7745
46 7 7-310 Y (213) 628-7746
47 7 7-304 Y (213) 628-7747
48 7 7-302 Y (213) 628-7748
50 5 5-312 (213) 628-7750
51 7 7-313 Y (213) 628-7751
52 7 7-311 Y (213) 628-7752
53 7 7-309 Y (213) 628-7753
54 7 7-307 Y (213) 628-7754
55 7 7-305 (213) 628-7755
56 7 7-303 Y (213) 628-7756
100 13 13-307 Y (213) 628-7400
101 9 9-303 Y (213) 628-7401
102 9 9-305 Y (213) 628-7402
103 9 9-307 Y (213) 628-7403
104 9 9-309 Y (213) 628-7404
105 9 9-311 Y (213) 628-7405
106 9 9-313 Y (213) 628-7406
107 9 9-312 Y (213) 628-7407
108 9 9-310 Y (213) 628-7408
109 9 9-304 Y (213) 628-7409
110 9 9-302 Y (213) 628-7410
111 11 11-314 Y (213) 628-7411
112 11 11-312 Y (213) 628-7412
113 11 11-303 Y (213) 628-7413
114 11 11-305 Y (213) 628-7414
115 11 11-307 Y (213) 628-7415
116 11 11-309 Y (213) 628-7416
117 11 11-311 Y (213) 628-7417
118 11 11-313 Y (213) 628-7418
119 13 13-312 Y (213) 628-7249
120 13 13-310 Y (213) 628-7420
121 13 13-304 Y (213) 628-7421
122 13 13-302 Y (213) 628-7422
123 13 13-309 Y (213) 628-7423
124 13 13-313 Y (213) 628-7424
125 15 15-312 Y (213) 628-7425
126 15 15-310 Y (213) 628-7426
127 15 15-304 Y (213) 628-7427
128 15 15-302 Y (213) 628-7428
129 15 15-303 Y (213) 628-7429
130 15 15-305 Y (213) 628-7430
131 15 15-307 Y (213) 628-7431
132 15 15-309 Y (213) 628-7432
133 15 15-311 Y (213) 628-7433
134 15 15-313 Y (213) 628-7434
56 Вт

Здание суда Комптона
Отдел Этаж Комната DEPS Телефон
1 12 1211 (310) 761-7982
3 4400 Y (310) 761-4303
4 5 508 Y (310) 761-4304
5 5 507 Y (310) 761-4305
6 5 503 Y (310) 761-4306
7 5504 Y (310) 605-4017
8 5 500 Y (310) 761-4308
9 6607 Y (310) 761-4309
10 6606 Y (310) 761-4310
12 6 600 Y (310) 761-4312
13 6 603
14 6 604 (310) 761-4326
105 (трафик) 1105 (310) 761-6800
260 12 1208 Y (310) 761-4260
261 12 1207 Y (310) 761-4261
262 12 1203 Y (310) 761-4258
A 9 904 (310) 761-4302
B 9 906 (310) 761-4322
C 9 900 Y (310) 761-4332
D 10 1006 Y (310) 761-4323
E 10 1004 Y (310) 761-4333
F 10 1011 Y (310) 761-4313
G 10 1000 Y (310) 761-4314
H 11 1106 Y (310) 761-4324
J 11 1104 Y (310) 761-4325
К 11 1110 Y (310) 761-4315
L 11 1100 Y (310) 761-4335
M 4 408 (310) 761-4336
N 4 407 (310) 761-4316
P 12 1200 Y (310) 761-4317
Q 12 1213 Y (310) 761-4307

Здание суда Дауни
Отдел Этаж Комната DEPS Телефон
1 1 115 (562) 803-7010
2 2 201 (562) 803-7012
3 2229 Y (562) 803-7015
4 3 301 Y (562) 803-7018
5 3328 Y (562) 803-7021
6 4 401 Y (562) 803-7024
7 4421 Y (562) 803-7027
8 4412
9 4 413

Здание суда Восточного Лос-Анджелеса
Отдел Этаж Комната DEPS Телефон
1 1105 Y (323) 780-2001
2 2202 Y (323) 780-2003
3 2205 Y (323) 780-2005
4 3302 Y (323) 780-2007
5 3305 Y (323) 780-2009
202 4 401 Y (323) 780-2011
204 4 405 Y (323) 780-2015

Суд по делам несовершеннолетних Истлейка
Отдел Этаж Комната DEPS Телефон
201 1 Y (323) 227-4301
203 1 Y (323) 227-4303
205 1 Y (323) 227-4305

Эдмунд Д.Детский суд Эдельмана
Отдел Этаж Комната DEPS Телефон
400 2 (323) 307-8080
401 2 (323) 307-8001
402 3 (323) 307-8002
403 3 (323) 307-8003
404 3 (323) 307-8004
405 3 (323) 307-8005
406 3 (323) 307-8006
407 3 (323) 307-8007
408 3 (323) 307-8008
409 3 (323) 307-8009
410 4 (323) 307-8010
411 4 (323) 307-8011
412 4 (323) 307-8012
413 4 (323) 307-8013
414 4 (323) 307-8014
415 4 (323) 307-8015
416 4 (323) 307-8016
417 4 (323) 307-8017
418 5 (323) 307-8018
419 5 (323) 307-8019
420 5 (323) 307-8020
421 5 (323) 307-8021
422 5 (323) 307-8022
423 5 (323) 307-8023
424 5 (323) 307-8024
425 5 (323) 307-8085

Здание суда Эль-Монте
Отдел Этаж Комната DEPS Телефон
1 1 102 (626) 401-2201
2 1106 Y (626) 401-2202
3 2 200 Y (626) 401-2203
4 2204 Y (626) 401-2204
5 2208 Y (626) 401-2205
6 2210 Y (626) 401-2206

Здание суда Глендейла
Отдел Этаж Комната DEPS Телефон
1 1 142 (818) 265-6401
2 1 102 Y (818) 265-6402
3 2210 Y (818) 265-6403
5 2 272B (818) 265-6405
D 2260 (818) 265-6413
E 2250 (818) 265-6423
Ф. 2 272A

Губернатор Джордж Деукмеджян Здание суда
Отдел Этаж Комната DEPS Телефон
Назначить
S01 1 1900 (562) 256-1410
S02 1 1700 (562) 256-1415
S03 2 2700 Y (562) 256-1425
S04 2 2601
S05 2 2500 (562) 256-1430
S06 2 2400 Y (562) 256-1435
S07 2 2300 Y (562) 256-1440
S08 2 2200 Y (562) 256-1445
S09 3 3900 (562) 256-1470
S10 3 3800 (562) 256-2252
S11 3 3700 (562) 256-1450
S12 3 3600 (562) 256-2243
S13 3 3500 Y (562) 256-1465
S14 3 3400 (562) 256-1475
S15 3 3300 (562) 256-1480
S16 3 3200 (562) 256-1485
S17 4 4900 (562) 256-1490
S18 4 4800 Y (562) 256-1495
S19 4 4700 Y (562) 256-1502
S20 4 4600 (562) 256-1507
S21 4 4500 (562) 256-1512
S22 4 4400 (562) 256-2202
S23 4 4300 Y (562) 256-2207
S24 4 4200 Y (562) 256-2212
S25 5 5600
S26 5 5500 Y (562) 256-2222
S27 5 5400 (562) 256-2227
S28 5 5300 Y (562) 256-2232
S29 5 5200 Y (562) 256-2237
S30 5 5100 (562) 256-2242
S31 5 5000 (562) 256-2247

Здание суда Голливуда
Отдел Этаж Комната DEPS Телефон
103 1103 (323) 441-1893
113 1 113 (323) 441-1892
203 2 203 (323) 441-1894
213 2213 (323) 441-1895

Здание суда Инглвуда
Отдел Этаж Комната DEPS Телефон
1 2 200 Y (310) 419-1301
2 5 500 (310) 419-1302
3 3303 Y (310) 419-1303
4 3 300 Y (310) 419-1304
5 5 503 (310) 419-1305
6 2203 Y (310) 419-1306
7 4 403 Y (310) 419-1307
8 5 504 (310) 419-1308
N 5 502 (310) 419-1326
O 3 300 Y (310) 419-1316

Здание суда по делам несовершеннолетних Инглвуда
Отдел Этаж Комната DEPS Телефон
240 1 Y (310) 412-8340
241 2 Y (310) 412-8341
242 2 (310) 412-8342

Здание суда по психическому здоровью
Отдел Этаж Комната DEPS Телефон
95A 4 401 (323) 441-1893
95B 4400 (323) 441-1894
95C 6 611 (323) 441-1892
95D 6 610 (323) 441-1895

Здание городского суда
Отдел Этаж Комната DEPS Телефон
60 3308 Y (213) 745-1860
61 3 300 (213) 745-1861
62 6 600 Y (213) 745-1862
63 4 409 (213) 745-1863
64 8 800 (213) 745-1864
65 3302 Y (213) 745-1865
66 5509 Y (213) 745-1866
67 5 500 (213) 745-1867
68 6 610 (213) 745-1868
69 6 612 (213) 745-1869
70 4 401 (213) 745-1870
71 6601 Y (213) 745-1871
72 7712 Y (213) 745-1872
73 7710 Y (213) 745-1873
74 7 700 Y (213) 745-1874
75 7701 Y (213) 745-1875

Майкл Д.Антонович, здание суда Долины Антилоп,
Отдел Этаж Комната DEPS Телефон
A01 Подвал L410 Y (661) 483-5501
A02 Подвал L610 Y (661) 483-5502
A03 1 1210 (661) 483-5503
A04 2 2010 Y (661) 483-5504
A05 2 2210 Y (661) 483-5505
A06 2 2410 Y (661) 483-5506
A07 2 2610 Y (661) 483-5507
A08 2 2810 Y (661) 483-5508
A09 2 2910 Y (661) 483-5509
A10 3 3010 (661) 483-5510
A11 3 3210 Y (661) 483-5511
A12 3 3410 (661) 483-5512
A13 3 3610 (661) 483-5513
A14 3 3810 (661) 483-5774
A15 3 3910 (661) 483-5715
A16 4 4010 Y (661) 483-5516
A17 4 4210 Y (661) 483-5517
A18 4 4410 Y (661) 483-5518
A19 4 4510 Y (661) 483-5519
A20 4 4810 Y (661) 483-5520
A21 4 4910 Y (661) 483-5521
A22 4 4001 (661) 483-5722

Здание суда Норуолка
Отдел Этаж Комната DEPS Телефон
A 2 206 (562) 345-3722
B 2 204 (562) 345-3712
С 3312 (562) 345-3702
D 3 310 Y (562) 345-3723
E 3 301 Y (562) 345-3713
F 3302 Y (562) 345-3703
G 4 406 Y (562) 345-3704
H 4 404 Y (562) 345-3714
J 4 401 Y (562) 345-3715
К 4 403 Y (562) 345-3725
L 5 506 (562) 345-3705
M 5 504 Y (562) 345-3706
N 5 501 Y (562) 345-3716
п 5 503 (562) 345-3727
R 6606 Y (562) 345-3717
S 6604 Y (562) 345-3707
T 6601 Y (562) 345-3708
Вт 6603 (562) 345-3729
Y 7713 (562) 345-3719
Z 7712 (562) 345-3709

Здание суда Пасадены
Отдел Этаж Комната DEPS Телефон
A 4 (626) 396-3302
B 4 Y (626) 396-3312
C 4 Y (626) 396-3322
D 5 Y (626) 396-3303
E 5 Y (626) 396-3313
F 5 Y (626) 396-3323
G 6 Y (626) 396-3304
H 6 Y (626) 396-3314
J 6 Y (626) 396-3305
К 4 Y (626) 396-3355
L 2 Y (626) 396-3315
M 1 (626) 396-3306
N 1 Y (626) 396-3316
O 1 Y (626) 396-3326
п 2 (626) 396-3307
R 2 (626) 396-3317
S 4 Y (626) 396-3327

Здание суда Помоны Юг
Отдел Этаж Комната DEPS Телефон
281 4417 Y (909) 802-1181
282 4 402 Y (909) 802-1182
A 1109 Y (909) 802-1102
B 2205 (909) 802-1112
C 2 204 (909) 802-1122
D 2 203 (909) 802-1103
E 3311 Y (909) 802-1113
F 3 301 Y (909) 802-1123
G 3 302 (909) 802-1104
H 3312 Y (909) 802-1114
Дж 4418 (909) 802-1105
К 4417 Y (909) 802-1125
L 5 503 Y (909) 802-1115
M 5 502 Y (909) 802-1106
N 5 530 Y (909) 802-1116
O 5543 (909) 802-1126
P 6 616 Y (909) 802-1107
R 6 611 Y (909) 802-1117
S 6 601 (909) 802-1127
T 6604 Y (909) 802-1108

Здание суда Сан-Фернандо
Отдел Этаж Комната DEPS Телефон
A 2 2123 Y (818) 256-1802
B 2 2107 Y (818) 256-1812
C 2 2142 Y (818) 256-1822
D 2 2129 Y (818) 256-1803
E 3 3149 Y (818) 256-1823
F 3 3130 Y (818) 256-1813
G 3 3121 Y (818) 256-1814
H 3 3099 Y (818) 256-1824
I 4 4076 Y (818) 256-1804
J 4 4092 Y (818) 256-1825
M 1 1056 Y (818) 256-1816
N 4 4049 Y (818) 256-1806
S 1 1076 Y (818) 256-1807

Здание суда Санта-Кларита
Отдел Этаж Комната DEPS Телефон
1 1 Y (661) 253-5601
2 1 Y (661) 253-5602
3 1 Y (661) 253-5603
4 Приложение

Здание суда Санта-Моники
Отдел Этаж Комната DEPS Телефон
A 1 104 (310) 255-1842
B 1 108 (310) 255-1852
D 1110 Y (310) 255-2483
E 1111 (310) 255-1853
F 1 115 Y (310) 255-1843
G 1117 Y (310) 255-1844
I 1 A103 Y (310) 255-1854
J 2 A212 Y (310) 255-1855
К 2 A203 Y (310) 255-1876
M 2 201 Y (310) 255-1846
N 2202 Y (310) 255-1856
O 2208 Y (310) 255-1866
P 2 209 Y (310) 255-1877
Q 2213 (310) 255-1867
R 2215 Y (310) 255-1857
S 2218 Y (310) 255-1847
Т 2220

Здание суда на Спринг-Стрит
Отдел Этаж Комната DEPS Телефон
1 2 248 (213) 310-7001
2 2 247 (213) 310-7002
3 2 238 (213) 310-7003
4 2 237 (213) 310-7004
5 2212 (213) 310-7005
6 2211 (213) 310-7006
7 2 222 (213) 310-7007
8 2 221 (213) 310-7008
9 1 9 (213) 310-7009
10 1 10 (213) 310-7010
11 1 11 (213) 310-7011
12 1 12 (213) 310-7012
14 1 14 (213) 310-7014
15 1 15 (213) 310-7015
16 1 16 (213) 310-7016
17 1 17 (213) 310-7017
25 8 827B (213) 310-7025
26 8 827C (213) 310-7026
27 8 836C (213) 310-7127
28 8 836B (213) 310-7128
29 9 927A (213) 310-7129
31 9934 (213) 310-7131
32 9 934A (213) 310-7132

Здание суда Стэнли Моск
Отдел Этаж Комната DEPS Телефон
1 5 534 (213) 633-0601
1A 5 548 (213) 633-0612
2 2215 (213) 633-0252
2A 2 227 (213) 633-0111
2B 2 247 (213) 633-0632
2C 2 243 Y (213) 633-0312
2D 6 629 (213) 633-1023
3 2 224 (213) 633-0253
4 2217 (213) 633-0254
5 2 236 (213) 633-0245
6 5543 (213) 633-0606
7 3319 (213) 633-0507
8 2 245 (213) 830-0830
9 2 244 (213) 633-0259
11 2 246 (213) 633-0251
12 6 636 Y (213) 633-1012
13 3312 Y (213) 633-0513
14 3 300 Y (213) 633-0514
15 3 307 Y (213) 633-0515
16 3306 Y (213) 633-0516
17 3309 Y (213) 633-0517
18 3 308 (213) 633-0518
19 3311 Y (213) 633-0519
20 3310 Y (213) 633-0520
21 3313 (213) 633-0521
22 5 519 (213) 633-0622
23 3315 (213) 633-0523
24 3314 Y (213) 633-0524
25 3317 Y (213) 633-0525
26 3 316 (213) 633-0526
27 6 634 (213) 633-1027
28 3318 Y (213) 633-0528
29 2 240 (213) 633-0249
30 4400 Y (213) 633-0150
31 4 407 Y (213) 633-0151
32 4 406 Y (213) 633-0152
33 4 409 (213) 351-7533
34 4 408 Y (213) 633-0154
35 4411 Y (213) 633-0155
36 4410 Y (213) 633-0156
37 4413 Y (213) 633-0157
38 4412 Y (213) 633-0158
39 4415 Y (213) 633-0159
40 4414 Y (213) 633-0160
41 4417 (213) 351-7504
42 4416 (213) 633-0162
43 4419 (213) 633-0353
44 4418 (213) 633-0354
45 5 529 (213) 633-0645
46 5 500 (213) 351-7503
47 5 507 Y (213) 633-0647
48 5506 Y (213) 633-0648
49 5509 Y (213) 633-0649
50 5 508 Y (213) 633-0650
51 5 511 Y (213) 633-0351
52 5 510 (213) 633-0652
53 5 513 Y (213) 633-0653
54 5 512 Y (213) 633-0654
55 5 515 Y (213) 633-0655
56 5 514 Y (213) 633-0656
57 5 517 Y (213) 633-0657
58 5 516 Y (213) 633-0658
59 5 547 (213) 633-5859
60 5 518 (213) 351-7534
61 7732 Y (213) 633-1061
62 6 600 Y (213) 633-1062
63 6 604 (213) 633-1063
64 6 601 (213) 633-1064
65 6 608 (213) 633-1065
66 6 633 Y (213) 633-5866
67 6 614 (213) 633-1067
68 6 617 Y (213) 633-1068
69 6 621 Y (213) 633-1069
71 7 729 Y (213) 830-0771
72 7731 Y (213) 830-0772
73 7733 Y (213) 830-0773
74 7735 Y (213) 830-0774
76 7734 (213) 830-0776
77 7736 (213) 830-0777
78 7730 Y (213) 830-0878
79 6 629 (213) 633-1079
81 8832 (213) 830-0781
82 8833 (213) 830-0782
83 8829 (213) 830-0783
84 8835 (213) 830-0784
85 8834 (213) 830-0785
86 8836 (213) 830-0786
87 8830 (213) 830-0787
88 8831 (213) 830-0788
89 5 532 (213) 633-0689
90 5 541 (213) 633-0690
91 6 632 Y (213) 633-1091
92 6 635 Y (213) 633-1092
93 6 631 (213) 633-1093
94 7723 Y (213) 830-0794
96 5 531 (213) 633-0696
97 6 634 Y (213) 633-1097
98 6635 (213) 633-0698
APLT 6 615 (213) 633-1070

Здание суда по делам несовершеннолетних Сильмар
Отдел Этаж Комната DEPS Телефон
277 1 508 Y (818) 256-1077
279 1 517 Y (818) 256-1079

Здание суда Торранса
Отдел Этаж Комната DEPS Телефон
11 4460 (310) 787-3711
2 2 200 Y (310) 787-3702
3 2 240 Y (310) 787-3703
4 2220 Y (310) 787-3704
5 2260 Y (310) 787-3705
7 Приложение ПРИЛОЖЕНИЕ (310) 787-3707
8 5 520 Y (310) 787-3725
A 3 300 (310) 787-3712
B 3 340 (310) 787-3722
C 3320 Y (310) 787-3732
E 5 500 (310) 787-3713
F 5550 Y (310) 787-3723
G 4 420 Y (310) 787-3714
H 1 180 (310) 787-3724
Дж 5 560 (310) 787-3715
L 4400 Y (310) 787-3718
M 3350 (310) 787-3716
P 4440 Y (310) 787-3717

Здание суда Ван Найс Восток
Отдел Этаж Комната DEPS Телефон
A 5 510 (818) 901-4603
B 5 530 (818) 901-4732
С 4400 (818) 901-4682
D 7 720 (818) 901-4602
H 6 630 (818) 901-4734
I 5 520 (818) 901-4614
Дж 7 700 (818) 901-4605
К 7710 (818) 901-4615
L 7730 Y (818) 901-4625
M 4410 (818) 901-4616
п 4430 (818) 901-4607
Q 3 310 (818) 901-4617
Т 6 600 (818) 901-4612
U 6 620 (818) 901-4608
Вт 6 610 (818) 901-4609
Y
Z 3320 (818) 901-4619

Здание суда Ван Найс Западное
Отдел Этаж Комната DEPS Телефон
100 3305 Y (818) 989-6800
101 3 307 Y (818) 989-6801
102 4 405 (818) 989-6802
103 4 407 Y (818) 989-6803
105 8810 Y (818) 989-6805
106 5 511 (818) 901-4606
112 6 610 Y (818) 989-6812
113 7710 Y (818) 989-6813
115 7 704 Y (818) 989-6815
119 7702 Y (818) 989-6819
120 9 904 Y (818) 989-6820
121 7 708 Y (818) 989-6821
122 6604 Y (818) 989-6822
E 6 602 Y (818) 989-6823
F 8 804 Y (818) 989-6833
G 9 908 Y (818) 989-6814
N 9910 Y (818) 989-6806
R 8 808 Y (818) 989-6817
S 9 902 Y (818) 989-6827
В 8 802 (818) 989-6818

Здание суда Западной Ковины
Отдел Этаж Комната DEPS Телефон
1 1 (626) 430-2501
2 1 (626) 430-2582
3 1 (626) 430-2583
4 1 (626) 430-2504
5 1 (626) 430-2505
6 1 Y (626) 430-2506
7 1 Y (626) 430-2507
8 1 Y (626) 430-2508
9 1 Y (626) 430-2509
10 1   Y (626) 430-2510
11 1   Y (626) 430-2511

Whittier Courthouse
Отдел Этаж Комната DEPS Телефон
102 1 102 (562) 968-2701
123 1 123 (562) 968-2702
128  
201 2 201 (562) 968-2704
202 2 202 (562) 968-2705
302 3 302 (562) 968-2707

.

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *