Тс 80 7 характеристики: Трансформаторы ТС-80 – В помощь радиолюбителю

alexxlab | 30.04.1975 | 0 | Разное

Содержание

Трансформаторы ТС-80 - В помощь радиолюбителю

 

Серия этих трансформаторов разрабатывалась для питания ламповой и транзисторной бытовой радиоаппаратуры.
Сердечники трансформаторов, могут быть как и стержневыми, сечением 22х32, изготовленными из стальной ленты (основная масса трансформаторов), так и броневыми из Ш-образных пластин.
Необходимо иметь в виду, что приведённые здесь моточные данные, могут отличаться на имеющиеся у Вас трансформаторы, в связи с изменениями ТУ, заводов изготовителей, прошествии времени и прочих условий и их следует принимать, только как основу. При  необходимости определить более точно количество витков обмоток имеющегося у Вас трансформатора, намотайте дополнительную обмотку с известным количеством витков, замерьте на ней напряжение и по полученным данным просчитайте ваш трансформатор.

Трансформаторы силовые ТС-80, броневые.

Трансформатор ТС-80.

Начнём, пожалуй с самого первого ТС-80, разработанного для применения в ламповых радиоприёмниках.
Трансформатор разработан для работы в 5-ти - 6-ти ламповых радиоприёмниках, для питания их анодным напряжением 290 - 310 вольт, при суммарном токе до 85 мА. Сердечник трансформатора набран из штампованных Ш-образных пластин, размером Ш32х40. Мощность трансформатора 80 ватт.

Трансформатор рассчитан для работы с кенотроном 5Ц4С, но может быть использован и с другим, ток накала которого не более 3-х ампер, при соответствующей подгонке режима и цоколёвке.
На верхнем экране трансформатора имеются две панели. Одна для колодки переключателя сети, другая для кенотрона.

Рисунок 1. Внешний вид трансформатора ТС-80.

В нижнем экране трансформатора выведено семь проводов.
Два белых провода - сеть.
Два зелёных провода - накал ламп приёмника.
Один чёрный провод - экран.
Один красный провод - плюс выпрямленного анодного напряжения.
Один провод красно-жёлтый - минус анодного (средняя точка анодной обмотки).
Схема трансформатора изображена на рисунке 2, моточные данные приведены в таблице 1.
Схема распайки панели для колодки переключения сети, может отличаться от приведённой.

Рисунок 2. Схема трансформатора ТС-80.

Таблица 1. Моточные данные трансформатора ТС-80.

NN выводов

Число витков

Марка и диаметр провода, мм

Напряжение, ном. В

Ток, ном. А

Ia

II
III
IV

368+57
57+368
950+950
24
19

ПЭВ-1 0,35
ПЭВ-1 0,35
ПЭВ-1 0,18
ПЭВ-1 1,0
ПЭВ-1 1,0

110+17
17+110
275+275
6,5
5,5

0,35
0,35
1,0
1,0
1,0

Трансформаторы силовые ТС-80, стержневые.

Трансформатор ТС-80-1.


Силовой трансформатор ТС-80-1, применялся для питания бытовой радиоаппаратуры, выполненной на полупроводниковых приборах.
Обмотки трансформатора выполнены симметрично на двух катушках.
Подключение сети к первичной обмотке, производится к выводам 1 и 1' (220 вольт), и устанавливается перемычка на выводы 2 и 2', (смотри схему трансформатора на рисунке 3).
Моточные данные трансформатора ТС-80-1, приведены в таблице 2.

Рисунок 3. Схема трансформатора ТС-80-1.

Таблица 2. Моточные данные трансформатора ТС-80-1.

Сердечник

NN выводов

Число витков

Марка и диаметр провода, мм

Напряжение, ном. В

Ток, ном. А

ПЛМ22х32

1-2-3
1'-2'-3'
4-5
4'-5'
6-6'
7-7'
10-10'

475+75
475+75
33
33
46+46
46+46
14,5+14,5

ПЭВ-1 0,49
ПЭВ-1 0,49
ПЭВ-1 0,69
ПЭВ-1 0,69
ПЭВ-1 0,69
ПЭВ-1 0,69
ПЭВ-1 0,44

110+17
110+17
7,5
7,5
19,5
19,5
6,3

0,35
0,35
1,0
1,0
1,0
1,0
0,3

Трансформатор ТС-80-2

Рисунок 4. Внешний вид трансформатора ТС-80-2.

Силовой трансформатор ТС-80-2, применялся для питания бытовой радиоаппаратуры, выполненной на полупроводниковых приборах.
Обмотки трансформатора выполнены симметрично на двух катушках.
Подключение сети к первичной обмотке, производится к выводам 1 и 2', при этои необходимо установить перемычку между выводов 1'-2.

Схема силового трансформатора ТС-80-2, изображена на рисунке 5, а в таблице 3, приведены его характеристики и моточные данные.

Рисунок 5. Схема трансформатора ТС-80-2.

Таблица 3. Моточные данные и электрические параметры трансформатора ТС-80-2.

Сердечник

NN выводов

Число витков

Марка и диаметр провода, мм

Напряжение, ном. В

Ток, ном. А

ПЛМ22х32

1-9+9'-1'
2-10+10'-2'
3-13+13'-3'
4-6-7-8
4'-6'-7'-8'
5-11+11'-5'

271+271
201+201
82+82
82+82+82
82+82+82
44,5+44,5

ПЭВ-1 0,51
ПЭВ-1 0,33
ПЭВ-1 0,55
ПЭВ-1 0,55
ПЭВ-1 0,55
ПЭВ-1 0,51

127
93
36
18+18+18
18+18+18
19

0,35
0,35
0,5
0,5
0,5
0,35

 

Трансформатор ТС-80-4


Силовой трансформатор ТС-80-4, применялся для питания бытовой радиоаппаратуры, выполненной на полупроводниковых приборах и устанавливался, например в цветные телевизионные приёмники.
Обмотки трансформатора выполнены симметрично на двух катушках.
Подключение сети к первичной обмотке, производится к выводам 1 и 1', при этом необходимо установить перемычку на выводы 2 и 2'. Электрическая схема трансформатора ТС-80-4, изображена на рисунке 6. Его характеристики и моточные данные приведены в таблице 4.

Рисунок 6. Схема трансформатора ТС-80-4.

Таблица 4. Моточные данные трансформатора ТС-80-4.

Сердечник

NN выводов

Число витков

Марка и диаметр провода, мм

Напряжение, ном. В

Ток, ном. А

ПЛ22х32

1-2-3
1'-2'-3'
4-5
4'-5'
6-6'
8-8'
10-10'

475+75
475+75
55
55
125,5+125,5
35,5+35,5
14,5+14,5

ПЭВ-1 0,49
ПЭВ-1 0,49
ПЭВ-1 0,69
ПЭВ-1 0,69
ПЭВ-1 0,69
ПЭВ-1 0,49
ПЭВ-1 0,35

110+17
110+17
12,5
12,5
58,5
16
6,3

0,4
0,4
1,2
1,2
1,0
0,4
0,3

Трансформатор ТС-80-6

Рисунок 7. Внешний вид трансформатора ТС-80-6.


Силовой трансформатор ТС-80-6, применялся для питания бытовой радиоаппаратуры, выполненной на полупроводниковых приборах.
Обмотки трансформатора выполнены симметрично на двух катушках.
Подключение сети к первичной обмотке, производится к выводам 1 и 1'. Дополнительная обмотка 3-3' могла соединяется с первичной обмоткой(1-1') и использовалась для питания электродвигателя. В обычном включении трансформатора, её можно не использовать.
У трансформаторов ранних выпусков, первичная обмотка рассчитывалась для подключения к сети 127/220 вольт, и состояла из двух частей. Первая часть, это обмотка 1-9, перемычка, и обмотка 9'-1'. Вторая часть, это обмотка 2-10, перемычка, и обмотка 10'-2' (смотри трансформатор ТС-80-2).
В этом случае сеть 220 вольт подавалась на выводы 1 - 2' и замыкались выводы 1'-2.
Схема трансформатора ТС-80-6 (на 220 вольт) изображена на рисунке 8, моточные данные и характеристики, приведены в таблице 5.

Рисунок 8.

Схема трансформатора ТС-80-6.

Таблица 5. Моточные данные и электрические параметры трансформатора ТС-80-6.

Сердечник

NN выводов

Число витков

Марка и диаметр провода, мм

Напряжение, ном. В

Ток, ном. А

ПЛМ22х32

1-9+9'-1'
3-11+11'-3'
4-5
4'-5'
6-12+12'-6'
7-8
7'-8'

475+475
55,5+55,5
46
46
51,5+51,5
23
23

ПЭВ-1 0,5
ПЭВ-1 0,31
ПЭВ-1 0,8
ПЭВ-1 0,8
ПЭВ-1 0,4
ПЭВ-1 0,4
ПЭВ-1 0,4

220
26
10
10
24

5,0
5,0

0,35
0,15
2,0
2,0
0,3
0,3
0,3

Трансформатор ТС-80-7

Силовой трансформатор ТС-80-7, применялся для питания бытовой радиоаппаратуры, выполненной на полупроводниковых приборах. Использовался в основном в звукоусилительной аппаратуре.
Обмотки трансформатора выполнены симметрично на двух катушках.
Подключение сети к первичной обмотке, производится к выводам 1 и 1', при этом перемыкаются выводы 2 и 2'. Электрическая схема трансформатора ТС-80-7, изображена на рисунке 9, а его данные приведены в таблице 6.

Рисунок 9. Схема трансформатора ТС-80-7.

Таблица 6. Моточные данные трансформатора ТС-80-7.

Сердечник

NN выводов

Число витков

Марка и диаметр провода, мм

Напряжение, ном. В

Ток, ном. А

ПЛМ22х32

1-2
1'-2'
5-3-6
5'-3'-6'
7-8
7'-8'
9-10
9'-10'

475
475
118+22
118+22
54
54
28
28

ПЭВ-1 0,49
ПЭВ-1 0,49
ПЭВ-1 0,69
ПЭВ-1 0,69
ПЭВ-1 0,39
ПЭВ-1 0,39
ПЭВ-1 0,44
ПЭВ-1 0,44

110
110
25+5,5
25+5,5
11,2
11,2
6,0
6,0

0,35
0,35
1,0
1,0
0.21
0,21
0,3
0,3

  *- Выпускались трансформаторы ТС-80-7 с первичной обмоткой, аналогичной трансформатору ТС-40-1. Включение в сеть и нумерация выводов первички совпадает. При этом у вторичных обмоток II и II' отсутствуют выводы 3 и 3' (они уже входят в состав первичной обмотки) и имеются только 5-6 и 5'-6', остальные вторичные обмотки без изменений.

Трансформатор ТС-80-8

Силовой трансформатор ТС-80-8, применялся для питания бытовой радиоаппаратуры, выполненной на полупроводниковых приборах.
Обмотки трансформатора выполнены симметрично на двух катушках.
Подключение сети к его первичной обмотке, отличается от других трансформаторов ТС-80.
Сеть 220 вольт подаётся на выводы 2 и 3 - на одной катушке, на другой катушке соответствующие выводы 2' и 3' необходимо замкнуть между собой.
Электрическая схема трансформатора ТС-80-7, изображена на рисунке 10, характеристики его приведены в таблице 7.

Рисунок 10. Схема трансформатора ТС-80-8.

Таблица 7. Моточные данные и характеристики трансформатора ТС-80-8.

Сердечник

NN выводов

Число витков

Марка и диаметр провода, мм

Напряжение, ном. В

Ток, ном. А

ПЛМ22х32

1-2+2'-1'
3-5-8+8'-5'-3'
6-12+13'-11
11-13+12'-6'
7-9+9'-7

198,5+198,5
120-150,5+150,5-120
64,5+64,5
64,5+64,5
11,5+11,5

ПЭВ-1 0,49
ПЭВ-1 0,49
ПЭВ-1 0,69
ПЭВ-1 0,69
ПЭВ-1 0,49

93
127*
28
28
5,0

0,35
0,35
1,3
1,3
0.5

* - Напряжение указано для выводов 3-3'. Напряжение на выводах 3-5 = 28в, на выводах 5-5'= 70в.

 

 

характеристики, схемы подключения и намотки

Автор otransformatore На чтение 6 мин Опубликовано

Рассмотрим полную характеристику блоков питания на трансформаторе тс 80 6, тс 80 1, тс 80 2 и т д, образцы схем блоков питания. Правильно составленная схема – залог создания высококачественного радиоприемника, телевизора и другой электротехники.

Отличительные особенности силовых трансформаторов серии тс-80

Трансформаторы серии ТС в отличии от масляных обладают высокой пожароустойчивостью, пылеустойчивостью, не загрязняют окружающую среду, требуют малых затрат на обслуживание. Трансформаторы ТС классифицируют на два вида:

  1. ТСЗ с изоляцией или Nomex: имеет компактный, небольшой размер, водоустойчив, безопасен. Часто такую аппаратуру применяют на огромных предприятиях, в промышленности и  жилых домах.
  2. ТСЗГЛФ, ТСГЛ, ТСЗГЛ – они имеют литую изоляцию, содержащую в своем химическом составе геафолий.  Аппаратура, сделанная по такому принципу в процессе работы, издает меньше шума, чем аппаратура, построенная на масляных батареях. Данные модели  можно устанавливать в местах, где запрещены масляные трансформаторы. Например: в нефтеперерабатывающем цеху, пропаном заводе, фабрике по производству огнеопасных химикатов. ТСЗГЛФ, ТСГЛ, ТСЗГЛ не боится повышенной влажности и огнеопасных предприятий. Но все же перед сборкой и разборкой трансформаторов во избежание несчастных случаев, следует контролировать влажность воздуха и поддерживать его примерно до 90% к отношению окружающей среды.

Обмотки ТСЗГЛФ, ТСГЛ, ТСЗГЛ,  ТСЗ состоят из провода алюминия фирмы АППТСД, здесь присутствует комбинация полиамидно-стекловолокнистой изоляции.

Процесс работы заключается в явлении магнитной индукции. Переменный ток подается на первичную обмотку, в результате магнитопровод образует магнитный ток. Это происходит за счет замыкания, сцепления между обмотками индуцирования эдс. Сухие трансформаторы имеют воздушное охлаждение, легкодоступны на рынке и просты в использовании, в отличие от масляных они имеют выходное напряжение.

По силе мощности трансформаторы бывают: от 100 ватт до 200 000 кВА более 330 кв.

Броневые

Броневой трансформатор представляет собой стержень с обмоткой вокруг, которого располагается ярмо. Оно защищает стержень от повреждений окружающей среды. В большинстве случаев  в процессе создания трансформатора медная проволока, изолируется от стержня хлопчатобумажной тканью. ТС имеет одну катушку с обмоткой, служит для конструкций аппаратуры  малой и средней мощности. Недостатки: тяжело отремонтировать, дороговизна, трудность осмотра повреждений, долгая диагностика. Преимущество: имеет относительный меньший ток, толстого входа.

Стержневые

Такие трансформаторы малочувствительны к наводкам, так как между двумя катушками существует компенсация, в результате которой одна катушка передает эдс другой. Преимущества: легкое конструирование, простота изолирования и сборки обмотки, меньший риск появления коротких замыканий.

Технические характеристики и намоточные данные

ТС 80

ТС 80 широко применяются в ремонте, в процессе конструирования ламповых радиоприёмников и телевизоров. Может функционировать в  пяти и шестиламповых радиоприемниках, при этом должно соблюдаться следующее равновесие: суммарный ток- 80в, анодное напряжение 290-310в.

Намоточные данные

Номер выводовЧисло витковМарка и диаметр проволокиНапряжениеТок
368+57ПЭВ-1 0.35110+170.35
57+368ПЭВ-1 0.3517+1100.35
2950+950ПЭВ-1 0.18275+2751.0
324ПЭВ-1 1.06.51.0
419ПЭВ-1 1.06.51.0

ТС 80 1

Стержневой ТС 80-1 используется для энергоподачи (зарядки) бытовой радиотехники. Обмотки имеются на двух катушках, выполнены симметрично.

Намоточные данные

СердечникНумерация выводовЧисло витковДиаметр и марка провода НапряжениеТок
 

 

ПЛМ22 *32

1-2-3475+75ПЭВ-1 0.49110+170.35
1 _2_3475+75ПЭВ-1 0.49110+170.35
4-533ПЭВ-1 0.697.51.0
4_533ПЭВ-1 0.697.51.0
6-6_46+46ПЭВ-1 0.6919.51.0

ТС 80 2

Применяется для подзарядки электрорадиоаппаратуры, которая работает на основе полупроводниковых приборов. Обмотки симметричны, расположены на двух катушках. Отключается посредством выводов 1 и 2. Для данного действия необходимо поставить перемычку между выводами 1-2.

Намоточные данные

СердечникНумерация выводовЧисло витковМарка и диаметр проводаНапряжениеТок
 

ПЛМ 22*32

1-9+9_-1-2
10+10-2-3-271+271ПЭВ-1 0.511270.35
13+13-3201+201ПЭВ-1 0.33930.35
4-6-7-882+82+82ПЭВ-1 0.55360.5
4-6-7-882+82+82ПЭВ-1 0.5518+18+180.5

ТС 80 4

Как и остальные ТС 80 4 является силовым трансформатором, применяется для подзарядки радиоаппаратов и цветовых приемников. Медная проволока обмотана на двух катушках, симметрично. Вывод – 1, первичная обмотка используется для подключения  к сети. Для подключения к сети перемычку отодвигают к 2-2.

Следует добавить, что иногда следует проводить проверку силовых трансформаторов в целях безопасности.

Намоточные данные

СердечникНумерация выводовЧисло витковМарка и диаметр проводаНапряжениеТок
 

 

ПЛП22*32

1-2-3475+75ПЭВ-1 0.49110+170.4
1-2-3475+75ПЭВ-1 0.49110+170.4
4-555ПЭВ-1 0.6912.51.2
6-655ПЭВ-1 0.6912.51.2
8-8125.5+125.5ПЭВ-1 0.4958.51.0

ТС 80 5

Данной документации на трансформатор нигде не обнаруживается, так как его производство было сильно ограничено.

ТС 80 6

Техническая характеристика трансформатора ТС 80 6 немного сложней вышеперечисленных устройств. ТС 80 6 используется для подзарядки радиоаппаратуры. Подключается к сети посредством переключения к выводу1-1, также эту комбинацию можно использовать для зарядки электродвигателя. Для прибавления мощности, можно третью катушку присоединить к первой.

Данные намотки

СердечникНумерация выводовЧисло витковМарка и диаметр проводаНапряжениеТок
 

 

ПЛМ 22*32

1-9+9-1-3475+475ПЭВ-1 0.52200.35
11+11-355.5+55.5ПЭВ-1 0.31260.15
4-546ПЭВ-1 0.8102.0
4-546ПЭВ-1 0.8102.0
6-51.5+51.5ПЭВ-1 0.4240.3

ТС 80 7

ТС 80 7 применяется для электропитания радиоаппаратуры. Играет роль звукоусилителя, широко применяется в акустической сфере: создании микрофонов, транзисторов, музыкальных колонок и т д. К сети подключается посредством примыкания выводов: 2-2 и 1-1.

Намоточные данные

СердечникНумерация выводовЧисло витковМарка и диаметр проводаНапряжениеТок
 

 

ПЛМ 22*32

1-2475ПЭВ-1 0.491100.35
5-3-6118+22ПЭВ-1- 0.6925+5.51.0
7-854ПЭВ-1 0.3911.20.21
7-854ПЭВ-1 0.3911.20.21
9-1028ПЭВ-1 0.446.00.3

ТС 80 7м

Мощность полная равна 80 ватт. Применяется в звукоосилительной аппаратуре. Подключение к сети такое же, что у ТС 80 7. Технически характеристике те же.

ТС 80 8

В структуре есть отличие в подключении первичной обмотке. 220вольт поочередно на первой катушке сигнал подается ко второму и третьему выводу; на второй катушке действуют выводы 2-3, с последующим закрытием цепи.

Намоточные данные

СердечникНумерация выводовЧисло витковМарка и диаметр проводаНапряжениеТок
 

 

ПЛМ22*32

1-2+2-1198.5+198.5
3-5-120-ПЭВ-1 0.49930.35
8+8-5-3150.5+150.5ПЭВ-1 0.491270.35
6-120ПЭВ-1 0.69281.3
12+13-11-64.5+64.5ПЭВ-1 0.69281.3
11-64.5+64.5ПЭВ-1 0.495.00.5

Схемы подключения

Схема подключения ТС 80 1, описание смотреть выше

Схема ТС 80 6, описание приведено выше

Примеры схем блоков питания

Ламповый мини трансивер

Источник питания большой мощности

Чтобы трансформатор послужил долгие годы, нужно избегать вибраций, тряски. Хранить в сухом теплом помещении. Проводить демонтаж во взрывоопасных местах, при температуре более25 градусов нельзя, в противном случае трансформатор может взорваться.

Также длительный приток холодного воздуха не должен идти непосредственно на сам трансформатор.

В процессе хранения нужно исключить близкое расположение  электронной техники, батарей, кондиционеров. Правильная эксплуатация послужит долгой работоспособности аппаратуры. По схемам решить задачу по конструированию трансформатора с заданными функциями довольно просто.

РАДИО - РадиоЛюбителям - Трансформаторы ТС

Справочник по трансформаторам и дросселям.

Основные термины и определения

Трансформатор - статическое электромагнитное устройство, имеющее не менее двух индуктивно связанных обмоток и предназначенное для преобразования посредством электромагнитной индукции одной или нескольких систем переменного тока в одну или несколько других систем переменного тока.
Трансформатор малой мощности - трансформатор с выходной мощностью 4 кВА и ниже для однофазных, 5 кВА и ниже для трехфазных сетей.
Трансформатор питания электронной аппаратуры - трансформатор малой мощности, предназначенный для преобразования напряжения электрических сетей в напряжения, необходимые для питания электронной аппаратуры.
Сигнальный трансформатор - трансформатор малой мощности, предназначенный для передачи, преобразования и запоминания электрических сигналов.
Импульсный трансформатор - сигнальный трансформатор, предназначенный для передачи, формирования, преобразования и запоминания импульсных сигналов.
Входной трансформатор - сигнальный трансформатор для согласования внутреннего полного электрического сопротивления источника сигнала с полным входным сопротивлением функционального узла электронной аппаратуры. Выходной трансформатор - сигнальный трансформатор для согласования выходного полного электрического сопротивления каскада, электронной аппаратуры с полным сопротивлением нагрузки.
Номинальный режим работы трансформатора (дросселя) - режим, при котором значения каждого параметра равны номинальным.
Номинальное вторичное напряжение - напряжение на зажимах вторичной обмотки при нагрузке обмотки номинальным током с коэффициентом мощности, равным 1, при приложении к первичной обмотке номинального напряжения с номинальной частотой.
Номинальное сопротивление нагрузки - сопротивление, на которое рассчитан трансформатор.
Напряжение холостого хода трансформатора питания - напряжение на любой разомкнутой вторичной обмотке при номинальных частоте и напряжении на первичной обмотке.
Номинальная мощность трансформатора - сумма мощностей вторичных обмоток трансформатора малой мощности, в котором мощность каждой обмотки определяется произведением номинального тока на номинальное напряжение.
Габаритная или типовая мощность трансформатора - полусумма мощностей всех частей обмоток трансформатора.
Примечание. Мощностью части обмотки является произведение наибольшего длительно допустимого в этой части тока на наибольшее длительно допустимое напряжение этой части.
Коэффициент трансформации - отношение числа витков вторичной обмотки к числу витков первичной или отношение напряжения на вторичной обмотке к напряжению на первичной обмотке в режиме холостого хода без учета падения напряжения на трансформаторе.
Потери трансформатора - активная мощность, расходуемая в магнитной системе, обмотках и других частях трансформатора при различных режимах работы.

Классификация трансформаторов и дросселей

Малогабаритные трансформаторы и дроссели могут классифицироваться по различным признакам: функциональному назначению, рабочей частоте, электрическому напряжению, электрической схеме, а также конструктивным признакам.
Функциональное назначение. Этот классификационный признак характеризует основные функции, выполняемые трансформатором в электрической схеме. Согласно данному признаку малогабаритные трансформаторы подразделяются на трансформаторы питания, согласующие и импульсные.
Рабочая частота трансформатора - одни из наиболее важных параметров, который определяет ряд характеристик изделия, назначение и область возможного применения. По этому признаку трансформаторы могут быть классифицированы на: трансформаторы пониженной частоты (ниже 50 Гц), промышленной частоты (50 Гц), повышенной промышленной частоты (400, 1000 Гц), овышенной частоты (до 10 000 Гц), высокой частоты (свыше 10 000 Гц).
Электрическое напряжение. По данному признаку трансформаторы можно разделить на изковольтные, у которых напряжение любой обмотки не превышает. 1000 и высоковольтные, у которых напряжение любой обмотки может превышать 1000 В.
Электрическая схема. По данному признаку трансформаторы подразделяются на однообмоточные, двухобмоточные и многообмоточные.
Однообмоточный трансформатор - автотрансформатор, в котором между первичной (входной) и вторичной (выходной) обмотками кроме электромагнитной связи существует еще и непосредственная электрическая. Такой трансформатор не имеет гальванической развязки.
Многообмоточный трансформатор имеет одну первичную и одну или более вторичных обмоток. Все обмотки многообмоточных трансформаторов электрически не связаны друг с другом.
Конструктивные признаки. Это основные классификационные признаки трансформаторов, в основе которых лежат конструкция магнитопровода, его конфигурация и технология изготовления. По конструкции магнитопровода определяется конструкция трансформатора, т. е. название магнитопровода определяет конструктивный признак трансформатора.
Конструктивно магнитопроводы трансформаторов и дросселей подразделяются на броневые, стержневые и тороидальные (кольцевые). Соответственно трансформаторы и дроссели в зависимости от конструкции применяемого магнитопровода подразделяются на броневые, стержневые и тороидальные.
Магннтопророды дросселей сглаживающих фильтров отличаются от магнитопроводов трансформаторов наличием немагнитного (воздушного) зазора, что позволяет достичь при одинаковом токе подмагничивания значительно большей индуктивности, а - также значительно уменьшить степень изменения индуктивности дросселя при изменении тока в обмотке. Практически зазор между половинами магнитопровода заполняется изоляционной (диэлектрической) прокладкой; при этом фиксируется его размер.
Магнитопровод броневого трансформатора выполняется Ш-образной формы; все обмотки располагаются на среднем стержне, т. е. обмотки частично охватываются (бронируются) магнитопроводом (рис. 1, а). В. условное обозначение такого трансформатора входит буква «Ш». Броневые трансформаторы характеризуются следующими достоинствами: наличием только одной катушки с обмотками по сравнению со стержневыми трансформаторами, более высоким заполнением окна магнитопровода обмоточным проводом (медью), частичной защитой от механических повреждений катушки с обмотками ярмом магнитопровода.
Магнитопровод стержневого трансформатора выполняется П-образной формы и имеет два стержня с обмотками (рис. 1, б). На каждом стержне помещается половина витков первичной и половина витков вторичной обмоток. Они соединяются между собой последователно так, чтобы намагничивающие силы этих полуобмоток совпадали по направлению.
Стержневые трансформаторы обладают меньшей чувствительностью к внешним магнитным полям, так как знаки ЭДС помех, наводимых в двух катушках трансформатора, равны по величине, но противоположны по знаку, поэтому взаимно уничтожаются. В условное обозначение такого трансформатора входит буква «П».
Магнитопровод тороидального трансформатора выполняется круглой формы, как правило, навивкой ленты или из прессованного материала. В условное обозначение такого трансформатора входит буква «О».
Тороидальные трансформаторы характеризуются следующими достоинствами: меньшим магнитным сопротивлением, минимальным внешним потоком рассеяния, нечувствительностью к внешним магнитным полям независимо от их направления. Однако технология изготовления обмоток при полностью замкнутом магнитопроводе весьма сложна, условия охлаждения обмоток наиболее неблагоприятны по сравнению с другими трансформаторами. Тороидальные трансформаторы используются, как правило, на повышенных частотах.


Рисунок 1. Геометрические размеры магиятопроводов броневой (а) и стержневой (б) конструкций.

В зависимости от вида магнитного материала (листовой или ленточный) и технологии изготовления магнитопровода трансформаторы и дроссели делятся на пластинчатые (шихтованные) и ленточные (витые). Пластинчатые магнитопроводы собираются из отдельных пластин встык или внахлест. При сборке встык все пластины составляются вместе и располагаются одинаково; магнитопровод состоит из двух частей, которые соединяют вместе. При сборке встык облегчаются сборка и разборка трансформатора. При сборке внахлест пластины чередуются так, чтобы у соседних пластин разрезы были с разных сторон сердечника. Сборка внахлест уменьшает магнитное сопротивление магнитопровода, но усложняет сборку и разборку трансформатора.
Броневые и стержневые ленточные магнитопроводы изготовляются, как правило, из холоднокатаной стали и собираются встык из двух отдельных половин подковообразной формы.
Ленточные магнитопроводы по сравнению с пластинчатыми допускают магнитную индукцию на 20-30% выше, потерь в них меньше, заполнение объема магнитопровода обмотками выше, КПД трансформатора выше.

Магнитопроводы для трансформаторов и дросселей изготовляются нескольких типов, основными из которых являются следующие:
ШЛ - броневой ленточный, с наименьшей массой;
ШЛМ - броневой ленточный, с уменьшенным расходом меди;
ШЛО - броневой ленточный, с увеличенной шириной окна;
ШЛИ - броневой ленточный, с наименьшим объемом;
ШЛР - броневой ленточный, наименьшей стоимости;
ПЛ - стержневой ленточный;
ПЛВ - стержневой ленточный, с наименьшей массой;
ПЛМ - стержневой ленточный, с уменьшенным расходом меди;
ПЛР - стержневой ленточный, наименьшей стоимости;
ОЛ - тороидальный ленточный, с наименьшей массой.

Условные обозначения трансформаторов и дросселей

Полное условное обозначение изделия состоит из букв русского алфавита, указывающих на его тип, и последующих - цифр или отдельных групп цифр, характеризующих его основные параметры. Условное обозначение некоторых категорий изделий может заканчиваться буквами русского алфавита, указывающими на вид их исполнения в зависимости от климатической зоны при эксплуатации.
Ниже перечислены типы изделий.
Т - трансформатор питания;
ТА - трансформатор питания анодных цепей;
ТН - трансформатор питания накальных цепей;
ТАН - трансформатор питания анодно-накальных цепей;
ТПП - трансформатор питания устройств на полупроводниковых приборах;
TP - трансформатор питания с оребрением для охлаждения;
ТС - трансформатор питания бытовой радиоаппаратуры;
ТТ - трансформатор питания тороидальный;
ТВТ - трансформатор входной для транзисторных устройств;
ТОТ - трансформатор выходной (оконечный) для транзисторных устройств;
Т - трансформатор согласующий;
ТМ - трансформатор согласующий, маломощный;
ТИ - трансформатор импульсный, миниатюрный;
ТИМ - трансформатор импульсный, миниатюрный, маломощный;
Д1-Д274 - Дроссели унифицированные, низкочастотные;
Д, Др - дроссели фильтров для бытовой радиоаппаратуры.

Справочные данные на трансформаторы ТС:

  • ТС-3-1, ТС-4-1, ТС-5-4М, ТС-6-1, ТС-6-2, ТС-10-1, ТС-10-3, ТС-10-4

  • ТС-12-1, ТС-14-2, ТС-15-4, ТС-18-1

  • ТС-20-2, ТС20-4, ТС-20-6, ТС-20-7, ТС-20-8, ТС-20-9, ТС-20-26Л

  • ТС-25, ТС-25-1, ТС-26, ТС-26-1, ТС-26-2, ТС-27

  • ТСА-30-1, ТС-31-1

  • ТС-40, ТС-40-1, ТС-40-2, ТС-40-3, ТС-40-4, ТС-40-5, ТС-40-6

  • ТСА-50-1

  • ТС-60, ТС-60-1, ТС-60-2, ТС-60-3

  • ТСА-70-1, ТСА-70-6

  • ТС-80-1, ТС-80-2, ТС-80-4, ТС-80-6, ТС-80-7, ТС-80-8

  • ТС-90, ТС-90-1, ТС-90-2, ТС-90-3, ТС-90-4

  • ТС-100, ТС-100В, ТС-100-2, ТС-100-4

  • ТС-130, ТС-130-1, ТС-130-2, ТС-130-3, ТС-130-К, ТСВ-130, ТСШ-130

  • ТС-150-1, ТС-150-2,  ТС-150-3

  • ТС-160, ТС-160-1, ТС-160-2, ТС-160-3, ТС-160-4, ТСШ-160

  • ТСШ-170, ТСШ-170-3

  • ТС-180, ТС-180-2, ТС-180-2В, ТС-180-3, ТС-180-4, ТСА-180

  • ТС-200, ТС-200-К, ТС-200-1, ТС-200-1М, ТС-200-2, ТС-200-2К

  • ТС-210-1

  • ТС-250, ТС-250-1, ТС-250-2, ТС-250-2М, ТС-250-2МР, ТС-250-2П

  • ТС-270-1, ТС-270-2, ТСА-270-1, ТСА-270-2, СТ-270-1

  • ТС-280Р, СТ-280Р

  • ТС-300-2, ТС-300-3

  • ТСА-310-1, ТСА-310-2, СТ-310

  • СТ-320

  • ТС-330К-1

  • ТС-360М


Термостат ТС-80 суховоздушный

Главная / Лабораторное оборудование общего назначения / Термостаты лабораторные / Термостат ТС-80 суховоздушный

Термостат ТС-80 суховоздушный предназначен для получения и поддержания внутри рабочей камеры стабильной температуры, необходимой для проведения бактериологических и серологических исследований в клинико-диагностических и санитарно-бактериологических службах институтов, больниц, поликлиник и других учреждениях здравоохранения. Термостат ТС-80 обеспечивает непрерывное измерение температуры в рабочей камере и её визуальную индикацию.

Преимущества: 

  • Цифровая индикация температуры в контрольной точке с разрешением 0,1°С
  • Высокая точность поддержания температуры в контрольной точке: при температуре 37° и 60°С она достигает ± 0,2°С
  • Высокостабильный датчик температуры класса точности 0,2%
  • Хорошие показатели термостатирования при температуре, близкой к температуре окружающей среды, за счет снижения полной мощности нагревателя до 70 ВА
  • Контроль за состоянием датчика температуры
  • Блокировка процесса при обрыве или замыкании датчика, при превышении температуры в рабочей точке на ± 1,0°С
  • Термостат ТС-80 имеет удобное расположение панели управления – на дверке на уровне глаз оператора
  • Высокая помехозащищенность позволяет работать в условиях индустриальных помех.

Технические характеристики:
 Габаритные размеры рабочей камеры 400 х 400 х 500 мм
 Объем рабочей камеры 80 л
 Максимальный температурный диапазон термостатирования от Т окр.среды +5…. до 60 °С
 Предельное отклонение температуры стабилизации, °С
  от 25 до 45
  от 45 до 60
 
от –1 до +1
от –1,5 до +2,6
 Время выхода на установившийся режим при максимальной температуре в рабочей камере, мин., не более 120
 Время непрерывной работы 500 часов
 Электропитание 220В / 50Гц
 мощность потребляемая термостатом, ВА, не более 250
 Масса термостата не более 60
 Габаритные размеры 615 х 650 х 1250 мм

ТС-80-30-2: цена, характеристики, гост

Общая информация

Труба ТС-80-30-2 имеет широкий спектр применения. Элементы подобного типа устанавливаются при создании подземных водосточных, канализационных систем. Предназначены для транспортировки бытовых и производственных стоков, дождевой воды. Проход жидкости происходит самотёком, без воздействия давления.

Труба этого типа представляет собой цилиндрическое железобетонное изделие, с одной стороны имеющее ступенчатую поверхность. При соединении одного элемента с другим для герметизации служат уплотняющие резиновые кольца. Эксплуатация труб ТС-80-30-2 возможна в местности, в которой температура не опускается ниже -40 градусов. Данные изделия не применяются в районах с сейсмической активностью выше 8 баллов.

Маркировка

Нанесение маркировочных надписей на безнапорные трубы ТС-80-30-2 регламентировано ГОСТом 23009-2016. Надпись наносится буквами русского алфавита и арабскими цифрами. Первую позицию занимает обозначение категории изделия. ТС - труба безнапорная раструбная. Цифрами обозначают значимые характеристики строительного элемента. Для данного типа безнапорных труб это диаметр (в см.), длина (в дм.), несущая способность. Условные обозначения наносят влагоустойчивой краской на наружную поверхность.

Материалы изготовления

 Производство ТС-80-30-2 регламентировано Межгосударственным ГОСТом 6482-2011. Он пришёл на смену ГОСТу 6482-88. Актуальность ГОСТа можно проверить на официальном сайте Росстандарта. Основным материалом изготовления служит тяжёлый бетон классом не ниже В30. Водоупорность устанавливается проектом и рассчитывается для каждого сооружения. Она не может быть ниже W4. Морозостойкость также определяется в зависимости от условий будущей эксплуатации. Отпускная прочность бетона в тёплое время года - 70%, в холодное - 90%.

Армирование производится спиральными сварными каркасами из ненапряжённой арматуры. Для изготовления основы применяются стальные стержни А240 и А400, а также проволока В-I Вр-I. А500, В500 используется для спирали. Все трубы обязательно проходят контроль качества. Толщина трещин не должна быть больше 0,1 мм. Не допускаются дефекты поверхности, размер которых превышает указанный в ГОСТ 6482-2011. Труба проходит гидростатические тесты.

Транспортировка и хранение

Перевозка и складирование производятся в рабочем положении. При обеспечении устойчивости трубы можно устанавливать в вертикальное положение. При хранении и транспортировке используются специальные подкладки. Изделия укладываются в ровные массивы.

Размеры и характеристики ТС-80-30-2

Размеры и характеристики ТС-80-30-2 представлены в таблице ниже. По ГОСТ допускается отклонение размеров на более 4-6 мм.

  • Длина: 3 160 мм.
  • Ширина: 960 мм.
  • Высота: 960 мм.
  • Вес: 1,85 т.
  • Объем: 0.740 м³
  • ГОСТ: 6482-2011
ТС-80-30-2 цена в Москве

ТС-80-30-2 цена за штуку и зависит от их размера, толщины, наличия/отсутствия укрепляющих добавок, армирования. Чтобы не переплачивать за товар, целесообразно заказать напрямую от производителя на заводе ПСК Перспектива. Так вы получите сертифицированные железобетонные изделия с лабораторным заключением и по оптимальной стоимости.

Наша компания может предложить вам оптимальный баланс между качеством и стоимостью.

Наш прайс можно запросить оформить заказ в интересующем Вас разделе сайта.

Зайдите ознакомиться с ценами и убедитесь, что сотрудничество с нами будет выгодным для вас. 

Наш завод ООО ПСК Перспектива осуществляет свою деятельность с октября 2003 года.

Купить ТС-80-30-2 на заводе ЖБИ

Выгодно купить ТС-80-30-2 в Москве без посредников на заводе ЖБИ Перспектива. Новые ТС-80-30-2 всегда есть в наличии на наших складах. Сейчас мы наращиваем производственную мощность и ищем новых надежных партнеров. 

Если Вы всерьез настроены на сотрудничество – свяжитесь с нами по телефонам, указанным во вкладке «Контакты».

Завод ООО ПСК Перспектива – профессионал в области производства железобетонной продукции!

Доставка ТС-80-30-2

Доставка ТС-80-30-2 осуществляется собственным транспортом в г. Москва, области и другим областям России! Расчет доставки можно заказать в разделе Доставка.

При доставке ТС-80-30-2 необходимо соблюдать меры предосторожности. Транспортировать тяжеловесный груз согласно ГОСТ 6482-2011 разрешено только в горизонтальном положении в спецтранспорте. При погрузке/разгрузке запрещено перемещать по нескольку штук, только по одной плите. Исключение: такелажные работы специальными устройствами.

Термостат ТС-80М Термостат электрический суховоздушный TC-80M

 

Разное

Термостат электрический суховоздушный ТС-80М

Паспорт тМ2.998.003 ПС

Министерство медицинской промышленности. ВПО «СОЮЗМЕДПРИБОР»

Одесское ПО лабораторной медицинской техники «МЕДЛАБОРТЕХНИКА»

1983

ВНИМАНИЕ! Прежде чем приступить к работе с термостатом, необходимо ознакомиться с настоящим паспортом.

При подключении термостата к питающей сети необходимо контакт вилки с маркировкой «0» подключать только к нулевому проводу питающей сети.

В связи с постоянной работой по совершенствованию изделия, повышающей его надежность и улучшающей условия эксплуатации, в конструкцию могут быть внесены незначительные изменения, не отраженные в настоящем издании.

1. Назначение

Термостат электрический суховоздушный ТС-80М предназначен для получения и поддержания внутри рабочей камеры стабильной температуры, необходимой для проведения бактериологических и серологических исследований в клинико-диагностических и санитарно-бактериологических лабораториях клиник и больниц, научно-исследовательских институтах и других учреждениях здравоохранения.

Термостат предназначен для эксплуатации в интервале температур окружающего воздуха от +10 до +35 °C, относительной влажности до 80% при +25°С и при более низких температурах без конденсации влаги. Воздух помещения не должен содержать примесей, вызывающих коррозию.

Основные технические данные и характеристики
Основные параметры и размеры

Потребляемая мощность -- не более 180 Вт.

Термостат предназначен для работы от сети переменного тока частотой 50 Гц напряжением 220 ±22 В.

Масса термостата -- не более 65 кг.

Габариты термостата: длина 560мм, ширина 550, высота 1390мм.

Внутренние размеры рабочей камеры, в пределах: длина 395±3мм, глубина 400±3мм, высота 500±3мм.

2. Основные технические данные и характеристики

Термостат соответствует 3 классу точности по ОСТ 64-1-60-72 для группы воздушных термостатов и группе 1, классу В по ГОСТ 20790-75.

Диапазон рабочих температур термостата в установившемся режиме и при превышении заданной температуры над температурой окружающего воздуха не менее чем на 5 °С -- в пределах от +28 до +55 °С.

Погрешность стабилизации температуры в. опорной точке рабочей камеры, в установившемся режиме -- в пределах ±0,25°С.

Разность отклонений температур, измеренных в контрольных точках рабочей камеры термостата, относительно опорной точки при превышении температуры в контрольных точках над температурой в опорной точке не более чем на 1,4°С -- не более 2,9 °C.

Время достижения установившегося режима при максимальной рабочей температуре после включения термостата в сеть -- не более 16 часов.

Время непрерывного автоматического режима работы термостата -- не менее 350 часов.

Наработка на отказ термостата -- не менее 2000 часов условно-непрерывной работы.

Средний срок службы термостата до капитального ремонта -- не менее 5 лет.

 

ТС 80-3,5 с по стандарту: Серия 3.501.1-149

Фундаменты трехлучевые стаканные ТС 80-3,5 с запроектированы для установки поддерживающих контактную сеть железобетонных опор, изготовленных из центрифугированного железобетона. Кроме этого они используются для опор ошиновки ОРУ до 220кВ тяговых подстанций, мачт с прожекторами, опор ЛЭП, и конструкций аналогичного назначения. Элементами Серии 3.501.1-149 заменяются ранее использовавшиеся конструкции Серии 3.501.1-137. Конструктивно они представляют собой объединённые арматурным каркасом верхнюю стаканную часть и нижнюю трёхлучевую опору. Стаканная часть имеет квадратное сечение, а в средине её располагается цилиндрическое посадочное место для установки основания опоры.

1. Варианты маркировки

Незначительные различия в маркировке фундамента трехлучевого стаканного ТС 80-3,5 с обусловлены внутризаводскими стандартами производителей, но предусмотренные Серией параметры указываются обязательно.

1. ТС 80-3,5;

2. ТС 80-4,0;

3. ТС 80-4,5.

2. Основная сфера применения

Фундаменты трехлучевые стаканные ТС 80-3,5 с используются для установки опорных элементов железнодорожной контактной сети. Они могут использоваться на обычных и пучинистых грунтах глубокого сезонного промерзания в зонах с сейсмичностью до 9-ти баллов. При сейсмичности более 7-ми баллов нормативный момент должен быть скорректирован в сторону увеличения. Все расчёты при проектировании фундаментов проводились для полотна шириной 5,8м и 7,0м. Для железных дорог, имеющих отличную от указанных ширину, нормативные моменты следует определять по интерполяции.

3. Обозначение маркировка изделия

Маркировка фундамента трехлучевого стаканного ТС 80-3,5 с содержит сведения о типе изделия, характеризует его несущую способность и длину, а также указывает на возможность использования при пониженной температуре:

Буквенная группа характеризующая конструктивные особенности изделия:

1. Т – трёхлучевой;

2. С – стаканный;

Цифровые показатели мощности и длины:

3. 80 – величина нормативного момента по прочности, выраженная в кНм;

4. 3,5 – суммарная длина блока, выраженная в метрах;

Дополнительная информация об особенностях использования:

5. С – северное исполнение, что позволяет использовать конструкции при температуре наружного воздуха ниже -40°С.

Маркировка наносится на каждое изготовленное изделие несмываемой краской. Кроме собственно обозначения изделия обязательно указываются дата изготовления и общая масса, а также наносятся товарный знак производителя и штамп приёмки ОТК.

Основные характеристики:

Длина = 3500;

Ширина = 670;

Высота = 670;

Вес = 1400;

Объем бетона = 0,56;

Геометрический объем = 1,5712.

4. Изготовление и основные характеристики

Изготавливаются фундаменты трехлучевые стаканные ТС 80-3,5 с только в заводских условиях с применением жестких металлических форм с соблюдением требований ТУ 35-1327-85. Особое внимание при изготовлении уделяется соблюдению параметров толщины защитного слоя бетона над армирующими элементами и устройству отверстий в донной части стакана для отвода воды. Проектную толщину защитного слоя должны обеспечивать упорные стержни, привариваемые к армирующему каркасу и упирающиеся в стенки форм. Изготавливают указанные фундаменты из тяжелого бетона, имеющего повышенную плотность. Класс по прочности В30, морозостойкость F200, водонепроницаемость W6, водоцементное отношение менее 0,55. В зависимости от минимальной температуры в зоне установки рабочая арматура может приниматься по основному или дополнительному вариантам. В обычных условиях используется горячекатаная арматура А-III, а в северном исполнении – АII по ГОСТу 5781-82. Обязательным является вывод заземляющего элемента на боковую поверхность верхней части, который одновременно служит для подключения диагностической аппаратуры.

Заводом изготовителем фундаменты трехлучевые стаканные ТС 80-3,5 с поставляются с нанесённым защитным покрытием из битумной гидроизоляции. При использовании изделий в грунтах содержащих агрессивные по отношению к имеющему нормальную плотность бетону воды, тип защитного покрытия определяется привязывающей организацией. Его тип и условия нанесения указываются в заказных спецификациях по СНиП2.03.11-85.

5. Транспортировка и хранение

Строповка фундамента трехлучевого стаканного ТС 80-3,5 с осуществляется за специально предусмотренные отверстия и петли. После установки в грунт петли должны быть срезаны заподлицо с бетонной поверхностью, а место среза покрывают гидроизоляцией. Допускается их перевозка любыми видами транспорта.

Уважаемые покупатели! Сайт носит информационный характер. Указанные на сайте информация не являются публичной офертой (ст.435 ГК РФ). Стоимость и наличие товара просьба уточнять в офисе продаж или по телефону 8 (800) 500-22-52

Молекулярные, функциональные и структурные свойства пролилолигопептидазы Trypanosoma cruzi (POP Tc80), которая необходима для проникновения паразита в клетки млекопитающих

Biochem J. 2005 May 15; 388 (Pt 1): 29–38.

, * , , , * , * , § , * , , , и 9004 * 1 Изабела М. Д. Бастос

* Мультидисциплинарная лаборатория Пескиса в Дуэнса-де-Шагас (CP 04536), Universidade de Brasília, 70919-970, Brasília, DF, Brazil

Philippe Grellier

† USM 0504tement, Dvelopgément Diversité Moléculaire, Национальный музей естественной истории, 61 rue Buffon, 75231, Paris Cedex 05, France

Natalia F.Martins

‡ Embrapa, Genetic Resources and Biotechnology, CP 02372, Brasília, DF, Brazil

Gloria Cadavid-Restrepo

* Laboratório Multidisciplinar de Pesquisa em Doença de Chagas (CP 04536), Universidade de Braísías , DF, Brazil

Marian R. de Souza-Ault

* Laboratório Multidisciplinar de Pesquisa em Doença de Chagas (CP 04536), Universidade de Brasília, 70919-970, Brasília, DF, Brazil

partmenten Augustyns

9 медицинской химии, Университет Антверпена, Бельгия

Антонио Р.L. Teixeira

* Laboratório Multidisciplinar de Pesquisa em Doença de Chagas (CP 04536), Universidade de Brasília, 70919-970, Brasília, DF, Brazil

Joseph Schrével

† USM 0504, Département Rvelop Muséum National d'Histoire Naturelle, 61 rue Buffon, 75231, Paris Cedex 05, France

Bernard Maigret

∥Laboratoire de Chimie Théorique, Université de Nancy, 54506 Vandoeuvre-les-Nancy, France

José F.da Silveira

¶Departamento de Microbiologia, Imunologia e Parasitologia, Escola Paulista de Medicina, R. Botucatu 862, CEP 04023-062, São Paulo, SP, Brazil

Jaime M. Santana

* Лаборатория многопрофильных исследований Шагас (CP 04536), Universidade de Brasília, 70919-970, Brasília, DF, Brazil

* Laboratório Multidisciplinar de Pesquisa em Doença de Chagas (CP 04536), Universidade de Brasília, 70919-970, Brazil

, DF, Brazil

, DF † USM 0504, Département Régulations, Développement, Diversité Moléculaire, Muséum National d'Histoire Naturelle, 61 rue Buffon, 75231, Paris Cedex 05, France

‡ Embrapa, Genetic Resources and Biotechnology, CP 02372, Brazil

, DF, Brazil

, Brazil

, DF § Кафедра медицинской химии, Университет Антверпена, Бельгия

∥Laboratoire de Chimie Théorique, Université de Nancy, 54506 Vandoeuvre-les-Nancy, France

¶Departamento de Microbiologia, Imunologia e Parasi tologia, Escola Paulista de Medicina, R.Botucatu 862, CEP 04023-062, São Paulo, SP, Brazil

Представленные данные о нуклеотидных последовательностях были отправлены в базы данных нуклеотидных последовательностей DDBJ, EMBL, GenBank® и GSDB под регистрационным номером AF452421.

Поступило 21 июня 2004 г .; Пересмотрено 29 ноября 2004 г .; Принято 7 декабря 2004 г.

Эта статья цитировалась в других статьях в PMC.
Дополнительные материалы

Трехмерная модель комплекса коллагена и POP Tc80

GUID: FA88D541-3A7C-4FA0-AD1E-0930E17975B9

Дополнительная легенда к рисунку

GUID: 037C63E0-2F51-4899-94A8-8469772B54B4

Abstract

Мы продемонстрировали, что 80 кДа POP Tc80 (пролилолигопептидаза Trypanosoma cruzi ) участвует в процессе клеточной инвазии, поскольку специфические ингибиторы блокируют проникновение паразитов в нефагоцитарные клетки-хозяева млекопитающих.В отличие от других СОЗ, POP Tc80 способен гидролизовать большие субстраты, такие как фибронектин и нативный коллаген. В этом исследовании мы представляем клонирование гена POPTc80 , выведенная аминокислотная последовательность которого в значительной степени идентична другим членам семейства POP, в основном в его С-концевой части, которая образует каталитический домен. Саузерн-блот-анализ показал, что POPTc80 присутствует в виде единственной копии в геноме паразита. Эти результаты согласуются с отображением POPTc80 на одну хромосому.Активный рекомбинантный белок (rPOP Tc80) проявлял кинетические свойства, сопоставимые со свойствами нативного фермента. Новые ингибиторы тестировали с rPOP Tc80, и наиболее эффективные из них имели значения коэффициента ингибирования K i ≤1,52 нМ. Инфекционные паразиты, обработанные этими специфическими ингибиторами POP Tc80, прикреплялись к поверхности клеток-хозяев млекопитающих, но не могли их инфицировать. Структурное моделирование POP Tc80, основанное на кристаллизованном POP свиньи, показало, что POP Tc80 состоит из α / β-гидролазного домена, содержащего каталитическую триаду Ser 548 –Asp 631 –His 667 и семилопастной β-пропеллер некаталитический домен.Докинг-анализ предполагает, что доступ трехспирального коллагена к каталитическому сайту POP Tc80 происходит вблизи границы раздела между двумя доменами.

Ключевые слова: клетки млекопитающих, пролилолигопептидаза, структурное моделирование, протеиназа Tc80, Trypanosoma cruzi , трипомастигота

Сокращения: AMC, 7-амидо-4-метилкумарин; Boc, трет-бутоксикарбонил; Cbz, бензилоксикарбонил; DAPI, 4,6-диамидино-2-фенилиндол; ДТТ, дитиотреитол; FAP, белок активации фибробластов; IPTG, изопропилтио-β-D-галактозид; ORF, открытая рамка считывания; ПОП, пролилолигопептидаза; ПОП Tc80, ПОП Trypanosoma cruzi ; rPOP Tc80, рекомбинантный POP Tc80; UTR, непереведенный регион

ВВЕДЕНИЕ

Болезнь Шагаса, хроническое истощающее заболевание, вызывается простейшими паразитами Trypanosoma cruzi .По оценкам, 18 миллионов человек инфицированы T. cruzi , в то время как миллионы людей подвергаются риску заражения в тех районах, где болезнь все еще носит эндемический характер [1]. Распределение T. cruzi в тканях позвоночных-хозяев зависит от способности паразита проникать через базальные мембраны и внеклеточный матрикс, достигать и вторгаться в клетки-хозяева. Важным шагом в этом процессе является специфическое взаимодействие трипомастиготной формы паразита с коллагенами, ламинином, фибронектином и гепарином, что обеспечивает проникновение паразита в клетки-хозяева [2,3].В соответствии с этими особенностями взаимодействия T. cruzi с позвоночным хозяином, мы предположили, что паразит синтезирует фермент, проявляющий активность коллагеназы, который может способствовать проникновению паразита в клетки хозяина. Такая протеиназа была идентифицирована, очищена и биохимически охарактеризована как секретируемый нейтральный фермент 80 кДа (протеиназа Tc80) с активностью в отношении коллагенов типа I и IV человека и менее широко в отношении фибронектина [4,5]. Более того, мы продемонстрировали, что протеиназа Tc80 также опосредует гидролиз нативного коллагена I типа с характеристиками, сравнимыми с таковыми у коллагеназы Clostridium histolyticum [4].Эти биохимические и ферментативные свойства Tc80 позволяют предположить, что этот белок может быть вовлечен в процесс инфекции, облегчая миграцию паразитов через внеклеточный матрикс и взаимодействие с компонентами мембраны клетки-хозяина. Используя специфические ингибиторы против Tc80 [6,7], мы провели предварительные исследования физиологической роли белка во взаимодействии T. cruzi с клеткой-хозяином млекопитающего [5]. Ферментативная активность Tc80 специфически ингибируется этими молекулами, предотвращая инфицирование клетки-хозяина трипомастиготами дозозависимым образом.Это продемонстрировало, что протеиназа действительно участвует в нефагоцитарном процессе инвазии клеток млекопитающих T. cruzi и может быть потенциальной мишенью для химиотерапии инфекции позвоночных T. cruzi .

В соответствии с его паттерном ингибирования и высокой специфичностью в отношении пептидных связей на карбоксильном конце остатков пролина, Tc80 считается членом POP (пролилолигопептидаза; EC 3.4.21.26; также известный как фермент постпролинового расщепления. и пролилэндопептидазы) семейства сериновых протеиназ (S9) [8] и переименованы в POP Tc80 (POP T.cruzi ) [5]. В дополнение к так называемой POP, эта группа протеиназ также включает олигопептидазу B, ациламиноацилпептидазу и дипептидилпептидазу IV, поскольку, несмотря на низкое сходство первичных последовательностей, эти ферменты имеют схожую трехмерную структуру и считаются членами семейства α / β-гидролазных складчатых ферментов. Структура ПОП свиньи имеет цилиндрическую форму, состоящую из домена пептидазы и домена β-пропеллера с семью лопастями [9]. Было высказано предположение, что наиболее отличительной особенностью членов семейства POP является их специфичность в отношении олигопептидов длиной не более 30 аминокислотных остатков, поскольку домен β-пропеллера будет исключать более крупные субстраты из активного сайта фермента [9].Однако мы обнаружили, что очищенный POP Tc80 гидролизует крупные белковые субстраты, такие как коллагены и фибронектин, а также небольшие пептиды [4,5].

Целью настоящего исследования было охарактеризовать ген POPTc80 , экспрессировать протеиназу в гетерологичной системе и сравнить его кинетические свойства со свойствами его нативной формы, а также получить информацию о его трехмерной структуре. Мы также установили роль POP Tc80 в паразитарной инвазии клеток млекопитающих путем использования специфических ингибиторов.

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

Паразиты

Формы эпимастигот T. cruzi из исходного материала Tulahuen выращивали в триптозной среде для инфузии печени с добавлением 100 единиц / мл пенициллина, 100 мкг / мл стрептомицина и 10% (об. / Об.) Фетальной сыворотки теленка при 28 ° C при непрерывном перемешивании. Трипомастиготы и амастиготы паразита были получены путем монослойной культуры мышечных клеток L-6 мыши, выращенных в среде RPMI, содержащей 10% фетальной телячьей сыворотки, при 37 ° C в 5% CO 2 , а затем очищены, как описано ранее [10,11] .

Выделение гена

POPTc80

Обратные праймеры, содержащие 3'-UTR (3'-нетранслируемую область; poputr , 5'-CGCAAACATTCTTTCCACACGTTCC-3 ') и стоп-кодон ( pop-nested GCAGTCCACCTTATTTACTCTTTCC-3 ') были созданы из T. cruzi , экспрессируемого секвенированным тегом (регистрационный номер EMBL {"type": "entrez-нуклеотид", "attrs": {"text": "AW325010", "term_id": "6760931", "term_text": "AW325010"}} AW325010) клон, вычисленная аминокислотная последовательность которого полностью совпадала с двумя внутренними триптическими пептидами из очищенного POP Tc80 [5].Праймер pop-utr использовали для синтеза кДНК первой цепи из 5 мкг общей эпимастиготной РНК (экстрагированной реагентом TRIzol®; Gibco BRL, Гейтерсбург, Мэриленд, США) с использованием набора SUPERSCRIPT ™ (Gibco BRL) в соответствии с инструкции производителя. Полную последовательность POPTc80 получали с помощью ПЦР с использованием 1 мкл (5%) реакционной смеси кДНК эпимастигота в сочетании с прямым праймером миниексона (5'-TTGCTACAGTTTCTGTACTATATT-3 '; [12]) и pop-вложенным , как описано выше.ПЦР выполняли следующим образом: 94 ° C в течение 2 минут, затем 30 циклов при 94 ° C в течение 30 секунд, 55 ° C в течение 30 секунд и 72 ° C в течение 3 минут с последним продлением на 10 минут при 72 ° C. Продукт размером 2176 п.н. непосредственно клонировали в pCR4-TOPO® (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA), создавая TOPO- POPTc80 , который был полностью секвенирован в обоих направлениях для подтверждения его подлинности. Последовательность кДНК POP Tc80 доступна в базе данных GenBank® под номером доступа. {"type": "entrez-нуклеотид", "attrs": {"text": "AF452421", "term_id": "33317308", "term_text": "AF452421"}} AF452421.

Геномная организация POP Tc80

ДНК T. cruzi очищали по методу Medina-Acosta and Cross [13]. Молекулярный кариотип гена POPTc80 был выполнен методом Саузерн-блоттинга хромосомы T. cruzi , разделенной гель-электрофорезом в импульсном поле [14]. Чтобы оценить количество геномных копий POPTc80 , аликвоты по 5 мкг геномной ДНК T. cruzi расщепляли рестрикционными ферментами BamHI, ClaI, EcoRV, HindIII и XhoI в течение 16 часов, разделяли электрофоретически на 0.8% агарозного геля и промокания на нейлоновой мембране. Мембраны зондировали случайным образом праймированным 32 P-меченным полноразмерным ORF POPTc80 (открытая рамка считывания), дважды промывали 2 × SSC (1 × SSC - 0,15 M NaCl / 0,015 M цитрат натрия) / 0,1%. SDS при 42 и 55 ° C в течение 15 минут каждый, а затем промывали 0,1 × SSC / 0,1% SDS при 65 ° C в течение 30 минут перед экспонированием на рентгеновской пленке.

Экспрессия POP Tc80 в

Escherichia coli

ORF 2094 bp POPTc80 была амплифицирована из TOPO- POPTc80 с использованием прямого (5'-ccaacaCAT ATG CGCAGCGTT-3 случайных оснований; , сайт NdeI; жирный шрифт, кодон инициации) и обратные (5'-ctatgaaCTCGAG TTA CTCTTCCACGAAGCATTG-3 '; подчеркнутый сайт XhoI; жирный шрифт, стоп-кодон) праймеры в условиях ПЦР, описанных выше.Полученный фрагмент расщепляли и клонировали в сайты NdeI и XhoI вектора pET-15b (Novagen, Карлсбад, Калифорния, США), и правильное клонирование в желаемой ориентации подтверждали секвенированием. N-концевой His-меченный POP Tc80 экспрессировали в E. coli BL21 (DE3) с помощью индукции 0,5 мМ IPTG (изопропилтио-β-D-галактозид) при 16 ° C в течение 5 часов. Для очистки рекомбинантной протеиназы (rPOP Tc80) клетки собирали, лизировали с помощью Bugbuster ™ (Novagen) и центрифугировали при 16000 g в течение 20 минут при 4 ° C.Супернатант подвергали аффинной хроматографии на никель-агарозной смоле (Sigma) при 4 ° C. После тщательной промывки смолы буфером, содержащим 50 мМ Na 2 HPO 4 (pH 8,0), 0,5 М NaCl и 20 мМ имидазол, связанный rPOP Tc80 элюировали тем же буфером, содержащим 250 мМ имидазола. Метку His отщепляли от протеиназы биотинилированным тромбином с использованием набора Thrombin Cleavage Capture Kit ™ (Novagen). Затем тромбин был удален из реакционной смеси путем его адсорбции на стрептавидин-агарозной смоле, тогда как непереваренные белки и свободные метки в реакционной смеси были дополнительно удалены с помощью периодической обработки никель-агарозой с последующим диализом против 25 мМ Hepes (pH 7.5) и хранили в 50% (об. / Об.) Глицерине при -20 ° C. Очищенный rPOP Tc80 и растворимые белки из бактерий BL21, содержащие плазмиду pET-15b / POPTc80 или пустой вектор, подвергали SDS / PAGE (10% полиакриламид) в восстанавливающих условиях с последующим окрашиванием геля кумасси синим [15].

Производство антител против rPOP Tc80

Пять мышей-самцов BALB / C иммунизировали аликвотами по 5 мкг очищенного rPOP Tc80, эмульгированного в полном адъюванте Фрейнда, с последующим введением четырех бустеров раз в две недели с белком в неполном адъюванте Фрейнда.Сыворотку собирали после каждой ревакцинации для мониторинга продукции специфических антител вестерн-блоттингом с использованием экстракта эпимастиготного белка T. cruzi . По истечении 8 недель сыворотки собирали, разбавляли 1: 1 глицерином (об. / Об.) И хранили при -20 ° C.

Иммуноблоттинг

Экстракты растворимых белков (20 мкг) из IPTG-индуцированных бактерий BL21, несущих либо POPTc80 , либо пустой вектор, rPOP Tc80 (100 нг) или суммарные белки из амастигот, эпимастигот или трипомастигот размером T.cruzi , соответствующий 5 × 10 6 клеток / лунку, подвергали SDS / PAGE (10% полиакриламида) в восстанавливающих условиях. Солюбилизировали паразитов непосредственно в буфере для электрофоретического образца. Белки переносили на нитроцеллюлозную мембрану и блокировали инкубацией в 5% (мас. / Об.) Обезжиренном молоке / PBS в течение ночи при 4 ° C. Блоты инкубировали в течение 2 часов с антисывороткой к rPOP Tc80 или очищенной антисывороткой к POP Tc80 [5] или моноклональным антителом против тубулина (TAT-1), разведенным в 1% обезжиренном молоке / PBS.После четырех промывок PBS по 5 минут каждая мембраны инкубировали в течение 1 часа с подходящими конъюгированными с щелочной фосфатазой козьими анти-IgG, разведенными до 1: 5000, промывали, как указано выше, и выявляли иммунокомплексы с субстратом щелочной фосфатазы 5-бром-фосфатазой. 4-хлор-3-индолил-1-фосфат / нитро-синий тетразолий (Sigma).

Анализ активности фермента

Активность рекомбинантного POP Tc80 определяли путем измерения флуоресценции AMC (7-амидо-4-метилкумарина), высвобождаемого при гидролизе субстрата фермента N-Suc-Gly-Pro-Leu-Gly-Pro- AMC [4], где Suc означает сукцинил.Очищенный rPOP Tc80 анализировали в реакционном буфере [25 мМ Hepes и 5 мМ DTT (дитиотреитол), pH 7,5], содержащем 20 мкМ субстрата в конечном объеме 100 мкл. Флуоресценцию AMC, высвобождаемую в результате ферментативной реакции, регистрировали, как описано ранее [5]. Активность rPOP Tc80 также оценивали с использованием различных пептидов в одних и тех же экспериментальных условиях (N-Boc-Val-Leu-Lys-AMC, N-Boc-Leu-Lys-Arg-AMC, N-Cbz-Val-Lys-Met- AMC, N-Boc-Leu-Gly-Arg-AMC, N-Boc-Ile-Gly-Gly-Arg-AMC, N-Suc-Leu-Tyr-AMC, N-Suc-Ala-Ala-Ala-AMC, N-Boc-Val-Pro-Arg-AMC, N-Suc-Gly-Pro-AMC, N-Cbz-Gly-Gly-Arg-AMC, N-Suc-Ala-Ala-Pro-Phe-AMC, N- Cbz-Phe-Arg-AMC, H-Gly-Arg-AMC, H-Gly-Phe-AMC, Ala-Ala-Phe-AMC, L-Arg-AMC и L-Ala-AMC и L-Lys-Ala- AMC, где Boc и Cbz обозначают трет-бутоксикарбонил и бензилоксикарбонил соответственно).Для определения кинетических параметров рекомбинантный (0,67 нг) или нативный (0,26 нг) POP Tc80 инкубировали в реакционном буфере с переменными концентрациями субстрата N-Suc-Gly-Pro-Leu-Gly-Pro-AMC (3,12–100 мкМ) и Выпуск AMC измеряли, как описано выше. Значения K m и V max определяли гиперболической регрессией по методу Корниш-Боудена [16]. k cat вычисляли с использованием k cat = V max / [E] 0 , где [E] 0 представляет концентрацию активного фермента.Количественное определение активного rPOP Tc80 проводили путем инкубации белка с серийными концентрациями необратимого хлорметанового ингибитора POP Tc80, как описано в [5].

Анализ ингибирования инвазии rPOP Tc80 и

T. cruzi

Различные концентрации (в диапазоне 0,01–100 нМ) ингибиторов POP Tc80 [17] были использованы для анализа ингибирования rPOP Tc80. Значения коэффициента ингибирования K и определяли, как описано в [5].

Трипомастиготы (5 × 10 6 клеток / мл) инкубировали в течение 1 часа при 37 ° C в культуральной среде, содержащей различные концентрации ингибиторов, а затем переносили в культуру мышечных клеток L-6 через 24 часа после посева на стерильные круглые покровные стекла в 24-луночных планшетах с соотношением трипомастигот / хозяйские клетки 20: 1. После 4-часовой инкубации клетки трижды промывали культуральной средой и фиксировали в течение ночи при 4 ° C в 3,7% (об. / Об.) Формальдегиде. После нескольких промывок PBS клетки инкубировали с 5% (мас. / Об.) Обезжиренным молоком в PBS в течение 30 минут, после чего инкубировали с сывороткой от пациента с хронической болезнью Шагаса.Клетки промывали несколько раз, а затем инкубировали с FITC-конъюгированным козьим антителом против человеческого IgG в течение 1 часа. После этого следовало вторичное удаление антител перед окрашиванием ДНК клетки-хозяина и паразита 5 мкг / мл DAPI (4,6-диамидино-2-фенилиндола) в течение 5 мин. Покровные стекла помещали в антифадный реагент FluoroGuard (Bio-Rad Laboratories, Геркулес, Калифорния, США) и наблюдали с помощью эпифлуоресцентной микроскопии. DAPI-положительные паразиты с отрицательной иммунной меткой считались внутриклеточными паразитами, тогда как паразиты, меченные анти- T.cruzi считались внеклеточными [5,10]. Количество интернализованных паразитов в клетке L-6 определяли путем наблюдения не менее 500 клеток.

Молекулярное моделирование гомологии POP Tc80

Шаблонные структуры, используемые для моделирования гомологии POP Tc80, были выбраны путем поиска в Brookhaven PDB (банк данных по белкам; http://www.rcsb.org/pdb/). Следующие структуры были использованы для создания моделей POP Tc80: POP-цепи A из свиного мозга (код PDB 1h3W) и мышцы свиньи (код PDB 1QFM).Выравнивание выбранных шаблонов с последовательностью POP Tc80 проводили с помощью Clustal W [18]. Предварительная трехмерная модель для обоих шаблонов была впервые получена с использованием программного обеспечения модуля гомологии InsightII (Accelerys; http://www.accelerys.com/) и Modeler [19]. Боковые цепи были перестроены, и их структурное положение было скорректировано на основе библиотеки разрешенных ротамеров боковых цепей. Наконец, общее качество модели было проверено путем анализа трехмерных свойств каждого остатка, и была проверена упаковка структуры.Окончательная структура модели была выбрана из шаблона 1QFM. Таким образом, его координаты были уточнены с помощью нескольких раундов минимизации энергии (1000 шагов наискорейшего спуска с последующими сопряженными градиентами до схождения). Сначала были оптимизированы положения боковых цепей, при этом оставался фиксированным весь остов. Затем это ограничение было снято до схождения алгоритма сопряженного градиента. Для этой цели использовался модуль InsightII Discover с зависящей от расстояния диэлектрической проницаемостью и порогом отсечки 20 Å (1 Å = 0.1 нм). На данном этапе не рассматривались заряженные группы (N- и C-концевые группы, боковые цепи Asp, Glu, Arg и Lys), чтобы избежать неожиданных ионных внутримолекулярных взаимодействий в вакууме. Использовалось постоянное валентное силовое поле (CVFF). В дальнейшем качество модели оценивали с помощью программ PROCHECK [20] и WHATIF [21].

Последним шагом была стыковка трехспиральной структуры коллагена в модели POP Tc80. Для этой цели мы сначала проверили размер и объем полости модели активного центра POP Tc80 после предыдущих прогонов молекулярной динамики, особенно следя за потоком молекул воды в модель и из нее.Поэтому мы вручную состыковали трехспиральную структуру коллагена (интегрин-связывающий коллагеновый пептид с последовательностью (Gly-Pro-Hyp) 2 -Gly-Phe-Hyp-Gly-Glu-Arg- (Gly-Pro-Hyp) [ 22], в котором каждый из остатков фенилаланина, глутамата и аргинина был заменен остатком глицина с использованием этих характеристик, располагая подходящую для коллагена ножничную связь рядом с остатками активного сайта POP Tc80 Ser 548 , His 667 и Asp 631 . Эта предварительная модель комплекса POP Tc80-коллаген была сначала уточнена по энергии с помощью алгоритма конъюгированного градиента (10 4 итераций), учитывая, что атомы основной цепи фермента C α фиксированы.Дальнейшие раунды прогонов малой молекулярной динамики (10 пс) с последующей минимизацией энергии (10 4 шагов) были затем выполнены для стабилизации системы до энергетической конвергенции всей системы белок + лиганд + водный слой.

РЕЗУЛЬТАТЫ

Клонирование и секвенирование кДНК POP из

T. cruzi

Последовательность клонированной кДНК POP Tc80 (2155 п.н.) содержит 61 п.н. от 5'-UTR и 2094 п.н. в качестве ORF POP Tc80, которая кодирует для полипептида из 697 аминокислот с расчетной молекулярной массой 78.230 кДа. КДНК POP Tc80 не содержала стоп-кодонов в своей 5'-UTR области; таким образом, инициирующий кодон был установлен как первый остаток метионина после последовательности миниексона. Это было основано на сравнении выведенной последовательности POP Tc80 с последовательностями POP из Homo sapiens , Sus scrofa , Aeromonas hydrophila и Dictyostelium discoideum , которое показало, что остатки тирозина, пролина и аргинина близки к первым метилам метила. , то есть MRSV YP LA R , консервативны в N-концевой области СОЗ в этих организмах ().Кроме того, не было предсказано сигнального пептида из последовательности POP Tc80, хотя он секретируется инфекционными формами трипомастигот [4].

Выравнивание T. cruzi POP Tc80 с другими POP

Аминокислотные последовательности из Trypanosoma cruzi POP Tc80 (номер доступа GenBank® {"type": "entrez-нуклеотид", "attrs": {" text ":" AF452421 "," term_id ":" 33317308 "," term_text ":" AF452421 "}} AF452421), Homo sapiens POP (инвентарный номер {" type ":" entrez-нуклеотид "," attrs " : {"text": "X74496", "term_id": "558595", "term_text": "X74496"}} X74496 [51]), Sus scrofa (инвентарный номер.{"type": "entrez-нуклеотид", "attrs": {"text": "M64227", "term_id": "164620", "term_text": "M64227"}} M64227 [52]), Aeromonas hydrophila POP (инвентарный номер {"type": "entrez-нуклеотид", "attrs": {"text": "D14005", "term_id": "216200", "term_text": "D14005"}} D14005 [53 ]), Dictyostelium discoideum POP (номер доступа {"type": "entrez-нуклеотид", "attrs": {"text": "AJ238018", "term_id": "4584572", "term_text": "AJ238018 "}} AJ238018 [54]) и T. cruzi олигопептидаза B (OP-Tc; номер доступа.{"type": "entrez-nucleotide", "attrs": {"text": "U69897", "term_id": "1572680", "term_text": "U69897"}} U69897 [30]) были выровнены с использованием Программа CLUSTAL W. Стрелки указывают на каталитическую триаду.

Выравнивание аминокислотных последовательностей подтвердило, что POP Tc80 принадлежит к семейству сериновых протеиназ POP. POP Tc80 на 43% идентичен многим POP млекопитающих, таким как POP свиньи, чья молекулярная структура была определена [9]. Уровень идентичности POP Tc80 достигал 55% с POP в целом, когда интересующей областью была C-концевая часть (начиная с остатка 430), которая включает каталитический домен и является наиболее консервативной областью в этом семействе протеиназ. ().Каталитическая триада POP Tc80 состоит из высококонсервативных Ser 548 , Asp 631 и His 667 (Ser 554 , Asp 641 и His 680 в POP свиньи). Более того, сходство POP Tc80 с олигопептидазой B T. cruzi было более слабым и составляло лишь 22% идентичности. Этот фермент также считается членом семейства сериновых протеиназ S9, хотя это не настоящий POP, поскольку он не расщепляется после остатка пролина [23].

Геномная организация и экспрессия гена POP Tc80

Единственная полоса была обнаружена с помощью Саузерн-блоттинга геномной ДНК T. cruzi , расщепленной рестрикционными ферментами ClaI, EcoRV, HindIII или XhoI и зондированной полноразмерной кДНК POP Tc80 (А). ДНК, расщепленная ферментами, которые представляют один сайт в гене POP Tc80, например EcoRI (результаты не показаны), или два, например BamHI (A), генерировала две и три полосы соответственно. Зонд легко гибридизуется с продуктом расщепления BamHI размером 747 п.н., что согласуется с присутствием сайтов в положениях 342 и 1089 в POPTc80 .Эти результаты предполагают, что ген POPTc80 представлен как одна копия на гаплоидный геном. В соответствии с этим, Саузерн-блот-анализ хромосомной ДНК, разделенной гель-электрофорезом в импульсном поле, показал, что POPTc80 отображается на единственную полосу хромосомы размером 3,5 Мб (B).

Анализ числа копий гена, положения хромосомы и характера экспрессии POP Tc80 в T. cruzi

( A ) Геномная ДНК T. cruzi была фрагментирована рестрикцией BamHI, ClaI, EcoRV, HindIII или XhoI ферменты, разделенные на 0.8% агарозный гель, перенесенный на нейлоновую мембрану и зондированный радиоактивно меченной полноразмерной ORF POPTc80 . Указаны размеры зондируемых фрагментов (в т.н.). ( B ) Хромосомное картирование POPTc80 . Гель клона CL-Brener в импульсном поле окрашивали бромидом этидия (слева, хромосомные полосы показаны в мегабазах), наносили на нейлоновую мембрану (справа) и исследовали, как описано выше. ( C ) Анализ экспрессии POP Tc80 в различных T.cruzi (5 × 10 6 клеток / лунку) вестерн-блоттингом с использованием антисыворотки rPOP Tc80. Контроль нагрузки осуществляли с использованием моноклонального антитела против тубулина ТАТ-1. А - стадия амастиготы; E - стадия эпимастиготы; Т, стадия трипомастиготы.

Чтобы проверить уровень экспрессии POP Tc80 на протяжении жизненного цикла T. cruzi , мы используем антитело против rPOP Tc80, полученное у мышей, для проведения вестерн-блоттинга трех стадий развития паразита. POP Tc80 по крайней мере в три раза больше в трипомастиготах и ​​амастиготах, чем в эпимастиготах (C).В этом эксперименте мы использовали одинаковое количество клеток на каждой стадии развития. Таким образом, эти результаты подтверждают наше предыдущее исследование, показывающее, что эпимастиготы проявляют только 35% ферментативной активности POP Tc80, как это наблюдается у трипомастигот [4]. Мечение сывороток доиммунных заболеваний не наблюдалось (результаты не показаны). Эти результаты показывают, что POP Tc80 по-разному экспрессируется на стадиях жизненного цикла T. cruzi .

Рекомбинантный и нативный POP Tc80 проявляют сходные биохимические и кинетические свойства

После индукции IPTG свежий растворимый экстракт бактерий BL21, содержащий pET-15b / POPTc80 , проявил значительную активность в отношении N-Suc-Gly-Pro-Leu-Gly -Pro-AMC-специфический субстрат POP Tc80, в то время как экстракты бактерий, трансформированных пустым вектором, этого не сделали (результаты не показаны).Неочищенный и очищенный rPOP Tc80 показал такой же электрофоретический профиль по сравнению с нативным ферментом с полосой 80 кДа на SDS / PAGE в восстанавливающих условиях после кипячения (дорожки 3 и 4). Подлинность экспрессии rPOP Tc80 подтверждали вестерн-блоттингом этих экстрактов с использованием нативной антисыворотки, специфичной для POP Tc80. Единственная полоса ожидаемого размера была выявлена ​​только из экстрактов E. coli , содержащих рекомбинантную плазмиду, несущую POPTc80 , а также очищенный аффинно rPOP Tc80 (дорожки 6 и 7).

Экспрессия рекомбинантных бактерий POP Tc80

BL21, содержащих плазмиду pET-15b / POPTc80 (дорожка 3) или пустой вектор (дорожка 2), индуцировалась 0,5 мМ IPTG в течение 5 ч при 16 ° C; рекомбинантный белок очищали с помощью аффинной хроматографии на никель-агарозной смоле (дорожка 4) и анализировали с помощью SDS / PAGE (10% полиакриламид) в восстанавливающих условиях и окрашивания кумасси синим. Вестерн-блоттинг выполняли, как описано в экспериментальном разделе, с использованием антитела против нативного POP Tc80 (полоса 5, экстракт бактерий, содержащих пустой вектор; полоса 6, экстракт бактерий, содержащих pET-15b / POPTc80 ; полоса 7, очищенный rPOP Tc80) .Дорожка 1, стандарты молекулярной массы.

Ферментативные анализы, проведенные для определения эффекта таких соединений, как соль, детергент и восстанавливающие агенты, на rPOP Tc80 показали, что восстанавливающие агенты, такие как DTT и 2-меркаптоэтанол, значительно увеличивают его активность. Каталитическая эффективность фермента была в 14 раз выше в присутствии DTT, чем в его отсутствие (результаты не показаны). Этот эффект наблюдался для олигопептидазы B T. brucei , у которой максимальная активность была зарегистрирована при 10 мМ DTT [23].Поэтому ферментные анализы проводили в присутствии 5 мМ DTT.

Рекомбинантный POP Tc80 продемонстрировал кинетические свойства, приближенные к тем, которые были получены для нативного фермента с использованием N-Suc-Gly-Pro-Leu-Gly-Pro-AMC (). Чтобы оценить, может ли rPOP Tc80 эффективно гидролизовать субстраты, отличные от N-Suc-Gly-Pro-Leu-Gly-Pro-AMC, мы проанализировали его активность на нескольких флуорогенных субстратах. Отщеплялись только субстраты, содержащие остатки пролина в положении P 1 , такие как N-Suc-Gly-Pro-AMC (24% активности, полученной с использованием N-Suc-Gly-Pro-Leu-Gly-Pro-AMC ), за исключением N-Suc-Ala-Ala-Ala-AMC.Этот последний субстрат показал более слабый коэффициент гидролиза, не более 13% от коэффициента, полученного для N-Suc-Gly-Pro-Leu-Gly-Pro-AMC. Активность СОЗ по отношению к остаткам аланина в положении P 1 описана в [24]. Примером является ПОЗ из мышц свиньи, который расщепляет мастопоран, биоактивный пептид (Ile-Asn-Leu-Lys-Ala-Leu-Ala-Ala-Leu-Ala-Lys-Ile-Leu-NH 2 ), после всего аланина остатки [25]. Для других испытанных субстратов, содержащих лизин, аргинин, метионин, тирозин или фенилаланин в положении P 1 , гидролиз не зарегистрирован.Кроме того, rPOP Tc80 был способен гидролизовать как очищенный, так и нативный коллаген I типа (результаты не показаны) с характеристиками, сопоставимыми с характеристиками его нативной формы [4].

Таблица 1

Кинетические свойства рекомбинантного и нативного POP Tc80 с использованием субстрата N-Suc-Gly-Pro-Leu-Gly-Pro-AMC

POP Tc80 K m (мкм ) k cat (s −1 ) k cat / K m (мкМ −1 · s −1)
Рекомбинантный * 18.1 48,7 2,68
Нативный 14,0 28,1 2,00

Рекомбинантный и нативный POP Tc80 демонстрируют схожую чувствительность к ингибиторам POP. . показывает ингибирующие эффекты некоторых из этих ингибиторов на рекомбинантный и нативный POP Tc80 в отношении флуорогенного субстрата N-Suc-Gly-Pro-Leu-Gly-Pro-AMC. Оба фермента сильно ингибировались соединениями

1–4 со значениями K i в диапазоне 0.26–1,52 нМ. Напротив, их активности были менее чувствительны к соединению 5 . Эти результаты показывают, что рекомбинантный и нативный POP Tc80 демонстрируют сходные профили ингибирования.

Таблица 2

Ингибирование рекомбинантного и нативного POP Tc80

Z, бензилоксикарбонил.

Ингибирование инвазии клеток-хозяев ингибиторами POP Tc80 является результатом подавления самого процесса проникновения, а не ингибирования прикрепления паразитов к клеткам-хозяевам

Ранее мы показали, что ингибиторы POP Tc80 блокируют нефагоцитарную инвазию трипомастиготами [ 5].Инвазия клетки-хозяина - сложный процесс, который можно разделить на два основных этапа: (i) прикрепление паразита к клетке-хозяину посредством связывания белка с компонентами внеклеточного матрикса или углеводами на поверхности клетки; (ii) интернализация паразита, включающая ранние события передачи сигнала, которые приводят к рекрутированию и слиянию лизосом хозяина в месте прикрепления паразита. Чтобы отличить участие POP Tc80 на этих двух этапах, мы протестировали влияние специфических ингибиторов POP Tc80 на инвазию клеток-хозяев трипомастиготами, используя метод иммуноокрашивания на паразитов, который позволяет нам отличать интернализованных паразитов от паразитов, прикрепленных к клетке-хозяину. .показывает ингибирующие эффекты соединений 1 , 2 и 4 . Принимая во внимание количество внутриклеточных паразитов на клетку, инвазию паразитов препятствовали соединения 1 и 2 со значениями IC 50 прибл. 10 мкМ и, в меньшей степени, соединением 4 (B). При учете количества прикрепленных паразитов на клетку наблюдалась обратная зависимость между увеличением количества паразитов, прикрепленных к клеткам-хозяевам, и увеличением концентрации лекарственного средства (A).В условиях, использованных в этом эксперименте, эти ингибиторы не были токсичными ни для клеток-хозяев, ни для трипомастиготов (результаты не показаны). Эти результаты убедительно свидетельствуют о том, что ингибиторы POP Tc80 действуют через ингибирование самой инвазии клеток-хозяев, а не через ингибирование прикрепления трипомастигот к поверхности клетки-хозяина.

Ингибиторы POP Tc80 блокируют проникновение трипомастигот в клетки-хозяева, но не прикрепление к их поверхности

Трипомастиготы предварительно инкубировали в течение 1 ч с 10 мкМ (темно-серый), 25 мкМ (светло-серый) и 100 мкМ (белый) ингибиторов 1, 2 и 4, перенесенные на культуры мышечных клеток L-6 мыши.После 4-часовой инкубации клетки промывали, фиксировали формальдегидом и подвергали иммунофлуоресцентному анализу (IF) и окрашиванию DAPI, чтобы отличить паразитов, прикрепленных к клетке-хозяину ( A , внеклеточные паразиты) от интернализованных ( B , внутриклеточные паразиты). Значения на ординате представляют количество паразитов на 100 клеток L6. Контроли (черные) состояли из паразитов, содержащихся без ингибитора и с такими же концентрациями ДМСО. Каждое значение представляет собой среднее значение ± S.D. для трехкратных экспериментов.

Молекулярное моделирование POP Tc80

Для построения трехмерной молекулярной модели POP Tc80 мы использовали молекулярную структуру кристаллизованного свиного POP в качестве шаблона [9]. Эти белки имеют 43% идентичности аминокислот (), что позволяет прогнозировать модель. Два характерных домена POP составляют архитектуру POP Tc80, которые накладываются на таковые из POP свиньи (A и B). Каталитический домен демонстрирует характерную α / β-гидролазную складку [26], состоящую из остатков 1–74 и 435–697.Основной домен содержит центральный β-лист, состоящий из восьми нитей, из которых только одна антипараллельна. Центральные β-листы окружают пять спиралей. Активный центр состоит из Ser 548 в качестве нуклеофила и His 667 в качестве носителя протона, тогда как Asp 631 поддерживает имидазольное кольцо в подходящем положении для захвата серинового протона во время катализа. Ser 548 является частью консервативной последовательности GGSNGG среди POP и располагается на «нуклеофильном изгибе» между цепью и спиралью [26].Каталитическая триада расположена на границе между α / β-гидролазой и некаталитическим доменом и доступна из большого кармана.

Теоретическая модель POP Tc80

Модель POP Tc80 ( A ) основана на кристаллографической структуре свиного POP ( B ). Каталитический домен состоит из десяти α-спиралей (красный) и десяти β-цепей (голубой), образующих структуру, подобную α / β-гидролазе. Желтый и зеленый обозначают повороты. Некаталитический домен β-пропеллера расположен чуть ниже каталитического домена и состоит только из антипараллельных β-цепей (голубой).Домен β-пропеллера POP Tc80 ( C ) и POP свиньи ( D ) рассматривается перпендикулярно тому, что показано на ( A , B ). Β-листы семи лопастей последовательно соединяются вокруг центральной оси.

Второй домен складывается из остатков 75–425, образуя некаталитический домен. Эта часть состоит из семи одинаковых β-листов, которые вместе образуют конструкцию β-пропеллера. Четыре антипараллельных β-нити соответствуют лопасти пропеллера, а ряд лопастей скручены и радиально расположены вокруг центральной оси, образуя центральную полость в виде воронки (C и D).Это трехмерное расположение обеспечивает плоскую структуру, имеющую нижнюю поверхность с воронкой, открывающейся во внешнюю среду, и верхнюю поверхность области пропеллера, ковалентно присоединенную к домену α / β-гидролазы. Как и в свином POP, первая и седьмая лопасти β-пропеллера POP Tc80 не связаны ни дисульфидными, ни ковалентными связями, в отличие от других известных структур β-пропеллера [27,28], а только гидрофобными взаимодействиями и солевыми мостиками, которые создают POP Tc80 β-пропеллер гибкий домен.

Мы провели стыковочные расчеты для определения энергий взаимодействия субстрат-каталитический карман между трехмерной структурой трехспирального коллагена и предложенной моделью структуры POP Tc80. После раундов молекулярной динамики / минимизации оказывается, что коллаген будет получать доступ к активному центру POP Tc80 через интерфейсную область, расположенную между двумя доменами (α / β-гидролаза и β-пропеллер;), обращенными к каталитическому карману, а не центральной порой, образованной на конструкции β-пропеллера [9].Вероятно, размещение коллагена рядом с активным сайтом облегчает его расщепление за счет отхода от доменов пептидазы и пропеллера, поддерживаемых «шарниром», образованным лопастями 1 и 7, которые соединяют эти два домена [29] (см. дополнительный рисунок на http://www.BiochemJ.org/bj/388/bj3880029add.htm). Среднеквадратичное отклонение между атомами основной цепи белка двух комплексов составило 2,1 Å, показывая, что общая структура POP Tc80 не была изменена включением большой молекулярной системы, такой как тройная спираль коллагена.

Стыковка тройного спирального коллагена с POP Tc80

Коллаген (серый) взаимодействует в непосредственной близости от α / β-гидролазы (оранжевая лента C α ) и β-пропеллера (голубая лента C α ) ) домены.

ОБСУЖДЕНИЕ

Наши предыдущие исследования показали, что секретируемая протеиназа T. cruzi 80 кДа (первоначально названная Tc80; [4]), фермент, который проявляет активность, подобную коллагеназе, является членом семейства сериновых протеиназ POP. [5].В настоящем исследовании мы клонировали и секвенировали ген POP Tc80, анализ аминокислотной последовательности которого подтвердил, что он кодирует POP T. cruzi . Поскольку POP Tc80 является первым описанным POP простейших, его ближайшие гомологичные ферменты родственны POP млекопитающих и имеют до 44% идентичности. Напротив, трипаносоматид-олигопептидаза B [23,30], ферменты, не расщепляющие постпролин, которые считаются членами семейства S9 POP, на 22% идентичны POP Tc80.

Не было предсказано типичного сигнального пептида для выведенной аминокислотной последовательности POP Tc80, несмотря на то, что фермент находится внутри везикул и секретируется T.cruzi трипомастиготы [4,5]. В связи с этим в Plasmodium falciparum описано несколько секретируемых белков, лишенных типичных сигнальных пептидов, таких как GPB 130, RESA, FIRA и PfEMP1 [31–34]. Более того, ингибитор-2 активатора плазминогена, который также не имеет типичного сигнального пептида, вероятно, секретируется с помощью гидрофобных аминокислот, расположенных далеко от N-конца [35]. В других сообщениях представлены доказательства посттрансляционной транслокации белка через мембрану эндоплазматического ретикулума, которая не требует типичной N-концевой сигнальной последовательности и не вовлекает частицу распознавания сигнала.Вместо этого требуется класс белков теплового шока размером 70 кДа, которые, скорее всего, играют роль в воздействии на гидрофобное ядро ​​белков [36].

Мы предположили, что POP Tc80 может играть роль в процессе инвазии клеток-хозяев T. cruzi . Это подтверждается его секрецией в основном трипомастиготами, инфекционными формами T. cruzi и POP Tc80-специфическими ингибиторами, которые селективно нарушают проникновение трипомастигот в клетки-хозяева млекопитающих [4].В настоящем исследовании мы сообщаем другие детали, которые подкрепляют наше первоначальное предположение: (i) T. cruzi демонстрирует значительное увеличение экспрессии POP Tc80 на стадии его жизненного цикла трипомастиготы по сравнению с его стадией неинфекционной эпимастиготы, подтверждая предыдущие результаты, что показали, что трипомастиготы проявляют в три раза более высокую ферментативную активность по сравнению с эпимастиготами; и (ii) ингибирование инвазии клетки-хозяина ингибиторами POP Tc80, по-видимому, происходит из-за ингибирования самого процесса проникновения, а не из-за ингибирования, возникающего в результате прикрепления трипомастигота к поверхности клетки-хозяина.

Рекомбинантный POP Tc80 показал сходные кинетические параметры и чувствительность к ингибиторам по сравнению с нативным белком, что указывает на то, что он был правильно свернут и сохранил биохимические особенности своей нативной формы. Более того, POP Tc80, по-видимому, не подвергается дальнейшей посттрансляционной модификации, поскольку бактериальная внутриклеточная среда для этого неблагоприятна. Если да, то это не требуется для его деятельности. Мы наблюдали, что DTT увеличивает каталитическую эффективность POP Tc80 на N-Suc-Gly-Pro-Leu-Gly-Pro-AMC.Окисление некоторых остатков цистеина может образовывать дисульфидные мостики, которые делают структуру POP Tc80 менее гибкой. Это может затруднить доступ субстрата к каталитическому карману. Известно, что СОЗ, в том числе POP Tc80, сильно ингибируются объемными реагентами со специфичностью в отношении остатков цистеина [4,37]. Это ингибирование, безусловно, связано с Cys 255 , расположенным близко к каталитическому сайту в свернутом ферменте [9], поскольку POP из Flavobacterium meningosepticum имеет Cys 255 , замененный остатком треонина и не инактивируется ингибиторами тиолов [ 38].Таким образом, DTT может уберечь Cys 255 от травм.

Знания о каталитическом механизме и архитектуре каталитического кармана ферментов очень полезны для улучшения дизайна селективных и специфических ингибиторов. Чтобы получить некоторую информацию о его каталитических и структурных свойствах, мы провели теоретическое трехмерное моделирование POP Tc80 на основе кристаллизованной структуры свиного POP. Мы наблюдали, что остатки, составляющие каталитическую триаду POP Tc80 и POP свиньи, накладываются друг на друга; однако боковые цепи этих остатков расположены под разными углами (результаты не показаны).Возможно, эти различия могут изменить стереоспецифичность для субстратов и, следовательно, для ингибиторов, как это наблюдалось с теми из POP Tc80, которые блокируют активность POP млекопитающих с меньшей эффективностью [5,17,39]. Среди сообщенных каталитических расхождений основным и наиболее интригующим является способность POP Tc80 расщеплять трехспиральные коллагеновые волокна, в отличие от других POP, которые ограничиваются гидролизом небольших пептидов. Однако POP Tc80 - не единственный член POP, описанный со способностью разлагать большие полипептиды.Подобно POP Tc80, FAPα (белок активации фибробластов α [40]), фермент, подобный дипептидилпептидазе IV, легко разрушает коллагены внеклеточного матрикса. FAPα представляет собой мембраносвязанный гликопротеин II типа, экспрессирующийся в основном в реактивных стромальных фибробластах опухоли, и его коллагенолитическая активность способствует ремоделированию и инвазии эпителиальных опухолей. Более того, недавно сообщалось, что олигопептидаза B Salmonella enterica расщепляет гистоны h3A и h5 in vitro [41] и что цитозольная пролилэндопептидаза участвует в деградации варианта белка p40-phox в миелоидных клетках [42].Интересно отметить, что, хотя POP, FAP и олигопептидаза B, представляют собой совершенно разные аминокислотные последовательности, они имеют сходные трехмерные структуры, состоящие из доменов α / β гидролазы и β-пропеллера [43,44].

На основе нашего стыковочного анализа мы предполагаем, что доступ тройного спирального коллагена к каталитическому карману POP Tc80 происходит вблизи границы α / β гидролазы и β-пропеллера. Сравнимое предположение было высказано Rasmussen et al.[45], предполагая, что вход субстрата в активный центр дипептидилпептидазы IV, вероятно, осуществляется через боковое отверстие, расположенное между доменами пептидазы и β-пропеллера, что является самым коротким и наиболее подходящим доступным путем к каталитическому карману. Подобная гипотеза была экспериментально подтверждена на свином POP посредством сайт-специфического мутагенеза, когда дисульфидная связь между доменами пептидазы и β-пропеллера предотвращает доступ субстрата к каталитическому карману [29].Вероятно, β-пропеллер является доменом, ответственным за взаимодействия POP Tc80 и коллагена, как уже предполагалось для дипептидилпептидазы IV и FAPα [46,47]. Более того, β-пропеллерные структуры, включая четырехлопастный β-пропеллер матриксных металлопротеиназ коллагеназ [48], участвуют во множественных межбелковых взаимодействиях [49]. Было показано, что, хотя β-пропеллер не является каталитическим доменом, он необходим для расщепления коллагена матриксными металлопротеиназами [50].

Мультимедийный модуль

Трехмерная модель комплекса коллагена и POP Tc80: Условные обозначения дополнительных фигур:

Благодарности

Мы благодарим Д.Engman, C. Deregnaucourt и S. Freitas за критическое прочтение этой статьи, A. Haemers за предоставление ингибиторов, S. Charneau за производство антисыворотки против rPOP Tc80 и Ana de Cássia Vexenat за техническую поддержку. Эта работа была поддержана CNPq (Conselho Nacional de Desenvolvimento Cientifico e Tecnológico) и CAPES, Бразилия, а также CNRS (гранты GDR 1077 и IFR 63) и MENRT (PRFMMIP) Франции.

Ссылки

1. Монкайо А. Прогресс в направлении прекращения передачи болезни Шагаса.Mem. Inst. Освальдо Крус. 1999; 94: 401–404. [PubMed] [Google Scholar] 2. Джордано Р., Фаутс Д. Л., Тевари Д., Колли В., Мэннинг Дж. Э., Алвес М. Дж. Клонирование гликопротеина поверхностной мембраны, специфичного для инфекционной формы Trypanosoma cruzi , обладающего адгезионными свойствами к ламинину . J. Biol. Chem. 1999; 274: 3461–3468. [PubMed] [Google Scholar] 3. Ортега-Барриа Э., Перейра М. Э. Вхождение Trypanosoma cruzi в эукариотические клетки. Заразить. Агенты Дис. 1992; 1: 136–145. [PubMed] [Google Scholar] 4.Santana J. M., Grellier P., Schrevel J., Teixeira A. R. A Trypanosoma cruzi -секретируемая протеиназа 80 кДа со специфичностью в отношении человеческого коллагена типов I и IV. Biochem. J. 1997; 325: 129–137. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 5. Grellier P., Vendeville S., Joyeau R., Bastos I. M., Drobecq H., Frappier F., Teixeira A. R., Schrével J., Davioud-Charvet E., Sergheraert C., et al. Trypanosoma cruzi пролилолигопептидаза Tc80 участвует в нефагоцитарной инвазии клеток млекопитающих трипомастиготами.J. Biol. Chem. 2001; 276: 47078–47086. [PubMed] [Google Scholar] 6. Vendeville S., Buisine E., Williard X., Schrével J., Grellier P., Santana J., Sergheraert C. Идентификация ингибиторов протеазы 80 кДа из Trypanosoma cruzi посредством скрининга библиотеки комбинаторных пептидов. Chem. Pharm. Бык. (Токио) 1999; 47: 194–198. [PubMed] [Google Scholar] 7. Joyeau R., Maoulida C., Guillet C., Frappier F., Teixeira A. R., Schrével J., Santana J., Grellier P. Синтез и активность производных пирролидинил- и тиазолидинилдипептидов в качестве ингибиторов пролила Tc80. олигопептидаза из Trypanosoma cruzi .Евро. J. Med. Chem. 2000. 35: 257–266. [PubMed] [Google Scholar] 8. Барретт А. Дж., Ролингс Н. Д. Олигопептидазы и появление семейства пролилолигопептидаз. Биол. Chem. Хоппе Сейлер. 1992; 373: 353–360. [PubMed] [Google Scholar] 9. Fulop V., Bocskei Z., Polgar L. Пролилолигопептидаза: необычный бета-пропеллерный домен регулирует протеолиз. Cell (Кембридж, Массачусетс) 1998; 94: 161–170. [PubMed] [Google Scholar] 10. Тардье И., Вебстер П., Равеслот Дж., Борон В., Ланн Дж. А., Хойзер Дж. Э., Эндрюс Н.W. Набор и слияние лизосом являются ранними событиями, необходимыми для инвазии трипаносом в клетки млекопитающих. Cell (Кембридж, Массачусетс), 1992; 71: 1117–1130. [PubMed] [Google Scholar] 11. Лей В., Роббинс Э. С., Нуссенцвейг В., Эндрюс Н. В. Выход Trypanosoma cruzi из фагосомы ингибируется повышением рН кислых компартментов. J. Exp. Med. 1990; 171: 401–413. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 12. Милхаузен М., Нельсон Р. Г., Сатер С., Селкирк М., Агабиан Н. Идентификация малой РНК, содержащей сплайсированный лидер трипаносомы: донор общих 5'-последовательностей мРНК трипаносоматид? Cell (Кембридж, Массачусетс.) 1984; 38: 721–729. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 13. Медина-Акоста Э., Кросс Г. А. Быстрое выделение ДНК из простейших трипаносоматид с использованием простой процедуры «мини-препарирования». Мол. Biochem. Паразитол. 1993; 59: 327–329. [PubMed] [Google Scholar] 14. Кано М. И., Грубер А., Васкес М., Кортес А., Левин М. Дж., Гонсалес А., Дегрейв В., Рондинелли Э., Зингалес Б., Рамирес Дж. Л. и др. Молекулярный кариотип клона CL Brener, выбранный для проекта генома Trypanosoma cruzi . Мол. Biochem.Паразитол. 1995. 71: 273–278. [PubMed] [Google Scholar] 15. Лэммли У.К. Расщепление структурных белков при сборке головки бактериофага Т4. Nature (Лондон) 1970; 227: 680–685. [PubMed] [Google Scholar] 16. Корниш-Боуден А. Лондон: Баттервортс; 1976. Принципы ферментной кинетики. [Google Scholar] 17. Бал Г., Ван дер Векен П., Антонов Д., Ламбейр А. М., Греллье П., Крофт С. Л., Августинс К., Хемерс А. Пролилизоксазолы: сильнодействующие ингибиторы пролилолигопептидазы с антитрипаносомной активностью.Биоорг. Med. Chem. Lett. 2003. 13: 2875–2878. [PubMed] [Google Scholar] 18. Томпсон Дж. Д., Хиггинс Д. Г., Гибсон Т. Дж. CLUSTAL W: повышение чувствительности последовательного последовательного выравнивания с помощью взвешивания последовательностей, штрафов за пропуски в зависимости от положения и выбора матрицы весов. Nucleic Acids Res. 1994; 22: 4673–4680. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 19. Марти-Реном М.А., Стюарт А.С., Фисер А., Санчес Р., Мело Ф., Сали А. Сравнительное моделирование структуры белков генов и геномов.Анну. Rev. Biophys. Biomol. Struct. 2000; 29: 291–325. [PubMed] [Google Scholar] 20. Ласковски Р. А., Макартур М. В., Мосс Д. С., Торнтон Дж. М. Программа для проверки стреохимического качества белковых структур. J. Appl. Кристаллогр. 1993; 26: 283–291. [Google Scholar] 21. Хоофт Р. В., Вринд Г., Сандер С., Абола Э. Ошибки в белковых структурах. Nature (Лондон) 1996; 381: 272. [PubMed] [Google Scholar] 22. Эмсли Дж., Найт С. Г., Фарндейл Р. В., Барнс М. Дж. Структура интегрин-альфа-2-бета-1-связывающего коллагенового пептида.J. Mol. Биол. 2004. 335: 1019–1028. [PubMed] [Google Scholar] 23. Морти Р. Э., Лонсдейл-Экклс Дж. Д., Морхед Дж., Калер Э. В., Ментеле Р., Ауэрсвальд Э. А., Кутцер Т. Х., Эндрюс Н. В., Берли Б. А. • Олигопептидаза B из Trypanosoma brucei , новый член развивающейся подгруппы сериновых олигопептидаз. J. Biol. Chem. 1999; 274: 26149–26156. [PubMed] [Google Scholar] 24. Йошимото Т., Фишл М., Орловски Р. С., Уолтер Р. Фермент, расщепляющий постпролин, и постпролин-дипептидиламинопептидаза.Сравнение двух пептидаз с высокой специфичностью по остаткам пролина. J. Biol. Chem. 1978; 253: 3708–3716. [PubMed] [Google Scholar] 25. Морияма А., Наканиши М., Сасаки М. Пролилэндопептидаза мышц свиней и ее эндогенные субстраты. J. Biochem. (Токио) 1988; 104: 112–117. [PubMed] [Google Scholar] 26. Llis D. L., Cheah E., Cygler M., Dijkstra B., Frolow F., Franken S. M., Harel M., Remington S.J., Silman I., Schrag J. Альфа / бета гидролаза складывать. Белок. Англ. 1992; 5: 197–211. [PubMed] [Google Scholar] 27.Ли Дж., Брик П., О'Хара М. К., Скаржински Т., Ллойд Л. Ф., Карри В. А., Кларк И. М., Бигг Х. Ф., Хазлеман Б. Л., Cawston T. E., et al. В структуре полноразмерной синовиальной коллагеназы свиньи обнаружен С-концевой домен, содержащий соединенный с кальцием четырехлопастный бета-пропеллер. Состав. 1995; 3: 541–549. [PubMed] [Google Scholar] 28. Бейкер С.С., Сондерс Н.Ф., Уиллис А.С., Фергюсон С.Дж., Хайду Дж., Фулоп В. Структура цитохрома cd1: необычное окружение гема в нитритредуктазе и анализ факторов, способствующих бета- винт складывается.J. Mol. Биол. 1997; 269: 440–455. [PubMed] [Google Scholar] 29. Szeltner Z., Rea D., Juhasz T., Renner V., Fulop V., Polgar L. Для связывания субстрата необходимы согласованные структурные изменения в пептидазных и пропеллерных доменах пролилолигопептидазы. J. Mol. Биол. 2004. 340: 627–637. [PubMed] [Google Scholar] 30. Берли Б. А., Калер Е. В., Вебстер П., Эндрюс Н. В. Цитозольная сериновая эндопептидаза из Trypanosoma cruzi необходима для генерации передачи сигналов Ca 2+ в клетках млекопитающих.J. Cell Biol. 1997. 136: 609–620. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 31. Кочан Дж., Перкинс М., Раветч Дж. В. Тандемно повторяющаяся последовательность определяет домен связывания для белка, связывающего рецептор эритроцитов, из P. falciparum . Cell (Кембридж, Массачусетс), 1986; 44: 689–696. [PubMed] [Google Scholar] 32. Фавалоро Дж. М., Коппель Р. Л., Коркоран Л. М., Фут С. Дж., Браун Г. В., Андерс Р. Ф., Кемп Д. Дж. Структура гена RESA Plasmodium falciparum . Nucleic Acids Res.1986; 14: 8265–8277. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 33. Лингельбах К. Р. Plasmodium falciparum : молекулярный взгляд на транспорт белка от паразита в эритроцит хозяина. Exp. Паразитол. 1993. 76: 318–327. [PubMed] [Google Scholar] 34. Барух Д. И., Паслоске Б. Л., Сингх Х. Б., Би Х., Ма Х. С., Фельдман М., Тараски Т. Ф., Ховард Р. Дж. Клонирование P. falciparum ген, кодирующий PfEMP1, вариантный антиген малярии и рецептор адгезии на поверхности паразитированных эритроцитов человека.Cell (Кембридж, Массачусетс) 1995; 82: 77–87. [PubMed] [Google Scholar] 35. Йе Р. Д., Вун Т. С., Сэдлер Дж. Е. Секреция белка млекопитающих без удаления сигнального пептида. Биосинтез ингибитора активатора плазминогена-2 в клетках U-937. J. Biol. Chem. 1988; 263: 4869–4875. [PubMed] [Google Scholar] 36. Бродский Дж. Л. Посттрансляционная транслокация белков: не все hsc70 созданы равными. Trends Biochem. Sci. 1996. 21: 122–126. [PubMed] [Google Scholar] 37. Книсачек Х., Бауэр К. Характеристика «фермента, дезаминирующего тиролиберин», как фермента, расщепляющего постпролин.Частичная очистка и ферментно-химический анализ фермента из ткани передней доли гипофиза. J. Biol. Chem. 1979; 254: 10936–10943. [PubMed] [Google Scholar] 38. Йошимото Т., Уолтер Р., Цуру Д. Пролин-специфическая эндопептидаза из Flavobacterium . Очищение и свойства. J. Biol. Chem. 1980; 255: 4786–4792. [PubMed] [Google Scholar] 39. Vendeville S., Goossens F., Debreu-Fontaine M. A., Landry V., Davioud-Charvet E., Grellier P., Scharpe S., Sergheraert C. Сравнение ингибирования пролилэндопептидаз человека и Trypanosoma cruzi .Биоорг. Med. Chem. 2002; 10: 1719–1729. [PubMed] [Google Scholar] 40. Park J.E., Lenter M.C., Zimmermann R.N., Garin-Chesa P., Old L.J., Rettig W.J. Белок активации фибробластов, сериновая протеаза с двойной специфичностью, экспрессируемая в реактивной строме опухоли человека. фибробласты. J. Biol. Chem. 1999; 274: 36505–36512. [PubMed] [Google Scholar] 41. Морти Р. Э., Фулоп В., Эндрюс Н. В. Свойства распознавания субстрата олигопептидазы В из Salmonella enterica серовара Typhimurium. J. Bacteriol.2002; 184: 3329–3337. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 42. Хасебе Т., Хуа Дж., Сомея А., Морейн П., Чеклер Ф., Нагаока И. Участие цитозольной пролилэндопептидазы в деградации варианта белка сплайсинга p40-phox в миелоидных клетках. J. Leukoc. Биол. 2001; 69: 963–968. [PubMed] [Google Scholar] 43. Герцей Т., Кесеру Г. М., Нарай-Сабо Г. Построение трехмерной модели олигопептидазы B, потенциального процессирующего фермента у прокариот. J. Mol. График. Модель. 2000; 18: 7–17. [PubMed] [Google Scholar] 44.Аджами К., Эбботт С. А., Обрадович М., Гисберс В., Кан Т., МакКоган Г. В., Горрелл М. Д. Структурные требования для катализа, экспрессии и димеризации в семействе генов CD26 / DPIV. Биохимия. 2003. 42: 694–701. [PubMed] [Google Scholar] 45. Расмуссен Х. Б., Браннер С., Виберг Ф. С., Вагтманн Н. Кристаллическая структура дипептидилпептидазы IV / CD26 человека в комплексе с аналогом субстрата. Nat. Struct. Биол. 2003; 10: 19–25. [PubMed] [Google Scholar] 46. Ченг Х. С., Абдель-Гани М., Эльбл Р. К., Паули Б.U. Эндотелиальная дипептидилпептидаза IV легких способствует адгезии и метастазированию клеток рака молочной железы крыс через фибронектин, связанный с поверхностью опухолевых клеток. J. Biol. Chem. 1998. 273: 24207–24215. [PubMed] [Google Scholar] 47. Loster K., Zeilinger K., Schuppan D., Reutter W. Богатая цистеином область дипептидилпептидазы IV (CD 26) является сайтом связывания коллагена. Biochem. Биофиз. Res. Commun. 1995; 217: 341–348. [PubMed] [Google Scholar] 48. Ли Дж., Брик П., О'Хара М. К., Скаржински Т., Ллойд Л. Ф., Карри В.A., Clark I.M., Bigg H.F., Hazleman B.L., Cawston T.E. Структура полноразмерной синовиальной коллагеназы свиньи выявляет C-концевой домен, содержащий связанный с кальцием четырехлопастный бета -винт. Состав. 1995; 3: 541–549. [PubMed] [Google Scholar] 49. Адамс Дж., Келсо Р., Кули Л. Суперсемейство белков келча-повторов: движители клеточной функции. Trends Cell Biol. 2000; 10: 17–24. [PubMed] [Google Scholar] 50. Боде В. Рука помощи для коллагеназ: гемопексиноподобный домен. Состав. 1995; 3: 527–530.[PubMed] [Google Scholar] 51. Ванхуф Г., Гуссенс Ф., Хендрикс Л., Де Мистер И., Хендрикс Д., Вринд Г., Ван Брокховен К., Шарп С. Клонирование и анализ последовательности гена, кодирующего пролилэндопептидазу лимфоцитов человека. Ген. 1994; 149: 363–366. [PubMed] [Google Scholar] 52. Реннекс Д., Хеммингс Б. А., Хофстинг Дж., Стоун С. Р. Клонирование кДНК пролилэндопептидазы свиного мозга и идентификация серилового остатка в активном центре. Биохимия. 1991; 30: 2195–2203. [PubMed] [Google Scholar] 53. Канатани А., Йошимото Т., Китазоно А., Кокубо Т., Цуру Д. Пролилэндопептидаза из Aeromonas hydrophila : клонирование, секвенирование и экспрессия гена фермента, а также характеристика экспрессированного фермента. J. Biochem. (Токио) 1993; 113: 790–796. [PubMed] [Google Scholar] 54. Уильямс Р. С., Имс М., Ривз В. Дж., Виггарс Дж., Харвуд А. Дж. Потеря пролилолигопептидазы придает устойчивость к литию за счет повышения содержания инозитол (1,4,5) трифосфата. EMBO J. 1999; 18: 2734–2745. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]

Молекулярные, функциональные и структурные свойства пролилолигопептидазы Trypanosoma cruzi (POP Tc80), которая необходима для проникновения паразита в клетки млекопитающих

Пролилолигопептидаза

Trypanosoma cruzi

37

Рисунок 6 Стыковка тройного спирального коллагена с POP Tc80

Коллаген (серый) взаимодействует в непосредственной близости от α / β-гидролазы (оранжевая C

α

следовой ленты) и

β-пропеллера (голубая лента C

α

).

интерфейс. Сравнимое предположение было высказано

Rasmussen et al. [45], предполагая, что вход субстрата в активный сайт

дипептидилпептидазы IV, вероятно, осуществляется через боковое отверстие

, расположенное между доменами пептидазы и β-пропеллера,

, что является самым коротким и наиболее подходящим доступным путем для

каталитическая гильза. Подобная гипотеза была экспериментально подтверждена

на свином POP с помощью сайт-специфического мутагенеза, где дисульфидная связь

между пептидазой и β-пропеллерными доменами

предотвращает доступ субстрата к каталитическому карману

[29].Вероятно, β-пропеллер является доменом, ответственным за взаимодействия POP

Tc80 и коллагена, как уже предполагалось для дипептидил

пептидазы IV и FAPα [46,47]. Более того, β-пропеллерные структуры

, включая четырехлопастный β-пропеллер матричной металлопротеиназы

коллагеназ [48], участвуют во множественных межбелковых действиях

[49]. Было показано, что, хотя β-пропеллер

не является каталитическим доменом, он важен для расщепления коллагена

матриксными металлопротеиназами [50].

Мы благодарим D. Engman, C. Deregnaucourt и S. Freitas за критическое чтение этой статьи, A.

Haemers за предоставление ингибиторов, S. Charneau за производство антисыворотки против rPOP Tc80,

и Ana de C

´

assia Vexenat за техническую поддержку. Эта работа была поддержана CNPq

(Conselho Nacional de Desenvolvimento Cienti e Tecnol

´

ogico) и CAPES, Бразилия,

, а также CNRS (гранты GDR 1077 и IFR 63) и MENRT (PRFM).

СПРАВОЧНАЯ ИНФОРМАЦИЯ

1 Монкайо, А. (1999) Прогресс в направлении прекращения передачи болезни Шагаса.

Мем. Inst. Oswaldo Cruz 94, 401–404

2 Giordano, R., Fouts, DL, Tewari, D., Colli, W., Manning, JE и Alves, MJ (1999)

Клонирование гликопротеина поверхностной мембраны, специфичного для инфекционная форма

Trypanosoma cruzi

, обладающая адгезионными свойствами к ламинину. J. Biol. Chem. 274,

3461–3468

3 Ортега-Баррия, Э.и Pereira, M. E. (1992) Вхождение

Trypanosoma cruzi

в эукариотические клетки

. Заразить. Агенты Дис. 1, 136–145

4 Santana, JM, Grellier, P., Schrevel, J. and Teixeira, AR (1997) A

Trypanosoma

cruzi

-секретируемая протеиназа 80 кДа, специфичная для человеческого коллагена типов I и IV.

Biochem. J. 325, 129–137

5 Grellier, P., Vendeville, S., Joyeau, R., Bastos, I.M., Drobecq, H., Frappier, F.,

Teixeira, A. R., Schr

´

evel, J., Davioud-Charvet, E., Sergheraert, C. et al. (2001)

Trypanosoma cruzi

пролилолигопептидаза Tc80 участвует в инвазии клеток нефагоцитов

трипомастиготами. J. Biol. Chem. 276, 47078–47086

6 Vendeville, S., Buisine, E., Williard, X., Schr

´

evel, J., Grellier, P., Santana, J. и

Sergheraert, C. (1999) Идентификация ингибиторов протеазы 80 кДа из

Trypanosoma cruzi

посредством скрининга библиотеки комбинаторных пептидов.

Chem. Pharm. Бык. (Tokyo) 47, 194–198

7 Joyeau, R., Maoulida, C., Guillet, C., Frappier, F., Teixeira, AR, Schr

´

evel, J., Santana, J.

и Grellier, P. (2000) Синтез и активность производных пирролидинил- и тиазолидинилдипептида

в качестве ингибиторов пролилолигопептидазы Tc80 из

Trypanosoma cruzi

.

Eur. J. Med. Chem. 35, 257–266

8 Barrett, A. J. и Rawlings, N.D. (1992) Олигопептидазы и появление семейства олигопептидаз пролил

. Биол. Chem. Hoppe Seyler 373, 353–360

9 Fulop, V., Bocskei, Z. and Polgar, L. (1998) Пролилолигопептидаза: необычный домен бета-пропеллера

регулирует протеолиз. Cell (Кембридж, Массачусетс) 94, 161–170

10 Tardieux, I., Webster, P., Ravesloot, J., Boron, W., Lunn, JA, Heuser, JE и

Andrews, NW (1992 Рекрутирование и слияние лизосом - это ранние события, необходимые

для инвазии трипаносом в клетки млекопитающих.Cell (Кембридж, Массачусетс) 71,

1117–1130

11 Ley, V., Robbins, ES, Nussenzweig, V. и Andrews, NW (1990) Выход

Trypanosoma cruzi

из фагосомы ингибируется повышением pH кислотных отсеков

. J. Exp. Med. 171, 401–413

12 Milhausen, M., Nelson, RG, Sather, S., Selkirk, M. и Agabian, N. (1984) Идентификация

небольшой РНК, содержащей сплайсированный лидер трипаносомы: донор общие 5

последовательностей мРНК трипаносоматид? Cell (Кембридж, Массачусетс.) 38, 721–729

13 Medina-Acosta, E. и Cross, G. A. (1993) Быстрое выделение ДНК из простейших трипаносоматид

с использованием простой процедуры «мини-препарирования». Мол. Biochem. Паразитол. 59, 327–329

14 Кано, М.И., Грубер, А., Васкес, М., Кортес, А., Левин, М.Дж., Гонсалес, А., Дегрейв, В.,

, Рондинелли, Э., Зингалес, B., Ramirez, JL et al. (1995) Молекулярный кариотип клона CL

Бренер выбран для проекта генома

Trypanosoma cruzi

.Мол. Biochem. Паразитол. 71,

273–278

15 Laemmli, U. K. (1970) Расщепление структурных белков во время сборки головки

бактериофага T4. Nature (London) 227, 680–685

16 Cornish-Bowden, A. (1976) Principles of Enzyme Kinetics, Butterworths, London

17 Bal, G., Van der Veken, P., Antonov, D., Lambeir , AM, Grellier, P., Croft, SL,

Augustyns, K. и Haemers, A. (2003) Пролилизоксазолы: сильные ингибиторы пролилолигопептидазы

с антитрипаносомной активностью.Биоорг. Med. Chem. Lett. 13,

2875–2878

18 Томпсон, Дж. Д., Хиггинс, Д. Г. и Гибсон, Т. Дж. (1994) CLUSTAL W: повышение чувствительности

прогрессивного множественного выравнивания последовательностей за счет взвешивания последовательностей,

штрафов за пропуски и веса, специфичных для позиции выбор матрицы. Nucleic Acids Res. 22,

4673–4680

19 Марти-Реном, М.А., Стюарт, А.С., Фисер, А., Санчес, Р., Мело, Ф. и Сали, А. (2000)

Сравнительное моделирование структуры белков генов и геномы.Анну. Rev. Biophys.

Biomol. Struct. 29, 291–325

20 Laskowski, R.A., MacArthur, M. W., Moss, D. S. и Thornton, J. M. (1993) Программа для

проверяет стохимическое качество белковых структур. J. Appl. Кристаллогр. 26, 283–291

21 Хоофт, Р. В., Вринд, Г., Сандер, К. и Абола, Э. Э. (1996) Ошибки в белковых структурах.

Nature (Лондон) 381, 272

22 Эмсли, Дж., Найт, К. Г., Фарндейл, Р. У. и Барнс, М. Дж. (2004) Структура пептида коллагена, связывающего интегрин альфа 2 бета 1

.J. Mol. Биол. 335, 1019–1028

23 Морти, Р. Э., Лонсдейл-Экклс, Д. Д., Морхед, Дж., Калер, Е. В., Ментеле, Р.,

Ауэрсвальд, Е. А., Кутцер, Т. Д., Эндрюс, Северо-Запад и Берли, Б. 1999)

Олигопептидаза B из

Trypanosoma brucei

, новый член развивающейся подгруппы

сериновых олигопептидаз. J. Biol. Chem. 274, 26149–26156

24 Yoshimoto, T., Fischl, M., Orlowski, R.C. и Walter, R. (1978) Постпролиновый фермент

и постпролин дипептидиламинопептидаза.Сравнение двух пептидаз с

высокой специфичностью по остаткам пролина. J. Biol. Chem. 253, 3708–3716

25 Морияма А., Наканиши М. и Сасаки М. (1988) Пролилэндопептидаза из мышц свиней

и ее эндогенные субстраты. J. Biochem. (Токио) 104, 112–117

26

´

Оллис, Д.Л., Чеа, Э., Сиглер, М., Дейкстра, Б., Фролов, Ф., Франкен, С.М., Харел, М.,

Ремингтон, С.Дж., Силман, И. и Шраг, Дж. (1992) Альфа / бета гидролазная складка.

Белок. Англ. 5, 197–211

27 Li, J., Brick, P., O'Hare, MC, Skarzynski, T., Lloyd, LF, Curry, VA, Clark, IM,

Bigg, HF, Hazleman, BL , Cawston, TE et al. (1995) Структура полноразмерной синовиальной коллагеназы свиньи

обнаруживает С-концевой домен, содержащий соединенный с кальцием четырехлопастный бета-пропеллер

. Структура 3, 541–549

c

2005 Биохимическое общество

% PDF-1.3 % 1 0 объект > поток конечный поток эндобдж 2 0 obj > эндобдж 3 0 obj > эндобдж 4 0 obj > / Parent 3 0 R / Contents [22 0 R] / Type / Page / Resources> / Shading> / XObject> / ProcSet [/ PDF / Text / ImageC] / ColorSpace> / Font >>> / MediaBox [0 0 595 . cTLUYgNBs69IҀ ~ 3RTaS7SV \ C_Y @ WRʼ3͇'LМO /] @ "T +] / X +" ["m1, Uq |

UrethanCastings - Жесткий огнестойкий уретановый пластик - TC-894

Огнестойкий уретановый пластик - TC-894 A / B

Жесткий полиуретановый литейный комплекс с твердостью 80 Shore D, огнестойкий

Этот прочный огнестойкий материал по шкале 80 Shore D внесен в список UL с рейтингом воспламеняемости на уровне 1/16 дюйма (1.6 мм). Он отлично подходит для ручного литья или машинного дозирования электронных корпусов или любых деталей, требующих огнестойких характеристик. Время работы 2,5 минуты показывает очень низкую усадку и исключительные физические свойства. Также доступны с разным временем работы как TC-890, 891 и 892 FR REV 1.

  • Соответствует RoHS / REACH
  • Время демонтажа 60 минут
  • Время работы 2,5 минуты
  • Внесено в список UL 94V-0, класс воспламеняемости при толщине 1/16 дюйма (файл № E174527)

График отверждения / тепловое отверждение:

Большинство физических свойств могут быть достигнуты за 5-7 дней при 77ºF (25ºC).Вы можете использовать свой собственный график пост-отверждения, но физические свойства могут отличаться от графика отверждения BJB: 1-3 часа при 77ºF (25ºC) с последующими 16 часами при 180ºF (82ºC). Не превышайте температуру отверждения 200ºF (93ºC). Поддержка детали может потребоваться для предотвращения деформации детали во время процесса термоотверждения.

Хранение

Большинство физических свойств могут быть достигнуты за 5-7 дней при 77ºF (25ºC). Вы можете использовать свой собственный график пост-отверждения, но физические свойства могут отличаться от графика отверждения BJB: 1-3 часа при 77ºF (25ºC) с последующими 16 часами при 180 ºF (82ºC).Не превышайте температуру отверждения 200ºF (93ºC). Поддержка детали может потребоваться для предотвращения деформации детали во время процесса термоотверждения.

Меры предосторожности

Использовать в хорошо вентилируемом помещении. Избегайте контакта с кожей, используя защитные перчатки и защитную одежду. Повторный или продолжительный контакт с кожей может вызвать аллергическую реакцию. Защита глаз чрезвычайно важна. Всегда используйте одобренные защитные очки или защитные очки при работе с этим продуктом.

Если контакт произошел

Кожа: Немедленно промыть водой с мылом.Перед повторным использованием снимите загрязненную одежду и постирайте. Не рекомендуется удалять смолу с кожи растворителями. Растворитель только усилит контакт и сухость кожи. При возникновении аллергических реакций обратитесь за квалифицированной медицинской помощью.

Глаза: Немедленно промойте водой в течение не менее 15 минут. Вызовите врача.

Проглатывание: При проглатывании немедленно вызовите врача. Удалите содержимое желудка с помощью желудочного отсоса или вызовите рвоту только по указанию медицинского персонала.Никогда ничего не давайте человеку без сознания.

Характеристики уровня лавинной опасности по результатам полевых наблюдений за нестабильностью снега

Бакерманс, Л., Джеймисон, Б., Швейцер, Дж., И Хегели, П .: Использование тестов на устойчивость и региональной лавинной опасности для оценки локальной лавинной опасности, Анн. . Glaciol., 51, 176–186, https://doi.org/10.3189/172756410791386616, 2010.

Беллэр С., Джеймисон Б. и Швейцер Дж .: Когда копать? Размышления об оценке устойчивости склонов, Proceedings ISSW 2010, International Snow Science Workshop, Lake Tahoe, CA, USA, 17–22 октября 2010 г., стр. 424–430, 2010 г.

Брейман, Л., Фридман, Дж. Х., Ольшен, Р. А. и Стоун, К. Дж.: Деревья классификации и регрессии, CRC Press, Бока-Ратон, США, 368 стр., 1998.

EAWS: Шкала лавинной опасности, доступно по адресу: https://www.avalanches.org/standards/avalanche-danger-scale/, последний доступ: 30 марта 2021 г.

Фирц, К., Армстронг, Р.Л., Дюран, Ю., Этчеверс, П., Грин, Э. ., McClung, DM, Nishimura, K., Satyawali, PK, and Sokratov, SA: Международная классификация сезонного снега на земле, Технические документы HP-VII по гидрологии, Вклад МАКО № 1, ЮНЕСКО-МГП, Париж, Франция , 90 с., 2009.

Föhn, P .: Lawinen - kurzfristige Gefahrenbeurteilung (Prognose), Schweizerische Zeitschrift für Forstwesen, 145, 59–73, 1994.

Föhn, PMB: Rutschblock как практический инструмент для оценки устойчивости склонов, Симпозиум Давос 1986 - Формирование, движение и эффекты лавины, IAHS Publ., 162, 223–228, 1987.

Фен, PMB и Schweizer, J .: Проверка лавинной опасности в отношении прогнозирования лавины, в: Les apports de la recherche scientifique à la sécurite neige, glace et alanche.Actes de Colloque, Шамони, 30 мая - 3 июня 1995 г., под редакцией: Сивардиер, Ф., АНЕНА, Гренобль, Франция, 151–156, 1995 г.

Жиро, Г., Лафей, Ж. и Пахо, Э. : Evaluation de la qualité de la prevision du risque d'avalanche, Симпозиум в Давосе 1986 - Формирование лавины, движение и эффекты, IAHS Publ., 162, 583–591, 1987.

Haladuick, S .: Связь полевых наблюдений и снежного покрова испытания на опасность схода снежных лавин, магистерская работа, Департамент гражданского строительства, Университет Калгари, Калгари, AB, Канада, 178 стр., 2014.

Харви, С., Мейстер, Р., Лейтхолд, Х. и Альгёвер, Б.: Местная проверка Швейцарского бюллетеня о лавинах, Proceedings ISSW 1998, International Snow Science Workshop, Санривер, Орегон, США, 27 Сентябрь – 1 октября 1998 г., 339–343, 1998 г.

Джеймисон, Б., Хэгели, П., и Швейцер, Дж .: Полевые наблюдения для оценки локальной лавинной опасности в горах Колумбия в Канаде, Cold Reg. Sci. Technol., 58, 84–91, https://doi.org/10.1016/j.coldregions.2009.03.005, 2009.

Джеймисон, Дж. Б.: Испытание на сжатие - через 25 лет, The Avalanche Review, 18, 10–12, 1999.

Ленинг, М., Бартельт, П., Браун, Р.Л., Русси, Т., Стёкли, У. ., и Зиммерли, М .: Расчет модели снежного покрова для предупреждения о лавинах на основе новой сети метеорологических и снежных станций, Cold Reg. Sci. Technol., 30, 145–157, https://doi.org/10.1016/S0165-232X(99)00022-1, 1999.

Meister, R .: Общенациональное предупреждение о лавинах в Швейцарии, Proceedings ISSW 1994, Международный семинар по снежной науке, Snowbird, Юта, США, 30 октября – 3 ноября 1994 г., стр. 58–71, 1995.

Рейтер, Б. и Земмель, К.: Оценка рисков для отдаленных районов на основе характеристик местности и снежного покрова, Материалы ISSW 2018, Международный семинар по науке о снеге, Инсбрук, Австрия, 7–12 октября 2018 г., 1632–1634, 2018 г.

Рейтер , Б., ван Хервейнен, А., Вейтингер, Дж., И Швейцер, Дж .: Связь простых водителей с нестабильностью снега, Cold Reg. Sci. Technol., 120, 168–178, https://doi.org/10.1016/j.coldregions.2015.06.016, 2015.

Reuter, B., Calonne, N., and Adams, E.: Разрушение слабых слоев снега на сдвиг в первые часы после захоронения, Криосфера. Обсудить. [препринт], https://doi.org/10.5194/tc-2018-268, 2019.

Schweizer, J .: Rutschblock 73 - Verifikation der Lawinengefahr, Bergundsteigen - Zeitschrift für Risikomanagement im Bergsport, Oesterreichischer Alpenverein, Австрия , 12, 56–59, 2003.

Schweizer, J .: Verifikation des Lawinenbulletins, in: Schnee und Lawinen in den Schweizer Alpen. Зима 2004/2005. Wetter, Schneedecke und Lawinengefahr.Winterbericht SLF, под редакцией: Pielmeier, C., Aebi, M., and Schweizer, J., Eidg. Institut für Schnee- und Lawinenforschung SLF, Давос, Швейцария, 91–99, 2007.

Швейцер, Дж .: Предсказание уровня лавинной опасности на основе полевых наблюдений, Proceedings ISSW 2010, International Snow Science Workshop, Lake Tahoe, CA, USA, 17–22 октября 2010 г., стр. 162–165, 2010 г.

Schweizer, J. и Jamieson, JB: Свойства снежного покрова для анализа профиля снежного покрова, Cold Reg. Sci. Technol., 37, 233–241, https: // doi.org / 10.1016 / S0165-232X (03) 00067-3, 2003.

Schweizer, J. и Jamieson, J.B .: Подход с использованием пороговой суммы для оценки устойчивости ручных профилей снега, Cold Reg. Sci. Technol., 47, 50–59, https://doi.org/10.1016/j.coldregions.2006.08.011, 2007.

Schweizer, J. and Jamieson, JB: Тесты Snowpack для оценки нестабильности снежного склона, Ann . Glaciol., 51, 187–194, https://doi.org/10.3189/172756410791386652, 2010.

Schweizer, J. и Wiesinger, T .: Интерпретация профиля снега для оценки стабильности, Cold Reg.Sci. Technol., 33, 179–188, https://doi.org/10.1016/S0165-232X(01)00036-2, 2001.

Schweizer, J., Kronholm, K., and Wiesinger, T .: Verification устойчивости снежного покрова региона и лавинной опасности, Cold Reg. Sci. Technol., 37, 277–288, https://doi.org/10.1016/S0165-232X(03)00070-3, 2003.

Schweizer, J., McCammon, I., and Jamieson, JB: Наблюдения за снежным покровом и концепции разрушения для лыжников, вызывающих снежные лавины, покрытые сухим снегом, Cold Reg. Sci. Technol., 51, 112–121, https: // doi.org / 10.1016 / j.coldregions.2007.04.019, 2008.

Schweizer, J., Mitterer, C., Techel, F., Stoffel, A., and Reuter, B .: О связи между возникновением лавины и сходом лавины. уровень опасности, Криосфера, 14, 737–750, https://doi.org/10.5194/tc-14-737-2020, 2020.

Schweizer, J., Mitterer, C., Reuter, B., and Техел, Ф .: Полевые наблюдения нестабильности снега, EnviDat [набор данных], https://doi.org/10.16904/envidat.222, 2021.

Сименойс, Р. и Биркеланд, К.В.: Расширенный тест столбца: эффективность теста, пространственная изменчивость и сравнение с тестом распространения пилы, холодная рег. Sci. Technol., 59, 210–216, https://doi.org/10.1016/j.coldregions.2009.04.001, 2009.

Spiegel, MR, Stephens, LJ: Обзор теории и проблем статистики Шаума, 3-е изд. ., Серия набросков Шаума, McGraw-Hill, New York, 538 pp., 1999.

Statham, G., Haegeli, P., Greene, E., Birkeland, K., Israelson, C., Tremper, B. , Стетхем, К., МакМахон, Б., Уайт, Б. и Келли, Дж .: Концептуальная модель лавинной опасности, Nat. Опасности, 90, 663–691, https://doi.org/10.1007/s11069-017-3070-5, 2018.

Stoffel, L. и Schweizer, J .: Руководство для служб контроля лавин: организация, оценка опасностей и документация - пример из Швейцарии, Proceedings ISSW 2008, International Snow Science Workshop, Уистлер, Британская Колумбия, Канада, 21–27 сентября 2008 г., 483–489, 2008.

Techel, F .: О согласованности и качестве в публичном прогнозировании лавин - управляемый данными подход к проверке прогнозов и уточнению определений лавинной опасности, докторская диссертация, Факультет естественных наук, Цюрихский университет, Цюрих. , Швейцария, 236 с., https://doi.org/10.5167/uzh-199650, 2020.

Techel, F. и Pielmeier, C .: Автоматическая классификация ручных профилей снега по структуре снега, Nat. Опасности Earth Syst. Sci., 14, 779–787, https://doi.org/10.5194/nhess-14-779-2014, 2014.

Techel, F. и Schweizer, J .: Об использовании местных оценок уровня лавинной опасности для региональных проверка прогноза, холодная рег. Sci. Technol., 144, 52–62, https://doi.org/10.1016/j.coldregions.2017.07.012, 2017.

Techel, F., Mitterer, C., Ceaglio, E., Coléou, C., Morin, S., Rastelli, F., and Purves, R.S .: Пространственная согласованность и систематическая ошибка в прогнозах лавины - тематическое исследование в европейских Альпах, Nat. Опасности Earth Syst. Sci., 18, 2697–2716, https://doi.org/10.5194/nhess-18-2697-2018, 2018.

Techel, F., Müller, K., and Schweizer, J .: О важности устойчивости снежного покрова, частотного распределения устойчивости снежного покрова и размера лавины при оценке уровня лавинной опасности, Криосфера, 14, 3503–3521, https: // doi.org / 10.5194 / tc-14-3503-2020, 2020.

van Herwijnen, A. и Jamieson, J.B .: Свойства снежного покрова, связанные с возникновением и распространением трещин, приводящих к сходу снежных лавин, вызванных лыжниками, Cold Reg. Sci. Technol., 50, 13–22, https://doi.org/10.1016/j.coldregions.2007.02.004, 2007.

Уилкс, Д.С.: Статистические методы в атмосферных науках, 3-е изд., Международная серия по геофизике, Academic Press, Сан-Диего, Калифорния, США, 467 стр., 2011.

Zeidler, A./ как [YWF> r Jk Չ '% uH.c ᓟ, p]} 9xE2_ конечный поток эндобдж 11 0 объект > / XObject >>> / Annots [8 0 R 9 0 R] / Parent 5 0 R / MediaBox [0 0 612 792] >> эндобдж 13 0 объект > / Подтип / Ссылка / C [0 0 1] / Граница [0 0 0] / Прямоугольник [63 3,34 103,45 10,74] >> эндобдж 14 0 объект > / Подтип / Ссылка / C [0 0 1] / Граница [0 0 0] / Прямоугольник [63 3,34 103,45 10,74] >> эндобдж 15 0 объект > / Подтип / Ссылка / C [0 0 1] / Граница [0 0 0] / Прямоугольник [63 3,34 103,45 10,74] >> эндобдж 16 0 объект > поток x10Ew⏰i: @ VDI% D ڥ i # 3 '얖 tk ֎ BA) `v-YlWEL & = Sj \ FqyHU] CUox5 |] wa5Y۳Bȥ ) 0su & HI / KT ޿ sk0N8> H конечный поток эндобдж 17 0 объект > / XObject >>> / Аннотации [13 0 R 14 0 R 15 0 R] / Родительский 5 0 R / MediaBox [0 0 612 792] >> эндобдж 19 0 объект > / Подтип / Ссылка / C [0 0 1] / Граница [0 0 0] / Прямоугольник [63 3.RͶ} ERX9 ~ s [d-Ka ܻ ~ ° laYkh ~ P Ջ D) \> RR'A K;> = N˶8 HGoFoFo конечный поток эндобдж 24 0 объект > / XObject >>> / Аннотации [19 0 R 20 0 R 21 0 R 22 0 R] / Родитель 5 0 R / MediaBox [0 0 612 792] >> эндобдж 26 0 объект > / Подтип / Ссылка / C [0 0 1] / Граница [0 0 0] / Прямоугольник [63 3,34 103,45 10,74] >> эндобдж 27 0 объект > / Подтип / Ссылка / C [0 0 1] / Граница [0 0 0] / Прямоугольник [63 3,34 103,45 10,74] >> эндобдж 28 0 объект > / Подтип / Ссылка / C [0 0 1] / Граница [0 0 0] / Прямоугольник [63 3,34 103,45 10,74] >> эндобдж 29 0 объект > / Подтип / Ссылка / C [0 0 1] / Граница [0 0 0] / Прямоугольник [63 3.NLLL˛547 конечный поток эндобдж 32 0 объект > / XObject >>> / Аннотации [26 0 R 27 0 R 28 0 R 29 0 R 30 0 R] / Родительский 5 0 R / MediaBox [0 0 612 792] >> эндобдж 34 0 объект > / Подтип / Ссылка / C [0 0 1] / Граница [0 0 0] / Прямоугольник [63 3,34 103,45 10,74] >> эндобдж 35 0 объект > / Подтип / Ссылка / C [0 0 1] / Граница [0 0 0] / Прямоугольник [63 3,34 103,45 10,74] >> эндобдж 36 0 объект > / Подтип / Ссылка / C [0 0 1] / Граница [0 0 0] / Прямоугольник [63 3,34 103,45 10,74] >> эндобдж 37 0 объект > / Подтип / Ссылка / C [0 0 1] / Граница [0 0 0] / Прямоугольник [63 3.34 103.45 10,74] >> эндобдж 38 0 объект > / Подтип / Ссылка / C [0 0 1] / Граница [0 0 0] / Прямоугольник [63 3,34 103,45 10,74] >> эндобдж 39 0 объект > / Подтип / Ссылка / C [0 0 1] / Граница [0 0 0] / Прямоугольник [63 3,34 103,45 10,74] >> эндобдж 40 0 объект > поток x 퐻 0Ew a I $ 0x @ VDi% D ڥ S ~% k ߖ3- P09ˈ-9b! @LJ {jSp @__ Fo-c cuPw1 {7OV: SJfVZ -tR ~

R͋ | N% 6 s {0p] {qA | fo7 ٛ M> sB конечный поток эндобдж 41 0 объект > / XObject >>> / Аннотации [34 0 R 35 0 R 36 0 R 37 0 R 38 0 R 39 0 R] / Родительский 5 0 R / MediaBox [0 0 612 792] >> эндобдж 43 0 объект > / Подтип / Ссылка / C [0 0 1] / Граница [0 0 0] / Прямоугольник [63 3.34 103,45 10,74] >> эндобдж 44 0 объект > / Подтип / Ссылка / C [0 0 1] / Граница [0 0 0] / Прямоугольник [63 3,34 103,45 10,74] >> эндобдж 45 0 объект > / Подтип / Ссылка / C [0 0 1] / Граница [0 0 0] / Прямоугольник [63 3,34 103,45 10,74] >> эндобдж 46 0 объект > / Подтип / Ссылка / C [0 0 1] / Граница [0 0 0] / Прямоугольник [63 3,34 103,45 10,74] >> эндобдж 47 0 объект > / Подтип / Ссылка / C [0 0 1] / Граница [0 0 0] / Прямоугольник [63 3,34 103,45 10,74] >> эндобдж 48 0 объект > / Подтип / Ссылка / C [0 0 1] / Граница [0 0 0] / Прямоугольник [63 3,34 103,45 10,74] >> эндобдж 49 0 объект > / Подтип / Ссылка / C [0 0 1] / Граница [0 0 0] / Прямоугольник [63 3.34 103,45 10,74] >> эндобдж 50 0 объект > поток x 퐻 0Ew a I40x̅JK | Cb): - pmBArcv-% Yc # OFjcp8O_WFE54Y ~ R + n0 & [ͬ, 49r) r ​​+ B) »0su & II-K

Ярлыки с красной точкой с болтовым креплением, таблица предохранителей 10078

% PDF -1,6 % 204 0 объект > эндобдж 261 0 объект > поток 11.6944444444444458.2669444444444192019-03-07T09: 50: 21.224-05: 00Acrobat Distiller 17.0 (Windows) Eaton8deef074d2a83539f8322faa63934c891fc9a6a5433806Eaton; Буссманн; предохранители низковольтных красных пятен на болтах; даташит 10078; Предохранители ТБ; Предохранители TBC; Предохранители ТС; Предохранители ТФ; Предохранители ТКФ; Предохранители ТКМ; Предохранители TMF; Предохранители ТМ; Предохранители TMT; Предохранители ТТМ; Предохранители TLM; Предохранители ТТ; Предохранители ВПУ; Предохранители TXU Acrobat Distiller 17.0 (Windows) PScript5.dll Версия 5.2.22019-03-07T13: 50: 32.000Z2019-03-07T08: 50: 32.000-05: 002019-03-07T08: 50: 32.000-05: 00application / pdf

  • en_gb
  • 2019-03-08T03: 14: 17.048-05: 00
  • Eaton
  • Eaton Bussmann низковольтные бирки с красной точкой с болтовым креплением, центральные болтовые предохранители, лист данных 10078
  • © 2019 Eaton Все права защищены
  • Eaton
  • Bussmann
  • низковольтные красные пятна в центре бирки с болтовым креплением
  • лист данных 10078
  • Предохранители ТБ
  • Предохранители TBC
  • Предохранители ТС
  • Предохранители TF
  • Предохранители TKF
  • Предохранители ТКМ
  • Предохранители TMF
  • Предохранители ТМ
  • Предохранители TMT
  • Предохранители ТТМ
  • Предохранители TLM
  • Предохранители ТТ
  • Предохранители TLU
  • Предохранители TXU
  • Ярлыки с красной точкой на болтах, лист данных предохранителей 10078
  • uuid: 8768299a-346d-4f80-be67-0eb080115d15uuid: 7af16fe9-82c9-4114-b767-36d51fc09e86http: // www.eaton.com/us/en-us/company/policies-and-statements/terms-and-conditions.html/index.htm
  • eaton: таксономия продуктов / защита электрических цепей / предохранители и держатели предохранителей / предохранители bussmann-low-voltage-british-standard-bs88
  • eaton: страна / европа / ie
  • eaton: страна / европа / gb
  • eaton: language / en-gb
  • eaton: ресурсы / технические ресурсы
  • eaton: ресурсы / технические ресурсы / технические данные
  • конечный поток эндобдж 197 0 объект > эндобдж 199 0 объект > эндобдж 200 0 объект > эндобдж 201 0 объект > эндобдж 71 0 объект > эндобдж 75 0 объект > эндобдж 79 0 объект > эндобдж 83 0 объект > эндобдж 86 0 объект > эндобдж 90 0 объект > эндобдж 104 0 объект > эндобдж 119 0 объект > эндобдж 123 0 объект > эндобдж 124 0 объект > поток hZr} W # sT | $ vL.

    Добавить комментарий

    Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *