Силовые масляные трансформаторы серии ТМЗ являются понижающими, трехфазные, двухобмоточные и герметичные с защитой масла трансформаторы мощностью от 250 до 2500 кВА напряжением до 10 кВ предназначены для установки на крупных промышленных объектах и в комплектных трансформаторных подстанциях (КТП) внутренней и наружной установки.
Трансформаторы ТМЗ производятся в герметичном исполнении, а в качестве конструктивной защиты масла применяют сухой азот (принцип азотной подушки между зеркалом масла и крышкой трансформатора ТМЗ). Азотная подушка позволяет эффективно защищать трансформаторное масло от окисления и компенсирует температурные колебания объема масла. Для защиты устанавливается предохранительная диафрагма или реле давления, которые срабатывают при достижении в баке давления 0.75 атм и газы выходят наружу. На стенке маслоазоторасширителя устанавливается маслоуказатель.
Перед отгрузкой электротехническое оборудование проверяется, испытывается и полностью готово к эксплуатацииВ комплекте поставляются: паспорт и протокол испытаний
Баки трансформаторов сварные, прямоугольной формы, заполняется трансформаторным маслом.
Вводы расположены на узких стенках бака. Азотная подушка обеспечивает защиту масла от окисления и компенсирует температурные колебания объема масла. Для защиты устанавливается предохранительная диафрагма или реле давления, которые срабатывают при достижении в баке давления 0.75 атм и газы выходят наружу. На стенке маслоазоторасширителя устанавливается маслоуказатель.
Трансформаторы силовые трехфазные двухобмоточные масляные герметичные с защитой азотной подушкой. Предназначены для комплектных трансформаторных подстанций, изготавливаемых для нужд народного хозяйства.
Трансформатор ТМЗ 400 силовой трехфазный двухобмоточный c естественным масляным охлаждением. Азотная подушка обеспечивает защиту масла от окисления и компенсирует температурные колебания объема масла.
Трансформатор состоит из активной части, переключателя, бака, крышки с вводами ВН и НН. В нижней части бака имеются пластина заземления и пробка для слива масла. Для защиты устанавливается предохранительная диафрагма или реле давления, которые срабатывают при достижении в баке давления 0.75 атм и газы выходят наружу.
Бак трансформатора представляет собой сварную металлическую конструкцию овальной или прямоугольной формы. Транспортируется в полностью собранном виде, заполненным маслом.
выпускаются с номинальным напряжением первичной обмотки (высокого напряжения) до 10 кВ, включительно, и вторичной обмотки (низкого напряжения) – 0,4 кВ; 0,69 кВ. Схема и группа соединений силовых трансформаторов
– У/Ун-0, Д/Ун-11.
Напряжение регулируется без возбуждения. Для этого силовые трансформаторы ТМЗ оснащены высоковольтными переключателями, которые присоединяются к обмотке высокого напряжения и позволяют регулировать напряжение ступенями с диапазоном + 2х2,5 % при отключенном от сети трансформаторе ТМЗ со стороны НН и ВН.
Пробка для спуска масла находится в нижней части стенки бака, там же находится кран для взятия пробы и болт заземления.трансформаторов ТМЗ-1000 кВА:ТМЗ-1000 10/0,4 кВТМЗ-1000 6/0,4 кВТМЗ-1000 35/10 кВТМЗ-1000 35/6 кВТМЗ-1000 35/0,4 кВ
ТМЗ трансформатор является устройством, предназначенным для работы в трехфазной сети. Подобное оборудование применяется в промышленных и бытовых цепях энергоснабжения. Работа трансформатора этого типа заключается в обеспечении потребителей электричеством с заданными параметрами. Технические характеристики, расшифровка и описание параметров представлено далее.
Силовые трансформаторы ТМЗ обладают масляной охладительной конструкцией. Вещество внутри циркулирует естественным способом. Это относительно недорогой прибор. Каждый производитель предусматривает в трансформаторе типа ТМЗ специальную защиту. Масло представляет собой воспламеняемое вещество. Предотвратить аварийную ситуацию позволяет сухой азот . Вещество дополнительно защищает масло, предотвращает соприкосновение охладителя с воздухом.
Стоимость аппаратуры зависит от габаритов и мощности. Завод-изготовитель выпускает разные типоразмеры. Большим спросом пользуется трансформатор ТМЗ 1000, 1600, 250, 630, 400, 2500 и т. д. Широкий ассортимент представленной продукции позволяет приобрести установку, оптимально подходящую требованиям потребителя.
При рассмотрении описания конструкции трансформаторный прибор демонстрирует определенный набор качеств. Особенности эксплуатации обеспечивает устройство внутренних систем. Для охлаждения масляного вещества применяются специальные радиаторы.
Магнитопривод изготавливается из электротехнической стали. В состав конструкции входит переключатель. Обмотки изготавливаются из алюминия. Верх бака имеет крюки для подъема агрегата. Внизу предусмотрена пробка для слива масла, взятия его проб. В конструкцию включается болт заземления.
На торцах предусмотрены выводы ВН, НН. Изоляторы выполнены из фарфора. Контролировать уровень масла в баке позволяет специальный прибор. Между поверхностью охладителя и крышкой находится азотная подушка.
Термический сигнализатор измеряет температуру масла. Предусмотрены приборы для измерения внутреннего давления в баке. При достижении 0,75 атм., срабатывает специальная защита. Газы выводятся из прибора наружу.
Трансформаторы ТМЗ имеют определенную структуру обозначения. Маркировка позволяет определить особенности устройства. Номенклатура может быть следующей: ТМЗ-х/6(10)-У1(ХЛ), где:
Информация маркировки находится в доступном месте. Это позволит обслуживающему персоналу определить тип устройства.
Трансформаторным агрегатам свойственна эксплуатация при определенных условиях. Они применяются для сетей с частотой тока 50 Гц. Монтаж аппаратуры производится на высоте над уровнем моря не более 1 км. Температура окружающего воздуха может находиться в пределах от -45 до +40°С. Влажность составляет до 80%.
Обмотка может нагреваться. Этот показатель при нормальной работе не превышает +65°С. Масло нагревается не более +60°С в верхних слоях. На выводе ВН напряжение может повышать, но не более 5% в длительной перспективе. Эпизодически допускается увеличение нагрузки до 10%, если суммарное количество подобных случаев не превышает 6 часов в сутки.
Оборудование поставляется на объект в собранном виде. Ревизия активной части не производится. Агрегат монтируют на ровный, плоский фундамент. На корпусе и прочих составных элементах дефекты недопустимы. При нарушении условий транспортировки, установки требуется обратиться к помощи профессиональных мастеров. Специалисты вскрывают активную часть, проводят осмотр аппаратуры. Только после этого прибор можно эксплуатировать в обычном режиме.
После проведения испытаний, подтверждения характеристик заявленным производителем качествам, настраивается переключатель. Подается электричество в систему.
Трансформатор герметичный масляный с защитой. Благодаря наличию азотной подушки, которая расположена над зеркалом масла, обеспечивается защита. Поэтому масло не окисляется и кроме того компенсируется расширение при нагревании.
Основное назначение трансформатора ТМЗ 1000/10(6)/0.4 преобразование
электроэнергии и электроснабжение.
Покупая трансформатор ТМЗ 1000/10(6)/0.4 — ВекторЭнерго, вы получаете
качественное оборудование по оптимальной цене. Трансформатор прослужит вам
долго! К тому же мы несем гарантийную ответственность и дорожим своей
репутацией.
После проведения расчета мы отправим вам коммерческое предложение или счет.
– трехфазные двухобмоточные герметичные понижающие с защитой масла при помощи азотной подушки. Выпускаются мощностью 630 кВА, 1000 кВА, 1600 кВА и напряжением до 10 кВ и предназначены для внутренней и наружной установки.
Трансформаторы ТМЗ выпускаются на номинальное напряжение первичной обмотки 6 или 10 кВ. Номинальное напряжение вторичной обмотки 0,4 или 0,69 кВ. Схема и группа соединения обмоток Y/Yн-0 или Δ/Yн-11.
Трансформаторы ТМЗ имеют азотную подушку, которая обеспечивает защиту масла от окисления и компенсирует температурные колебания объема масла.
Габаритные и присоединительные размеры трансформаторов ТМЗ-630, ТМЗ-1000, ТМЗ-1600:
ООО “Компани “Плазма”® является одним из ведущих поставщиков масляных и сухих силовых трансформаторов.
“1000 фунтов. Звезда сестер Тэмми Слэтон была брошена в пыль ее экранным бойфрендом Джерри после того, как раскрыла, что она пансексуальна, но парень не перестал об этом думать… TMZ узнал.
Джерри Сайкс говорит нам … да, он действительно оставил Тэмми и прекратил их отношения – как показано в эпизоде в понедельник вечером на TLC – но это не по той причине, которую все могут подумать … а именно, что она показала, что ее привлекают все типы людей, которые, казалось, скинь его.
Вы помните… Тэмми раскрыла информацию, о чем на выходных дразнили в клипе. Джерри казался особенно ошеломленным. Тэмми сказала, что встречается с трансгендером. Как только серия вышла в эфир, зрители узнали, что в конце концов он порвал все и уехал.
Это не только расстроило Тэмми, но и заставило зрителей задуматься о сроках – понимаете, ведь Тэмми только что вышла и честно рассказала о своей сексуальности ранее в эпизоде. Однако он хочет исправить положение … это не излишняя пансексуальность.
Джерри говорит, что ему нужен перерыв, потому что он чувствовал себя виноватым из-за предыдущих отношений – своего брака, не меньше – и должен был исправить это, прежде чем он смог продолжить с Тэмми.
По состоянию на февраль – примерно через три-четыре месяца ПОСЛЕ съемок пансексуального эпизода – нам сказали, что Джерри и Тэмми все еще не имели романтических отношений. Неясно, общаются ли они по-прежнему … но все, с чем ему пришлось иметь дело, все еще решается.
Домашняя драма Джерри заключается в его отчужденной жене, Киа Рассел-Ракер Сайкс … которая рассказывает TMZ, что она узнала об отношениях Джерри с Тэмми через телевидение и друзей, что стало для нее новостью, когда она впервые узнала об этом где-то в течение сезона.
Киа говорит, что они расстались, и она считает, что Тэмми – разлучница. Тем не менее, она говорит, что они с Джерри все еще разговаривают … и что он помогает ей материально. Похоже, они в достаточно приличных отношениях, особенно после того, как Джерри вернулся к сделке.
Теперь, что касается того, есть ли на горизонте какое-нибудь примирение с Тэмми в будущем… похоже, что оно есть, по крайней мере, на данный момент. Джерри говорит нам, что его проблемы с Киа по-прежнему мешают ему быть рядом с Тэмми так, как ей нужно.
Темозоломид (TMZ) – пероральный алкилирующий агент, используемый для лечения мультиформной глиобластомы (GBM) и астроцитом. Однако по крайней мере 50% пациентов, получавших TMZ, не реагируют на TMZ. Это происходит в первую очередь из-за сверхэкспрессии O 6 -метилгуанинметилтрансферазы (MGMT) и / или отсутствия пути репарации ДНК в клетках GBM.
4 NHA нормальные астроциты человека
MTIC 5 – (3-метилтриазен-1-ил) имидазол-4-карбоксамид
mTOR-мишень рапамицина у млекопитающих
NAMPT никотинамидфосфорибозилтрансфераза
NF-κB ядерный фактор-каппа B
PARP полиомераза NADP
гидрокси-N’-фенил-октандиамид
STAT3 Преобразователь сигналов и активатор транскрипции 3
TNFAIP3 Белок, индуцированный фактором некроза опухоли 3
Рекомендуемые статьи Цитирующие статьи (0)
Просмотреть аннотацию Copyright © 2016, Chongqing Medical University.
Рекомендуемые статьи Цитирующие статьи Устойчивость глиобластомы к TMZ связана с активностью HR, которая … Контекст 1
… дефицит увеличивает чувствительность TMZ в клетках глиобластомы, что отменяется одновременным истощением Chk2. Истощение Ape1 вызывает дефекты пролиферации клеток in vitro (Рис. …
Контекст 2
… вместе противодействуют цитотоксичности TMZ, связанной с дефицитом Ape1, и поддерживают выживаемость клеток (Рис.2F). Используя модель орто-топической глиобластомы у мышей 35, мы подтвердили, что истощение Ape1 в клетках U251-FM вызывает дефектный рост опухоли, однако одновременное истощение Ape1 и Chk2 восстанавливает рост опухоли у мышей (рис. S6B-D). . Подтверждая эти находки, мы обнаружили, что клетки U2OS, истощенные по Ape1 / Chk2, были способны включать BrdU в свою ДНК (рис. S6E), подтверждая, что синтез ДНК возобновляется в клетках, дефицитных как по Ape1, так и по Chk2.
Context 3
… ортопедической моделью глиобластомы у мышей 35, мы подтвердили, что истощение Ape1 в клетках U251-FM вызывает дефектный рост опухоли, но одновременное истощение Ape1 и Chk2 восстанавливали рост опухоли у мышей (фиг. S6B-D). Подтверждая эти находки, мы обнаружили, что клетки U2OS, истощенные по Ape1 / Chk2, были способны включать BrdU в свою ДНК (рис. S6E), подтверждая, что синтез ДНК возобновляется в клетках, дефицитных как по Ape1, так и по Chk2.Таким образом, эти результаты подтверждают, что Ape1 и Chk2 играют скоординированные роли в пролиферации клеток. Хотя Ape1 может быть вероятным субстратом киназы Chk2, необходимы дальнейшие исследования для идентификации возможных участков фосфорилирования, опосредованных Chk2 …
Context 4
… клеток, которые впоследствии были восстановлены за счет истощения Chk2 ( Рис.
Контекст 5
… скоординированная ли экспрессия Ape1 и Chk2 связан с TMZ-ответом клеток глиобластомы, мы проанализировали две полученные пациентом клетки глиобластомы раннего пассажа IN-GB-2 и IN-GB-10, которые характеризуются разными уровнями экспрессии Ape1 и Chk2, оба в белке и уровень мРНК (рис.6А; Рис. S8E, G). Анализ TMZ-ответов этих клеток показал, что клетки IN-GB-2 с более низкими уровнями Ape1 / Chk2 были более устойчивы к TMZ, чем клетки IN-GB-10 с их более высокими уровнями Ape1 / Chk2 (фиг.
Контекст 6
… IN-GB- 2 и IN-GB-10, которые характеризуются разными уровнями экспрессии Ape1 и Chk2 как на уровне белка, так и на уровне мРНК (рис.6А; Рис. S8E, G). Анализ TMZ-ответов этих клеток показал, что клетки IN-GB-2 с более низкими уровнями Ape1 / Chk2 были более устойчивы к TMZ, чем клетки IN-GB-10 с их более высокими уровнями Ape1 / Chk2 (фиг. 6B). Кроме того, после воздействия TMZ мы обнаружили повышенную активность HR в клетках IN-GB-2, в то время как клетки IN-GB-10 показали заметное снижение HR при воздействии TMZ (фиг. 6C). TMZ- или IR-индуцированное накопление BRCA1 в ядре в клетках IN-GB-2, но не в клетках IN-GB-10, предоставило дополнительные доказательства повышенной активности HR у…
Контекст 7
… из этих клеток показали, что клетки IN-GB-2 с более низкими уровнями Ape1 / Chk2 были более устойчивы к TMZ, чем клетки IN-GB-10 с их более высокими уровнями Ape1 / Chk2.
Контекст 8
… (термин «пара» представляет первичные и повторяющиеся образцы ткани, полученные от того же пациента) для ядерного окрашивания белка Rad51 как маркера активности HR. Около 42% тканей рецидивирующей глиобластомы (16 из 38) были признаны положительными по обогащению Rad51 в ядрах, а репрезентативное изображение пациента показано на рис.6D. Поскольку все пациенты с диагнозом первичная глиобластома получали терапию TMZ до рецидива опухоли, эти результаты предполагают, что клетки глиобластомы Рис.
В поисках эффективных методов лечения для преодоления устойчивости к темозоломиду в опухолях головного мозга 1. Парсонс Д., Джонс С., Чжан Х, Лин Дж., Лири Р., и другие.Комплексный геномный анализ мультиформной глиобластомы человека. Наука 2008; 321: 1807-12.
DOIPubMedPMC 2. Филипс Х., Харбанда С., Чен Р., Форрест В., Сориано Р. и др. Молекулярные подклассы глиомы высокой степени злокачественности предсказывают прогноз, определяют характер прогрессирования заболевания и напоминают стадии нейрогенеза. Cancer Cell 2006; 9: 157-73.
DOIPubMed 3. Beroukhin R, Getz G, Nghiemphu L, Barretina J, Hsueh T. и др. Оценка значимости хромосомных аберраций при раке: методология и приложение к глиоме.PNAS 2007; 104: 20007-12.
DOIPubMedPMC 4.
DOIPubMed 5. Шерер Х. Формы роста глиом и их практическое значение. Мозг 1940; 63: 1-35.
6. Смит С., Килич О., Скиаппарелли П., Герреро-Казарес Н., Ким Д. и др. Фенотип миграции раковых клеток головного мозга предсказывает исходы для пациентов.Cell Reports 2016; 15: 2616-24.
DOIPubMedPMC 7. Бродбельт А., Гринберг Д., Винтерс Т., Уильямс М., Вернон С. и др. Глиобластома в Англии: 2007-2011 гг. Eur J Cancer 2015; 51: 533-42.
DOIPubMed 8. Эбботт, штат Нью-Джерси, Патабендиге, А.А., Долман, Д.Э., Юсоф, С.Р., Бегли, Д.Дж. Структура и функция гематоэнцефалического барьера. Neurobiol Dis 2010; 37: 13-25.
DOIPubMed 9. Ван З., Сунь Х., Якисич Дж.С. Преодоление гематоэнцефалического барьера при химиотерапии: ограничения, вызовы и возрастающие проблемы.
PubMed 10. Groothuis D. Барьеры кровь-мозг и кровь-опухоль: обзор стратегий увеличения доставки лекарств. Нейроонкология 2000; 2: 45-59.
DOIPubMedPMC 11. Newlands ES, Blackledge GR, Slack JA, Rustin GJ, Smith DB и др. Фаза I испытания темозоломида (CCRG 81045: M&B 39831: NSC 362856). Br J Cancer 1992; 65: 287-91.
DOIPubMedPMC 12. Денни Б.Дж., Рулевая рубка Р.Т., Стивенс М.Г.Ф., Цанг Л.Л., Слэк Дж.ЯМР и молекулярное моделирование, исследование механизма активации противоопухолевого препарата темозоломид и его взаимодействия с ДНК. Биохимия 1994; 33: 9045-51.
DOIPubMed 13. Тисдейл MJ. Противоопухолевые имидазотетразины – XV. Роль алкилирования гуанина O6 в механизме цитотоксичности имидазотетразинонов. Biochem Pharmacol 1987; 36: 457-62.
DOIPubMed 14. Hegi M, Diserens AC, Gorlia T., Hamou MF, de Tribolet N, et al. Молчание гена MGMT и польза от темозоломида при глиобластоме.
DOIPubMed 15. Zhang J, Stevens MFG, Laughton CA, Madhusudan S, Bradshaw TD. Приобретенная устойчивость к темозоломиду в линиях клеток глиомы: молекулярные механизмы и потенциальные трансляционные приложения. Онкология 2010; 78: 103-14.
DOIPubMed 16. Чжан Дж., Стивенс М.Ф., Брэдшоу Т.Д. Темозоломид: механизмы действия, восстановления и устойчивости. Curr Mol Pharmacol 2012; 5: 102-14.
PubMed 17. Wiewrodt D, Nagel G, Dreimuller N, Hundsberger T, Perneczky A, et al.MGMT при первичных и рецидивирующих глиобластомах человека после лучевой и химиотерапии и сравнение со статусом p53 и клиническим исходом. Int J Cancer 2008; 122: 1391-9.
DOIPubMed 18. Китанж Г., Карлсон Б., Шредер М., Гроган П., Ламонт Дж. И др. Индукция экспрессии MGMT связана с устойчивостью к темозоломиду в ксенотрансплантатах глиобастомы. Нейроонкология 2009; 11: 281-91.
DOIPubMedPMC 19. Чжан Дж.
DOIPubMed 20. Поулояннис Г., Фрайлинг И.М., Арендс М.Дж. Дефицит репарации несоответствия ДНК при спорадическом колоректальном раке и синдроме Линча. Гистопатология 2010; 56: 167-79.
DOIPubMed 21. Кэхилл Д.П., Кодд П.Дж., Бэтчелор Т.Т., Карри В.Т., Луис Д.Н. Инактивация MSH6 и возникающая резистентность к темозоломиду в глиобластомах человека.Clin Neurosurg 2008; 55: 165-71.
PubMed 22. Ип С., Мяо Дж., Кэхилл Д.П., Лафрат А.Дж., Алдапе К. и др. Мутации MSH6 возникают в глиобластомах во время терапии темозоломидом и опосредуют резистентность к темозоломиду. Clin Cancer Res 2009; 15: 4622-9.
DOIPubMedPMC 23. Хантер С., Смит Р., Кэхилл Д. П., Стивенс П., Стивенс С.
DOIPubMed 24. Даниэль П., Сабри С., Чаддад А., Михан Б., Жан-Клод Б. и др. Темозоломид-индуцированная гипермутация в глиоме: эволюционные механизмы и терапевтические возможности. Фронт Онкол 2019; 9:41.
DOIPubMedPMC 25. Калатоццоло С., Гелати М., Чусани Э., Шакка Флорида, Полло Б. и др. Экспрессия белков лекарственной устойчивости Pgp, MRP1, MRP3, MRP5 и GST-pi в глиоме человека. Журнал Neurooncol 2005; 74: 113-21.
DOIPubMed 26. Балесария С., Брок С., Бауэр М., Кларк Дж., Николсон С.К. и др.Потеря хромосомы 10 является независимым прогностическим фактором при глиомах высокой степени злокачественности. Британский журнал J Cancer 1999; 81: 1371-7.
DOIPubMedPMC 27. Lefranc F, Rynkowski M, DeWitte O, Kiss R. Настоящие и потенциальные будущие проблемы с адъювантами при лечении астроцитарной глиомы высокой степени злокачественности.
PubMed 28. Бакс Д.А., Литтл С.Е., Гаспар Н., Перриман Л., Маршалл Л. и др. Молекулярная и фенотипическая характеристика клеточных линий детской глиомы как модели для доклинической разработки лекарств.PLoS One 2009; 4: e5209.
DOIPubMedPMC 29. Гаспар Н., Маршалл Л., Перриман Л., Бакс Д.А., Литтл С.Е. и др. MGMT-независимая резистентность к темозоломиду в педиатрических клетках глиобластомы, связанная с опосредованной PI3-киназой сигнатурой гена HOX / STEM-клеток. Cancer Res 2010; 70: 9243-52.
DOIPubMedPMC 30. Molenaar RJ, Maciejewski JP, Wilmink JW, van Noorden CJF. Ферменты IDh2 / 2 дикого типа и мутировавшие и ответная реакция на терапию. Онкоген 2018; 37: 1949-60.
ДОИПубМедПМС 31.Лу Й., Квинткевич Дж., Лю Й., Тек К., Фрейди Л. Н. и др. Химиочувствительность глиом с мутацией IDh2 из-за нарушения PARP1-опосредованной репарации ДНК. Cancer Res 2017; 77: 1709-18.
DOIPubMedPMC 32.
DOIPubMedPMC 33. Цао Х, Лу И, Лю И, Чжоу Й, Сонг Х и др.Комбинация ингибитора PARP и темозоломида для подавления прогрессирования хордомы. Журнал Мол Меди (Берл) 2019; 97: 1183-93.
DOIPubMed 34. Zhang J, Stevens MFG, Hummersone M, Madhusudan S, Laughton CA, et al. Некоторые имидазотетразины ускользают от O6-метилгуанин-ДНК-метилтрансферазы и репарации несоответствия. Онкология 2011; 80: 195-207.
DOIPubMed 35. Кузен Д., Хаммерсон М.Г., Брэдшоу Т.Д., Чжан Дж., Муди С.Дж. и др. Активность по ингибированию синтеза и роста имидазо [5,1-d] -1,2,3,5-тетразин-8-карбоксамидов, связанных с противоопухолевым лекарственным средством темозоломидом, с присоединенными кремнийбензильными и гетерометильными группами в 3-положении.
DOIPubMedPMC 36. Осман Р.Т., Кимиши И., Брэдшоу Т.Д., Сторер ЖКД, Коршунов А. и др. Преодоление множественных механизмов лекарственной устойчивости медуллобластомы. Acta Neuropath Comm 2014; 2: 57.
DOIPubMedPMC 37. Кузен Д., Чжан Дж., Хаммерсон М.Г., Мэтьюз К.С., Фриджерио М. и др. Противоопухолевые имидазо [5,1-d] -1,2,3,5-тетразины: соединения, модифицированные в 3-м положении, преодолевают устойчивость в клеточных линиях глиобластомы человека. MedChemComm 2016; 7: 2332-43.
DOI 38. Свец Р.Л., Фуриасси Л., Скибински К.Г., Фан Т.М., Риггинс Г.Дж. и др. Настраиваемая стабильность имидазотетразинов приводит к созданию мощного соединения для глиобластомы. ACS Chem Biol 2018; 13: 3206-16.
DOIPubMedPMC 39. Ян З., Вэй Д., Дай Х, Стивенс М.Ф.Г., Брэдшоу Т.Д. и др. С8-замещенные аналоги имидазотетразина преодолевают устойчивость к темозоломиду, индуцируя аддукты ДНК и повреждение ДНК.
DOIPubMedPMC 40. Саммерс Х.
41. Оберой Р., Пэрриш К., Сио Т., Миттапалли Р., Элмквист В. и др. Стратегии улучшения доставки противоопухолевых препаратов через гематоэнцефалический барьер для лечения глиобластомы. Нейроонкология 2015; 18: 27-36.
DOIPubMedPMC 42. Ким Дж., Ан С., Ким Ю. Нанотерапевтические препараты, разработанные для преодоления бло-мозгового барьера для улучшенной доставки лекарств в центральную нервную систему. J Industrial и Eng Chem 2019; 73: 8-18.
DOIPubMedPMC 43. Ostermann S, Csajka C, Buclin T, Leyvraz S, Lejeune F, et al.Фармакокинетика темозоломида в плазме и популяции спинномозговой жидкости у больных злокачественной глиомой. Clin Can Res 2004; 10: 3728-36.
DOIPubMed 44. Портнов Дж., Бади Б., Чен М., Лю А., Бланшар С. и др. Нейрофармакокинетика темозоломида у пациентов с резектабельными опухолями головного мозга: потенциальные последствия для текущего подхода к химиолучевой терапии.
DOIPubMedPMC 45. Thiel EC. Ферритин: структура, регуляция генов и функции клеток у животных, растений и микроорганизмов.Анну Рев Биохим 1987; 56: 289-315.
DOIPubMed 46. Хегер З., Скаликова С., Зитка О., Адам В., Кизек Р. Применение апоферритина в наномедицине. Наномедицина (Лондон) 2014; 9: 2233-45.
DOIPubMed 47. Монти Д.М., Ферраро Дж., Мерлино А. Доставка противоопухолевых металлических препаратов на основе ферритина: Кристаллографические, аналитические и цитотоксические исследования. Наномедицина НБМ 2019; 20: 101997.
DOIPubMed 48. Li L, Fang C, Ryan J, Niemi E, Lebrón J, et al. Связывание и захват H-ферритина опосредуются рецептором трансферрина-1 человека.PNAS 2010; 107: 3505-10.
DOIPubMedPMC 49. Торти С., Торти Ф. Железо и рак: нужно добыть больше руды. Nature Rev Cancer 2013; 13: 342-55.
DOIPubMedPMC 50. Hulet SW, Powers S, Connor JR.
DOIPubMed 51. Джеффрис В., Брэндон М., Хант С., Уильямс А., Гаттер К. и др. Рецептор трансферрина на эндотелии капилляров головного мозга.Nature 1984; 312: 162-3.
DOIPubMed 52. Росагер А., Соренсен М., Дальрот Р., Хансен С., Шонберг Д. и др. Рецептор трансферрина-1 и тяжелые и легкие цепи ферритина в астроцитарных опухолях головного мозга. Выражение и прогностическая ценность. PLoS One 2017; 12: e0182954.
DOIPubMedPMC 53. Johnsen KB, Burkhart A, Melander F, Kempen PJ, Vejlebo JB, et al. Нацеливание на рецепторы трансферрина на гематоэнцефалический барьер улучшает захват иммунолипосом и последующий транспорт грузов в паренхиму мозга.Научный журнал 2017; 7: 10396.
DOIPubMedPMC 54. Дак К.А., Коннор-младший. Поглощение и транспорт железа через физиологические барьеры. Биометаллы 2016; 29: 573-91.
DOIPubMedPMC 55. Тодорич Б., Чжан Х, Коннор-младший. H-ферритин является основным источником железа для олигодендроцитов. Глия 2011; 59: 927-35.
DOIPubMed 56. Cordon-Cardo C, O’Brien JP, Casals D, Rittman-Grauert L, Biedler JL, et al. Ген множественной лекарственной устойчивости (Р-гликопротеин) экспрессируется эндотелиальными клетками на участках гематоэнцефалического барьера.Proc Nat Acad Sci USA 1989; 86: 695-8.
DOIPubMedPMC 57. Куруппу А.И., Чжан Л., Коллинз Н., Турьянска Л., Томас Н.Р. и др. Система доставки лекарственного средства на основе апоферритина для ингибитора тирозинкиназы гефитиниба. Adv Healthcare Mater 2015; 4: 2816-21.
DOIPubMed 58. Брин А.Ф., Уэллс Г., Турьянская Л., Брэдшоу Т.Д. Разработка новых препаратов апоферритина для противоопухолевых бензотиазолов. Отчеты о раке 2019; DOI: 10.1002 / cnr2.1155.
ДОИ 59.Ким М., Ро Й, Джин К.С., Ан Б., Юнг С. и др. pH-зависимые структуры ферритина и апоферритина в растворе: разборка и повторная сборка.
DOIPubMed 60. Нунан Е.М., Шах Д., Яффе МБ, Лауффенбургер Д.А., Самсон Л.Д. Повреждения O6-метилгуаниновой ДНК вызывают остановку внутри S-фазы, из которой клетки выходят в апоптоз, управляемый ранней и поздней активацией многопутевой сигнальной сети. Интегр Биол (Камб) 2012; 4: 1237-55.
ДОИПубМедПМС 61.Зильбер-младший, Бобола М.С., Бланк А, Чемберлен М.С. O6-метилгуанин-ДНК-метилтрансфераза в терапии глиомы: перспективы и проблемы. Biochim Biophys Acta 2012; 1826: 71-82.
DOIPubMedPMC 62. Куримото Т., Кондо А., Огино И., Фуджимура Дж., Аракава А. и др. Эффект метилирования O6-метилгуанин-ДНК-метилтрансферазы при медуллоблазоме. Мол Клин Онкол 2017; 7: 1107-11.
DOIPubMedPMC 63. Pollack IF, Hamilton RL, Sobol RW, Burnham J, Yates AJ, et al. Экспрессия O6-метилгуанин-ДНК-метилтрансферазы сильно коррелирует с исходом злокачественных глиом у детей: результаты когорты CCG-045.Дж.
DOIPubMed 64. Руд Б.Р., Чжан Х., Коген PH. Межклеточная гетерогенность экспрессии гена репарации ДНК MGMT в педиатрической медуллобластоме. Нейроонкология 2004; 6: 200-7.
DOIPubMedPMC 65. Bobbola MS, Berger MS, Ellenbogen RG, Roberts TS, Geyer JR, et al. O6-Метилгуанин-ДНК-метилтрансфераза в первичных опухолях головного мозга у детей: связь с пациентом и характеристиками опухоли. Clin Cancer Res 2001; 7: 613-9.
ПабМед 66.Гроссман С.А., Финклештейн Д.М., Ракдешель Дж.С., Трамп Д.Л., Мойнихан Т. и др. Рандомизированное проспективное сравнение внутрижелудочкового метотрексата и тиотепа с ранее нелеченным неопластическим менингитом. Восточная кооперативная онкологическая группа. Журнал клинической онкологии 1993; 11: 561-9.
DOIPubMed 67. Ishikawa E, Tsuboi K, Takano S, Uchimura E, Nose T, et al. Внутриопухолевая инъекция IL-2-активированных NK-клеток усиливает противоопухолевый эффект внутрикожной инъекции противоопухолевой вакцины, фиксированной параформальдегидом, на модели внутричерепной опухоли головного мозга крысы.
DOIPubMed 68. Рустамзаде Э., Холл В.А., Тодхантер Д.А., Валлера В.Д., Низкий туалет и др. Внутричерепная терапия глиобластомы гибридным белком DTAT у иммунодефицитных мышей. Int J Cancer 2006; 120: 411-9.
DOIPubMed 69. Льюис О., Вулли М., Джонсон Д., Россер А., Баруа Н.Ю. и др. Хронические устройства для доставки с прерывистой конвекцией. J. Neurosci Methods 2015; 259: 47-56.
DOIPubMed 70. Джахангири А., Чин А.Т., Фланиган П.М., Чан Р., Аги М.К.Доставка с усилением конвектина при глиобластоме: обзор доклинических и клинических исследований. Журнал Neurosurg 2017; 126: 191-200.
DOIPubMedPMC 71. Холлингворт М., Хертер С., Вули М., Льюис О., Гилл С. и др. ДИПГ-65. Предварительный опыт хронической перемежающейся конвекции, ускоренной введением карбоплатина и вальпоровой кислоты для лечения диффузной внутренней глиомы моста после лучевой терапии. Нейроонкология 2018; 20: i62.
DOI Факты о пропускной способности – База знаний Сколько стоит 1 мег?
Каждый раз, когда кто-то просматривает вашу веб-страницу, все данные (HTML-код, текст, графика и т.
1. Объем получаемого трафика
Как измеряется передача?
Один килобайт (КБ) равен 1024 байтам.
1-й давайте посмотрим на BIT
Байт
На самом деле, исходя из среднего интернет-трафика, вы могли бы привлечь намного больше посетителей, поскольку не все просматривают каждую страницу вашего сайта.В среднем сайт личного и профессионального уровня передает от 100 до 1500 МБ в месяц.
Те, которые предлагают безлимитный
В наших планах веб-хостинга указано точное количество гигабайт, выделенных для учетной записи клиента. Никаких уловок. Независимо от того, решите ли вы разместить свой веб-сайт у нас, остерегайтесь неограниченных предложений по передаче. Мы не утверждаем, что все веб-хостинговые компании используют эти методы, следует проявлять осторожность при поиске нового веб-хостинга.
Если вы превысите свою квоту, вы можете перейти на пакет следующего размера.
Противоопухолевое действие рибавирина в сочетании с TMZ и IFN ‑ β на клетки злокачественной глиомы Введение Хотя достижения в области мультимодальной терапии, включая
хирургия, лучевая терапия и химиотерапия,
прогноз для глиобластомы, наиболее распространенной первичной опухоли головного мозга в
взрослых и классифицированных как злокачественные новообразования IV степени по классификации ВОЗ, не
адекватно совершенствовался более 30 лет.В 2009 году EORTC / NCIC
сообщили об окончательных результатах, указывающих на преимущества сопутствующих и
адъювант темозоломид (TMZ: относительно новый алкилирующий агент) в
в дополнение к стандартной послеоперационной лучевой терапии глиобластомы
(1). Впоследствии сопутствующие
лучевая терапия с TMZ с последующей адъювантной химиотерапией TMZ
стать современным и мировым стандартом лечения злокачественных
глиомы, особенно глиобластомы. Хотя такое лечение показывает
улучшение выживаемости у пациентов с глиобластомой, прогноз, определяющий
от этих методов лечения остается неудовлетворительным.
Рибавирин, впервые описанный в 1972 г. Sidwell et al.
al (2) в качестве противовирусного агента,
представляет собой аналог нуклеиновой кислоты. На сегодняшний день рибавирин служит
терапевтическое средство, широко используемое против РНК- и ДНК-вирусов, и
в частности один из стандартных агентов хронического гепатита С
в сочетании с интерфероном (3). На
С другой стороны, мы и другие недавно наблюдали противоопухолевое
влияние рибавирина на различные опухолевые клетки, в том числе на молочную железу
рак, острый миелоидный лейкоз и атипичный тератоид / рабдоид
опухоли, которые, как считается, опосредуются через
инозин-5′-монофосфатдегидрогеназа (IMPDH), эукариотическая
фактор инициации трансляции 4E (eIF4E), гистон-метилтрансфераза
энхансер гомолога 2 zeste (EZh3), внеклеточный регулируемый белок
киназы (ERK) и / или митоген-активируемые протеинкиназы, взаимодействующие
протеинкиназа 1 (MNK1) (3–11).На сегодняшний день их было всего несколько
исследования противоопухолевого действия рибавирина против клеток глиомы.
Вольпин и др. (9) сообщили о
противоопухолевый эффект рибавирина, в том числе в сочетании с ТМЗ
и облучение клеток глиомы и стволовых клеток глиомы в
vivo и in vitro. Совсем недавно мы продемонстрировали
влияние рибавирина на индукцию апоптоза, остановку клеточного цикла, p53
активации пути и повреждение ДНК (двухцепочечные разрывы: DSB) в
линии клеток злокачественной глиомы (10).
В настоящем исследовании мы получили дополнительные данные с помощью
изучение эффекта рибавирина в сочетании с TMZ и
интерферон-бета (IFN-β) на злокачественных клетках глиомы.Причины
с использованием TMZ и IFN-β в комбинации с рибавирином, когда TMZ является
стандартный химиотерапевтический агент для глиобластомы, как уже упоминалось
выше, а IFN-β проявляет плейотрофную биологическую активность
против новообразований (12-15) и действует как лекарственный сенсибилизатор, усиливая
противоопухолевый эффект при применении в сочетании с
нитрозомочевины (алкилирующие агенты) против злокачественных глиом
(16). Кроме того, синергетический
противоопухолевый эффект между TMZ и IFN-β был продемонстрирован в
злокачественные клетки глиомы (17-19) и значительный противоопухолевый эффект
рибавирин в комбинации с IFN-α (сгруппированы в IFN типа I,
такой же, как IFN-β) наблюдается в клетках гепатомы и почечной
клетки карциномы (20,21).По результатам настоящего
исследования, комбинация этих трех агентов может оказать
синергетический противоопухолевый эффект в злокачественных клетках глиомы и обеспечивает
экспериментальная основа для рационального клинического лечения в
больные глиобластомой.
Материалы и методы Клеточные линии и культура клеток Клетки злокачественной глиомы человека А-172 (ячейка №
JCRB0228, лот № 021999), АМ-38 (ячейка IFO50492, лот №
12082003), T98G (ячейка IFO50303, лот №1007), У-251МГ (сотовый
нет. IFO50288, лот № 12132002) и YH-13 (ячейка IFO50493, лот
нет. 1164) клеточные линии были получены из Health Science Research
Resources Bank (Осака, Япония) и U-87MG (глиобластома неизвестного происхождения).
источник; № по каталогу: HTB-14, № лота. 2497162) и У-138МГ (каталог
нет. HTB-16, лот № 1104428) были закуплены у American Type
Коллекция Культуры. Нами подтверждено, что
O6-метилгуанин-ДНК-метилтрансфераза (MGMT: a
ключевой фактор алкилирующих агентов) выражается в T98G, U-138MG и
YH-13 с помощью ОТ-ПЦР и вестерн-блоттинга в предыдущем исследовании
(22).В соответствии с более ранним
отчет (23), это также было подтверждено
что T98G (237 Met → Ile) и U-251MG (273 Arg → His)
имеют точечную мутацию гена р53. Эти клеточные линии были
культивировали в модифицированной среде Дульбекко Игла (Nissui
Pharmaceutical), содержащий 10% фетальной телячьей сыворотки (Life Technologies)
с использованием пластиковых колб для культивирования (Corning®) в стандартном
увлажненный инкубатор при 37 ° C и 5% CO2, 95% воздуха
Атмосфера.
Исследования роста клеточных культур Оценка пролиферации злокачественных клеток глиомы
с помощью счетчика Коултера (Beckman Coulter) для определения ячейки
числа в 24-луночных планшетах (Iwaki).Каждый колодец был засеян
1 × 104 клеток и культивировали в течение 24 ч перед обработкой
обеспечить прилипание клеток к пластине. Питательная среда была
пополняется свежей средой, содержащей рибавирин (0,1–100 мкМ;
Sigma) отдельно или в комбинации с TMZ (10 мкМ; LKT Laboratories)
и IFN-β (10 МЕ / мл; Toray), и клетки культивировали в течение 72 часов.
Мы выбрали условия инкубации 10 мкМ TMZ и / или 10 МЕ / мл.
IFN-β, потому что эти значения представляют собой клинически достижимые
концентрации TMZ и IFN-β (19,24).Кроме того, чтобы оценить влияние
комбинация этих агентов, TMZ, IFN-β и / или рибавирина, была
синергетический, рибавирин был установлен на клинически значимую
концентрация 10 мкМ (25). В
пролиферированные клетки собирали с раствором трипсин-ЭДТА.
(Invitrogen; Thermo Fisher Scientific, Inc.) и числа
посчитал. Эксперименты по выращиванию культур клеток повторяли
минимум четыре раза каждое.
Синергизм комбинации препаратов
лечение Кроме того, чтобы подтвердить наличие противоопухолевого эффекта
комбинации с TMZ, IFN-β и рибавирином были синергическими,
индекс комбинации (CI) также был рассчитан с использованием Chou-Talalay
метод (26).В данном исследовании,
мы решили рассчитать ДИ при 50% ингибировании клеточного
пролиферация (IC50). Две линии клеток злокачественной глиомы,
Поэтому A-172 и U-251MG использовались для расчета CI,
потому что их значения IC50 были получены на основе
кривых доза-ответ. IC50 TMZ, IFN-β и
рибавирин для A-172 составлял 52,4 мкМ, 57,5 МЕ / мл и 53,6 мкМ, а для
U-251 составлял 22,5 мкМ, 26,4 МЕ / мл и 257,7 мкМ соответственно (7,15,22).
Согласно методу Чоу-Талалай, значения ДИ менее 1 являются
указывает на синергизм (чем меньше значение, тем больше
степень синергизма), те, которые равны 1, указывают на аддитивность, а те
более 1 интерпретируются как антагонизм.Значения CI <
0,4, от 0,4 до 0,8 и> 0,8 указывают на сильную, среднюю и
небольшой синергизм, соответственно (26,27). An
аддитивный эффект определяется как ситуация, в которой конечный эффект
равно сумме эффектов лекарств. Лекарственные взаимодействия
интерпретируются как антагонистические, если они приводят к снижению
эффекты одного или обоих препаратов (26,27).
Оценка апоптоза Из результатов по эффекту ингибирования роста
и клетки CI, U-251MG подвергали дальнейшим экспериментам.Апоптоз анализировали методом проточной цитометрии с использованием двойного окрашивания
набор для обнаружения апоптоза Annexin V-FITC / PI (BD Biosciences).
Клетки высевали в 6-луночные планшеты (Iwaki) в количестве 1 × 106.
клетки и инкубировали в течение 24 ч для прикрепления. Затем культуральную среду
пополнен свежей средой, содержащей рибавирин, TMZ, IFN-β, TMZ
и IFN-β, или TMZ, IFN-β и рибавирин в течение 72 часов (рибавирин, 10 мкМ;
TMZ, 10 мкМ; IFN-β, 10 МЕ / мл). Затем клетки промывали PBS и
собирают с использованием раствора трипсин-ЭДТА. После центрифугирования и
промывки в PBS, раствор перемешивали со 100 мл связующего
буфер (Wako Pure Chemical Industries, Ltd.), в которую 5 мкл
Аннексин V Конъюгат Alexa Fluor 488 (Life Technologies; Thermo
Fisher Scientific, Inc.) и 10 мкл PI (Miltenyi Biotech).
добавляли и инкубировали при комнатной температуре в течение 10 мин. Дополнительный
Добавляли 400 мкл связывающего буфера, чтобы получить общий объем образца
500 мкл. Флуоресценцию измеряли с помощью FACSCalibur flow.
цитометр (Becton-Dickinson). Апоптотические клетки анализировали.
с помощью программного обеспечения Flowjo (BioLegend). Опыты повторяли
три раза для подтверждения воспроизводимости.
Статистический анализ Соответствующие сравнения были выполнены с использованием одностороннего
дисперсионный анализ по методу Тьюки-Крамера среди
множественные сравнения с использованием программного обеспечения Stat View (Ver. 5.0; SAS
Institute Inc.). Данные были выражены как среднее значение ± стандартная ошибка.
и считались значимыми при P <0,05.
Результаты Противоопухолевые эффекты комбинации
рибавирин с TMZ и IFN-β Ранее нами был продемонстрирован противоопухолевый эффект.
рибавирина на клеточные линии злокачественной глиомы (7).В этом исследовании семь злокачественных глиом
клеточные линии подвергались воздействию 0,1–1000 мкМ рибавирина и обрабатывались
в течение 72 часов, и было обнаружено, что рибавирин ингибирует рост
все семь клеточных линий дозозависимым образом (7).
Чтобы оценить, является ли комбинация рибавирина
с TMZ и IFN-β может оказывать более сильное противоопухолевое действие
по сравнению с одним рибавирином в клеточных линиях злокачественной глиомы,
клетки инкубировали в культуральной среде, содержащей различные
концентрации (0–100 МЕ / мл) только рибавирина или рибавирина с
TMZ (10 мкМ) и IFN-β (10 МЕ / мл) в течение 72 часов.Как показано на рис. 1, комбинация рибавирина с
TMZ (10 мкМ) и IFN-β (10 МЕ / мл) выявили значительный рост клеток.
ингибирующий эффект с зависимостью от дозы рибавирина во всех семи
линии клеток злокачественной глиомы. Такой эффект ингибирования роста клеток
также наблюдалась при относительно низкой концентрации рибавирина, 0,1
и 1 мкМ. Кроме того, это было очевидно при 0,1 мкМ рибавирина в
Ячейки AM-38, T98G, U-87MG и U-251MG.
Кроме того, мы исследовали, может ли комбинация
TMZ, IFN-β и рибавирин показали усиленный рост клеток
ингибирующий эффект по сравнению с контролем, одним TMZ или TMZ и
IFN-β.Как показано на рис. 2,
эффект ингибирования роста клеток через 72 часа был значительно выше
в группе, получавшей TMZ (10 мкМ), IFN-β (10 МЕ / мл) и
рибавирин (10 мкМ) по сравнению с группой, получавшей только TMZ
во всех семи линиях злокачественных клеток глиомы. Кроме того,
комбинация TMZ, IFN-β и рибавирина оказала значительное влияние на
усиленный эффект ингибирования роста по сравнению с TMZ и IFN-β в
ячейки AM-38, U-87MG, U-138MG и YH-13.
Анализ лекарственной синергии комбинации
рибавирина с TMZ и IFN-β Наши результаты показали, что комбинация TMZ,
IFN-β и рибавирин показали значительное ингибирование роста
злокачественные клетки глиомы.Когда применялись TMZ, IFN-β и рибавирин
в сочетании был обнаружен синергетический эффект, что было проанализировано
метод Чоу-Талалая на злокачественных клетках глиомы. Значение CI было
0,68 (средний синергизм) у A-172 и 0,98 (слабый синергизм) у
U-251MG на уровне IC50 соответственно.
Апоптоз, индуцированный комбинацией
TMZ, IFN-β и рибавирин в клетках U-251MG Индукция апоптоза TMZ, IFN-β, рибавирином,
TMZ и IFN-β или TMZ, IFN-β и рибавирин в клетках U-251MG были
исследовали двойным окрашиванием аннексином V / PI и оценивали с использованием проточного
цитометрия.Распределение апоптотических клеток (аннексин V-положительный,
ранняя стадия апоптоза; Аннексин V / PI-положительный апоптоз на поздней стадии)
после 72 ч обработки показано на рис. 3. В частности, доля
Положительные по аннексину V / PI клетки (поздняя стадия апоптоза) после
лечение тремя агентами (TMZ, IFN-β и рибавирин; среднее значение = 10,56%)
был выше, чем для каждого отдельного агента (означает: TMZ, 5,57%;
IFN-β, 5,74%; и рибавирин, 5,57% соответственно). Результаты
указали, что апоптотические клетки после обработки тремя
агенты имеют тенденцию увеличиваться, показывая повышение более чем на 2%
между каждой обработкой в клетках U-251MG.Однако тот факт, что
статистически значимых различий среди
лечение может отражать небольшое количество в каждой группе.
Рис. 3. Индукция апоптоза TMZ, IFN-β,
рибавирин, TMZ и IFN-β или TMZ, IFN-β и рибавирин в U251MG
клетки. Соотношение обнаружения аннексина V-положительного и аннексина
V / PI-положительные клетки, указывающие на раннюю стадию апоптоза, и
апоптоз или некроз в поздней фазе, соответственно, измеряли с помощью
сортировка клеток, активируемая флуоресценцией, после 72 часов обработки.В
процент аннексин V-положительных клеток и процент
Аннексин V / PI-положительных клеток увеличился, как показано внизу
справа и вверху справа соответственно. Средние распределения
проиллюстрированы апоптотические клетки с каждым лекарством и комбинацией.
справа. IFN-β, интерферон-β; TMZ, темозоломид.
Обсуждение TMZ стал действующей первой линией
химиотерапевтическое средство, но оно не дает удовлетворительного
преимущества для пациентов с глиобластомой.Необходимы дальнейшие исследования, чтобы
улучшить клиническую терапевтическую эффективность и установить
терапевтическая стратегия при глиобластомах. С другой стороны, мы
продемонстрировали дозозависимую противоопухолевую эффективность рибавирина для
линии клеток злокачественной глиомы (7).
Недавно Вольпин и др. (9)
показали, что рибавирин (30 мкМ) ингибирует пролиферацию клеток и
миграция, усиление ареста и гибели клеток в глиоме
клетки, потенциально через модуляцию elF4E, EZh3 и ERK
пути. Кроме того, они указали, что рибавирин в сочетании с
TMZ (100 мкМ) и облучение (5 Гр) потенциально могут усилить
противоопухолевый ответ в клетках глиомы и стволовых клетках глиомы, и
что животные получали комбинацию рибавирина, облучения,
и TMZ имели значительно увеличенное время выживания (9).Совсем недавно мы обнаружили, что рибавирин
(10 мкМ) оказывает противоопухолевое действие на клетки злокачественной глиомы через
биологические процессы индукции DSB, остановки клеточного цикла в
G0 / G1, как экзогенный, так и эндогенный
апоптоз (10). Более того, такие
эффекты могут не зависеть от экспрессии MGMT, которая тесно связана с
коррелирует с устойчивостью к лечению TMZ (10).
В настоящем исследовании комбинация рибавирина
с TMZ и IFN-β (клинически достижимые концентрации) выявлены
более выраженное ингибирующее действие на рост клеток по сравнению с
только рибавирин с зависимостью от дозы рибавирина, которая была
наблюдается из-за относительно низкой концентрации рибавирина, во всех
семь линий клеток злокачественной глиомы (рис.1), предполагая, что рибавирин обладает некоторым противоопухолевым действием как
медицинский препарат. Хотя TMZ (10 мкМ) не показал роста клеток
ингибирующее действие на A-172, T98G, U-138MG и YH-13,
комбинация рибавирина с TMZ и IFN-β действительно показала
значительный эффект ингибирования роста клеток в этих клеточных линиях. Вне
из четырех ячеек U-138MG и YH-13 отображали значительную ячейку
эффект ингибирования роста при лечении рибавирином, TMZ и
IFN-β по сравнению с эффектом без рибавирина (рис. 2). Эти данные свидетельствуют о том, что
комбинация рибавирина с TMZ и IFN-β выявила более
значительный эффект ингибирования роста клеток не только в чувствительных к TMZ
клеток, но также и в клетках, устойчивых к TMZ.Кроме того, в этом исследовании
противоопухолевое действие комбинации этих трех агентов на
Клетки A-172 и U-251MG показали синергетическое взаимодействие, когда
оценены по методу Чоу-Талалай [A-172 и U-251MG использовались в
анализ, потому что IC50 для каждого препарата
получено (7,22)]. Такое сочетание рибавирина с
Таким образом, TMZ и IFN-β можно рассматривать как эффективные
лечение в определенных клетках глиобластомы, хотя, в меру
насколько нам известно, ни один отчет еще не описал подробный эффект
такая комбинация на линиях клеток глиомы и других линиях клеток.
Хотя механизм, лежащий в основе противовирусной и
противоопухолевые эффекты рибавирина еще полностью не выяснены,
несколько участвующих / возможных процессов были упомянуты выше.
Каст и др. (28) указали
следующие основные механизмы действия, особенно связанные с
противовирусное действие: i) фактическое смешивание с вирусным
РНК; рибавирин попадает в клетку посредством транспорта нуклеозидов
механизм, впоследствии подавляющий / изменяющий синтез вирусной РНК,
ii) структурная аналогия с GTP; включение в ячейку
пассивно, затем связывание / ингибирование РНК-полимеразы / синтеза РНК,
iii) иммунный клиренс; иммуностимуляция за счет активации
цитокины для сдвига баланса клеток Th2 / 2 в сторону доминирования Th2, iv)
ингибирование eIF4E; тем самым ингибируя кэппирование мРНК и
инициация трансляции, v) модуляция связанного с ИФН гена
экспрессия, vi) ингибирование IMPDH; с последующим истощением
внутриклеточный GTP и vii) мутаген РНК; следующий
трифосфорилирования, рибавиринтрифосфат включается в
репликация РНК вирусных РНК-полимераз с последующей индукцией
вирусный мутагенез.Эти процессы привлекательны как факторы
перепрофилирование противовирусного рибавирина в качестве противоопухолевого агента, и
также в механизме, лежащем в основе синергетического эффекта
рибавирин в сочетании с другими средствами. В частности,
модуляция экспрессии генов, связанных с IFN, считается
потенциальный фактор синергического действия рибавирина с IFN
(13,19), поскольку IFN оказывает праймирующее действие на
индуцированный рибавирином ген, связанный с ИФН (29). Дальнейшие исследования по изучению
молекулярные механизмы явно необходимы для подтверждения эффективности
эти комбинации.
В настоящем исследовании анализ проточной цитометрии
может указывать на то, что индукция апоптоза представляет собой один из возможных
биологический процесс, связанный с синергическим противоопухолевым действием
эффект тройного комбинированного лечения, потому что апоптотические клетки
после такой тройной обработки имеет тенденцию к увеличению в U-251MG,
хотя статистически значимых различий не наблюдалось.
Шлоссер и др. (20)
продемонстрировали, что рибавирин и IFN усиливают апоптоз и каспазу.
активация в клетках гепатомы.Кроме того, Teng et al (21) показали, что комбинация рибавирина
с IFN может значительно ингибировать пролиферацию клеток и
миграция, вызвать апоптоз, остановить клеточный цикл и уменьшить
Продукция IL-10 в клетках карциномы почек. На основе этих
находки, мы предлагаем рибавирин в сочетании с TMZ и
IFN-β может увеличивать апоптоз в клетках глиобластомы.
Наконец, что очень важно, нам нужно вкратце
упомяните другие эффекты комбинации препаратов, использованной в этом исследовании.Токсичность, вызванная химиотерапией, является серьезной проблемой в борьбе с опухолями.
терапия. Эффект ингибирования роста клеток также наблюдался при
относительно низкая концентрация рибавирина (0,1 и 1 мкМ) в некоторых
линии клеток глиомы, AM-38, T98G, U-87MG, U-138MG и U2-51MG,
в сочетании с 10 мкМ TMZ и 10 МЕ / мл IFN-β: обе концентрации являются
клинически достижимый (19,24). Рибавирин в концентрации 10 мкМ считается
клинически значимая концентрация, потому что при введении в
доза 800 мг / сут в качестве лечебного средства при хроническом гепатите С,
концентрация рибавирина в крови достигала 13 мкМ, а церебральный
спинальная миграция рибавирина составила 70% (10,25).В
Кроме того, Casaos et al (11)
использовали 50 мкМ рибавирина в качестве клинически приемлемой концентрации
в своих экспериментах in vitro. Очень низкая концентрация
рибавирин должен помочь уменьшить побочные эффекты рибавирина,
таких как анемия, и будет проще для клинического использования. Кроме того,
рибавирин относительно недорог и поэтому полезен при
отношение к растущим медицинским расходам, особенно опухоли
лечение. С момента клинического применения тройной комбинированной терапии
может привести к комбинированной токсичности у пациентов, дальнейшие исследования
необходимо для исследования степени эффективности различных доз и
время использования этих комбинаций.
В заключение мы представили доказательства того, что
рибавирин в сочетании с TMZ и IFN-β может вызывать синергетический
противоопухолевые эффекты, включая ингибирование роста клеток в глиоме
клеток и может иметь потенциальное значение в клинической
параметр.
Благодарности Авторы выражают благодарность господину Нобуо Миядзаки.
(Toray Industries Inc., Токио, Япония) за обсуждения. Некоторый
части настоящего исследования были включены в
Диссертация на японском языке, представленная на соискание степени доктора философии.D. степень Юши
Очиаи в Медицинской школе Университета Нихон.
Финансирование Эта работа была частично поддержана грантами для
Научные исследования Японского общества содействия развитию
Наука (грант № 16K10772) и частично за счет гранта Министерства здравоохранения.
Science Research Institute, Inc. (Иокогама, Япония) для
Отделение сопутствующей диагностики, Отделение патологии и
Микробиология, Медицинский факультет Университета Нихон.
Наличие данных и материалов Все данные, полученные или проанализированные в ходе этого исследования,
включены в эту опубликованную статью.
Авторские работы AY внесла свой вклад в экспериментальную концепцию и
дизайн. YO и ES разработали экспериментальную схему, выполнили большинство
экспериментов и анализа некоторых данных, а также написал часть
черновик рукописи. KS и AY также провели часть данных
анализ и способствовал написанию рукописи. SYo, SYa
и АО были вовлечены в концепцию и дизайн исследования,
провел часть экспериментов, проанализировал данные и
участвовал в написании черновика рукописи.TU, YS, TN, HH
и Ю.К. руководили исследованием (включая экспериментальный план),
провели несколько экспериментов, проанализировали данные, помогли подготовить
черновик рукописи и вычитайте рукопись. YO и KS
внес равный вклад в эту работу. Все авторы прочитали и одобрили
окончательная рукопись.
Утверждение этических норм и согласие на
участвовать Не применимо.
Согласие пациента на публикацию Не применимо.
Конкурирующие интересы Авторы заявляют, что у них нет конкурирующих
интересы.
Список литературы 1
Ступп Р., Хеги М.Э., Мейсон В.П., ван ден Бент
MJ, Taphoorn MJ, Janzer RC, Ludwin SK, Allgeier A, Fisher B,
Belanger K и др.: Эффекты лучевой терапии с сопутствующими и
адъювантный темозоломид по сравнению с одной лучевой терапией на выживаемость в
глиобластомы в рандомизированном исследовании III фазы: 5-летний анализ
испытание EORTC-NCIC. Ланцет Онкол. 10: 459–466. 2009. Просмотр статьи: Google Scholar: PubMed / NCBI
2
Сидвелл Р. У., Хаффман Дж. Х., Харе ГП, Аллем
LB, Witkowski JT и Robins RK: Противовирусная активность широкого спектра действия
Виразола: 1-бета-D-рибофуранозил-1,2,4-триазол-3-карбоксамид.Наука. 177: 705–706. 1972. Просмотреть статью: Google Scholar: PubMed / NCBI
3
Коли А., Шаффер А., Шерман А. и Коттилил
S: Лечение гепатита C: систематический обзор. ДЖАМА.
312: 631–640. 2014. Просмотр статьи: Google Scholar: PubMed / NCBI
4
Кенцис А, Тописирович I, Цулькович Б,
Shao L и Borden KL: рибавирин подавляет опосредованные eIF4E онкогенные
трансформация путем физической мимикрии мРНК 7-метилгуанозина
шапка.Proc Natl Acad Sci USA. 101: 18105–18110. 2004. Просмотр статьи: Google Scholar: PubMed / NCBI
5
Ассулин С, Кулькович Б, Коколакис Э,
Руссо К., Беслу Н., Амри А., Каплан С., Лебер Б., Рой, округ Колумбия, Миллер У.
Jr и Borden KL: Молекулярное нацеливание на онкоген eIF4E в
острый миелоидный лейкоз (ОМЛ): клиническое испытание, подтверждающее принцип действия
с рибавирином. Кровь. 114: 257–260. 2009. Просмотр статьи: Google Scholar: PubMed / NCBI
6
Борден К.Л. и Кулькович-Кралячич Б.
Рибавирин как противораковая терапия: острый миелоидный лейкоз и
вне? Лимфома лейка.51: 1805–1815. 2010. Просмотр статьи: Google Scholar: PubMed / NCBI
7
Огино А, Сано Э, Очиай Й, Ямамуро С.,
Таширо С, Ячи К., Охта Т, Фукусима Т, Окамото Й, Цумото К. и др.
al: Эффективность рибавирина против линий злокачественных клеток глиомы.
Oncol Lett. 8: 2469–2474. 2014. Просмотр статьи: Google Scholar: PubMed / NCBI
8
Де ла Крус-Эрнандес E, Медина-Франко JL,
Трухильо Дж., Чавес-Бланко А., Домингес-Гомес Дж., Перес-Карденас Е,
Гонсалес-Фиерро А., Таха-Чайеб Л. и Дуэньяс-Гонсалес А.: Рибавирин
как трехнаправленный противоопухолевый репозиционированный препарат.Oncol Rep.
33: 2384–2392. 2015. Просмотр статьи: Google Scholar: PubMed / NCBI
9
Вольпин Ф, Касаос Дж, Сесен Дж, Мангравити А,
Чой Дж., Горелик Н., Фриче Дж., Лотт Т., Фелдер Р., Шотландия С. Дж. И др.
al: Использование противовирусного препарата, рибавирина, в качестве антиглиобластомы.
терапевтический. Онкоген. 36: 3037–3047. 2017. Просмотр статьи: Google Scholar: PubMed / NCBI
10
Очиай Й, Сано Э, Окамото Й, Ёсимура С.,
Макита К., Ямамуро С., Охта Т., Огино А., Тадакума Х., Уэда Т. и др.:
Эффективность рибавирина против линий злокачественных клеток глиомы:
Последующее исследование.Oncol Rep. 39: 537–544. 2018.PubMed / NCBI
11
Casaos J, Huq S, Lott T, Felder R, Choi J,
Горелик Н., Петерс М., Ся Й, Максвелл Р., Чжао Т. и др.: Рибавирин как
потенциальное терапевтическое средство для атипичных тератоидных / рабдоидных опухолей.
Oncotarget. 9: 8054–8067. 2018. Просмотр статьи: Google Scholar: PubMed / NCBI
12
Сайто Р., Мизуно М., Хатано М., Кумабе Т.,
Ёсимото Т. и Ёсида Дж .: Два разных механизма апоптоза
резистентность, наблюдаемая при индуцированном интерфероном-β апоптозе человека
клетки глиомы.J Neurooncol. 67: 273–280. 2004. Просмотр статьи: Google Scholar: PubMed / NCBI
13
Ёсино А., Катаяма Ю., Ёкояма Т.,
Ватанабэ Т, Огино А, Ота Т, Комине С, Фукусима Т и Кусама К.:
Терапевтическое значение фактора регуляции интерферона 1 (IRF-1)
и IRF-2 в диффузно инфильтрирующих астроцитомах (DIA): ответ на
(IFN) -beta в клетках глиобластомы и прогностическое значение для DIA. J
Neurooncol. 74: 249–260. 2005. Просмотр статьи: Google Scholar: PubMed / NCBI
14
Ваннуччи С., Кьянторе М.В., Мангино Г.,
Percario ZA, Affabris E, Fiorucci G и Romeo G: перспектива в
биомолекулярное терапевтическое вмешательство при раке: от раннего до
новые стратегии с интерферонами 1 типа.Curr Med Chem.
14: 667–679. 2007. Просмотр статьи: Google Scholar: PubMed / NCBI
15
Ёшино А., Таширо С., Огино А., Ячи К.,
Охта Т, Фукусима Т, Ватанабэ Т, Катаяма Й, Окамото Й, Сано Э и
Цумото К. Профили экспрессии генов, предсказывающие ответ на
IFN-β и комбинация темозоломида и IFN-β при злокачественных
глиомы. Int J Oncol. 39: 529–542. 2011.PubMed / NCBI
16
Ёсида Дж., Кадзита Й., Вакабаяси Т. и
Sugita K: долгосрочные результаты наблюдения за 175 пациентами с
злокачественная глиома: важность радикального удаления опухоли и
послеоперационная адъювантная терапия интерфероном, ACNU и
радиация.Acta Neurochir. 127: 55–59. 1994. Просмотр статьи: Google Scholar: PubMed / NCBI
17
Нацумэ А., Исии Д., Вакабаяси Т., Цуно
T, Hatano H, Mizuno M и Yoshida J: IFN-бета подавляет
экспрессия гена репарации ДНК MGMT и сенсибилизация устойчивой глиомы
клетки к темозоломиду. Cancer Res. 65: 7573–7579. 2005. Просмотр статьи: Google Scholar: PubMed / NCBI
18
Пак Дж.А., Джо Я., Ким Т.Г. и Хонг Ю.К .:
Усиление антиглиомного эффекта комбинированным темозоломидом и
интерферон-бета.Oncol Rep. 16: 1253–1260. 2006 г., PubMed / NCBI
19
Ёшино А, Огино А, Ячи К, Охта Т,
Фукусима Т., Ватанабэ Т., Катаяма Ю., Окамото Ю., Нарусэ Н. и Сано
E: Влияние IFN-бета на клеточные линии глиомы человека с темозоломидом.
сопротивление. Int J Oncol. 35: 139–148. 2009. Просмотр статьи: Google Scholar: PubMed / NCBI
20
Шлоссер С.Ф., Шулер М., Берг С.П., Лаубер
K, Schulze-Osthoff K, Schmahl FW и Wesselborg S: Рибавирин и
альфа-интерферон усиливает апоптоз, опосредованный рецепторами смерти, и
активация каспаз в клетках гепатомы человека.Противомикробные агенты
Chemother. 47: 1912–1921. 2003. Просмотр статьи: Google Scholar: PubMed / NCBI
21
Дэн Л, Дин Д, Чен И, Дай Х, Лю Г, Цяо
Z и An R: противоопухолевый эффект рибавирина в сочетании с
интерферон-α на клеточных линиях почечно-клеточной карциномы in vitro. Рак
Cell Int. 14: 632014. Просмотр статьи: Google Scholar: PubMed / NCBI
22
Ёшино А, Огино А, Ячи К, Охта Т,
Фукусима Т, Ватанабэ Т, Катаяма Й, Окамото Й, Нарусэ Н, Сано Э
и Цумото К. Профилирование экспрессии генов предсказывает ответ на
темозоломид при злокачественных глиомах.Int J Oncol. 36: 1367–1377. 2010 г.
Просмотр статьи: Google Scholar: PubMed / NCBI
23
Вишхузен Дж., Науманн У., Огаки Х.,
Растинежад Ф. и Веллер М: CP-31398, новый стабилизатор р53,
вызывает р53-зависимую и р53-независимую гибель клеток глиомы.
Онкоген. 22: 8233–8245. 2003. Просмотр статьи: Google Scholar: PubMed / NCBI
24
Остерманн С, Чайка С, Буклин Т, Лейвраз
S, Lejeune F, Decosterd LA и Stupp R: Плазма и цереброспинальный
Жидкая популяционная фармакокинетика темозоломида при злокачественных новообразованиях.
больные глиомой.Clin Cancer Res. 10: 3728–3736. 2004. Просмотр статьи: Google Scholar: PubMed / NCBI
25
Наик Г.С. и Тяги М.Г.: фармакологический
профиль рибавирина и мониторинг его концентрации в плазме крови
хроническая инфекция гепатита С. J Clin Exp Hepatol. 2: 42–54. 2012 г.
Просмотр статьи: Google Scholar: PubMed / NCBI
26
Чжоу ТК: Теоретические основы, экспериментальные
дизайн и компьютерное моделирование синергизма и антагонизма в
исследования комбинации препаратов.Pharmacol Rev. 58: 621–681. 2006 г.
Просмотр статьи: Google Scholar: PubMed / NCBI
27
Ren H, Tan X, Dong Y, Giese A, Chou TC,
Райнов Н. и Ян Б.: Дифференциальный эффект иматиниба и синергизм
комбинированного лечения химиотерапевтическими средствами при злокачественных новообразованиях.
клетки глиомы. Basic Clin Pharmacol Toxicol. 104: 241–252. 2009 г.
Просмотр статьи: Google Scholar: PubMed / NCBI
28
Каст Р.Э., Скули Н., Кос С., Карпель-Масслер Дж.,
Шиодзава Й., Гошен Р. и Халач М.Э. Режим ABC7: новый
подход к метастатическому раку молочной железы с использованием семи распространенных препаратов для
ингибировать эпителиально-мезенхимальный переход и увеличивать
эффективность капецитабина.Рак молочной железы. 9: 495–514. 2017.PubMed / NCBI
29
Стюарт В.Е., Госсер Дж. Б. и Локкарт Р. З. младший:
Прайминг: не противовирусная функция интерферона. J Virol. 7: 792–801.
1971. Просмотреть статью: Google Scholar: PubMed / NCBI
Новый эпигенетический механизм действия темозоломида в клетках глиомы Abstract Темозоломид (TMZ) – пероральный алкилирующий химиотерапевтический агент, который продлевает выживаемость пациентов с глиобластомой (GBM).Несмотря на высокий потенциал TMZ, прогрессирование заболевания и рецидивы все еще наблюдаются. Следовательно, необходимо более глубокое понимание механизма действия этого лекарства, которое может обеспечить более длительную пользу от его антиглиомных свойств. Используя метод пост-маркировки нуклеотидов и разделение на тонкослойной хроматографии, мы измерили глобальные изменения 5-метилцитозина (m 5 C) в ДНК клеток глиомы, обработанных TMZ. Хотя m 5 C не является продуктом реакции метилирования TMZ ДНК, мы проанализировали эффекты действия препарата на различные клеточные линии глиомы через глобальные изменения на уровне основной эпигенетической метки ДНК.Первым эффектом действия TMZ, который мы наблюдали, является гиперметилирование ДНК с последующим глобальным деметилированием. Следовательно, увеличение метилирования ДНК и подавление экспрессии некоторых генов можно приписать активации ДНК-метилтрансфераз (DNMT). С другой стороны, гипометилирование индуцируется окислительным стрессом и вызывает неконтролируемую экспрессию патологических генов белка. Результаты лечения опухолей головного мозга TMZ позволяют предположить новый механизм модуляции эпигенетического маркера в раковых клетках.Высокая концентрация TMZ вызвала значительное увеличение содержания m 5 C в ДНК за короткое время, но низкая концентрация TMZ при более длительном гипометилировании наблюдается для всего диапазона концентраций TMZ. Поэтому прием ТМЗ в малых дозах и непродолжительное время следует рассматривать как оптимальную терапию.
Образец цитирования: Barciszewska A-M, Gurda D, Głodowicz P, Nowak S, Naskręt-Barciszewska MZ (2015) Новый эпигенетический механизм действия темозоломида в клетках глиомы.PLoS ONE 10 (8):
e0136669.
https://doi.org/10.1371/journal.pone.0136669
Редактор: Хавьер С. Кастресана, Университет Наварры, ИСПАНИЯ
Поступила: 22 мая 2015 г .; Одобрена: 5 августа 2015 г .; Опубликовано: 26 августа 2015 г.
Авторские права: © 2015 Barciszewska et al. Это статья в открытом доступе, распространяемая в соответствии с условиями лицензии Creative Commons Attribution License, которая разрешает неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе при условии указания автора и источника
Доступность данных: Все данные указаны в бумага.
Финансирование: Это исследование было поддержано Университетом медицинских наук через грант для молодых ученых № 502-14-01122178-09753 (AMB) и Министерством науки и высшего образования Польши в рамках программы KNOW (MZB).
Конкурирующие интересы: Авторы заявили, что никаких конкурирующих интересов не существует.
Введение Злокачественные глиомы являются наиболее распространенным типом первичной опухоли головного мозга у взрослых. Они составляют примерно 50% всех опухолей центральной нервной системы [1].Мультиформная глиобластома (ГБМ) является наиболее летальным подтипом со средней выживаемостью пациентов от 8 до 12 месяцев с момента постановки диагноза [2,3]. Традиционная терапия ГБМ включает хирургическое вмешательство с последующей лучевой терапией и химиотерапией [4]. Реагенты для алкилирования ДНК – это старейший класс противораковых препаратов. В настоящее время они используются и остаются важными для лечения различных типов рака, включая опухоли головного мозга [5,6]. Алкилирующие агенты повреждают ДНК за счет образования различных небольших или объемных аддуктов с основаниями нуклеиновых кислот.Наиболее перспективным терапевтически активным средством при опухолях головного мозга является темозоломид [7,8]. Темозоломид (TMZ) представляет собой пероральный алкилирующий агент, который считается эффективным и продлевает выживаемость при введении во время и после лучевой терапии. Темозоломид препятствует развитию раковых клеток, замедляя их рост и распространение в организме. Он используется в качестве лечения первой линии при глиобластоме. TMZ также проявляет значительную активность против рецидивирующей глиомы [9].
Пролекарство темозоломид (4-метил-5-оксо-2,3,4,6,8-пентазабицикло [4.3.0] нона-2,7,9-триен-9-карбоксамид с молекулярной массой 194,15) является производным имидазола. Это алкилирующий химиотерапевтический агент второго поколения, разработанный в 1980-х годах в рамках рациональной инициативы по разработке лекарств. Поскольку TMZ является липофильным, он эффективно проникает через гематоэнцефалический барьер и является биодоступным для ЦНС. Он стабилен при кислом pH (<5), но при нейтральном и щелочном pH (> 7) быстро гидролизуется до активного промежуточного соединения 5- (3-метилтриазен-1-ил) имидазол-4-карбоксамида (MTIC).Образующийся in situ ион метилдиазония является активным соединением, которое переносит метильную группу на основания ДНК [10,11]. Около 70% аддуктов образуются в позиции N7 гуанина (m 7 G) и 9% в позиции N3 аденина (m 3 A) (Рис. 1). Эти модифицированные компоненты ДНК могут быть восстановлены с помощью механизма эксцизионной репарации оснований (BER) [12]. Эффективный ремонт сводит к минимуму эффект от этих повреждений. Однако, если BER нарушается, эти аддукты становятся высоко цитотоксичными. Нарушение BER способно обходить другие факторы устойчивости к TMZ, такие как сверхэкспрессия O6-метилгуанозинметилтрансферазы (MGMT) и дефекты репарации несоответствия.Подход к усилению цитотоксичности TMZ заключается в ингибировании BER, так что нецитотоксические аддукты, то есть m 7 G и m 3 A, становятся цитотоксическими. Интересно, что только ок. 5% реакции метилирования, опосредованной TMZ, приводит к O6-метилгуанозину. Несмотря на низкий выход, этот путь в настоящее время признан основным механизмом действия препарата. Защитный эффект активности MGMT в опухолевой ткани связан с устойчивостью к препарату TMZ. MGMT быстро отменяет модификацию в положении O6 гуанозина, удаляет метильную группу, добавленную TMZ, и снижает цитотоксические эффекты своего действия [13,14].Известно, что подавление гена MGMT за счет метилирования остатка цитозина (m 5 C) (но не m 7 G, m 3 A или O 6 mG) в промоторной области приводит к снижению экспрессии фермента в опухолевых клетках. Хорошо известно, что метилирование цитозина является обычным механизмом инактивации (подавления) генов супрессии опухоли во время злокачественного прогрессирования [12]. Неясно, почему метилирование положения O6 гуанозина, которое представляет лишь небольшую часть всех повреждений ДНК, вызванных TMZ (рис. 1), считается основным игроком цитотоксического действия препарата [11,15].Метилирование гуанина по O6 приводит к включению «несоответствия» тимидина вместо цитозина, и эта ошибка распознается ферментной системой восстановления несоответствия (MMR), которая пытается вырезать тимидин [16]. Поскольку метилирование гуанина сохраняется, следует серия бесполезных циклов репликации и репарации, что в конечном итоге приводит к гибели клеток в результате апоптоза. Поскольку остатки метилированного гуанина могут быть восстановлены, клетки могут избежать гибели клеток, вызванной TMZ. Следовательно, чтобы проявлять цитотоксическое действие TMZ, клетке необходима интактная система MMR и недостаточный или низкий уровень MGMT.Напротив, недостаточная система MMR в сочетании с высокими уровнями экспрессии MGMT опосредует устойчивость к TMZ.
Рис. 1. Сайт-специфическое метилирование ДНК темозоломидом.
Основным продуктом реакции ДНК с TMZ является 7-метилгуанозин (m 7 G). Предполагается, что метилирование гуанозина O6 является основным механизмом действия TMZ, но происходит только на 5%.
https://doi.org/10.1371/journal.pone.0136669.g001
Принимая во внимание низкое содержание O6-метилгуанозина и устойчивость раковых клеток к TMZ, мы задали вопрос об эффективном механизме действия TMZ на клетки глиомы.Вместо аддуктов метилирования ДНК мы проанализировали изменения на уровне m 5 C в ДНК раковых клеток после обработки TMZ в зависимости от времени и концентрации препарата.
Материалы и методы Клеточные линии и их обработка TMZ Клеточные линии глиомы человека (U138MG, U118MG, T98G), HeLa (клетки рака шейки матки) человека и линии клеток глиомы С6 крысы были получены из АТСС (Американская коллекция культур тканей, Роквилл, Мэриленд, США). Клеточная линия HaCaT (сердце человека) была получена от CLS (Cell Line Service GmbH), а темозоломид (TMZ) – от Sigma-Aldrich.
TMZ был недавно растворен в диметилсульфоксиде (ДМСО) в концентрации 0,103 М. Этот основной раствор добавляли непосредственно в культуральную среду (клетки с конфлюэнтностью 90–95%) в соответствии с расчетной концентрацией. Клетки высевали с плотностью 5×10 5 клеток на лунку в 6-луночные планшеты, содержащие 2 мл RPMI 1640 или DMEM (Sigma) с добавлением 10% FCS (Sigma) и стандартных антибиотиков ( пенициллин 100 Ед / мл и стрептомицин 100 мкг / мл), выращивали при 37 ° C в атмосфере 5% CO 2 .Через 24 часа клетки промывали фосфатно-солевым буфером (PBS, Sigma), помещали в свежую среду и обрабатывали TMZ в различных концентрациях (100, 250, 500 и 1000 мкМ) в течение 3, 12, 24 и 48 часов. Для контроля клетки обрабатывали только H 2 O или ДМСО. После 3–48 ч обработки TMZ клетки промывали PBS, трипсинизировали и собирали центрифугированием при 12000 об / мин в течение 10 мин. Осадки клеток быстро замораживали и хранили при -20 ° C для выделения ДНК.
Выделение ДНК из образцов ткани экстрагировали с помощью набора Genomic Mini (A&A Biotechnology, Гданьск, Польша).Вскоре образцы тканей инкубировали сначала с протеиназой K, а затем с РНКазой A. После центрифугирования (15000 об / мин в течение 3 мин) супернатант наносили на мини-колонку, и ДНК, связанная с колонкой, элюировали трис-буфером pH 8,5 и хранили при -20 ° C для дальнейшего анализа.
Гидролиз ДНК, маркировка и ТСХ-хроматография (высушенная, 1 мкг) растворяли в сукцинатном буфере (pH 6,0), содержащем 10 мМ CaCl 2 , и расщепляли 0,001 единицами фосфодиэстеразы селезенки II и 0.02 единицы микрококковой нуклеазы в общем объеме 3,5 мкл в течение 5 ч при 37 ° C. 0,17 мкг гидролизата ДНК метили 1 мкКи [γ- 32 P] АТФ (6000 Ки / ммоль, Hartmann Analytic GmbH) и 1,5 единицами полинуклеотидкиназы Т4 (USB, Великобритания) в 3 мкл 10 мМ бицин-NaOH pH. 9.7, содержащий 10 мМ MgCl 2 , 10 мМ DTT и 1 мМ спермидин. Через 0,5 часа при 37 ° C добавляли 3 мкл апиразы (10 единиц / мл) в том же буфере и инкубировали еще 0,5 часа. 3’-нуклеотид-фосфат отщепляли с помощью 0.2 мкг РНКазы P1 в 500 мМ буфере ацетата аммония, pH 4,5. Идентификацию [γ- 32 P] m 5 dC проводили с помощью двумерной тонкослойной хроматографии (ТСХ) на целлюлозных пластинах (Merck, Дармштадт, Германия) с использованием системы растворителей: изомасляная кислота: NH 4 OH : H 2 O (66: 1: 17 об. / Об.) В первом измерении и 0,2 M фосфат натрия (pH 6,8) -сульфат аммония-н-пропиловый спирт (100 мл / 60 г / 2 мл) во втором. измерение. Затем радиоактивность измеряли с помощью флюоресцентного анализатора изображений FLA-5100 с Multi Gauge 3.0 (FujiFilm). Каждый анализ повторяли четыре раза (рис. 2). Для точных расчетов мы оценивали пятна, соответствующие не только m 5 dC, но и продуктам его деградации как dC (цитозин) и dT (тимин). Количество m 5 C было рассчитано как R = [(m 5 dC / m 5 dC + dC + dT)] * 100 [17,18].
Рис. 2. Анализ m 5 C в ДНК.
A. Блок-схема анализа m 5 C в геномной ДНК. Изолированная ДНК была гидролизована до 3’-мононуклеотидов (A – аденозин, G – гуанозин, C – цитидин, T – тимидин и X – другие модификации).Кроме того, они были помечены [γ- 32 P], дефосфорилированы по 3’-фосфату и разделены с помощью ТСХ в двух измерениях. Хроматограмму оценивали с помощью фосфоимиджера. B. Анализ методом двумерной тонкослойной хроматографии (ТСХ) меченных [5’- 32 P] дезоксинуклеотидов, полученных ферментативным гидролизом ДНК из различных типов клеток. Чистую ДНК выделяли из необработанных клеток HeLa (слева) и обрабатывали TMZ (справа) в течение 48 часов.
https: // doi.org / 10.1371 / journal.pone.0136669.g002
Данные, полученные с помощью методов пост-мечения и ТСХ, были идентичны данным, полученным с помощью анализа ELISA [19].
Анализ клеточного цикла с помощью проточной цитометрии 5 x 10 5 клеток высевали на 6-луночные планшеты для культивирования клеток и инкубировали в течение 12 и 48 часов со 100–1000 мкМ темозоломидом. Контрольные клетки инкубировали в полностью дополненной ростовой среде с ДМСО и без него (17,6 мкл). По окончании инкубации клетки фиксировали 80% этанолом.Затем клетки собирали и центрифугировали при 200 × g в течение 5 минут, и среду для культивирования клеток удаляли. Осадок дважды промывали 1 мл PBS, центрифугировали, как ранее, и ресуспендировали в 100 мкл PBS. Затем добавляли 1 мл ледяного 80% этанола и инкубировали в течение 2 ч при 4 ° C и хранили при -20 ° C. Перед проведением анализа клеточного цикла с помощью проточной цитометрии фиксированные клетки окрашивали пропидиевым диодом (PI). После центрифугирования (200 x g в течение 5 мин) клетки дважды промывали 1 мл PBS и центрифугировали.Осадок инкубировали в 100 мкл PBS, содержащего 1% FBS, PI (5 мкг) и РНКазу A (20 мкг), в течение 30 мин при 37 ° C в темноте. Флуоресценцию PI измеряли с помощью проточного цитометра FACS calibur (Becton Dickinson). Данные анализировали с помощью программного обеспечения FlowJo [20].
Статистический анализ STATISTICA, выпуск 1998 г. (StatSoft Polska, 1995–2008) использовалась для статистического анализа всех данных, как и в предыдущих наших исследованиях [21]. Стандартные отклонения были указаны в виде столбцов ошибок на графиках.
Результаты Мы проанализировали эпигенетические изменения ДНК (анализ m 5 C) шести типов клеток: глиома C6 (крыса), U118MG (человек), U138MG (человек), T98G (человек), HeLa (человек). и HaCaT (человек) после обработки 100–1000 мкМ TMZ в течение 3–48 часов. Интересно, что мы заметили, что клеточные линии U118 реагируют на TMZ в зависимости от концентраций и времени реакции. За короткое время обработки TMZ количество m 5 C в ДНК значительно увеличивается (рис. 3). Количество m 5 C (R) достигает наивысшего уровня при 500 мкМ TMZ и через 24 часа (рис. 3).Увеличение продолжительности лечения приводит к снижению уровня m 5 C, что явно свидетельствует о деметилировании ДНК. Наибольшее снижение R наблюдается при максимальной концентрации TMZ (1000 мкМ) и через 48 ч (рис. 4). Конечное количество m 5 C аналогично количеству необработанных клеток. Для более низкой концентрации TMZ (100–500 мкМ) можно увидеть два эффекта. Первый, при коротком времени обработки, до 24 ч, – это увеличение содержания m 5 C в ДНК (гиперметилирование), а затем, при более продолжительном времени, наблюдалось снижение метилирования.Такие же эффекты наблюдаются и для других линий клеток глиомы, таких как U138, T98G и C6 (рис. 4). В неглиомной линии раковых клеток HeLa скорость деметилирования ДНК коррелирует с концентрациями TMZ (рис. 4). Наименьшие изменения метилирования ДНК в нормальной клеточной линии (HaCaT) изменяются незначительно. Ясно, что TMZ вызывает сильный окислительный стресс и снижение m 5 C в ДНК (например, деметилирование посредством окисления m 5 C). Данные на рис. 4 ясно показывают, что TMZ более эффективен (токсичен) для рака, чем для нормальных клеток.
Рис. 3. Временной эффект TMZ на статус метилирования ДНК.
Клеточная линия U118, обработанная 250 мкМ (пустой кружок) и 500 мкМ (серый кружок) TMZ через 3, 6, 9, 12, 24 и 48 часов. ДНК, не обработанную темозоломидом, использовали в качестве контроля (черный кружок). Содержание m 5 C указано по оси Y. Наибольшее содержание m 5 C в ДНК наблюдалось после 24 ч инкубации клеток с 500 мкМ TMZ.
https://doi.org/10.1371/journal.pone.0136669.g003
Рис. 4. Влияние TMZ на содержание 5-метилцитозина (m 5 C) в ДНК глиомы.
(U138, T98G, C6) и клетки HeLa через 3, 12, 24 и 48 часов. Клеточная линия HaCaT использовалась в качестве эталона. C обозначает контрольные клетки, обработанные только ДМСО.
https://doi.org/10.1371/journal.pone.0136669.g004
Влияние TMZ на нормальную пролиферацию клеток HaCaT и T98G глиомы оценивали путем количественной оценки с пропидиум иодом (PI).Клеточный цикл необработанных клеток характеризовался длинным и четко определенным пиком G0 / G1, со слегка выраженным G2 / M и относительно низкой фракцией S. Мы заметили, что эффект TMZ на клетки HaCaT слаб и меньше, чем на клетки глиомы (рис. 5). Обработка TMZ клеток глиомы в концентрациях выше 500 мкМ в течение 12 ч индуцирует незначительные, но в течение 48 ч инкубации наблюдались большие изменения при концентрации 1000 мкМ (Таблица 1). Обработка TMZ уменьшает количество клеток в суб-G0 / G1, но процент клеток в S и G2 / M значительно увеличивается (рис. 5 и таблица 1).Эти изменения были более очевидны для клеток, инкубированных в течение 48 ч с TMZ. В присутствии 500 и 1000 мкМ TMZ процент клеток в фазе sub G0 / G1 снизился до 25,7% и 53,73%, но количество клеток в фазе G2 / M увеличилось до 17,8% и 57,37% соответственно (Таблица 1). Изменения больше для T98G, чем для клеток HaCaT (Таблица 1).
Рис. 5. Влияние TMZ на клеточный цикл.
Распределение фаз клеточного цикла в глиобластоме человека (T98G) по сравнению с линиями нераковых клеток (HaCaT) после 12- и 48-часовой обработки темозоломидом (TMZ) проводили с использованием проточного цитометра FACS calibur путем окрашивания ДНК пропидиевым иодом.Обработка TMZ приводила к остановке фазы G2M в обеих тестируемых клеточных линиях дозозависимым образом.
https://doi.org/10.1371/journal.pone.0136669.g005
Таблица 1. Влияние TMZ на линии клеточного цикла HaCaT и T98G.
Процент клеток в каждой фазе клеточного цикла в раковой (T98G) и не раковой (HaCaT) клеточной линии после лечения препаратом. Самые высокие концентрации TMZ (500 мкМ и 1000 мкМ) повлияли на распределение фаз клеточного цикла в наибольшей степени.Результаты выражены в виде среднего значения ± стандартное отклонение. Все эксперименты проводили в трех повторностях.
https://doi.org/10.1371/journal.pone.0136669.t001
Наконец, мы провели анализ цитотоксичности (МТТ). Было показано, что обработка TMZ в диапазоне 1-2000 мкМ запускает апоптоз гибели клеток (рис. 6).
Рис. 6. Влияние на жизнеспособность клеток после обработки темозоломидом, оцененное методом МТТ.
Нормальные (HaCaT) и опухолевые клетки (HeLa, T98G и U118) обрабатывали разными концентрациями TMZ (1-2000 мкМ) в течение 3-48 часов.C- контрольные клетки, культивируемые без TMZ; ДМСО – клетки, обработанные самой высокой концентрацией ДМСО, использованной в экспериментах. Результаты выражены в виде среднего значения ± стандартное отклонение.
https://doi.org/10.1371/journal.pone.0136669.g006
Обсуждение Устойчивость к темозоломиду через механизм репарации ДНК на основе метилгуанозинметилтрансфераз O6 остается важной проблемой для успешного лечения пациентов со злокачественной глиомой. Экспрессия MGMT в опухолевых клетках может определять ответ на TMZ, а подавление гена MGMT за счет метилирования промотора играет важную роль в регуляции активности MGMT в глиомах.На основе модуляции метилирования промотора MGMT были предложены некоторые подходы к преодолению опосредованной MGMT устойчивости [11]. Хотя TMZ не излечивает GBM, было показано, что его антиглиомная активность продлевает общую выживаемость [12]. Чтобы изучить молекулярный механизм, лежащий в основе действия TMZ, мы рассмотрели другой уровень генетической информации и проанализировали глобальные изменения 5-метилцитозина (m 5 C), основной эпигенетической модификации ДНК в линиях клеток глиомы. Сам профиль метилирования ДНК не статичен и подвержен динамическим изменениям, вызванным старением, факторами окружающей среды, питательными и патогенными факторами, вирусами и многими другими [20].
Известно, что метилирование ДНК (m 5 C) может функционировать как «переключатель» для активации или репрессии транскрипции гена, обеспечивая важный механизм тканеспецифичных и регулируемых развитием генетических процессов [22]. C5 цитозинового остатка может быть активирован только специфическими ДНК-метилтрансферазами (DNMT), которые катализируют побочное специфическое метилирование ДНК с использованием S-аденозилметионина (SAM) в качестве субстрата. В нормальных клетках уровень m 5 C контролируется процессами ферментативного метилирования-деметилирования ДНК.Количество m 5 C в геномной ДНК можно измерить с помощью широкого диапазона методов, разработанных для получения количественной и качественной информации о метилировании геномной ДНК [23,24]. Принимая во внимание регуляторную роль m 5 C, вместе с его химической реакционной способностью и способностью как очага мутаций [25], мы изучили геномное (глобальное) количество m 5 C в ДНК различных раковых клеток, обработанных TMZ в различных условиях, чтобы контролировать его действие на эпигенетическую метку ДНК.Количество m 5 C, выраженное в виде коэффициента R, является хорошим диагностическим биомаркером процессов онкогенеза и оказалось полезным в качестве зонда для различных заболеваний и старения [18,24,26]. Из анализа содержания m 5 C влияния TMZ на раковые клетки возникло два вопроса. Первый – как можно объяснить изменения и, в частности, увеличение количества эпигенетической метки. Принимая во внимание, что TMZ не может напрямую реагировать с углеродом цитозина C5 и не является субстратом для ДНК-метилтрансфераз, единственно разумным выводом, по-видимому, является то, что темозоломид стимулирует или активирует фермент, ответственный за специфическое образование m 5 C в ДНК e.грамм. ДНК-метилтрансфераза. Как следствие этого, можно наблюдать метилирование промоторной области гена некоторых белков и их сайленсинг. С другой стороны, TMZ, а также другие препараты, вводимые в течение более длительного времени и в высоких концентрациях, вызывают значительный клеточный стресс [27]. Действительно, индуцированное TMZ гипометилирование предполагает глобальный стресс (окислительное повреждение) клетки и, в частности, всех компонентов ДНК, включая m 5 C. Такое случайное и глобальное удаление эпигенетического маркера, являющегося сигналом сайленсинга, приводит непосредственно к активации гена. экспрессия белков, связанных с патологией.Этот вывод подтверждается увеличением количества клеток и остановкой клеток глиомы в фазе G2 / M из-за многочисленных модификаций, которые происходят в основаниях ДНК, вызывая повреждение ДНК.
Вторая проблема заключается в том, как результаты глобального эпигенетического анализа соответствуют клиническим данным о назначении темозоломида пациентам с глиобластомой. Известно, что глобальное гипометилирование является общим свойством всех раковых заболеваний человека [28]. То же самое и с опухолями головного мозга. Недавно мы показали, что уровень m 5 C в ДНК опухолей головного мозга снижается по мере увеличения их злокачественности [26,29].Уровень m 5 C в ДНК клеток глиобластомы является самым низким среди онкологических заболеваний человека. Напротив, опухоли головного мозга I и II степени по классификации ВОЗ показали значительно большее количество m 5 C в ДНК. Следовательно, гиперметилирование ДНК, наблюдаемое в клетках на первой фазе лечения TMZ, может быть очень полезным для пациента, но дальнейшее деметилирование, индуцированное TMZ, способствует ошибочной экспрессии генов и дальнейшему развитию злокачественных новообразований. Урок здесь в том, что небольшие дозы TMZ, принимаемые в течение более короткого времени, следует рассматривать как более полезные для пациентов.Эксперименты по токсичности клеток показали, что TMZ влияет на жизнеспособность клеток в зависимости от дозы и времени. Инкубация с TMZ в диапазоне концентраций 1–2000 мкМ до 48 часов приводила к снижению жизнеспособности клеток до ~ 16% в клетках HeLa и U118. Наше наблюдение согласуется с другими сообщениями [30–32]. Более того, было также показано, что цитотоксичность TMZ не является следствием индукции апоптоза [31–32].
Наконец, очевиден вопрос: какой механизм действия TMZ является функциональным? Похоже, что метод, основанный на метилировании гуанинов O6 (ок.5%), что предполагает участие O6-метилгуанин-ДНК-метилтрансферазы в приобретенной устойчивости клеток к TMZ, имеет некоторые слабые места, в частности, низкий процент метилирования этого сайта. Другие относятся к глобальному гипер- и гипометилированию, что подчеркивает решающую роль эпигенетики в канцерогенезе.
Наконец, наши данные убедительно подтверждают, что TMZ действует в основном за счет индукции окислительного стресса и изменений статуса метилирования ДНК. Ясно, что TMZ вызывает увеличение содержания m 5 C в ДНК на первом этапе лечения и уменьшение содержания m 5 C в ДНК на втором этапе.Следовательно, очевидно, что гиперметилирование является результатом более высокой активности ДНК-метилтрансфераз, индуцированной TMZ, и этот процесс подавляет экспрессию некоторых генов, потенциально участвующих в канцерогенезе. Это можно рассматривать как положительный эффект TMZ. С другой стороны, гипометилирование является эффектом окислительного стресса и приводит к развитию или прогрессированию рака. Наконец, прием TMZ с низкими дозами препарата и в короткие сроки следует рассматривать как оптимальную терапию.
Выводы Наши результаты исследований лечения TMZ предполагают новый механизм его действия. Он работает через модуляцию эпигенетического маркера (m 5 C) в раковых клетках. Высокая концентрация TMZ за короткое время вызвала увеличение содержания m 5 C в ДНК, но при низкой концентрации TMZ и более продолжительном времени наблюдается гипометилирование во всем диапазоне концентраций лекарственного средства. Поэтому оптимальной терапией следует считать введение низких доз TMZ и короткое время.
Вклад авторов Задумал и спроектировал эксперименты: AMB MZB. Проведены эксперименты: AMB DG PG. Проанализированы данные: АМБ СН МЗБ. Написал бумагу: AMB.
Ссылки 1.
Луи Д. Н., Огаки Х., Вистлер О. Д., Кавени В. К., Burger PC, Джуве А. и др. Классификация опухолей центральной нервной системы ВОЗ 2007 г. Acta Neuropathol. 2007; 114: 97–109. pmid: 17618441 2.
Нагараджан Р.П., Костелло Дж. Ф. Эпигенетические механизмы мультиформной глиобластомы.Semin Cancer Biol. 2009; 19: 188–197. pmid: 19429483 3.
МакЛендон Р., Фридман А., Бигнер Д., ван Мейр Э. Г., Брат Д. Д., Мастрогианакис Г. М. и др. Всесторонняя геномная характеристика определяет гены и основные пути глиобластомы человека. Природа. 2008; 455: 1061–1068. pmid: 18772890 4.
Авгеропулос Н.Г., Бэтчелор Т.Т. Новые стратегии лечения злокачественных глиом. Онколог. 1994; 4: 209–224. 5.
Августин С.К., Ю Дж.С., Потти А., Йошимото Ю., Зипфель П.А., Фридман Х.С. и др.Геномное и молекулярное профилирование позволяет прогнозировать ответ на темозоломид при меланоме. Clin Cancer Res. 2009; 15: 502–510. pmid: 19147755 6.
Фишер Т., Галанти Дж., Лави Дж., Якоб-Хирш Дж., Квенцель И., Зелигсон С. и др. Механизмы противоопухолевой активности темозоломида при мультиформной глиобластоме. Рак J. 2007; 13: 335–344. pmid: 17921733 7.
Ступп Р., Мейсон В.П., ван ден Бент М.Дж., Веллер М., Фишер Б., Тапхоорн М.Дж. Лучевая терапия плюс сопутствующий и адъювантный темозоломид при глиобластоме.N Engl J Med. 2005; 352: 987–996. pmid: 15758009 8.
Хеги М.Э., Лю Л., Герман Дж. Г., Ступп Р., Вик В., Веллер М. и др. Корреляция метилирования промотора O6-метилгуанинметилтрансферазы (MGMT) с клиническими исходами при глиобластоме и клиническими стратегиями модуляции активности MGMT. J Clin Oncol. 2008; 26: 4189–4199. pmid: 18757334 9.
Neidle S, Thurston DE. Химические подходы к открытию и разработке методов лечения рака. Nat Rev Рак. 2005. 5: 285–296.pmid: 15803155 10.
Денни Б.Дж., Рулевая рубка RT, Стивенс М.Ф., Цанг Л.Л.H, Слэк Дж. ЯМР и молекулярное моделирование, исследование механизма активации противоопухолевого препарата темозоломид и его взаимодействия с ДНК. Биохимия. 1994; 33: 9045–9051. pmid: 8049205 11.
Тентори Л., Грациани Г. Последние подходы к повышению противоопухолевой эффективности темозоломида. Curr Med Chem. 2009; 16: 245–257. pmid: 19149575 12.
Хеги М.Э., Diserens A-C, Горлия Т., Хамон М.Ф., де Триболе Н., Веллер М. и др.Молчание гена MGMT и польза от темозоломида при глиобластоме. N Engl J Med. 2005; 352: 997–1003. pmid: 15758010 13.
Хапполд С., Рот П., Вик В., Шмидт Н., Флореа А.М., Сильгинер М. и др. Четкие молекулярные механизмы приобретенной устойчивости к темозоломиду в клетках глиобластомы. J Neurochem. 2012; 122: 444–455. pmid: 22564186 14.
Fan CH, Liu WL, Cao H, Wen C, Chen L, Jiang G. O 6 -метилгуанин-ДНК-метилтрансфераза в качестве многообещающей мишени для лечения глиом, устойчивых к темозоломиду.Cell Death Dis. 2013; 4, е876. pmid: 24157870 15.
Денни Б.Дж., Рулевая рубка RT, Стивенс М.Ф., Цанг Л.Л.H, Слэк Дж. ЯМР и молекулярное моделирование, исследование механизма активации противоопухолевого препарата темозоломид и его взаимодействия с ДНК. Биохимия. 1994; 33: 9045–9051. pmid: 8049205 16.
Шен В., Ху Дж.А., Чжэн Дж.С. Механизм противоопухолевого действия темозоломида на клетки глиомы. J Int Med Res. 2014; 42: 164–172. pmid: 24326954 17.Zukiel R, Nowak S, Barciszewska A-M, Gawrońska I, Keith G, Barciszewska MZ. Простой эпигенетический метод диагностики и классификации опухолей головного мозга. Mol Cancer Res. 2004; 2: 196–202. pmid: 15037658 18.
Barciszewska MZ, Barciszewska A-M, Rattan SIS. Обнаружение метилированного цитозина на основе ТСХ: приложение к эпигенетике старения. Биогеронтология. 2007; 8: 673–678. pmid: 17891469 19.
Lewandowska-Gnatowska E, Polkowska-Kowalczyk L, Szczegielniak J, Barciszewska M, Barciszewski J, Muszyńska G.Модулируется ли метилирование ДНК вызванным ранением окислительным бустином кукурузы? Plant Physiol Biochem. 2014: 82: 202–208. pmid: 24976604 20.
Фейл Р., Фрага М.Ф. Эпигенетика и окружающая среда: новые модели и последствия. Nat Rev Gen.2012; 13: 97–109. 21.
Михалак М., Барцишевска М.З., Барцишевский Дж., Плитта Б.П., Хмеларц П. Глобальные изменения в метилировании ДНК в семенах и проростках Pyrus communis после высыхания и хранения семян. PLoS One 2013; 8: e70693.pmid: 23940629 22.
Бэйлин С.Б., Джонс ПА. Десятилетие изучения эпигенома рака, биологических и трансляционных последствий. Nat Rev Рак. 2011; 11: 726–734. pmid: 21941284 23.
Лисанти С., Омар В.А., Томашевски Б., Де Принс С., Якобс Г., Коппен Г. и др. Сравнение методов количественной оценки глобального метилирования ДНК в клетках и тканях человека. PLoS One. 2013: 8: e79044. pmid: 24260150 24.
Улаханнан Н., Грилли Дж. М.. Полногеномные анализы, позволяющие идентифицировать и количественно определять модифицированные цитозины в исследованиях болезней человека.Epigen Chrom. 2015; 8: 5. 25.
Gong Z, Zhv JK. Активное деметилирование ДНК путем окисления и репарации. Cell Res. 2011; 21: 1649–1651. pmid: 21862972 26.
Barciszewska A-M, Nowak S, Naskręt-Barciszewska MZ. Степень глобального гипометилирования ДНК в периферической крови коррелирует с таковой в соответствующих опухолевых тканях при некоторых неоплазиях. PLOS One. 2014; 9: e92599. pmid: 24651295 27.
Деавалл Д.Г., Мартин Э.А., Хорнер Дж. М., Робертс Р. Окислительный стресс и токсичность, вызванные лекарствами.J Toxicol. 2012; ID: 645460. 28.
Wu SC, Zhang Y. Активное деметилирование ДНК: многие дороги ведут в Рим. Nat Rev Mol Cell Biol. 2010; 11: 607–620. pmid: 20683471 29.
Barciszewska A-M, Nowak S, Gawronska I, Barciszewska MZ. Диагностика опухолей головного мозга с помощью глобального специфического анализа метилирования ДНК. В «Терапевтические рибонуклеиновые кислоты при опухолях головного мозга», под ред. Springer Verlag Heidelberg. 2009. с.141–156. 30.
Мхайдат Н.М., Чжан XD, Аллен Дж., Эйвери-Кейда К.А., Скотт Р.Дж., Херси П.Темозоломид вызывает старение, но не апоптоз клеток меланомы человека. Br J Рак. 2007; 97: 1225–1233. pmid: 17968428 31.
Шен В., Ху Дж.А., Чжэн Дж.С. Механизм противоопухолевого действия темозоломида на клетки глиомы. J Int Med Res. 2014; 42: 164–172. pmid: 24326954 32.
Чытышлы В., Додурга Ю., Эроглу С., Сечме М., Авджы Б., Чатыроглу-Туфан Н.Л. Темозоломид может вызывать остановку клеточного цикла, взаимодействуя с URG4 / URGCP в клетках нейробластомы SH-SY5Y. 
Для увеличения поверхности охлаждения применяются радиаторы. В нижней части стенки бака имеются пробка для спуска масла, кран (пробка) для взятия пробы, болт заземления.
Азотная подушка обеспечивает защиту масла от окисления и компенсирует температурные колебания объема масла.
В трансформаторе ТМГ-1000 кВА предусмотрена защита масла от окисления при помощи подушки из жидкого азота, а также для компенсации температурных колебаний объёма масла. Силовые трансформаторы ТМЗ-1000 кВА выпускаются с номинальным напряжением ВН до 10кВ и НН 0.4; 0.69кВ. Силовой трансформатор ТМЗ-1000 кВА оснащен высоковольтным переключателем, который позволяет регулировать напряжение ступенями по 2,5% при отключенном трансформаторе ТМЗ-1000 со стороны НН и ВН.
Пары, газы могут разрушить изоляционные материалы. В сейсмически активных районах, в зонах повышенной вибрации установка недопустима.
После окончательной сборки проводятся соответствующие испытания. Оценивается качество и уровень масла в охладительной конструкции, герметичность составных элементов. Методика испытаний регламентируется нормативными актами.
По этому он применяется для питания
потребителей в сетях переменного тока частотой 50 Гц. Благодаря наличию защиты,
его широко применяют в составе комплектных распределительных подстанций, а
также он востребован в некоторых отраслях промышленности и для нужд народного
хозяйства.
4
Мы подберем Вам электрический трансформатор и осуществим его доставку в самые сжатые сроки.
1 в прошлом году.
Известно, что множество клеточных линий GBM содержат клетки, устойчивые к TMZ, и несколько приобретенных линий клеток GBM, устойчивых к TMZ, были разработаны для использования в экспериментах, разработанных для определения механизма устойчивости к TMZ и тестирования потенциальных терапевтических средств.Однако характеристики внутренних и адаптивных резистентных к TMZ клеток GBM систематически не сравнивались. В данной статье рассматриваются характеристики и механизмы устойчивости к TMZ в естественных и адаптированных линиях клеток GBM, устойчивых к TMZ. В нем также обобщены возможные варианты лечения GBM, устойчивых к TMZ.