1А 20 характеристики: 1А-20 ЛОМО – AudioArt.ru

alexxlab | 14.12.1979 | 0 | Разное

Благодарность Станиславу за отдельные фото.

 

 

Источник

58, 1

Содержание

Мечта о динамиках ЛОМО

Левчук Александр Николаевич©

    Данная акустика завода ЛЕНКИНАП уже давно не выпускается, для некоторых динамики покажутся старым хламом, для других большими и не нужными головками. Но многие аудиофилы, те кто начинал строить именно «свой звук » начинали делать акустику на основе этих динамиков завода ЛОМО. Кто пошел дальше, кто-то остановился именно на динамиках Кинап.

Самые первые были: динамики ДАТ-4, затем динамики 4А-15, а после динамики 4А-16. Чуть позже выпустили динамики 4А- 18, который устанавливался в акустику Импульс 50АС- 001.
Также 4А-18 устанавливался в ламповый радиоприемник Нева 49, а также в 49й.
После появился динамик 4А-18А, и динамики на кобальте 4А- 26.
Кстати, выпускали весьма редкий динамик 4А- 27.
Звукоинженеры таже выпускали отличные ВЧ головки, а именно: динамик 1А-7, мощный динамик 1А-13, который очень востребован среди аудиофилов. Выпускал Кинап также динамики 2А-8 исправленный динамик 2А-9, диффузором похож чем то Визатон 200 B, хорошие и очень редкие динамики ГДД-8, динамик ГДВ-2, а также динамики 1А-10. Несмотря ни на что ЛОМО выпускали рупор нч 6А-6, акустика очень больших размеров рупор НЧ 6А-7 комплектовался 2 динамиками 2А-8 или же 2А-9.
Делали колонки фазоинверторного типа 14А-11 комплектовали динамиком 2А-9. Даже делали рупора ВЧ 5А-5 комплектовали динамиком 1А-13, рупор ВЧ 5А-6 комплектовали 2 динами 1А-13, рупор ВЧ 5А-7 комплектовали динамиками 1А-13.
Затем на Кинап начали выпускать знаменитые динамики 4А-28У-4.
И не менее знаменитый ВЧ динамик 1А-16 с рупором 1А-16 ЛОМО. После него выпустили легендарный и редкий 1А- 17 Ленкинап.
Ну а такие динамики как 2А-11 и 2А-12 это настоящая удача для аудиофила, после них выпускать динамики 2А- 12У4 и 2А- 14, ну а рупор 2А- 14 большая редкость вообще увидеть. Кстати, 2А- 18У4 и динамик 2А- 20 напоминают Гудмансы. Венцом творений стал знаменитый «ширик» 4А- 32У- 4 устанавливали его в акустике ЛОМО 25А- 78У- 4

4А28+2гд36 в рупоре TQWT

«Внешне огромные и сделаны на совесть, звук отличный и позволит построить акустику на любой вкус» — вот так я бы охарактеризовал в нескольких словах динамики Кинап. Я и сам начинал свой звук с 4А28. Конечно, вы можете поискать намного лучше широкополосных динамиков, но по соотношению цена/качество они вне конкуренции. Позже когда увидел 4А32, был немного шокирован, на фото они были поменьше. Они невероятно огромные! Но когда услышал с ламповым усилителем, то окончательно «влюбился» в 4 А 32. Звук очень масштабный, детальный. Но увы, время берет свое, винтажных динамиков ЛОМО становится все меньше, год за годом. Мне повезло слышал, видел, трогал большинство из них. 
«Так в чем их прелесть?» — спросите вы.
«В их высокой чувствительности, ну для лампы они хороши» — отвечу я проще. После них невозможно слушать другую акустику (например, с-90). При прослушивании сразу привлекают детальность, вокал, в вашей комнате появляется жизнь, этот живой звук широкополосных динамиков заполняет все вокруг.

Я лично слушаю в щитах или ОЯ — все четко, точно, слышен каждый шорох. Эта сумасшедшая детальность (когда только сделал себе АС на этих динах) заставляла нас бегать прислушиваться что происходит за окном или за дверью или за в другой комнате, но в реальности эти звуки воспроизводили именно эти динамики 4а32, потом к звуку привыкли.

динамик 4а28

Кстати, попытки продолжить повторить легендарные динамики были у Ноэма. Выпустив целую серию подобных динамиков, они подняли волну обсуждений в аудиофильских-форумах. Между прочим, до сих пор делают. Но о них я расскажу в другой статье. Вы до сих пор думаете купить или нет? Даже и не думайте, покупайте, пилите корпуса под 4а32, либо заказывайте у мебельщиков. Рупора, открытые ящики, щиты — схемы коробов много разных скачивайте на здоровье. Обычно делают рупора это отличный и проверенный способ не ошибиться в расчетах. Изготовление очень просто и несложно. Российские аудио-форумы переполнены обсуждениями популярных динамиков 4а28 и 4а32. Не буду вдаваться в большие подробности этих высококлассных динамиков, скажу лишь одно: «Ламповый усилитель с хорошей «комплектухой» широкополосные динамики раскроет должным образом, не забывайте также про хороший источник, встройка звуковая не пойдет. » Любителей «компо-колоночек» они точно поразят своим правильным звуком. Между прочим, после прослушки такого звука, желание вернуться к убогому желания нет никакого. Внутреннее устройство динамиков Ломо просто отличное, несмотря на «винтажность» конструкция впечатляет, можно ремонтировать это вам не одноразовые современные, вот где нужно поучиться китайским звукоинженерам!

Прослушивание динамиков Кинап Ломо выявляет в них тягу к джазу и всей той музыки где есть живые инструменты. Звуковая сцена огромна и достаточно объемно и действительно показывает все инструменты в стерео.

Рекомендую эти динамики для всех тех, кто ищет свой звук или желает найти лучший из имеющегося. Помню первое свое знакомство с 4а28, и большое эмоциональное потрясение от звука этих динамиков которые стояли в рупорах работали они в связке с ламповым усилителем. Благодаря 4а28 я понял какой мне нужен звук. Впрочем, я иногда слушаю эти широкополосные динамики в щитах + ламповые усилители от КБ Лампобарон.

ЦАП Singxer SDA-2

Между прочим, Звук очень детальный, очень живой, очень точный, постоянно находишь нечто новое. Но все же им удается проиграть вокал — просто упиваешься, закрываешь глаза и кайфуя наслаждаешься отличным голосом певца/певицы(если он конечно есть) общим звучанием, пропадает всякое желание думать есть ли бас, хороши ли сч или вч и т.д. Слушаешь, кайфуешь и не думаешь ни о чем. Рекомендую к покупке.

Ламповый фонокорректор ЗМ №2

Чемодан Xiaomi 90 Points Travel Suitcase 1А 20″ (черный) (1059): характеристики и инструкция

Чемодан Xiaomi 90 Points Travel Suitcase 1А 20″ (черный) (1059)

Выбор более 2 млн человек

Более 98% положительных отзывов

Любой человек сможет обойти весь свет, если выберет правильного спутника. Уже более 2 миллионов человек отправились в путешествие с чемоданами 90 points, превосходное качество исполнения которых в высшей степени оценили 98% пользователей.

Ваша надежная опора и поддержка

Корпус чемодана выполнен из особого поликарбоната Makrolon™, произведенного немецким концерном Bayer. Трёхслойная структура материала обеспечивает устойчивость к сжатию и давлению, а также защищает его поверхность от царапин. Такой материал отлично подходит для чемоданов за счёт высочайшей прочности и упругости, позволяющей смело идти вперёд, несмотря ни на что.

Особый узор не боится царапин

Поверхность чемодана покрыта мелким узором из точек, напоминающих пчелиные соты. Такой узор не только выгодно выделяет чемодан на фоне остального багажа, но и делает его устойчивым к царапинам. Специальные вогнуто-выпуклые продольные канавки служат ребрами жёсткости, равномерно распределяя нагрузку и предотвращая деформацию чемодана.

Строжайший контроль качества

Показатели превосходят требования лучших стандартов

90 points прекрасно понимает, что чемодан может подвергаться самым суровым нагрузкам, поэтому прочности и устойчивости к нагрузкам уделяется особое внимание. Разработка чемоданов ведется со строгим соблюдением государственных стандартов, чтобы у каждого пользователя остались только положительные впечатления о продуктах 90 points.

Замок с международной сертификацией

Чемодан 90 points оснащен кодовым замком с сертификацией TSA. Таможенные работники могут открыть такой замок для осмотра чемодана только специальным ключом, не причиняя вреда ни замку, ни самому чемодану.

Колесики вращающиеся на все 360°

Прочные и упругие колесики из ТПЭ обеспечивают плавное движение без вибрации даже под нагрузкой. Конструкция колесиков с плотным расположением элементов предотвращает тряску и шум, обеспечивая долгий срок службы и плавное движение.

Надежная выдвижная ручка никогда не подведет

Выдвижная ручка выполнена из прочного алюминиевого сплава и имеет 4 вертикальных положения. Ее конструкция обеспечивает необходимый запас прочности и долговечности.

Грамотная организация внутреннего пространства

В 20-дюймовом чемодане предусмотрены специальные перегородки и многофункциональные сетчатые карманы, позволяющие разложить одежду и прочие вещи по своим местам. В 26-дюймовом чемодане крестообразный ремень помогает закрепить вещи на одном месте, максимально используя доступное пространство.

Размеры чемодана

ББП РАПАН-20: фото, характеристики, сертификаты

Код товара: 354

12 В, 2 А, металлический корпус под АКБ 7 Ач, защита АКБ, защита выхода от КЗ и перегрузки.

Гарантия: 1.5 года

Экономичные источники бесперебойного питания серии «РАПАН» предназначен для электропитания РЭА номинальным напряжением 12 В.

Область применения источника — обеспечение бесперебойного питания систем охранно-пожарной сигнализации, видеонаблюдения и других устройств.

Технические характеристики ББП РАПАН-20

1Материал корпусасталь
2Напряжение питающей сети 220 В, частотой 50±1 Гц, с пределами изменения, В187…242
3Ток нагрузки номинальный, А1,7
4Ток нагрузки кратковременно и при питании от АКБ, не более, А2
5Значение выходного напряжения, В9,5…14
6Тип АКБ: кислотный необслуживаемый, номинальным напряжением 12 В
7Рекомендуемая ёмкость АКБ, Ач7
8Количество АКБ, шт.1*
9Средний ток заряда АКБ, А0,1
10Напряжение на клеммах АКБ, при котором происходит автоматическое отключение нагрузки, В10…11,6
11Мощность, потребляемая от сети, без нагрузки, ВА, не более1
12Диапазон рабочих температур, °С-10…+40 **
13Относительная влажность воздуха при 25 °С, %, не более80
14Степень защиты оболочки по ГОСТ 14254-2015IP20
15Габаритные размеры ШхГхВ, мм, не более
без упаковки
158х150х82
в упаковке158х150х82
16Масса, НЕТТО (БРУТТО), кг (не более)0,3 (0,4) 
 ВНИМАНИЕ! Не допускается наличие в воздухе токопроводящей пыли и паров агрессивных веществ (кислот, щелочей и т. п.).
* АКБ в комплект поставки не входит. 
** Если изделие эксплуатируется при температуре выше +40 °C, то при увеличении температуры на 5 °C мощность нагрузки следует уменьшить на 12%, запрещается эксплуатация изделия при температуре выше +50 °C.

12 В, 2 А, металлический корпус под АКБ 7 Ач, защита АКБ, защита выхода от КЗ и перегрузки.

Гарантия: 1.5 года

Код товара: 354

Цена с НДС

1 130 1 050

Экономичные источники бесперебойного питания серии «РАПАН» предназначен для электропитания РЭА номинальным напряжением 12 В.

Область применения источника — обеспечение бесперебойного питания систем охранно-пожарной сигнализации, видеонаблюдения и других устройств.

Технические характеристики ББП РАПАН-20

1Материал корпусасталь
2Напряжение питающей сети 220 В, частотой 50±1 Гц, с пределами изменения, В187…242
3Ток нагрузки номинальный, А1,7
4Ток нагрузки кратковременно и при питании от АКБ, не более, А2
5Значение выходного напряжения, В9,5…14
6Тип АКБ: кислотный необслуживаемый, номинальным напряжением 12 В
7Рекомендуемая ёмкость АКБ, Ач7
8Количество АКБ, шт.1*
9
Средний ток заряда АКБ, А
0,1
10Напряжение на клеммах АКБ, при котором происходит автоматическое отключение нагрузки, В10…11,6
11Мощность, потребляемая от сети, без нагрузки, ВА, не более1
12Диапазон рабочих температур, °С-10…+40 **
13Относительная влажность воздуха при 25 °С, %, не более80
14Степень защиты оболочки по ГОСТ 14254-2015IP20
15Габаритные размеры ШхГхВ, мм, не болеебез упаковки158х150х82
в упаковке158х150х82
16Масса, НЕТТО (БРУТТО), кг (не более)0,3 (0,4) 
 ВНИМАНИЕ! Не допускается наличие в воздухе токопроводящей пыли и паров агрессивных веществ (кислот, щелочей и т. п.).
* АКБ в комплект поставки не входит. 
** Если изделие эксплуатируется при температуре выше +40 °C, то при увеличении температуры на 5 °C мощность нагрузки следует уменьшить на 12%, запрещается эксплуатация изделия при температуре выше +50 °C.

Двигатель УТД 20: характеристики, неисправности и тюнинг

Двигатель УТД 20 – это бескомпрессорный четырехтактный V-образный шестицилиндровый дизель, который имеет угол развала блока цилиндров в 120 градусов.

 

Этот мотор развивает мощность в 300 лошадиных сил и устанавливается на ряд военной техники, а с небольшими доработками достаточно часто применяется на грузовиках, КамАЗах и других разновидностях тяжелой спецтехники. Благодаря своей отличной надежности и простоте эксплуатации он получил сегодня широкое распространение и пользуется любовью у автовладельцев.

Технические характеристики

Скачать .xls-файл

Скачать картинку

Отправить на email

mail

ПАРАМЕТРЫЗНАЧЕНИЕ
Материал блока цилиндровчугун
Система питанияПрямой впрыск
ТипV-образный
Рабочий объем, л15.9
Максимальный крутящий момент980 Н·м, при 1600 об/мин
Мощность, л. с. при 2600 об/мин300
Количество цилиндров6
Количество клапанов на цилиндр2
Порядок работы цилиндров1л-1п-2л-2п-3л-3п
Ход поршня, мм150
Диаметр цилиндра, мм150
Степень сжатия15.8
Охлаждениежидкостное
ТопливоДЗ, ДА, ТС-1
Расход топливаНе более 175 литров в час
Размеры (длина/ширина/высота), мм790/1150/742
Вес, кг665
Гарантийный срок службы, ч500

Двигатель устанавливается на БМП-1, а его модификация УТД-20С1 на БМП-2.

Описание

Это чрезвычайно надежный силовой агрегат с жидкостным охлаждением, который использует систему непосредственного впрыска топлива. Дизельный двигатель отличается простотой в использовании, он надежен и долговечен. Отметим неприхотливость этого силового агрегата к качеству используемого топлива.

Одной из особенностей этого силового агрегата является использование в нём не подшипников скольжения в коленчатом валу, а подшипников качения. Подобная конструкция позволила несколько упростить эксплуатацию этого силового агрегата, обеспечивая его максимальную надежность.

Рабочий объем двигателя УТД 20 составляет 15,9 литров, благодаря чему мотор отличается великолепными тяговыми характеристиками, что позволяет применять его на танках и тяжелых машинах пехоты БМП-1. В последующем этот силовой агрегат с минимальными изменениями применялся на КамАЗах и другой спецтехнике. Подобное решение позволяет существенно повысить надежность используемых грузовых автомобилей, а сам мотор отличается простотой в ремонте и великолепной надежностью.

Двигатели УТД 20 не имеют системы слива топлива, так называемой обратки, что характерно для большинства других дизельных моторов, предназначенных для установки на тяжёлую спецтехнику или же в военных машинах БМП-1.

Отметим отсутствие системы пуска двигателя в холодное время года, что несколько усложняет эксплуатацию автомобиля зимой, когда могут отмечаться проблемы с замерзанием дизельного топлива в двигателе. Необходимо сказать, что подобная система появилась на модификации данного двигателя под индексом УТД-20С1. В данном моторе используется факельный безфорсуночный подогрев впускного воздуха, что позволяет выполнять пуск двигателя даже при температурах окружающей среды ниже минус 20 градусов.

Сам силовой агрегат изготовлен из высококачественного металлического сплава, который отличается устойчивостью к перегреву. Поэтому имеется возможность эксплуатации данного силового агрегата в условиях повышенных нагрузок.

Модификации

Из модификаций можно отметить, разве что модель УТД-20С1, которая представляла собой модернизированный вариант силового агрегата, оснащённый обраткой, что позволяло полностью подготовить двигатель к зиме, слить с него топливо и провести качественную консервацию. Кроме всего прочего, наличие у данной модификации системы подогрева топлива позволяло эксплуатировать транспортное средство даже в холодное время года. Более каких-либо существенных отличий между двумя этими модификациями двигателей не было.

Техническое обслуживание

Если же говорить о сервисном обслуживании двигателя УТД 20, то следует отметить простоту выполняемых работ, что существенно упрощает эксплуатацию техники. Раз в тысячу мото-часов работы рекомендуется провести замену масла, а по прошествии 3000 мото-часов эксплуатации мотора нужно провести очистку топливной системы, вскрыть головку блока цилиндров и провести очистку клапанной системы.

Более каких-либо серьезных сервисных работ проводить не требуется. В том случае, если двигатель не эксплуатируется в зимнее время года, то необходимо слить топливо и все технические жидкости. На модификации УТД 20 данные работы, по причине отсутствия обратки, представляли определённые сложности.

Неисправности

НЕИСПРАВНОСТЬПРИЧИНА
Двигатель отказывается заводиться.Причиной подобного является неправильная работа топливной системы. Следует определить подается ли топливо в цилиндры, после чего можно вскрывать двигатель и проводить глубокую диагностику повреждения мотора.
Появилась течь из-под прокладки клапанной крышки.В данном случае ремонт заключается во вскрытии мотора и замене поврежденной прокладки.
Мотор дымит и потребляет много масла.Причиной являются прогоревшие поршни колец, что и приводит к существенному увеличению расхода масла.
Мотор потерял часть своей мощности, плохо держит обороты.Причиной может стать выход из строя топливного насоса высокого давления, который не обеспечивает качественную подачу топлива. Это неремонтопригодный элемент и требуется его полная замена.

Тюнинг

Возможности по увеличению мощности этого силового агрегата существенно ограничены. Двигатель и так максимально форсирован, поэтому любые изменения, в том числе замена ТНВД или уже расточка блока цилиндров неизменно отрицательно скажется на показателях надежности этого силового агрегата.

07647-1A,20(3000-6000K) Бра Рапис бронза Led 12W

Бра Рапис бронза w22,5*15 h40 LED 1*12W (3000-6000K)

Тип
ТипБра и подсветки
Тип светильникаЛофт
Габариты
Высота (см)30
Длина (см)22.5
Размеры потолочных чашd12 h4
Ширина (см)15
Материал
Mатериалметалл
Цвет покрытияЧерный/бронза
Цвет стеклаБелый
Прочее
Гарантия1 год
Количество ламп/тип лампLed 12W (3000-6000K)
Назначение использованияДля гостиной
Площадь освещения3
Световой поток, люмен1080
Тип лампLED
Производитель
Cтрана происхожденияКитай

Характеристики товаров раздела “Электровелосипеды взрослые”

Электровелосипед Hoverbot CB-3
Технические характеристики:  Количество скоростей: 8 Диаметр колёс: 27.5″ Тип рамы    Универсальный Тип тормозов    Дисковые механические Дополнительно    скорость до 25 км/ч Запас хода от аккумулятора    50км Аккумулятор    36V, 17AH,…
Характеристики подробно

Электровелосипед (Велогибрид) Eltreco BamBoo (500w 48V/11,6 Ah), электрофэтбайк
Nirvana – взрыв эмоций обеспечен! Перед вами самый смелый, быстрый и безудержный велогибрид, какой только можно себе представить – ведь он сделан в Италии. Современный и модный – ведь его рама сделана из настоящего бамбука. Практичный и удобный – на больших широких колесах, которые обеспечат его владельцу бескомпромиссную проходимость и комфорт на любых дорогах….
Характеристики подробно

Электровелосипед E-motions Wind Runner 6919M 750w (48v/10,4Ah)
Характеристики E-motions Wind Runner 6919M 750w: Мощность 750w 48В Центральный мотор (находится в блоке педалей) Максимальная скорость до 50 км/ч Пробег на одной зарядке: до 50 км. Алюминиевая рама Колеса: 26 дюймов Передний амортизатор – телескопическая вилка Нагрузка до 120 кг …
Характеристики подробно

Электровелосипед Haibike (2017) Sduro AllMtn 7.0 250w (36V/ 13.4Ah)
Рама: 45 см Рама: aluminium 6061, Gravity Casting, hydroformed, thru-axle M12 (1.75) x 148mm, disc brake Post Mount, Travel: 150mm Двигатель: Yamaha PW-X SyВынос, 250W, 80Nm, 25km/h Дисплей: Yamaha, интегрирован в вынос Батарея: Yamaha Lithium Ion Зарядное устройство: Yamaha quick charger 4A Вилка: Magura Boltron, air, Travel: 150mm, aluminium steerer tube 1…
Характеристики подробно

Электровелосипед Kjing Single
ХАРАКТЕРИСТИКИ: Мощность двигателя Вт 250 Привязка к товарам Велогибрид Kjing Spoke …
Характеристики подробно

Электровелосипед HIPER Engine BS262
Модель: BS262 Аккумулятор: 400 Вт·ч. Бесщеточный мотор: 350 Вт Макс.скорость км/ч: 25 Номинальный пробег при 80кг.: 30-40 Размер колес , дюймов: 14 Яркая новинка 2020 года – HIPER ENGINE BS262. Электровелосипед с внешностью скутера и повышенной мощностью. Прекрасное…
Характеристики подробно

Электровелосипед Haibike (2017) Sduro HardNine 7.0 (250w 36V/ 13.4Ah)
Рама: 45 см Рама: aluminium 6061, hydroformed, Gravity Casting, thru-axle M12 (1.75) x 148mm, disc brake Post Mount Двигатель: Yamaha PW-X SyВынос, 250W, 80Nm, 25km/h Дисплей: Yamaha integretad in Вынос Батарея: Yamaha Lithium Ion Charger: Yamaha quick charger 4A Вилка: FOX Rhythm 34 Lockout, air, Travel: 110mm, aluminium…
Характеристики подробно

Электровелосипед E-motions Fly 500W 2021 года
    E-motions Fly – городской складной электровелосипед с мощным 500-ваттным двигателем и небольшими 20-дюймовыми колесами. Этот велогибрид представляет собой очень удобный в условиях города транспорт, спортивный снаряд и средство для развлекательных прогулок «в одном флаконе». Батарея:36В 8,8Ач Запас хода (км): До 40 …
Характеристики подробно

Электровелосипед (Велогибрид) Eltreco Air Volt GLS 500W
 Электровелосипед Eltreco Air Volt I поражает сочетанием лаконичности и практичности дизайна. В его конструкции нет ни одной лишней детали. Каждый элемент используется на 100%, и при этом электровел просто привлекателен внешне. Велогибрид Eltreco Air Volt GLS идеален для городских и загородных прогулок, а также для поездок на большие…
Характеристики подробно

Электровелосипед (Велогибрид) Eltreco Ultra Ex Plus 500W (36V/ 16Ah)
Характеристики Eltreco Ultra Ex Plus 500W: Максимальная скорость 25-40 км/ч Пробег До 70 км Тормоза передние Дисковые, механические. Тормоза задние Дисковые, механические. Батарея 36В/ 16 Ач Двигатель 36В, 500Вт, задний привод Контроллер 36V. 500W Конструкция Жесткая Вес 32 кг Максимальная…
Характеристики подробно

Электровелосипед Volteco Urban 350W (36V/ 6,6Ah)
    Название модели – Urban – точно отображает главную идею этого велогибрида. В его конструкции упор сделан на сочетание практичности и компактности – то, что требуется от городского велотранспорта. Конструкция Первое что обращает на себя внимание при знакомстве с этим электровелосипедом – необычно маленькие, но…
Характеристики подробно

Электровелосипед WELLNESS CROSS RACK (750W 36v/15Ah)
Характеристики WELLNESS CROSS RACK 750W: Тип: Электровелосипед Конструктив: Складные Особенности: Внедорожный Возможность перевозки: багажнике…
Характеристики подробно

Электровелосипед BESV Panther PS1 250W (36V/ 6.6Ah)
Модель Panther PS1 7G (2016) Цвет (основной) белый желтый красный Бренд BESV Страна Тайвань Класс велосипеда …
Характеристики подробно

Электровелосипед Haibike (2017) Xduro Trekking S 5.0 (250w 36V/ 11Ah)
Рама: 45 см Рама: aluminium 6061, hydroformed, Gravity Casting, quick-release 5 x 135mm, disc brake Post Mount Двигатель: Bosch Performance Speed, 350W, 60Nm, 45km/h Дисплей: Bosch Intuvia Батарея: Bosch PowerPack Charger: Bosch quick Charger 4A Вилка: SR Suntour NCX-E45 LOR Lockout, air, Travel: 60mm, alumi­nium steerer tube 1 1/8″ — 1…
Характеристики подробно

Электровелосипед Haibike (2017) Sduro AllMtn 6.0 250w (36V/ 13.4Ah)
Рама: aluminium 6061, Gravity Casting, hydroformed, thru-axle M12 (1.75) x 148mm, disc brake Post Mount, Travel: 150mm Двигатель: Yamaha PW-X SyВынос, 250W, 80Nm, 25km/h Дисплей: Yamaha LCD Батарея: Yamaha Lithium Ion Зарядное устройство: Yamaha quick charger 4A Вилка: Magura Boltron, air, Travel: 150mm, aluminium steerer tube 1 1/8″ — 1 1/2″…
Характеристики подробно

Электровелосипед (Велогибрид) Eltreco Wave VIP 350W (48V/ 11Ah)
    Eltreco Wave VIP (Волна) – один из вариантов городских «складников», производимых компанией Eltreco. Электровелосипед имеет очень низкую раму, изогнутую волной. Перед кареткой она разъединяется в шарнире, снабженном эксценриковым фиксатором, и складывается пополам. Габаритная ширина уменьшается благодаря складывающимся рулю и…
Характеристики подробно

Электровелосипед RLE Highland XT 2018
LE Bike – сверхлегкий и прочный электровелосипед на титановой раме, сделанный в РОССИИ!           Электровелосипед с амортизационной вилкой на колесах размера 27,5 дюймов.  Пробег электровелосипеда в режиме внедорожной езды при легком педалировании от 40 до 70 км. Рама Титан – аэрокосмический…
Характеристики подробно

Электровелосипед GreenCamel Трайк-20 Складной
Конфигурация: Назначение: прогулочный складной; Рама: алюминиевый сплав; Мотор: бесщеточный редукторный 500W 48V; Колёса: R20 спицевые магниевый сплав; Аккумулятор: 48V 15 Ah литиевый, 48V 10 Ah литиевый Время зарядки: 6-8 часов; Максимальная скорость: 30 км/ч; Максимальная нагрузка: 120 кг; Пробег: 35-45…
Характеристики подробно

Электровелосипед Haibike (2017) Xduro HardNine Carbon 8.0 (250w 36V/ 13.4Ah)
Рама: 45 см Рама: carbon, high-modulus UD-Monocoque, thru-axle M12 (1.75) x 142mm, disc brake Post Mount Двигатель: Bosch Performance CX, 250W, 75Nm, 25km/h Дисплей: Bosch Intuvia Батарея: Bosch PowerPack Charger: Bosch quick charger 4A Вилка: SR Suntour Axon RL-R, air, Travel: 100mm, aluminium steerer tube 1 1/8″ — 1 1/2″ tapered,…
Характеристики подробно

Электровелосипед Charger-360 720w (48V/ 7.5Ah)
Электровелосипед Charger 360 — универсальный железный конь на все случаи жизни! Он достаточно быстр для передвижения по городу без использования общественного транспорта и имеет приличный запас хода! Благодаря складному механизму, его всегда можно провезти в метро или багажнике автомобиля. Редукторный тип мотор колеса отличается малым весом, высокой тягой и…
Характеристики подробно


Новости 1 – 20 из 375
Начало | Пред. | 1 2 3 4 5 | След. | Конец

Личность, субъективное благополучие и ген рецептора серотонина 1a обыкновенных мартышек (Callithrix jacchus)

Abstract

Исследования личностных качеств обыкновенных мартышек ( Callithrix jacchus ) показывают, что существует пять или шесть конструктов – «Общительность», «Доминирование», «Невротизм», «Открытость» и две, связанные с сознательностью. В настоящем исследовании была предпринята попытка определить, выявило ли наше более раннее исследование лиц, размещенных в лабораториях, только три – доминирование, общительность и невротизм – из-за небольшого количества различий между субъектами.Для этого мы увеличили размер нашей выборки с 77 до 128. Кроме того, мы установили надежность и валидность оценок и были ли связаны полиморфизмы, связанные с рецептором серотонина 1a, с личностью. Мы обнаружили факторы «Общительность», «Доминирование» и «Негативное влияние», которые напоминают три области, обнаруженные в предыдущих исследованиях, включая наше. Мы также обнаружили фактор открытости и импульсивности, последний из которых имел некоторое сходство с сознательностью, и два фактора более высокого порядка, просоциальность и смелость.В ходе дальнейшего анализа мы не могли исключить возможность того, что просоциальность и смелость представляют собой более высокий уровень организации личности. Корреляции между личностными факторами и благополучием соответствовали определениям факторов. Значимых ассоциаций между личностью и генотипом не выявлено. Эти результаты позволяют предположить, что структура личности обыкновенной мартышки варьируется в зависимости от параметров выращивания или содержания, которые еще не исследовались систематически.

Образец цитирования: Weiss A, Yokoyama C, Hayashi T, Inoue-Murayama M (2021) Личность, субъективное благополучие и ген рецептора серотонина 1a у обыкновенных мартышек ( Callithrix jacchus ).PLoS ONE 16 (8): e0238663. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0238663

Редактор: Николас Чалин, Университет Сан-Паулу, БРАЗИЛИЯ

Поступила: 24 августа 2020 г .; Принята к печати: 28 июня 2021 г .; Опубликован: 9 августа 2021 г.

Авторские права: © 2021 Weiss et al. Это статья в открытом доступе, распространяемая в соответствии с условиями лицензии Creative Commons Attribution License, которая разрешает неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе при условии указания автора и источника.

Доступность данных: Данные, необходимые для воспроизведения анализов, доступны на веб-сайте Open Science Foundation: https://osf.io/ysrja/.

Финансирование: Эта работа была поддержана грантом AMED номер JP20dm0307006 для TH, номерами грантов KAKENHI 19H04904 и 20H00420 для MI-M, а также 18H05090 и 18K06372 для CY. Финансирующие организации не играли никакой роли в дизайне исследования, сборе и анализе данных, принятии решения о публикации или подготовке рукописи.

Конкурирующие интересы: Авторы заявили, что конкурирующих интересов не существует.

Введение

Мартышки обыкновенные ( Callithrix jacchus ) – это небольшие обезьяны Нового Света, которые населяют широкий спектр местообитаний в Южной Америке [1,2]. Из-за своего размера, быстрого жизненного цикла и других физических и физиологических характеристик обыкновенные мартышки становятся все более популярными моделями животных в биомедицинских исследованиях [3], хотя некоторые [например, 4] подчеркнули недостатки моделей мартышек.

Обыкновенные мартышки также становятся популярными объектами исследований познания и личности.Частично эта тенденция была вызвана открытием того, что обычные мартышки демонстрируют поведение и способности, которые когда-то считались исключительными для людей и человекообразных обезьян. Обычные мартышки, например, демонстрируют высокий уровень спонтанного кооперативного поведения [5,6] и могут различать третьи стороны, которые отвечают и не отвечают взаимностью [7]. Считается, что эти и другие способности развились у обычных мартышек, потому что они, как и другие каллитрихиды, но в отличие от других нечеловеческих приматов, являются совместными заводчиками [см. 8 для обзора].У видов, которые являются кооперативными заводчиками, а не рассеиваются и спариваются, взрослые братья и сестры и потомки спаривающихся пар часто остаются с семейной единицей, чтобы помочь вырастить потомство, и таким образом задерживают или отказываются от воспроизводства [9].

Исследования обыкновенных мартышек выявили наличие устойчивых личностных черт [10,11], хотя одно исследование показало, что эти черты можно изменить с помощью социальной помощи [12]. Исследования также показали, что черты личности обыкновенных мартышек наследуются и связаны с благополучием [13], связанными с силой латеральности [14] и потенциалом связывания переносчиков серотонина в головном мозге [15].Более того, личностные переменные, основанные на поведенческих наблюдениях, и переменные, основанные на оценках, коррелированы, когда оба оценивают один и тот же психологический конструкт, и некоррелированы, когда они не оцениваются соответственно [16,17]. Однако, по крайней мере, одно исследование показало, что это свидетельство конвергентной и дискриминантной валидности личностных показателей не обязательно распространяется на выборки [16].

Исследования обыкновенных мартышек способствовали попытке реконструировать эволюционную историю структуры личности [18,19].Структура личности относится к тому факту, что статистические методы, включая факторный анализ и анализ основных компонентов [20], а также другие [например, 21], показывают, что отдельные черты характера группируются в факторы более высокого порядка, которые представляют собой области личности . У людей, например, факторный анализ показал, что такие черты, как «боязнь», «уязвимость» и «тревога» описывают сферу невротизма, в то время как такие черты, как «активный», «социальный» и «напористый» описывают сферу экстраверсии [ 22,23].

Подобно исследованиям других таксонов нечеловеческих приматов, включая Macaca [24], Pan [25], Saimiri [26], Sapajus и Cebus [27–29] и других каллитрихидов [30] исследования обыкновенных мартышек [13,17,31,32] дали результаты, согласующиеся с представлением о том, что социоэкология вида влияет на структуру личности этого вида [см. обсуждение в 33]. Эти исследования обыкновенных мартышек, несмотря на различия в происхождении и жилище субъектов, выявляют набор перекрывающихся личностных доменов (таблица 1): все пять выявленных доменов связаны с общительностью [13,17,31,32]; четыре выявленных области, связанных с агрессивностью и конкурентоспособностью [13,17,31,32]; три выявленных области, связанных с тревогой и бдительностью [13,17,32]; две выявленные области, связанные с исследовательскими тенденциями [17,31]; и две выявленные области, связанные с самоконтролем [17,31].Кроме того, в двух из этих исследований были обнаружены области – Чувствительность восприятия [17] и Терпение [31], которые не были обнаружены у других видов, но которые также могут быть связаны с самоконтролем.

Наиболее поразительный результат этих исследований состоит в том, что, хотя многие виды демонстрируют индивидуальные различия в чертах, связанных с самоконтролем [34,35], у обычных мартышек эти черты образуют один или два широких домена. Среди других приматов подобные домены были обнаружены только у людей Homo sapiens [e.g., 36], шимпанзе Pan troglodytes [37–42], бонобо Pan paniscus [25] и коричневые (или тафтинговые) обезьяны капуцины Sapajus apella [28], все известные своим относительно большим мозгом. Следовательно, открытие доменов, связанных с самоконтролем у обыкновенных мартышек, привело исследователей к рассмотрению возможности того, что когнитивные и поведенческие требования, связанные с кооперативным размножением, могли привести к эволюции этих доменов у приматов с маленьким мозгом [31].

Однако результаты четырех исследований обыкновенных мартышек не совсем согласуются. В частности, хотя они обнаружили, что обыкновенные мартышки обладают шестью или семью доменами, они различались в зависимости от того, какое подмножество было найдено. Это различие между исследованиями может быть связано с тем фактом, что, помимо, возможно, одного исследования [31], в этих исследованиях не было отобрано достаточное количество черт или людей, чтобы охватить все способы, которыми люди могут отличаться по своей личности. Чтобы выяснить, так ли это на самом деле, мы продолжили наше более раннее исследование личности 77 (68 самцов и 9 самок) обыкновенных мартышек, размещенных в кампусе Института физических и химических исследований (RIKEN) в Кобе, Япония [13].В нашем предыдущем исследовании мы не обнаружили области сознательности, терпения или, если уж на то пошло, открытости. Одна из причин, по которой мы, возможно, не смогли найти эти домены, заключается в том, что некоторые элементы, относящиеся к этим доменам, были удалены, потому что их оценки надежности были меньше нуля [13]. Это может произойти, если между субъектами недостаточно дисперсии по признаку и / или большой разброс ошибок [43]. Одна из причин, по которой может возникнуть низкий уровень дисперсии между субъектами, заключается в том, что неизмеримые факторы, например, как содержатся или разводятся животные, подавляют или затрудняют наблюдение или восприятие индивидуальных различий в одной или нескольких чертах.Недавние открытия, которые, по-видимому, исключают такую ​​возможность, получены в результате исследования, в котором была обнаружена такая же структура у домашних и диких мартышек, обитающих в лабораториях [44]. Однако, поскольку группы в неволе и дикие жили в семейных группах, это исследование не могло исключить возможность того, что воспитание в других группах может повлиять на структуру личности. Низкий уровень дисперсии между субъектами может также происходить из-за того, что личности людей соответствуют личности их группы [12].

В настоящем последующем исследовании мы попытались исключить возможность того, что низкая дисперсия между субъектами была ответственна за несоответствие между нашим предыдущим исследованием и исследованиями, в которых были обнаружены дополнительные области, включая сознательность.Поэтому мы увеличили дисперсию между субъектами в выборке RIKEN, увеличив размер выборки примерно на две трети. Это также привело к тому, что соотношение женщин и мужчин увеличилось почти вдвое.

В дополнение к попыткам найти эти дополнительные домены у обычных мартышек, обитающих в RIKEN, мы исследовали связи между личностными доменами и субъективным благополучием. Предыдущие исследования на людях [45,46] и других приматах, включая шимпанзе [40,47,48], орангутангов Pongo spp.[49], макаки-резус Macaca mulatta [50], коричневые обезьяны-капуцины [51] и обыкновенные мартышки [13] продемонстрировали устойчивую модель взаимоотношений между личностью и показателями благополучия или благополучия. В частности, личностные области, связанные с общительностью, напористостью, активностью и другими чертами, связанными с экстраверсией [52], были связаны с более высоким субъективным благополучием, а личностные области, состоящие из черт, связанных с бдительностью, страхом, тревогой и другими чертами, связанными с невротизмом. [53] были связаны с более низким субъективным благополучием.Таким образом, проверяя связи между личностными доменами и субъективным благополучием, мы могли бы оценить степень, в которой обнаруженные нами личностные домены являются показателями различных психологических конструктов.

Наконец, мы проверили, связан ли набор генетических полиморфизмов с личностью. Наше предыдущее исследование обыкновенных мартышек показало, что более низкий уровень доминирования и более низкий невротизм у обычных мартышек были связаны с генотипом AA гена μ-опиоидного рецептора; Более низкий невротизм был дополнительно связан с короткой формой гена рецептора аргинина вазопрессина 1А [13].В настоящем исследовании мы сосредоточились на однонуклеотидных полиморфизмах (SNP) гена серотонинового рецептора 1a. Исследование на шимпанзе выявило SNP (rs25209664: C743A), который вызывал замену пролина на глутамин в 248 аминокислоте гена серотонинового рецептора 1a. Этот полиморфизм был связан с агрессией и общительностью: шимпанзе, обладавшие двумя аллелями С, менее склонны к социальному уходу и были оценены как более тревожные [54]. Это исследование также обнаружило доказательства некоторых взаимодействий: самцы с генотипом CC проявлялись чаще, а у шимпанзе с генотипом AC у индивидов среднего ранга были более низкие показатели близости [54].

Материалы и методы

Субъекты

Субъектами были 128 обыкновенных мартышек (99 самцов, 29 самок) в возрасте от 1,6 до 15,1 (среднее значение = 4,8, стандартное отклонение = 2,7). Набор испытуемых проводился в три волны. 77 субъектов первой волны приняли участие в аналогичном исследовании [13], в которое вошли 68 мужчин и 9 женщин в возрасте от 1,5 до 15,1 лет (среднее значение = 6,0, стандартное отклонение = 2,6). Субъекты второй и третьей волн родились в RIKEN. 24 субъекта из второй волны включали 17 мужчин и 7 женщин в возрасте от 1 года.От 7 до 4,5 лет (среднее = 2,6, SD = 0,7), и 27 субъектов третьей волны включали 14 мужчин и 13 женщин в возрасте от 2,0 до 4,9 лет (среднее значение = 3,0, SD = 0,8).

Животноводство и животноводство

субъектов были размещены в Центре исследований динамики биосистем RIKEN в Кобе, Япония. Сто двенадцать человек родились в центре, шесть были предоставлены компанией CLEA Japan Inc. (Токио, Япония) и 10 – компанией Japan Wild Animal Laboratory Limited (Амами, Япония).Субъекты, привезенные из других учреждений, жили в центре не менее трех лет до этого исследования.

В RIKEN субъекты были размещены в комнатах для разведения, в которых был 12-часовой цикл свет-темнота (свет: 08: 00–20: 00). Вольеры (1630 × 760 × 831 мм для семей, 660 × 650 × 600 или 660 × 450 × 600 мм для пар или отдельных лиц) имели деревянные насесты, пластиковые укрытия в форме куба, поднос для еды и диспенсер для воды. В каждой комнате для разведения было около двадцати клеток, и поэтому, даже если животные содержались индивидуально, они подвергались визуальной, слуховой и обонятельной стимуляции от сородичей.Температура и влажность в помещении для разведения поддерживались на уровне примерно 28 ° C и 50% соответственно. Утром и днем ​​испытуемые получали твердую пищу (CMS-1, CLEA Japan, Inc., Токио, Япония), смешанную с достаточным количеством воды для ее смягчения, сухую молочную смесь, мед, глюконовую кислоту, кальций, витамин С и пробиотик лактобацилл. . Днем пищу размягчали до состояния пасты, замачивая ее в воде и затем перемешивая. Раз в неделю в рацион испытуемых добавляли рубленые и вареные яйца или бананы.

Разведение животных

Животные, выращенные их родителями и / или членами их семей, включая от одного до пяти старших братьев или сестер, содержались в семейных клетках. Примерно через 14 дней после рождения, когда они были еще младенцами, во второй половине дня этих субъектов кормили пищевой пастой. Когда этим особям было от 6 до 15 месяцев, чтобы обеспечить им необходимое пространство, их переводили из семейной клетки в домашнюю клетку (от 0,21 до 0,43 м 2 площади пола на животное).Животные, жившие в этих домашних клетках, были сверстниками одного пола и разного возраста. Лица, которые должны были использоваться для визуализации мозга [55] или в поведенческих исследованиях, а также лица, которые не ладили со своими партнерами, были размещены в одном помещении.

Животные, которых не выращивали родители, например, в случае рождения тройни или родительского пренебрежения, были выращены людьми, осуществляющими уход, в клетках с контролируемым микроклиматом. Эта процедура описана в [13]. Короче говоря, этих животных помещали в термоизоляционный бокс и рулон полотенец от одного дня до 21 дня после рождения.Затем, от 21 дня после рождения до отъема, этих животных содержали в ящике из проволочной сетки размером 390 × 230 × 300 мм, снабженном гамаком, насестами, валиком для полотенец, тарелкой для кормления и бутылкой с водой. Этих животных кормили грудью в день их рождения, а затем кормили из бутылочки до отъема. Пищевая паста вводилась примерно через 28 дней, а затем животные были полностью отлучены от груди через 50-70 дней после рождения. После отъема этих животных помещали в домашнюю клетку со сверстниками или по отдельности в комнате для разведения.

Из 77 субъектов первой волны 30, включая 23 воспитываемых родителями и семь субъектов, воспитываемых вручную, были размещены в семейной группе (n = 13) или со сверстниками того же пола (n = 17).Остальные 47 субъектов, в том числе 33 воспитывались родителями, 13 находились на ручном воспитании и один с неизвестной историей воспитания, были размещены в одном помещении. Из 24 субъектов второй волны 22, в том числе 18 воспитывались родителями, 3 были воспитаны вручную и один с неизвестным анамнезом воспитания, были размещены в семейной группе (n = 7) с противоположным полом. мартышек для разведения (n = 2) или со сверстниками (n = 13). Остальные два субъекта из второй волны были на воспитании родителей и проживали в одном доме.Из 27 субъектов третьей волны 25 субъектов, воспитываемых родителями, и один субъект, воспитываемый вручную, были размещены в семейной группе (n = 1) с мартышками противоположного пола для разведения (n = 4), с однополыми. сверстники (n = 19) или одноквартирные (n = 2). Оставшийся субъект был воспитан родителями и жил в одном доме.

Рейтинги

Анкеты.

Для этого исследования мы использовали анкеты личностного и субъективного благополучия, которые были переведены с английского на японский язык с использованием процедуры обратного перевода.Исследование шимпанзе показало, что перевод не повлиял на психометрические свойства этих анкет [40].

Для определения личности мы использовали опросник гоминоидной личности (HPQ; доступен по адресу https://extras.springer.com/2011/978-1-4614-0176-6.zip). Каждый из 54 пунктов HPQ состоит из характерного прилагательного в паре с одним-тремя предложениями, которые задают прилагательное в контексте поведения приматов. Например, « FEARFUL » (жирный шрифт и заглавные буквы в оригинале) сочетается с описательным предложением «Субъект чрезмерно реагирует на реальные или воображаемые угрозы, проявляя такое поведение, как крик, гримасу, бегство или другие признаки беспокойства или беспокойства.Инструкции HPQ просят оценщиков a) оценить положение каждого животного по каждому признаку на основе поведения животного и взаимодействий с другими, а также собственного суждения оценщика о том, что составляет среднее поведение для этого вида, b) назначить оценку оценка от 1 («Отображает полное отсутствие или незначительное количество признака.») до 7 («Отображает чрезвычайно большое количество признака.») для каждого элемента и c) не обсуждают свои оценки с другими оценщиками.

Описание разработки HPQ можно найти в другом месте [56].Вкратце, HPQ вырос из Опросника личности орангутана с 48 пунктами [49], который вырос из Опросника личности шимпанзе с 43 пунктами [39]. Сорок один из 54 пунктов HPQ был взят из черт Голдберга [57], относящихся к пяти основным областям человеческой личности [39]. Остальные 13 пунктов были адаптированы из пунктов [58] или аспектов [59] из других инвентаризаций человеческой личности, или были созданы авторами этих инструментов [39,40,49].

Для оценки субъективного благополучия s мы использовали шкалу из четырех пунктов, основанную на анкете, первоначально разработанной для изучения содержащихся в неволе шимпанзе [47].Каждый пункт был разработан для оценки различных концепций субъективного благополучия, описанных в человеческой литературе [47,60–64]. Первый пункт (настроения) касался степени, в которой человек испытал положительный или отрицательный аффект. Второй вопрос (социальный) касался того, испытывает ли человек удовольствие от социальных взаимодействий. Третий пункт (цели) касался того, смог ли человек достичь своих целей, учитывая, что разные люди могут иметь разные цели.Четвертый пункт (быть мартышкой) спрашивал у оценщиков, насколько они были бы «счастливы», если бы они были этой мартышкой в ​​течение недели, и, таким образом, предназначался для измерения глобального удовлетворения. Инструкции шкалы субъективного благополучия просили оценщиков присвоить каждому пункту оценку от 1 («Отображает полное отсутствие или незначительное количество признака или состояния») до 7 («Отображает чрезвычайно большое количество признака»). Инструкции также требуют, чтобы оценщики не обсуждали свои оценки.

Рейтинги и рейтинги.

Мы попросили трех наблюдателей (двух мужчин и одну женщину), которые заполнили анкеты в первой волне сбора данных [см. 13 для деталей], заполнить анкеты для второй и третьей волны сбора данных.Хранители не знали ни результатов предыдущего исследования, ни цели сбора данных. Смотрители знали субъектов, которых они оценивали, от 1,1 до 9,8 лет (среднее значение = 3,7 года, стандартное отклонение = 2,2). Два смотрителя (мужчина и женщина) оценили все 128 предметов, а третий – 81 предмет. В результате было получено 337 оценок или в среднем 2,63 оценки по каждому предмету. Отсутствуют отсутствующие рейтинговые данные.

Генотипирование

Буккальный мазок был взят у каждого субъекта и сохранен в 90% растворе этанола до экстракции ДНК.ДНК экстрагировали с помощью набора DNeasy Blood and Tissue (Qiagen, CA, США). ПЦР-амплификацию проводили в 10 мкл (общий объем) реакционной смеси, содержащей 10 нг ДНК-матрицы, 0,4 мкМ каждого праймера (прямой: 5′-tggattcccttcctccgaaa-3 ‘, обратный: 5′-aggtgttgattccctagggt-3’), 0,5 ед. ДНК-полимеразы LA Taq, 400 мкМ dNTP и буфера I для GC (TaKaRa, Shiga, Япония). После денатурирования образцов ДНК при 95 ° C в течение 1 минуты, мы установили 40 циклов: 95 ° C в течение 30 секунд, 60 ° C в течение 30 секунд, 74 ° C в течение 1 минуты и окончательное удлинение при 74 ° C в течение 10 минут. .Всего было амплифицировано 1473 фрагмента пар оснований, включая целую область одного экзона. Затем мы секвенировали продукты полимеразной цепной реакции как в прямом, так и в обратном направлении, используя генетический анализатор 3130xl (Applied Biosystems, Калифорния, США). Внутренний праймер 5’-tcatgctggttctatggg-3 ’также использовали для секвенирования. Праймеры были разработаны на основе эталонной последовательности NCBI NC_013897. В конце концов, мы идентифицировали три новых SNP (G840C, G841A и T901A) в третьей внутриклеточной области рецептора (рис. 1 и 2).G840C был синонимичным SNP, кодирующим аланин в аминокислотной последовательности 280 th , G841A был несинонимичным SNP, который вызывал замену метионина в аминокислотной последовательности 281 st , а T901A был несинонимичным SNP, который вызывал замену серина на треонин. по аминокислотной последовательности 301 st .

Рис. 1. Нуклеотидная последовательность гена рецептора 1a серотонина обыкновенной мартышки.

Последовательность основана на NC_013897. Последовательности праймеров подчеркнуты.Последовательности стартового и стоп-кодона указаны в прямоугольниках. Третья внутриклеточная область заключена в скобки. Замены нуклеотидов показаны заглавными и жирными буквами: G840C (A280A), G841A (V281M), T901A (S301T).

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0238663.g001

Анализирует

Мы провели анализ с использованием версии 3.6.3 R [65]. Мы использовали функции из версии 1.9.12 пакета Psy [66], версии 1.0.7 пакета EFA.MRFA [67], а также некоторые пользовательские функции.

Пункт межэкспертной надежности.

Мы использовали специальную функцию для вычисления межэкспертной надежности оценок отдельных пунктов в опроснике HPQ и субъективном благополучии. Эта функция вычисляла две внутриклассовые корреляции ( ICC, с), описанные Шраутом и Флейссом (43). Один, ICC (3,1), указывает на надежность отдельных оценок, то есть это оценка надежности рейтинга от одного оценщика. Другой, ICC (3, k ), указывает на надежность средней оценки, полученной от k оценщиков, которая была равна 2.63 в настоящем исследовании. Мы исключили элементы, надежность которых была меньше или равна нулю [см. 56 для обсуждения].

Исследовательский факторный анализ.

Мы провели этот анализ по совокупности (среднему) личностных оценок 128 субъектов. Имитационные исследования [68–70] показали, что количество испытуемых, необходимое для удовлетворительного восстановления факторов, зависит от общности предметов, загруженности предметов и соотношения предмет: фактор, и что соотношение испытуемый: предмет не имеет значения.Предыдущие рейтинговые исследования личности обыкновенной мартышки [13,17,31] показали, что от 72% до 97% вопросов анкеты были надежными, всего от трех до пяти факторов, медиана значимых нагрузок около 0,6 или 0,7 и общности которые находились между широким и высоким [определения этих типов сообществ см. в ссылке 69]. Таким образом, у нас достаточно большой размер выборки для проведения факторного анализа этих данных [69].

Перед извлечением факторов с помощью метода максимального правдоподобия мы определили, сколько факторов нужно извлечь.Для этого мы использовали функцию fa.parallel из пакета mental, чтобы создать график осыпи, который мы проверили, и провести параллельный анализ [71], в котором мы сравнили собственные значения из анализа главных компонентов наших данных с распределением из 1000 собственных значений, сгенерированных в результате анализа главных компонентов передискретизированных и случайно сгенерированных данных. Мы использовали анализ главных компонентов для нашего параллельного анализа, потому что недавнее исследование показало, что количество измерений, идентифицированных таким образом, с большей вероятностью восстановит правильное количество факторов [72].Кроме того, мы использовали функцию VSS из пакета mental, чтобы определить для решений от одного до восьми факторов, которые имеют самый низкий байесовский информационный критерий [BIC; 73] и функцию hullEFA из пакета EFA.MRFA для определения количества факторов с помощью метода Халла [74]. Известно, что метод Халла хорошо работает с личностными данными [75]. Наконец, мы проверили факторы, чтобы убедиться, что их можно интерпретировать.

После того, как мы извлекли факторы с помощью функции fa из пакета mental, мы применили наклонное (promax) и ортогональное (varimax) вращение.Если вращение promax дало факторы, которые сильно коррелировали и / или имели другую структуру, мы сохраняли и интерпретировали эти факторы. В остальном мы сохранили и интерпретировали факторы, повернутые на варимакс.

При интерпретации факторов мы указали, что значительные нагрузки равны или превышают | 0,4 |. Мы обозначили факторы, основываясь на наших интерпретациях того, чем они были, и попытались найти подходящие ярлыки из предыдущих исследований обычных мартышек и, если таковые не были доступны, исследований нечеловеческих приматов и людей.Если мы не могли найти ярлык в этих источниках, мы придумали собственный.

Помимо проведения факторного анализа первого порядка, мы обнаружили доказательства (результаты будут обсуждены), предполагающие, что в основе этих данных могут лежать личностные факторы второго порядка. Таким образом, мы провели исследовательский факторный анализ корреляционной матрицы безфакторных факторов, полученной из факторов, повернутых с помощью promax. По той же причине мы провели дополнительный факторный анализ на уровне элементов в качестве проверки устойчивости.

Мы провели анализ факторов максимального правдоподобия с использованием функции fa для агрегированных (средних) оценок четырех пунктов субъективного благополучия для всех 128 субъектов.Предыдущая работа по 77 из этих предметов позволила выявить единственный фактор [13].

Факторные баллы, взвешенные по единицам.

Для остальных анализов мы использовали специальную функцию для вычисления взвешенных по единицам баллов [20,76] для данных о личности и субъективном благополучии. Это включало для каждого элемента поиск наиболее значимой факторной нагрузки. Если эта нагрузка была положительной, мы присваивали ей вес +1. Если эта нагрузка была отрицательной, мы присвоили ей вес -1. Во всех остальных случаях мы присвоили нулевой вес.После этого мы суммировали взвешенные рейтинги элементов.

Факторная надежность.

Для личностных факторов первого и второго порядка и для субъективного благополучия мы снова вычислили ICC (3,1) и ICC (3, k ). Как и в случае анализа на уровне элементов, k было равно 2,63. Кроме того, мы использовали альфа-функцию из пакета mental для вычисления альфа (α) Кронбаха, показателя надежности внутренней согласованности шкалы, и функции omega для вычисления иерархической иерархии McDonald’s (ω h ), меры степень насыщения элементов шкалы общим фактором.

Сравнение личностных факторов.

Чтобы сравнить факторы первого и второго порядка с факторами, обнаруженными в предыдущих исследованиях обыкновенных мартышек [13,17,31], мы сначала сгенерировали взвешенные по единицам факторы факторные оценки, основанные на структурах личности, описанных в этих других исследованиях. Поскольку в этих исследованиях не было полного совпадения пунктов анкеты, мы иногда заменяли пункты, которые были похожи по своему значению или конструкциям, которые они якобы оценивали. Подробную информацию о том, как создавались эти оценки, можно найти в таблице S1.После вычисления этих баллов мы получили корреляции между баллами, основанными на факторных нагрузках из настоящего исследования, и баллами, основанными на компонентных и факторных нагрузках из предыдущих исследований. Мы сравнили абсолютные величины этих корреляций и выделили самую высокую корреляцию или, в случае, когда доверительные интервалы двух или более корреляций перекрываются, самые высокие корреляции.

Ассоциации личности и субъективного благополучия.

Мы использовали коэффициенты корреляции Пирсона, чтобы исследовать связи между личностными факторами первого и второго порядка, а также между пунктами субъективного благополучия и суммой этих пунктов.Мы использовали метод Холма [77] для поправки на частоту ошибок в семье.

Ассоциации личности и генотипа.

Для изучения ассоциаций генотип-личность для факторов личности первого и второго порядка мы подбираем линейные модели с использованием функции lm. Для этого анализа мы стандартизировали баллы личностных факторов (среднее значение = 0, стандартное отклонение = 1). Переменные в моделях включали пол (мужской = 1, женский = 0), возраст в годах и категориальную переменную, указывающую на генотип. Поскольку возникли проблемы с генотипированием четырех субъектов, эти люди были исключены из анализа.Кроме того, генотипы G840C для двух субъектов и генотип T901A для одного субъекта были неясными, и поэтому эти люди не были включены в тесты ассоциаций между личностью и генотипами G840C и T901A, соответственно. Наконец, только один субъект имел версию G841A AA и только девять субъектов имели версию GA этого генотипа. Поэтому мы не исследовали связи между этими генотипами и личностью.

Хотя субъекты были родственниками, мы не тестировали влияние генотипов в контексте модели на животных [ср.13]. Более того, поскольку мы проводили несколько, иногда не независимых, тестов, мы использовали поправку Бонферрони, чтобы скорректировать семейные ошибки.

Этика

Это исследование соответствовало действующим законам Японии, включая Закон о благополучии и содержании животных. Все экспериментальные и хозяйственные процедуры выполнялись в соответствии с Руководством RIKEN по проведению экспериментов на животных и в соответствии с руководящими принципами ARRIVE (Исследования на животных: Отчетность об экспериментах in vivo).Все процедуры были одобрены Комитетом по уходу и использованию животных Института RIKEN в Кобе (MA2009-10-16).

Результаты

Интеррейтерская надежность пунктов

Личность.

Межэкспертная надежность 54 пунктов HPQ представлена ​​в таблице 2. Достоверность индивидуальных оценок и средних оценок пунктов «тревожный», «настойчивый», «бросающий» и «невнимательный» была отрицательной, поэтому мы исключил эти предметы из дальнейшего анализа.Хотя надежность средних оценок для элементов «инновационный» и «решающий» была равна 0,01, надежность индивидуальных оценок для этих элементов была меньше 0,01, поэтому мы решили исключить и эти элементы.

Из оставшихся 48 пунктов надежность индивидуальных оценок варьировалась от 0,02 («изобретательность») до 0,45 («общительность»). Среднее и стандартное отклонение для этих оценок составили 0,21 и 0,11 соответственно. Межэкспертная надежность средних оценок по остальным позициям варьировалась от 0.06 («изобретательный») до 0,68 («общительный»). Среднее значение и стандартное отклонение для этих оценок составили 0,40 и 0,16 соответственно.

Субъективное благополучие.

Надежность индивидуальных оценок между экспертами составила 0,16, 0,10, 0,15 и 0,14 для настроения, социального положения, целей и глобального благополучия, соответственно. Соответствующие надежности средних рейтингов составляли 0,33, 0,23, 0,32 и 0,30.

Анализ поисковых факторов максимального правдоподобия

Личность.

График на осыпях (S1 рис.) И параллельный анализ показали, что было пять факторов.Метод Халла (S2 рис.) Также показал, что было пять факторов, а BIC достиг минимума с пятью факторами. Таким образом, мы извлекли пять факторов.

Промакс-ротация пятифакторного решения дала две большие межфакторные корреляции ( r s ≥ | 0,5 |) и две средние ( r s ≥ | 0,3 |). Среднее и стандартное отклонение абсолютных межфакторных корреляций составили 0,26 и 0,20 соответственно. Сравнение повернутых факторов varimax и promax показало, что коэффициенты конгруэнтности для двух факторов упали ниже 0.95 (таблица S2) и проверка нагрузок показали, что факторы, повернутые с помощью promax, несколько отличались от их аналогов с вращением с помощью varimax. Учитывая эти результаты, мы интерпретировали факторы, повернутые на promax (таблица 3), которые объяснили 63% дисперсии (факторы, повернутые на varimax, представлены в таблице S3).

Первый фактор, связанный с элементами, относящимися к высокой экстраверсии и доброжелательности у людей [например, 57]. Этот фактор напоминал фактор общительности в одном исследовании [13] и фактор согласия из двух других исследований [17,31] обыкновенных мартышек.Чтобы соответствовать нашему предыдущему исследованию [13], мы назвали этот фактор «Общительностью».

Второй фактор, связанный с элементами, относящимися к высокой экстраверсии и низкой доброжелательности у людей [например, 57]. По сравнению с другими исследованиями обыкновенных мартышек, его лучше всего описать как узкую версию факторов, обозначенных как Доминирование [13], Экстраверсия [17] и Напористость [31]. Чтобы соответствовать нашему предыдущему исследованию [13], мы назвали этот фактор доминированием.

Третий фактор имел положительные нагрузки на предметы, связанные с высоким невротизмом и низкой сознательностью у людей, а также отрицательные нагрузки на предметы, связанные с низким невротизмом и высокой сознательностью [e.г., 57]. В предыдущем исследовании подвыборки этих животных [13] фактор доминирования и невротизма воздействовал на некоторые из этих элементов. По сравнению с другими исследованиями обыкновенных мартышек, он больше всего напоминал факторы, обозначенные как «Добросовестность» и «Терпение» в одном исследовании [31], и фактор «Добросовестность» в другом [17]. Люди с высоким невротизмом и низкой сознательностью описываются как люди с неконтролируемым стилем импульсного контроля [78]. Таким образом, мы назвали этот фактор Импульсивностью.

За исключением отрицательной нагрузки на предмет «Осторожно», четвертый фактор воздействовал в первую очередь на предметы, связанные с высокой открытостью у людей [например, 57]. Предыдущие исследования обыкновенных мартышек обозначили такие факторы, как Открытость [17] и Любознательность [31]. Таким образом, мы назвали этот фактор Открытостью.

Пятый фактор, связанный с элементами, относящимися к низкой экстраверсии и высокому невротизму у людей [например, 57]. В предыдущем исследовании подгруппы этих животных [13] невротизм положительно влиял на многие из этих элементов.Во всех трех предыдущих исследованиях этого вида такие факторы, как Доминирование, Напористость и Добросовестность, имели отрицательную нагрузку на эти элементы [13,17,31]. Учитывая, что этот фактор сочетал в себе аспекты высокого невротизма и низкой степени самоутверждения или социального мастерства, мы назвали его отрицательным аффектом.

Поскольку было несколько существенных корреляций между только что описанными факторами, мы проанализировали факторную матрицу интеркорреляции. Осмотр участка осыпи (S3 рис.) И параллельный анализ показали, что было два фактора; BIC был самым низким для двухфакторного решения (мы не проводили тест Hull, потому что hullEFA не может использоваться для проверки корреляционных матриц).Мы также пытались выделить один «общий» фактор, но это решение показало плохое соответствие (среднеквадратическое значение остатков = 0,14), и фактор не оказал заметной нагрузки на открытость или отрицательное влияние. Вращение promax двухфакторного решения показало, что факторы были почти ортогональными, а нагрузки факторов, повернутых с помощью varimax, были почти идентичны нагрузкам факторов, повернутых с помощью promax (таблица 4). Таким образом, мы интерпретировали факторы с вращением варимакс, на которые приходилось 49% дисперсии.После отражения (умножения нагрузок на -1) первого фактора у него была положительная нагрузка на общительность и отрицательная нагрузка на доминирование и импульсивность. Таким образом, мы назвали этот фактор просоциальным. Второй фактор имел положительную нагрузку на Открытость и отрицательную нагрузку на Негативное влияние. Таким образом, мы назвали этот фактор смелостью.

Предыдущие исследования обыкновенных мартышек не обнаружили доказательств факторов более высокого порядка, то есть межфакторные корреляции, как правило, были скромными [13,17,31].Таким образом, мы сочли целесообразным дополнить эти результаты двумя проверками устойчивости.

В ходе первой проверки устойчивости проверялось, отражают ли факторы более высокого порядка структурирование сбора данных. В частности, поскольку разные субъекты оценивались в каждой волне, это могло побудить оценщиков оценивать субъектов, принадлежащих к каждой волне, как более похожих друг на друга, чем субъектов в других волнах. Чтобы проверить это, мы распределили 48 надежных пунктов по категориальной переменной, которая представляла, был ли субъект оценен в первой, второй или третьей волне.Затем мы факторно проанализировали остаточные баллы по пунктам.

Проверка участка осыпи (S4 Рис.) Показала, что было четыре или пять факторов, а параллельный анализ показал, что было четыре фактора. Тест Халла показал, что было два фактора (S5 Рис.). BIC был самым низким для пятифакторного решения. Поэтому мы исследовали promax-вращения после извлечения двух, четырех и пяти факторов.

Для двухфакторного решения (таблица S4) первый фактор загружался преимущественно на вопросы, на которые были загружены факторы Общительность, Доминирование и Импульсивность.Таким образом, он напоминал фактор высшего порядка просоциальности. Второй фактор воздействовал преимущественно на предметы, на которые были загружены факторы Открытость и Негативное влияние. Поэтому он напоминал фактор более высокого порядка Смелость. Для четырехфакторного решения (таблица S5) первый, третий и четвертый факторы напоминали общительность, негативное влияние и открытость. Второй фактор – это преимущественно предметы, связанные с высоким доминированием и высокой импульсивностью. Пятифакторное решение дало пять факторов, которые напоминали пять факторов, которые были найдены ранее (таблица S6).

Сходство, как показывают коэффициенты конгруэнтности Таккера, между пятью факторами, полученными до и после остаточной оценки заданий, было равно или больше 0,98, что позволяет предположить, что это были одни и те же факторы (таблица S7). Таким образом, факторный анализ остаточных оценок пунктов выявил либо ту же структуру (пятифакторное решение), либо структуры, в которых были более сильные связи между факторами (двух- и четырехфакторные решения). Эти результаты не согласуются с возможностью того, что факторы более высокого порядка отражают тот факт, что мы собрали эти данные в три этапа.

Вторая из наших проверок устойчивости заключалась в том, чтобы проверить, являются ли факторы второго порядка общими оценочными факторами, используемыми оценщиками [см. 79]. Для этого мы проанализировали рейтинги каждого из трех экспертов отдельно. Мы также факторно проанализировали взвешенную корреляционную матрицу, из которой исключены возможные эффекты оценщиков: где R w , взвешенная корреляционная матрица, представляет собой сумму произведений корреляционных матриц каждого из k = 3 оценщика, R i , и субъектов, n i , оцененное этим индивидуальным оценщиком, деленное на общее количество испытуемых, N .

Для оценок от одного хранителя, который оценил всех субъектов, осыпная диаграмма (S6 рис.), Параллельный анализ, BIC и метод Халла (S7 рис.) Показали, что было пять факторов. Таким образом, мы извлекли пять факторов и подвергли их ротации promax (таблица S8). Эти факторы напоминали полученные при первоначальном факторном анализе, а межфакторные корреляции были аналогичными по величине. Затем мы провели факторный анализ второго порядка, в котором принудительно использовали двухфакторное решение. Хотя один фактор второго порядка просто пропустил наш критерий значительной нагрузки на фактор первого порядка, эти факторы напоминали просоциальность (обратная сторона) и смелость (таблица S9).

Для оценок второго хранителя, который оценил всех субъектов, диаграмма на осыпях (S8, рис.) Показала, что было пять факторов, а параллельный анализ, BIC и метод Халла (S9, рис.) Показали, что было четыре фактора. Таким образом, мы извлекли четыре фактора и подвергли m ротации promax (таблица S10). Первым фактором оказалось доминирование против уступчивости, третьим фактором была общительность (узкая грань экстраверсии), а последние два фактора было трудно интерпретировать.Межфакторные корреляции не соответствовали фактору второго порядка.

Для оценок хранителя, который оценил 81 предмет, диаграмма осыпи (S10 рис.) И параллельный анализ, BIC и метод Халла (S11 рис.) Показали, что существует три фактора. Таким образом, мы извлекли три фактора и подвергли их ротации promax (таблица S11). К этим факторам относились, соответственно, симпатия против доминирования, экстраверсия и негативное аффект / импульсивность.

Для взвешенной корреляционной матрицы график на осыпях показал, что было пять факторов (S12, рис.) И оба параллельного анализа, а BIC показал, что было три фактора.Таким образом, мы извлекли три фактора и подвергли их ротации promax (таблица S12). Первый и третий факторы повлияли на многие черты, которые принадлежали факторам, составляющим области социальной активности и смелости второго порядка, соответственно. Второй фактор – фактор импульсивности. Корреляция между первым и третьим факторами была низкой, но корреляция между импульсивностью и просоциальностью была между средней и большой, и, следовательно, соответствовала определениям этих факторов.

Затем мы извлекли пять факторов и подвергли их ротации promax (таблица S13). Эти пять факторов напоминали факторы из нашего первоначального факторного анализа, как и межфакторные корреляции. График на осыпях показал, что было два фактора (S13, рис.), Как и параллельный анализ, и BIC. Первый фактор более высокого порядка, если его отразить, оказался фактором просоциальности. Вторым фактором более высокого порядка был фактор смелости (таблица S14).

Субъективное благополучие.

Проверка участка осыпи (S14 Рис.), Параллельный анализ и BIC – все указывает на наличие единственного фактора.Тест Халла показал, что был один фактор, но выдал предупреждение, которое, как мы подозреваем, было связано с наличием всего четырех элементов. Этот фактор объяснил 67% дисперсии и имел значительную нагрузку по всем четырем пунктам (таблица 5).

Достоверности факторов

Личность.

Надежность индивидуальных оценок по общительности, доминированию, импульсивности, открытости и негативному влиянию составила 0,52, 0,39, 0,28, 0,26 и 0,25 соответственно.Межэкспертная надежность средних оценок для этих факторов составила 0,74, 0,63, 0,50, 0,48 и 0,46 соответственно. Для просоциальности и смелости, соответственно, надежность индивидуальных оценок между экспертами составляла 0,45 и 0,30, а надежность средних оценок для этих факторов второго порядка составляла 0,69 и 0,53.

Надежность внутренней согласованности (α Кронбаха) для общительности, доминирования, импульсивности, открытости и отрицательного влияния составляла 0,95, 0,95, 0,88, 0,85 и 0.81 соответственно. Степень насыщения этих факторов общим фактором (McDonald’s ω h ) составляла 0,81, 0,85, 0,75, 0,80 и 0,68 соответственно.

Субъективное благополучие.

Для общего балла субъективного благополучия надежность индивидуальных оценок между экспертами составила 0,21, а надежность среднего значения оценок – 0,41. Α Кронбаха для этой шкалы было 0,87, а ω h Макдональдса было 0,13.

Сравнение личностных факторов

Iwanicki и Lehmann [17] нашли четыре фактора.По сравнению с нашими факторами первого порядка, их фактор экстраверсии накладывается на Доминирование и (обратное) негативное влияние, их фактор согласия накладывается на общительность и (обратное) доминирование, их фактор сознательности накладывается на общительность, а их фактор открытости накладывается на фактор открытости, который мы нашли (Таблица 6). По сравнению с факторами второго порядка, экстраверсия Иваницкого и Лемана пересекалась с просоциальностью и смелостью; их доброжелательность и добросовестность совпадают с просоциальностью; и их коэффициент открытости совпал с смелостью (таблица 7).

Таблица 7. Корреляции между взвешенными на единицу факторами баллами, основанными на нагрузках из факторного анализа второго порядка в настоящем исследовании, и факторными нагрузками из предыдущих исследований личности обыкновенных мартышек.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0238663.t007

Koski et al. [31] обнаружили пять факторов. По сравнению с нашими факторами первого порядка, их фактор Сознательности накладывался на (обратное) Доминирование и (обратное) Импульсивное поведение; их фактор приветливости накладывается на общительность; их фактор уверенности накладывался на (обратную) коммуникабельность, доминирование и (обратное) отрицательное влияние; их фактор терпения накладывался на общительность; и их фактор любознательности совпал с открытостью (таблица 6).По сравнению с нашими факторами второго порядка их факторы сознательности, доброжелательности и терпения совпадают с просоциальностью; их фактор уверенности пересекается со смелостью и (обратной) просоциальностью; и их фактор любознательности совпал с смелостью (таблица 7).

Inoue-Murayama et al. [13] обнаружили три фактора. По сравнению с нашими факторами первого порядка, их фактор Доминирования перекрывался с Доминированием; их фактор общительности накладывался на общительность; и их фактор невротизма совпал с негативным воздействием (таблица 6).По сравнению с нашими факторами второго порядка, их факторы Доминирования и Общительности перекрывались с низкой и высокой просоциальностью, соответственно; их фактор невротизма перекрывался (обращенной) смелостью (таблица 7).

Ассоциации личности и субъективного благополучия

Корреляции между пунктами субъективного благополучия и личностными факторами представлены в таблице 8. Общительность была значительно связана с более высокими баллами по всем четырем пунктам и общим баллом субъективного благополучия.Доминирование не было существенно связано ни с одним из пунктов шкалы или фактором. Импульсивность в значительной степени связана с более низким, а открытость в значительной степени связана с более высоким балансом положительного и отрицательного настроения, тем, насколько счастливыми оценщики думали, если бы они были мартышками, и общим субъективным показателем благополучия. Отрицательное влияние отрицательно связано с тем, насколько счастливыми оценщики думали, будь они мартышкой. Из факторов второго порядка просоциальность была в значительной степени связана с получением более высоких оценок по всем пунктам, за исключением способности достигать целей и общей оценки субъективного благополучия.Смелость не была существенно связана с предметами удовольствия, полученными от социальных взаимодействий, но она была значительно связана с более высокими показателями по трем другим пунктам и в общей оценке субъективного благополучия.

Личностные и генотипические ассоциации

G840C.

Двадцать семь субъектов имели генотип GG, 23 – генотип CC и 72 были гетерозиготными. В первом наборе анализов мы сравнивали субъектов с генотипом GC и субъектов с генотипом GG с субъектами с генотипом CC.По сравнению с субъектами с генотипом CC, субъекты с генотипами GC или GG имели значительно более высокий уровень доминирования; эти ассоциации, однако, не превалируют при поправке на множественные тесты (таблица S15). Во втором наборе анализов мы сравнили 95 субъектов, которые были носителями аллеля C (генотип CC или GC), с 27 субъектами с генотипом GG. Ни одно из сравнений не было статистически значимым (таблица S16). В третьей серии анализов мы сравнили 99 субъектов, которые были носителями аллеля G (генотип GG или GC), с 23 субъектами с генотипом CC.Носители были значительно выше в Доминировании, но этот эффект не превалировал при коррекции для нескольких тестов (Таблица S16).

Т901А.

Двенадцать субъектов имели генотип TT, 35 – генотип AA и 76 были гетерозиготными. Из-за этого дисбаланса в количестве субъектов мы сравнили только 88 субъектов, несущих аллель Т, с 35 субъектами с генотипом AA. Ни одно из сравнений не было статистически значимым (таблица S17).

Обсуждение

Мы обнаружили пять личностных сфер – общительность, доминирование, импульсивность, открытость и негативное влияние – у обычных мартышек.Мы также нашли две области более высокого порядка. Один фактор более высокого порядка, просоциальность, имел положительную нагрузку на общительность и отрицательную нагрузку на доминирование и импульсивность, а второй, смелость, имел положительную нагрузку на открытость и отрицательную нагрузку на отрицательное влияние. Межэкспертная надежность обоих наборов доменов была сопоставима с тем, что было обнаружено в исследованиях других приматов [80], включая людей [например, 81], и они были связаны с субъективным благополучием способами, соответствующими их значению.Мы не нашли убедительных доказательств того, что личность или субъективное благополучие были связаны с геном рецептора серотонина 1a.

Домены личности, которые мы обнаружили, частично совпадают с теми, которые были обнаружены в предыдущих исследованиях обыкновенных мартышек. Открытость напоминала одноименные области или область, обозначенную как Любознательность, выявленную в предыдущих исследованиях [13,17,31,32]. Более того, хотя мы не обнаружили явного фактора сознательности, как это было в двух предыдущих исследованиях [17,31], импульсивность и просоциальность совпадали с сознательностью, поскольку все три были связаны с поведенческой последовательностью и надежностью, просоциальностью, терпимостью и низкими уровнями. агрессии [17,31].Однако импульсивность также была связана с эмоциональностью и реактивностью, тогда как сознательность – нет. Наконец, доминирование, общительность и негативное влияние напоминают области, обнаруженные в более ранних исследованиях [13,17,31,32]. С другой стороны, хотя они могли быть представлены просоциальностью, мы не нашли убедительных доказательств в пользу области терпения [31] или восприятия [17], хотя это может быть одна и та же конструкция [31] или связанная с Добросовестность.

В отличие от прошлых рейтинговых исследований, которые не обнаружили факторов более высокого порядка у обычных мартышек [13,17,31], мы обнаружили два таких фактора.Проверки устойчивости показали, что эти домены более высокого порядка частично отражают тенденцию оценщиков рассматривать одни черты как более коррелированные, чем другие. Однако этот анализ не мог исключить возможность того, что эти факторы представляли более высокий уровень организации личности, возможно, отражая групповые личности [ср. 12]. Хотя были сообщения о факторах человеческой личности более высокого порядка [например, 82], включая так называемый «общий фактор личности» [например, 83], эти сообщения подверглись критике [e.г., 84–86]. Проблемы, которые влияют на исследования на людях, которые якобы обнаруживают личностные факторы более высокого порядка, отсутствовали в настоящем исследовании: каждое животное оценивалось двумя или тремя смотрителями, корреляция между латентными переменными была значительной, а поправка на эффекты оценки увеличивалась, а не уменьшалась в некоторых интерфакторах. корреляции. Тем не менее, поскольку факторы второго порядка не были идентифицированы в других исследованиях обыкновенных мартышек [13,17,31,44], в том числе в исследовании 77 таких же животных, до интерпретации значения этого явления мы настоятельно рекомендуем попытаться воспроизвести эти результаты и анализ аналогичных данных, используя более гибкие методы моделирования [e.г., 11].

Результаты настоящего исследования согласуются с возможностью того, что обычные мартышки развили структуру личности, которая включает в себя область или области, связанные с самоконтролем, например, те, что встречаются у приматов с большим мозгом, включая коричневых обезьян-капуцинов [28 ], шимпанзе [39] и человек [59]. Поскольку эти виды имеют только очень далеких общих предков с каллитрихидами и имеют очень разную социоэкологию, эти черты вряд ли будут гомологичными.Напротив, наличие области, связанной с самоконтролем у обыкновенных мартышек, вероятно, отражает конвергентную эволюцию, которая была вызвана потребностью отдельных особей соответствовать требованиям, связанным с кооперативным разведением. Тем не менее, стоит отметить, что между исследованиями по-прежнему существуют различия в том, как эти черты группируются, исследования, изучающие роль, которую такие факторы, как сознательность, терпение или импульсивность играют в воспитании младенцев, особенно помощниками, среди обычных мартышек, необходимы для проверки. это гипотеза.

Как и в нашем исследовании подвыборки этих субъектов [13], мы обнаружили корреляции личностно-субъективного благополучия, которые согласовывались с корреляциями, обнаруженными в исследованиях людей [45,46] и нечеловеческих приматов [40,47–51]. Эти находки, а также результаты у людей и человекообразных обезьян, которые указывают на то, что в основе этих черт лежит общий генетический фон [87–92], согласуются с возможностью того, что эти отношения являются наследственными.

Наша неспособность найти ассоциацию между SNP, относящимися к гену рецептора серотонина 1a, и любым из доменов личности не согласуется с предыдущими данными о связи между этим генотипом и личностью у шимпанзе [54].Возможно, что наша неспособность найти ассоциации возникла из-за используемого нами личностного показателя. Однако, поскольку ассоциации между личностью и генами, связанными с серотонином, у людей, скорее всего, являются ложноположительными [93], мы подозреваем, что не нашли никаких ассоциаций, потому что их не было.

Это исследование имело недостатки. Во-первых, почти 40% испытуемых жили в одноместных домах. Поведение, связанное с некоторыми чертами, могло поэтому быть редким или отсутствовать, и поэтому мы все еще, возможно, не улавливали достаточного количества вариаций между субъектами.Во-вторых, факторная структура сравнивалась с исследованиями, в которых использовались разные, хотя и частично совпадающие, инструменты. Неясно, в какой степени использование разных показателей могло скрыть сходство или размыть различия между структурами в этих исследованиях. Это ограничение также помешало нам использовать другие статистические методы для прямого сравнения этих структур. В-третьих, мы сочли целесообразным сообщить о генетических ассоциациях, чтобы они могли внести свой вклад в будущие мета-анализы, как мы упоминали ранее, для выявления генетических эффектов, необходимы значительно большие размеры выборки.В-четвертых, межэкспертная надежность переменных субъективного благополучия была ниже, чем у других нечеловеческих видов приматов, например, шимпанзе [40,47], и степень, в которой общий фактор насыщал элементы, была низкой.

Клише о том, что результаты исследования могут дать больше вопросов, чем ответов, соответствует настоящему делу. Тем не менее, эти результаты подчеркивают необходимость (и перспективу) крупных совместных исследований, если мы хотим понять непосредственное и окончательное происхождение структуры личности у обычных мартышек и других видов, включая наш.

Вспомогательная информация

S3 Таблица. Матрица шаблонов из факторного анализа первого порядка рейтингов по анкете гоминоидной личности.

N = 128. Soc = Общительность, Дом = Доминирование, Импульс = Импульсивность, Opn = Открытость, Neg = Негативное влияние, h 2 = общности. Факторы, извлеченные с использованием оценки максимального правдоподобия и повернутые с использованием процедуры варимакс. Факторные нагрузки больше или равны | 0,4 | выделены жирным шрифтом.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0238663.s017

(DOCX)

S4 Таблица. Матрица шаблонов из факторного анализа остаточных оценок.

N = 128. Факторам не присвоены метки. h 2 = общины. Факторы, извлеченные с использованием оценки максимального правдоподобия и повернутые с использованием процедуры promax. Факторные нагрузки больше или равны | 0,4 | выделены жирным шрифтом. Корреляция между факторами = 0,07.

https: // doi.org / 10.1371 / journal.pone.0238663.s018

(DOCX)

S5 Таблица. Матрица шаблонов из факторного анализа остаточных оценок.

N = 128. Факторам не присвоены метки. h 2 = общины. Факторы, извлеченные с использованием оценки максимального правдоподобия и повернутые с использованием процедуры promax. Факторные нагрузки больше или равны | 0,4 | выделены жирным шрифтом.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0238663.s019

(DOCX)

S6 Таблица.Матрица шаблонов из факторного анализа остаточных оценок.

N = 128. Soc = Общительность, Дом = Доминирование, Импульс = Импульсивность, Opn = Открытость, Neg = Негативное влияние, h 2 = сообщества. Факторы, извлеченные с использованием оценки максимального правдоподобия и повернутые с использованием процедуры promax. Факторные нагрузки больше или равны | 0,4 | выделены жирным шрифтом.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0238663.s020

(DOCX)

S8 Таблица. Матрица шаблонов из факторного анализа оценок 1-го оценщика.

N = 128. Импульсивность = Импульсивность, Социальность = Общительность, Доминирование = Доминирование, Опн = Открытость, Отрицание = Негативное влияние, ч 2 = общность. Факторы, извлеченные с использованием оценки максимального правдоподобия и повернутые с использованием процедуры promax. Факторные нагрузки больше или равны | 0,4 | выделены жирным шрифтом.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0238663.s022

(DOCX)

S9 Таблица. Матрица шаблонов из факторного анализа второго порядка из оценок 1-го оценщика.

N = 128. I = просоциальность (обратная), II = смелость, h 2 = общности. 1 При округлении до трех десятичных знаков эта нагрузка составила 0,995. Факторы, извлеченные с использованием оценки максимального правдоподобия и повернутые с использованием процедуры promax. Факторные нагрузки больше или равны | 0,4 | выделены жирным шрифтом. Факторная корреляция = -0,14.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0238663.s023

(DOCX)

S10 Стол.Матрица шаблонов из факторного анализа оценок 2-го эксперта.

N = 128. Факторам не присвоены метки. h 2 = общины. Факторы, извлеченные с использованием оценки максимального правдоподобия и повернутые с использованием процедуры promax. Факторные нагрузки больше или равны | 0,4 | выделены жирным шрифтом.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0238663.s024

(DOCX)

S11 Стол. Матрица шаблонов из факторного анализа оценок рейтингового эксперта 3.

N = 81. Факторам не присвоены метки. h 2 = общины. Факторы, извлеченные с использованием оценки максимального правдоподобия и повернутые с использованием процедуры promax. Факторные нагрузки больше или равны | 0,4 | выделены жирным шрифтом.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0238663.s025

(DOCX)

S12 Стол. Матрица шаблонов из факторного анализа взвешенной корреляционной матрицы (R

w ).

N = 128. h 2 = общины. Факторы, извлеченные с использованием оценки максимального правдоподобия и повернутые с использованием процедуры promax. Факторные нагрузки больше или равны | 0,4 | выделены жирным шрифтом.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0238663.s026

(DOCX)

S13 Стол. Матрица шаблонов из факторного анализа взвешенной корреляционной матрицы (R

w ).

N = 128. Soc = Общительность, Дом = Доминирование, Импульс = Импульсивность, Opn = Открытость, Neg = Негативное влияние, h 2 = общности.Факторы, извлеченные с использованием оценки максимального правдоподобия и повернутые с использованием процедуры promax. Факторные нагрузки больше или равны | 0,4 | выделены жирным шрифтом.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0238663.s027

(DOCX)

S14 Стол. Матрица шаблонов из факторного анализа второго порядка из взвешенной корреляционной матрицы (R

w ).

N = 128. h 2 = общины. Факторы, извлеченные с использованием оценки максимального правдоподобия и повернутые с использованием процедуры promax.Факторные нагрузки больше или равны | 0,4 | выделены жирным шрифтом. Факторная корреляция = -0,08.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0238663.s028

(DOCX)

Благодарности

Мы хотим поблагодарить ведущую аспирантуру по приматологии и науке о дикой природе. Мы также благодарны Хироми Кобаяши за техническую поддержку и г-ну Акихиро Кавасаки, г-ну Такаши Фукуока и г-же Чихо Такеда за оценку животных. AW благодарит Университет Киото за то, что он принял его в качестве приглашенного профессора в Центре исследования дикой природы.

Ссылки

  1. 1. Райландс А.Б., Коимбра-Филью А.Ф., Миттермайер Р.А. Систематика, географическое распространение и некоторые примечания о статусе сохранности Callitrichidae. В: Rylands AB, редактор. Мартышки и тамарины: Систематика, поведение, экология. Нью-Йорк: издательство Оксфордского университета; 1993. стр. 11–77.
  2. 2. Райлендс А.Б., де Фариа Д.С. Среда обитания, экология кормления и размер ареала обитания представителей рода Callithrix . В: Rylands AB, редактор.Мартышки и тамарины: Систематика, поведение, экология. Нью-Йорк: издательство Оксфордского университета; 1993. стр. 262–72.
  3. 3. Сервик К. Почему нейробиологи США требуют мартышек? Наука. 2018: 383–4.
  4. 4. Preuss TM. Критика чистой мартышки. Brain Behav Evol. 2019; 93 (2–3): 92–107. pmid: 31416070
  5. 5. Буркарт JM, Fehr E, Efferson C, van Schaik CP. Другое – в отношении предпочтений нечеловеческих приматов: обыкновенные мартышки обеспечивают еду альтруистично.Proc Natl Acad Sci U S. A. 2007; 104 (50): 19762–6. pmid: 18077409
  6. 6. Буркарт Дж. М., Аллон О., Амичи Ф., Фихтель С., Финкенвирт С., Хешл А. и др. Эволюционное происхождение человеческого гипер-сотрудничества. Nature Communications. 2014; 5. pmid: 25158760
  7. 7. Kawai N, Yasue M, Banno T, Ichinohe N. Мартышковые обезьяны оценивают стороннюю взаимность. Письма биологии. 2014; 10 (5). pmid: 24850892
  8. 8. Буркарт JM, ван Шайк CP. Когнитивные последствия кооперативного разведения приматов? Anim Cogn.2010; 13: 1–19. pmid: 19629551
  9. 9. Дигби Л.Дж., Феррари С.Ф., Зальцман В. Каллитрихинс: Роль конкуренции в совместном размножении видов. В: Кэмпбелл CJ, Fuentes A, MacKinnon KC, Bearder SK, Stumpf RM, редакторы. Приматы в перспективе. 2-е изд. Оксфорд: издательство Оксфордского университета; 2010. с. 91–107.
  10. 10. Шлипогор В., Гунхолд-де Оливейра Т., Тадич З., Массен Дж.М., Бугняр Т. Устойчивые межиндивидуальные различия у обычных мартышек ( Callithrix jacchus ) в смелости-застенчивости, стрессовой активности и избегании исследований.Am J Primatol. 2016; 78 (9): 961–73. pmid: 27286098
  11. 11. Martin JS, Massen JJM, Šlipogor V, Bugnyar T, Jaeggi AV, Koski SE. Структура EGA + GNM: интегративный подход к моделированию поведенческих синдромов. Методы экологии и эволюции. 2019; 10 (2): 245–57.
  12. 12. Koski SE, Burkart JM. Обыкновенные мартышки демонстрируют социальную пластичность и сходство личности на групповом уровне. Научные отчеты. 2015; 5. pmid: 25743581
  13. 13. Иноуэ-Мураяма М., Ёкояма К., Яманаси Ю., Вайс А.Обыкновенная мартышка (Callithrix jacchus ) личность, субъективное благополучие, уровень кортизола в волосах и генотипы AVPR1a , OPRM1 и DAT . Научные отчеты. 2018. pmid: 29980755
  14. 14. Томассетти Д., Караччиоло С., Манчокко А., Кьяротти Ф., Витале А., Де Филиппис Б. Личность и латерализация обыкновенных мартышек ( Callithrix jacchus ). Поведенческие процессы. 2019; 167. pmid: 31326510
  15. 15. Ёкояма К., Кавасаки А., Хаяси Т., Оноэ Х.Связь между средней корковой серотонинергической системой и социальными особенностями поведения: исследования с помощью позитронно-эмиссионной томографии обычных мартышек. Cereb Cortex. 2013; 23: 2136–45. pmid: 227
  16. 16. Шлипогор В., Буркарт Ю.М., Мартин Ю.С., Бугняр Т., Коски С.Е. Валидация метода личности у обыкновенных мартышек ( Callithrix jacchus ): получение лучшего из обоих миров. J Comp Psychol. 2020; 134 (1): 52–70. pmid: 31328951
  17. 17. Иваницкий С., Леманн Дж. Поведенческие и рейтинговые оценки личности обычных мартышек ( Callithrix jacchus ).J Comp Psychol. 2015; 129 (3): 205–17. pmid: 26075516
  18. 18. Гослинг С.Д., Грейбил А. Древовидное мышление: новая парадигма для интеграции сравнительных данных в психологии. J Gen Psychol. 2007. 134 (2): 259–77. pmid: 17503699
  19. 19. Харви PH, Пагель MD. Сравнительный метод в эволюционной биологии. Оксфорд, Англия: Издательство Оксфордского университета; 1991.
  20. 20. Горсуч Р.Л. Факторный анализ. 2-е изд. Хиллсдейл, Нью-Джерси: Лоуренс Эрлбаум Ассошиэйтс; 1983.
  21. 21.Арая-Аджой Ю.Г., Дингемансе, штат Нью-Джерси. Характеристика поведенческих персонажей: эволюционная структура. П Р Соц Б. 2014; 281 (1776). pmid: 24335984
  22. 22. Маккрэй Р.Р., Джон ОП. Введение в пятифакторную модель и ее приложения. J Pers. 1992. 60 (2): 175–215. pmid: 1635039
  23. 23. Digman JM. Структура личности: появление пятифакторной модели. Annu Rev Psychol. 1990; 41: 417–40.
  24. 24. Адамс М.Дж., Майоло Б., Остнер Дж., Шуэльке О., Де Марко А., Тьерри Б. и др.Структура личности и социальный стиль макак. J Pers Soc Psychol. 2015; 109 (2): 338–53. pmid: 26030054
  25. 25. Вайс А., Стаес Н., Перебум Дж. Дж. М., Иноуэ-Мураяма М., Стивенс Дж. М.Г., Энс М. Личность бонобо. Psychol Sci. 2015; 26 (9): 1430–1430. pmid: 26209530
  26. 26. Wilson VAD, Inoue-Murayama M, Weiss A. Сравнение личности обыкновенной и боливийской беличьей обезьяны ( Saimiri sciureus и Saimiri boliviensis ). J Comp Psychol.2018; 132 (1): 24–39. pmid: 246
  27. 27. Робинсон Л. М., Мортон Ф. Б., Gartner MC, Виднесс Дж., Паукнер А., Эсслер Дж. Л. и др. Дивергентные структуры личности коричневых и белолицых капуцинов. J Comp Psychol. 2016; 130 (4): 305–12. pmid: 27841454
  28. 28. Мортон Ф. Б., Ли П. К., Бьюкенен-Смит Х. М., Броснан С. Ф., Тьерри Б., Паукнер А. и др. Структура личности бурых обезьян-капуцинов ( Sapajus apella ): сравнение с шимпанзе ( Pan troglodytes ), орангутанами (Pongo spp.) и макаки резус ( Macaca mulatta ). J Comp Psychol. 2013; 127 (3): 282–98. pmid: 23668695
  29. 29. Фернандес-Боланьос М., Дельваль И., де Оливейра Р.С., Изар П. Оценка структуры личности диких обезьян капуцинов ( Sapajus xanthosternos ) с использованием оценки черт и поведенческого кодирования. J Comp Psychol. 2020; 134 (3): 349–60. pmid: 32150430
  30. 30. Масилкова М., Шлипогор В., Вайс А., Конечна М. Сравнительная оценка поведенческих структур личности у тамаринов с золотыми руками ( Saguinus midas ), хлопковых тамаринов ( Saguinus oedipus ) и обыкновенных мартышек ( Callithrix6 jac ).J Comp Psychol. 2020; Предварительная онлайн-публикация. pmid: 323
  31. 31. Коски С.Е., Бьюкенен-Смит Х., Эш Х., Буркарт Дж., Бугняр Т., Вайс А. Обыкновенная мартышка ( Callithrix jacchus ) личность. J Comp Psychol. 2017; 131 (4): 326–36. pmid: 226
  32. 32. Йокояма К., Оноэ Х. Молекулярная визуализация мозга черт личности нечеловеческих приматов: исследование обыкновенной мартышки. В: Иноуэ-Мураяма М., Кавамура С., Вайс А., редакторы. От генов к поведению животных: социальные структуры, личности, общение по цвету.Токио: Springer Japan; 2011. с. 389–406.
  33. 33. Вайс А. Черты характера: Взгляд из животного мира. J Pers. 2017. pmid: 28236301
  34. 34. Дельгадо М.М., Саллоуэй Ф.Дж. Атрибуты сознательности во всем животном мире: эмпирический и эволюционный обзор. Psychol Bull. 2017; 143 (8): 823–67. pmid: 28447829
  35. 35. Маклин Э.Л., Заяц Б., Нанн С.Л., Аддесси Э., Амичи Ф., Андерсон Р.К. и др. Эволюция самоконтроля. Proc Natl Acad Sci U S A.2014; 111 (20): E2140 – E8. pmid: 24753565
  36. 36. Маккрэй Р.Р., Терраччиано А., 78 участников проекта «Профили личностей культур». Универсальные особенности черт личности с точки зрения наблюдателя: данные из 50 культур. J Pers Soc Psychol. 2005. 88 (3): 547–61. ISI: 000227310400009. pmid: 15740445
  37. 37. Вайс А., Кинг Дж. Э., Хопкинс В. Д.. Перекрестное исследование структуры и развития личности шимпанзе ( Pan troglodytes ): зоологические парки и Национальный исследовательский центр приматов Йеркса.Am J Primatol. 2007. 69 (11): 1264–77. pmid: 17397036
  38. 38. Король Дж. Э., Вайс А., Фермер К. Х. Шимпанзе ( Pan troglodytes ) аналог межнационального обобщения структуры личности: зоологические парки и африканский заповедник. J Pers. 2005. 73 (2): 389–410. pmid: 15745435
  39. 39. Король JE, Фигередо AJ. Пятифакторная модель плюс доминирование в личности шимпанзе. J Res Pers. 1997. 31 (2): 257–71.
  40. 40. Weiss A, Inoue-Murayama M, Hong K-W, Inoue E, Udono S, Ochiai T. и др.Оценка личности и субъективного благополучия шимпанзе в Японии. Am J Primatol. 2009. 71 (4): 283–92. pmid: 150
  41. 41. Freeman HD, Brosnan SF, Hopper LM, Lambeth SP, Schapiro SJ, Gosling SD. Разработка комплексного сравнительного опросника для измерения личности шимпанзе с одновременным использованием нисходящего и восходящего методов. Am J Primatol. 2013; 75 (10): 1042–53. pmid: 23733359
  42. 42. Dutton DM. Субъективная оценка личности шимпанзе ( Pan troglodytes ): надежность и стабильность оценок признаков.Приматы. 2008. 49 (4): 253–9. pmid: 18668303
  43. 43. Shrout PE, Fleiss JL. Внутриклассовые корреляции: используются при оценке надежности оценщика. Psychol Bull. 1979. 86 (2): 420–8. pmid: 18839484
  44. 44. Шлипогор В., Массен Дж.М., Шиль Н., Соуто А., Бугняр Т. Временная согласованность и экологическая значимость структуры личности у обыкновенных мартышек ( Callithrix jacchus ): объединяющее поле и лабораторный подход. Am J Primatol. 2021; 83 (2). pmid: 33464603
  45. 45.ДеНев К.М., Купер Х. Счастливая личность: метаанализ 137 личностных черт и субъективного благополучия. Психологический бюллетень. 1998. 124 (2): 197–229. pmid: 9747186
  46. 46. Стил П., Шмидт Дж., Шульц Дж. Уточнение связи между личностью и субъективным благополучием. Psychol Bull. 2008. 134 (1): 138–61. pmid: 18193998
  47. 47. Король JE, Ландау VI. Могут ли человеческие оценщики оценить счастье шимпанзе ( Pan troglodytes )? J Res Pers.2003. 37 (1): 1–15.
  48. 48. Робинсон Л.М., Альтшул Д., Уоллес Э., Убеда Ю., Льоренте М., Мачанда З. и др. Шимпанзе с положительным благополучием более счастливы, экстравертированы и эмоционально стабильны. Appl Anim Behav Sci. 2017; 191: 90–7.
  49. 49. Вайс А., Кинг Дж. Э., Перкинс Л. Личность и субъективное благополучие орангутанов ( Pongo pygmaeus и Pongo abelii ). J Pers Soc Psychol. 2006; 90 (3): 501–11. pmid: 16594834
  50. 50. Вайс А., Адамс М.Дж., Виддиг А., Джеральд М.С.Макаки-резусы ( Macaca mulatta ) как живые окаменелости гоминоидной личности и субъективного благополучия. J Comp Psychol. 2011. 125 (1): 72–83. pmid: 21341912
  51. 51. Робинсон Л. М., Варан Н. К., Лич М. С., Мортон Ф. Б., Паукнер А., Лонсдорф Е. и др. У коричневых капуцинов счастье – это положительное благополучие ( Sapajus apella ). Appl Anim Behav Sci. 2016; 181: 145–51. WOS: 000381171300019.
  52. 52. Уилт Дж., Ревелл В. Экстраверсия. В: Видигер Т.А., редактор. Оксфордский справочник по пятифакторной модели.Нью-Йорк: издательство Оксфордского университета; 2017. с. 57–82.
  53. 53. Tackett JL, Lahey BB. Невротизм. В: Видигер Т.А., редактор. Оксфордский справочник по пятифакторной модели. Нью-Йорк: издательство Оксфордского университета; 2017. с. 39–56.
  54. 54. Staes N, Sherwood CC, Freeman H, Brosnan SF, Schapiro SJ, Hopkins WD, et al. Вариация рецептора серотонина 1А связана с тревогой и агонистическим поведением у шимпанзе. Mol Biol Evol. 2019; 36 (7): 1418–29. pmid: 31045220
  55. 55.Hayashi T., Hou Y, Glasser MF, Autio JA, Knoblauch K, Inoue-Murayama M, et al. Проект нейровизуализации и нейроанатомии нечеловеческих приматов. Нейроизображение. 2021; 229: 117726. pmid: 33484849
  56. 56. Вайс А. Изучение факторного пространства (и другие приключения) с помощью опросника гоминоидной личности. В: Vonk J, Weiss A, Kuczaj S, редакторы. Личность в нечеловеческих животных. Чам, Швейцария: Шпрингер; 2017. с. 19–38.
  57. 57. Гольдберг LR. Альтернативное «описание личности»: факторная структура Большой пятерки.Журнал личности и социальной психологии. 1990. 59 (6): 1216–29. pmid: 2283588.
  58. 58. McCrae RR, Costa PT Jr. Обновление «адекватной таксономии» Нормана: измерения интеллекта и личности на естественном языке и в анкетах. J Pers Soc Psychol. 1985. 49 (3): 710–21. pmid: 4045699
  59. 59. Коста П. Т. младший, МакКрэй Р. Р. Пересмотренное профессиональное руководство NEO Personality Inventory (NEO-PI-R) и NEO Five-Factor Inventory (NEO-FFI). Одесса, Флорида: ресурсы психологической оценки; 1992 г.
  60. 60. Динер Э., Сух Э.М., Лукас Р.Э., Смит Х.Л. Субъективное благополучие: три десятилетия прогресса. Психологический бюллетень. 1999. 125 (2): 276–302.
  61. 61. Динер Э., Эммонс Р.А. Независимость положительного и отрицательного воздействия. J Pers Soc Psychol. 1984. 47 (5): 1105–17. pmid: 6520704
  62. 62. Павот В., Динер Э., Колвин Ч.Р., Сандвик Э. Дальнейшее подтверждение шкалы удовлетворенности жизнью – свидетельство перекрестной конвергенции методов оценки благополучия.Журнал оценки личности. 1991. 57 (1): 149–61. pmid: 1

    8

  63. 63. Кэмпбелл А. Чувство благополучия в Америке: последние модели и тенденции. Нью-Йорк: Макгроу-Хилл; 1981.
  64. 64. Кантор Н., Сандерсон, Калифорния. Участие в жизненных задачах и благополучие: важность участия в повседневной жизни. В: Канеман Д., Динер Э., Шварц Н., редакторы. Благополучие: основы гедонической психологии. Нью-Йорк: Фонд Рассела Сейджа; 1999. с. 230–43.
  65. 65.R Core Team. R: Язык и среда для статистических вычислений. Вена, Австрия: Фонд R для статистических вычислений; 2020.
  66. 66. Ревель В. Психология: процедуры психологических, психометрических и личностных исследований. 1.9.12 изд. Эванстон, Иллинойс: Северо-Западный университет; 2019.
  67. 67. Наварро-Гонсалес Д., Лоренцо-Сева У. EFA.MRFA: Оценка размерности с использованием факторного анализа минимального ранга. 1.0.9 ed2020.
  68. 68. de Winter JCF, Dodou D, Wieringa PA.Исследовательский факторный анализ с небольшими размерами выборки. Многомерное поведенческое исследование. 2009. 44 (2): 147–81. pmid: 26754265
  69. 69. MacCallum RC, Widaman KF, Zhang S, Hong S. Размер выборки в факторном анализе. Психологические методы. 1999. 4 (1): 84–99.
  70. 70. Mundfrom DJ, Shaw DG, Ke TL. Рекомендации по минимальному размеру выборки для проведения факторного анализа. Международный журнал тестирования. 2005. 5 (2): 159–68.
  71. 71. Рог JL. Обоснование и проверка количества факторов в факторном анализе.Психометрика. 1965. 30 (2): 179–85. pmid: 14306381
  72. 72. Ауэрсвальд М., Мошаген М. Как определить количество факторов, которые необходимо сохранить в исследовательском факторном анализе: сравнение методов экстракции в реальных условиях. Психологические методы. 2019; 24 (4): 468–91. pmid: 30667242
  73. 73. Шварц Г. Оценка размерности модели. Анналы статистики. 1978. 6 (2): 461–4.
  74. 74. Ceulemans E, Kiers HAL. Выбор среди трехмодовых моделей главных компонентов различных типов и сложности: метод числовой выпуклой оболочки.Br J Math Stat Psychol. 2006. 59 (1): 133–50. pmid: 16709283
  75. 75. Лоренцо-Сева У., Тиммерман М.Э., Кирс Х.А. Метод Халла для выбора числа общих факторов. Multivar Behav Res. 2011. 46 (2): 340–64. pmid: 26741331
  76. 76. Уэйнер Х. Оценка коэффициентов в линейных моделях: это не имеет значения. Psychol Bull. 1976; 83 (2): 213–7.
  77. 77. Холм С. Простая процедура последовательного множественного отбора. Скандинавский статистический журнал.1979; 6 (2): 65–70.
  78. 78. Коста П. Т. младший, МакКрэй Р. Р. Дополнение к руководству по эксплуатации NEO-4. Одесса, Флорида: ресурсы психологической оценки; 1998.
  79. 79. Bäckström M, Björklund F, Larsson MR. Пятифакторная инвентаризация имеет главный общий фактор, связанный с социальной желательностью, который можно уменьшить, если сформулировать предметы нейтрально. J Res Pers. 2009. 43 (3): 335–44.
  80. 80. Фриман HD, Гослинг SD. Личность нечеловеческих приматов: обзор и оценка прошлых исследований.Am J Primatol. 2010. 72 (8): 653–71. pmid: 20568079
  81. 81. Коста П. Т. младший, МакКрэй Р. Р. Поперечные исследования личности в национальной выборке: I. Разработка и проверка показателей обследования. Психология и старение. 1986; 1 (2): 140–3. pmid: 3267390
  82. 82. Digman JM. Факторы высшего порядка большой пятерки. J Pers Soc Psychol. 1997. 73 (6): 1246–56. pmid: 9418278
  83. 83. Мусек Дж. Общий фактор личности: свидетельство большого в пятифакторной модели.J Res Pers. 2007. 41 (6): 1213–33.
  84. 84. Ревелл В., Уилт Дж. Общий фактор личности: общая критика. J Res Pers. 2013. 47 (5): 493–504. pmid: 23956474
  85. 85. Фергюсон Э., Чаморро-Премузик Т., Пикеринг А., Вайс А. Пять в один не идут: критика общего фактора личности. В: Chamorro-Premuzic T, von Stumm S, Furnham A, editors. Справочник Вили-Блэквелла по индивидуальным различиям. Западный Сассекс, Великобритания: Уайли-Блэквелл; 2011. с.162–86.
  86. 86. Матч К. Факторы высшего порядка модели личности Большой пятерки: повторный анализ Дигмана (1997). Psychol Rep. 2005; 96 (1): 167–77. pmid: 15825921
  87. 87. Вайс А., Бейтс Т.С., Лучано М. Счастье – это личная вещь: генетика личности и благополучия в репрезентативной выборке. Psychol Sci. 2008; 19: 205–10. pmid: 18315789
  88. 88. Weiss A, Baselmans BML, Hofer E, Yang J, Okbay A, Lind PA и др. Полигены личности, положительный аффект и удовлетворенность жизнью.Twin Res Hum Genet. 2016; 19 (5): 407–17. pmid: 27546527
  89. 89. Хан Э., Готчлинг Дж., Кениг С.Дж., Spinath FM. Пересмотрена наследственность удовлетворенности работой: только уникальные факторы окружающей среды, помимо личности. Журнал бизнеса и психологии. 2016; 31 (2): 217–31.
  90. 90. Хан Э, Джонсон В., Spinath FM. Помимо наследственности удовлетворенности жизнью – роли личности и близнецовых влияний. Журнал исследований личности. 2013. 47 (6): 757–67.
  91. 91. Адамс MJ, King JE, Weiss A. Большинство генетических вариаций личности и субъективного благополучия орангутанга не аддитивны. Behav Genet. 2012; 42: 675–86. pmid: 22460560
  92. 92. Вайс А., Кинг Дж. Э., Эннс РМ. Субъективное благополучие наследуется и генетически коррелирует с доминированием у шимпанзе ( Pan troglodytes ). J Pers Soc Psychol. 2002; 83: 1141–9. pmid: 12416918
  93. 93. Munafò MR, Freimer NB, Ng W., Ophoff R, Veijola J, Miettunen J, et al.Генотип 5-HTTLPR и особенности личности, связанные с тревогой: метаанализ и новые данные. Am J Med Genet B Neuropsychiatr Genet. 2009. 150B (2): 271–81. pmid: 18546120

Свойства и профили экспрессии генов приобретенной радиорезистентности в клетках рака молочной железы мышей – Qin

Введение

Рак молочной железы был определен как ведущая причина смерти от рака среди женщин, вызывая около 500000 смертей в год (1). Хирургия, лучевая и адъювантная системная терапия (химиотерапия, эндокринная терапия и тканевая терапия) являются распространенными методами лечения рака груди (2).Лучевая терапия (ЛТ) обычно используется для уменьшения размеров больших опухолей перед операцией или уничтожения послеоперационных остаточных клеток рака молочной железы. Однако разные подтипы рака груди по-разному реагируют на ЛТ. Опухоли, положительные по рецептору 2 эпидермального фактора роста (HER2), составляют около 15–20% случаев рака молочной железы и, как сообщается, демонстрируют гораздо большую радиорезистентность, чем HER2-отрицательный рак молочной железы при клинической лучевой терапии (3-5). Накапливаются данные, свидетельствующие о том, что сверхэкспрессия HER2 связана с радиорезистентностью, опосредованной активацией пути NF-κB и PI3K / Akt, способствуя переходу эпителия в мезенхиму или приобретая фенотип стволовых клеток.Однако радиорезистентность HER2-положительного рака молочной железы все еще не может быть полностью объяснена известными в настоящее время механизмами.

Значительный прогресс был достигнут в лучевой терапии рака, но радиорезистентность остается основным препятствием на пути к эффективному лечению (6). В клинической лучевой терапии лучевая терапия иногда неэффективна для подавления регрессии опухоли, и ускоренная репролиферация также обычно наблюдается на позднем курсе лучевой терапии (7). Несмотря на то, что опухоли почти полностью исчезли на медицинских изображениях после лучевой терапии, остаточные опухолевые клетки, которые нельзя обнаружить с помощью обычных диагностических процедур, иногда оставались жизнеспособными.Фактически, репопуляция опухолей, возникающих из этих остаточных клеток, часто приобретает радиорезистентность, что является важной причиной неудач лучевой терапии (8). Между тем приобретенная радиорезистентность приводит к огромным различиям в биологических свойствах устойчивых клеток и их родительских клеток. Предыдущие исследования показали, что приобретенные клетки радиорезистентности претерпевают характерные изменения, включая ускоренную репопуляцию, усиленную миграцию и инвазию, а также повышенную антиапоптозную активность (9-11).Кроме того, накопленные данные свидетельствуют о том, что изменения метаболизма после облучения связаны с приобретением радиорезистентности и играют важную роль в метастазировании и толерантности опухоли (12,13). Необходимо профилировать характерные изменения в клетках с приобретенной радиорезистентностью.

Насколько нам известно, приобретенная радиорезистентность обычно возникает в результате комбинации нескольких сигнальных путей в ответ на облучение. Однако сложно идентифицировать ключевые эффекторы в этих комплексных сигнальных путях.Более того, изменения биологических функций после облучения, включая клеточную пролиферацию, миграцию, инвазию и апоптоз, также обычно сводятся к изменениям в профиле экспрессии генов (9,11,14). Основываясь на методе RNA-seq (RNA-Sequencing), который может точно измерять уровни транскриптов и их изоформ, одновременно можно идентифицировать задействованные молекулы сигнального пути. Метод RNA-seq был использован для исследования генов, чувствительных к облучению. Ма и др. идентифицировал 1656 значительно измененных генов в ответ на облучение с помощью RNA-seq, и эти гены обогащены различными биологическими путями, включая остановку клеточного цикла, репликацию ДНК, репарацию ДНК и апоптоз (15).Янг et al. также обнаружил несколько генов, связанных с репарацией повреждений ДНК, которые играют важную роль в радиорезистентности (16).

В этом исследовании была создана линия клеток рака молочной железы, резистентных к радиации (NF639R), из клеток NF639, сверхэкспрессирующих Her-2 / neu, путем моделирования рутинной клинической лучевой терапии. Некоторые свойства радиорезистентных клеток были описаны следующим образом: (I) наблюдалась серия морфологических изменений, включая более мелкие и длинные тела клеток и более тонкие псевдоподии; (II) активность пролиферации, антиапоптоза и миграции была усилена, но базальный уровень ROS (активных форм кислорода) был снижен; (III) митохондриальное дыхание и гликолитическая функция были увеличены.Кроме того, в общей сложности было идентифицировано 490 дифференциально экспрессируемых генов в радиорезистентных клеточных линиях, а также были изучены возможные механизмы, связанные с указанными выше свойствами. Таким образом, мы предоставили идеальную модель для изучения выявленных различных свойств после повторной лучевой терапии и предварительно исследовали связанные возможные механизмы. Наше исследование дало новое понимание рецидива опухоли после лучевой терапии.

Мы представляем следующую статью в соответствии с контрольным списком отчетов MDAR (доступен по адресу http: // dx.doi.org/10.21037/atm-20-4667).


Методы

Культура клеток и условия культивирования

Линия клеток рака молочной железы мышей NF639, управляемая Her-2 / neu, была приобретена из Американской коллекции типовых культур (Манассас, штат Вирджиния, США) и сохранена в среде Игла, модифицированной Дульбекко (кат. №: C11875500BT, Gibco, США) с добавлением 10% фетальной бычьей сыворотки (FBS, № по каталогу: S711-001S, Lonsera, Уругвай), 100 Ед / мл пенициллина и 100 мкг / мл стрептомицина (№ по каталогу. : 15140-122, Gibco, США).Клетки инкубировали при 37 ° C в увлажненной атмосфере в инкубаторе с 5% CO 2 и регулярно проверяли на загрязнение микоплазмами.

Облучение рентгеновскими лучами

Клетки подвергали облучению рентгеновскими лучами (SHINVA 600D) заданными дозами с мощностью дозы 0,189 Гр / мин. Перед облучением культуральную среду заменяли свежей.

Создание приобретенной радиорезистентной клеточной линии

Радиорезистентные клетки NF639R были разработаны из их родительских клеток NF639 путем моделирования клинической рутинной лучевой терапии, фракционированной по 2 Гр в день, 5 дней в неделю.Общая доза 80 Гр, разделенная на две схемы (всего 40 Гр / график) с интервалом в 4 недели, была получена в течение 12 недель. Вкратце, после получения 40 Гр (первая схема: 20 фракций в течение 4 недель) большинство клеток погибло, а затем оставшиеся клетки инкубировали в течение 4 недель (NF639 40 Гр ) и впоследствии облучали 40 Гр (вторая график: 20 фракций в течение 4 недель) ( Рисунок 1A ). После 3 месяцев (~ 30 пассажей) культивирования после облучения (всего 80 Гр) была создана радиорезистентная клеточная линия, названная NF639R, которую затем использовали в последующих экспериментах.Родительские клетки обрабатывали таким же образом, но без облучения (ИК).

Рисунок 1 Создание и проверка модели резистентных клеток. (А) График облучения. (B) Выходы MN (микроядра) в клетках NF639 и NF639R после облучения. (C) Кривые выживаемости клеток NF639 и NF639R после воздействия рентгеновских лучей в указанных дозах. Все данные представлены как среднее значение ± стандартное отклонение из трех независимых экспериментов. *, P <0,05; **, P <0,01.

Анализ микроядер

Частоту образования микроядер измеряли с помощью метода цитокинезного блока.Клетки обрабатывали трипсином и затем высевали при начальной плотности 5 × 10 4 клеток на чашку диаметром 35 мм. Цитохалазин B (каталожный номер: C6762, Sigma, США) добавляли в культуральную среду до конечной концентрации 1,5 мкг / мл после облучения 0, 2 или 4 Гр. Через 48 часов после облучения клетки фиксировали в 4% параформальдегиде (каталожный номер: P6148-100G, Sigma, США) в течение 30 минут и окрашивали 0,1% акридиновым оранжевым (каталожный номер: A6014, Sigma, США). решение. По крайней мере 1000 клеток были исследованы под флуоресцентным микроскопом (Leica DMI 4000B, Германия), и только микроядра в двуядерных клетках были рассмотрены для анализа.

Анализ колониеобразования

Клетки NRF639 и NRF639R высевали в чашки Петри диаметром 60 мм с плотностью 300 клеток на чашку. Затем прикрепленные клетки облучали рентгеновскими лучами 0, 2, 4 или 6 Гр. Через 10 дней клетки фиксировали 4% параформальдегидом и окрашивали 1% кристаллическим фиолетовым. Подсчитывали колонии, содержащие более 50 клеток, и рассчитывали эффективность посева и выживающую фракцию (SF). Кривые выживаемости клеток были получены с помощью многоцелевой модели однократного попадания в Origin 8.0 (OriginLab Corporation, Нортгемптон, Массачусетс, США). Каждый эксперимент проводился трижды.

Анализ пролиферации клеток

Для оценки скорости пролиферации клеток жизнеспособность клеток определяли с помощью набора Cell Counter Kit-8 (CCK-8) (каталожный номер: CK04-500T, Додзиндо, Япония) в соответствии с инструкциями производителя. инструкции. Вкратце, клетки высевали с плотностью 4000 клеток на лунку в 96-луночный планшет. Раствор CCK-8 (10 мкл) добавляли в каждую лунку и инкубировали при 37 ° C в течение 2 часов.Оптическую плотность (ОП) каждой лунки при 450 нм измеряли на считывающем устройстве для микропланшетов Varioskan Flash (Thermo Fisher Scientific, Германия).

Анализ миграции клеток

Анализ миграции клеток выполняли во вставке Transwell с дном поликарбонатной мембраны (размер пор 8,0 мкм) (Каталожный номер: 3422, Корнинг, Нью-Йорк, США). Вкратце, клетки суспендировали в бессывороточной среде и высевали во внутреннюю камеру (5 × 10 4 клеток на камеру). Полную питательную среду добавляли во внешнюю камеру.После 12 часов инкубации немигрирующие клетки на верхней стороне мембраны осторожно удаляли ватным тампоном, а клетки, мигрировавшие через мембрану, фиксировали и окрашивали 1% кристаллическим фиолетовым. Изображения окрашенных клеток получали с помощью микроскопа (100 ×). В каждой лунке подсчитывали клетки как минимум в 5 случайно выбранных полях. Каждый эксперимент проводился в трех экземплярах.

Обнаружение внутриклеточных АФК

Производство внутриклеточных АФК измеряли с помощью флуоресцентного зонда CELLROX ™ DEEP RED (кат.№: C10422, Thermo Fisher Scientific, Уолтем, Массачусетс, США), следуя инструкциям производителя. Вкратце, клетки трипсинизировали и промывали средой DMEM без FBS с последующей инкубацией с CELLROX ™ DEEP RED (2,5 мкМ) в течение 30 минут при 37 ° C в темноте. Затем клетки собирали и промывали PBS. Базальный уровень ROS определяли с помощью проточного цитометра (Accuri C6, BD Biosciences, Бедфорд, Массачусетс, США).

Обнаружение апоптоза

После обработки ионизирующим излучением клетки собирали через 72 часа и определяли апоптоз с помощью набора для обнаружения апоптоза PI-Annexin V (кат.№: 559763, BD, USA) согласно протоколу производителя. Затем клетки немедленно анализировали с помощью проточного цитометра (Accuri C6, BD Biosciences, Бедфорд, Массачусетс, США). Все анализы данных были выполнены с использованием аналитического программного обеспечения FlowJo.

Анализ Seahorse XF

Равное количество клеток (2,0 × 10 4 клеток на лунку) высевали в четырехкратные лунки планшета для культивирования клеток XF24 (Seahorse Bioscience, North Billerica, MA, USA) для достижения 90% слияния. На следующий день измеряли OCR (скорость потребления кислорода) и ECAR (скорость внеклеточного закисления) с помощью анализатора внеклеточного потока XF24 (Seahorse Bioscience).Для определения митохондриального стресса клетки промывали и заменяли средой XF-I (pH 7,4, 5 мМ глюкозы, 2 мМ пирувата натрия и 2 мМ L-глутамина в среде Морского конька XF Base, модифицированной Дульбекко в среде Игла; каталожный номер: 102353- 100, Agilent, Санта-Клара, Калифорния, США) с последующей инкубацией в течение 1 ч при 37 ° C в инкубаторе без CO 2 . Олигомицин (0,5 мкМ), карбонилцианид п- (трифторметокси) фенилгидразон (FCCP, 0,5 мкМ) и антимицин A / ротенон (10 мкМ) из набора XF Cell Mito Stress Test Kit (кат.№: 103015-100, Agilent, Санта-Клара, Калифорния, США) затем вводили последовательно. Для определения стресса гликолиза клетки промывали и среду заменяли средой XF-II (pH 7,4, 2 мМ L-глутамин в среде Игла Seahorse XF Base, модифицированной Дульбекко) с последующей инкубацией в течение 1 ч при 37 ° C в CO. 2 бесплатный инкубатор. Затем последовательно вводили три соединения (10 мМ глюкозы, 1,0 мкМ олигомицина и 100 мМ 2-дезоксиглюкозы) из набора для стресс-теста на гликолиз XF (каталожный номер: 103020-100, Agilent, Санта-Клара, Калифорния, США).Результаты были нормализованы к общему белку, измеренному с помощью анализа Брэдфорда, и данные были проанализированы с помощью программного обеспечения Seahorse Wave. Базальное окислительное фосфорилирование (OXPHOS) (до добавления олигомицина) и АТФ-связанный OXPHOS (разница между базальным OCR и OCR, индуцированным олигомицином) рассчитывали из профиля OCR как показателей дыхательной функции митохондрий. Базальный гликолиз (после добавления глюкозы), максимальный гликолиз (после добавления олигомицина) и гликолитическая способность (разница между ECAR, индуцированным олигомицином и ECAR, индуцированным 2-дезоксиглюкозой) были рассчитаны из профиля ECAR как индексы активации гликолитического пути.

Экстракция и секвенирование РНК

Общую РНК экстрагировали с использованием набора Qiagen RNeasy Midi Kit (№ по каталогу: 75144, Qiagen, Валенсия, Калифорния, США) в соответствии с инструкциями производителя. Количество образцов РНК определяли с помощью NanoDrop 2000 (Thermo Fisher Scientific, Уолтем, Массачусетс, США) и биоанализатора Agilent 2100 (Agilent Technologies, Санта-Клара, Калифорния, США). TruSeq RNA Library Prep Kit v2 (Cat. No. RS-122-2001, Illumina, San Diego, CA, USA) использовали для подготовки библиотек в соответствии с инструкциями производителя.Очищенные библиотеки количественно оценивали с помощью флуорометра Qubit 2.0 (Life Technologies, Карлсбад, Калифорния, США) и биоанализатора Agilent 2100. Кластеры были созданы с использованием cBot с библиотекой и секвенированы на платформе Illumina HiSeq 2500 (Сан-Диего, Калифорния, США).

Биоинформатический анализ RNA-seq

FastQC (версия: 0.11.2) был проведен для контроля качества (QC) чтения RNA-Seq (http://www.bioinformatics.babraham.ac.uk/projects/fastqc) . Обрезка выполнялась с помощью Trimmomatic (версия: 0.36) для известных последовательностей адаптеров Illumina TruSeq, плохих считываний и считываний РНК рибосом и т.д. Обрезанные считывания затем были сопоставлены с эталонным геномом Mus musculus (MM10) с помощью HISAT2 (версия: 2.1.0) (17,18). StringTie (версия: 1.3.3b) выполнялся для каждого подсчета генов из обрезанных считываний (19). Количество генов нормализовали по усеченному среднему M-значению (TMM) и рассчитывали количество транскриптов на миллион (TPM) (20). DEGseq выполняли для определения дифференциально-экспрессируемых генов, следуя пороговому значению со значением q <0.05 и абсолютные значения | log 2 FC (кратное изменение) | > 1 (21). Пути GO (Gene Ontology) и KEGG (Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes) были обогащены пакетом R (v3.5.1), чтобы лучше понять функции DEG (дифференциально экспрессируемые гены) (22). Сеть белок-белкового взаимодействия (PPI) была построена с использованием базы данных STRING. В этом исследовании clusterProfiler был применен для анализа терминов GO и путей KEGG, и были представлены 30 лучших GO и путей.

Количественная ПЦР в реальном времени

Концентрацию и чистоту общей РНК анализировали с помощью NanoDrop 2000 (Thermo Fisher Scientific, Уолтем, Массачусетс, США).Обратную транскрипцию для синтеза кДНК проводили с помощью набора RevertAid First Strand cDNA Synthesis Kit (каталожный номер: K1621, Thermo Scientific, США) из 2 мкг общей РНК в соответствии с инструкциями производителя. КПЦР (количественная ПЦР в реальном времени) выполняли с помощью набора для ПЦР QuantiTect SYBR Green (каталожный номер: 204143, Qiagen, Германия) с использованием определенных праймеров, перечисленных в таблице . Ген домашнего хозяйства, β-актин, служил в качестве внутреннего контроля, и относительные уровни мРНК рассчитывались методом 2 – ΔΔCq .

Таблица 1 Праймеры, используемые для анализа количественной ПЦР
Полный стол

Статистический анализ

T -тесты использовали для скрининга дифференциально экспрессируемых генов между клетками NF639R и NF639 с порогом P <0,05 и кратным изменением> 2. Все эксперименты были выполнены независимо 3 раза, и для каждого эксперимента было взято по 3 параллельных образца. Все данные были представлены как среднее значение ± стандартное отклонение (стандартное отклонение) из трех независимых экспериментов.Статистическая значимость была определена с помощью t -теста, и P <0,05 считалось значимым различием.


Результаты

Приобретенная радиорезистентность клеток NF639R

Для проверки радиорезистентности клеток NF639R, то есть выживших клеток NF639 после общего облучения 80 Гр, были выполнены анализ выживаемости клонов и тест микроядер. По сравнению с клетками NF639, выход микроядер в клетках NF639R также был значительно ниже после той же дозы облучения (, рис. 1В, ), что указывает на уменьшение невосстановленных или неправильно восстановленных повреждений ДНК.Фракции выживания клеток NF639 и NF639R были подобраны с помощью модели с множеством мишеней с одним попаданием, а аппроксимирующая кривая доза-эффект показана на , рис. 1C, . Значения нескольких параметров, включая D0 (средняя летальная доза), Dq (квазипороговая доза), SF2 (доля выживания при 2 Гр) и SERDq (коэффициенты повышения сенсибилизации Dq), были рассчитаны и показаны в таблице 2 . Результаты показали, что выживаемость клеток NF639R была значительно выше, чем у клеток NF639 после воздействия той же дозы облучения, что свидетельствует о значительном увеличении радиорезистентности.Кроме того, значения D0, Dq и SF2 для клеток NF639R были выше, чем для клеток NF639, что дополнительно указывает на то, что средняя летальная доза заметно увеличилась в клетках NF639R. Коэффициент усиления сенсибилизатора для Dq (SERDq) показал значительное увеличение до 1,58 (, таблица 2, ) в NF639R. Взятые вместе, клетки NF639R проявляли значительно повышенную радиорезистентность по сравнению с клетками NF639.

Таблица 2 Параметры кривой выживаемости клеток NF639 и NF639R после облучения
Полный стол

Стимулирование злокачественности опухолевых клеток, сопровождающееся приобретением радиорезистентности.

В отличие от крупной и плоской морфологии клеток NF639, в большинстве клеток NF639R наблюдались более мелкие и веретенообразные тела и длинные тонкие ложные ножки (, рис. 2А, ).Известно, что веретеновидная морфология, мезенхимальный фенотип, способствует миграции опухолевых клеток (23-25). Действительно, анализ миграции через лунки показал, что количество мигрирующих клеток NF639R было примерно в 2,5 раза больше, чем количество мигрирующих клеток NF639, что указывает на сильную миграционную способность клеток NF639R ( Рисунок 2B, C ). Пролиферативный анализ также показал значительное увеличение (~ 1,15 раза) клеток NF639R по сравнению с клетками NF639 (, фиг. 2D, ), что указывает на то, что пролиферация опухолевых клеток ускоряется после переноса в радиорезистентные клетки.Накапливающиеся данные свидетельствуют о том, что приобретенная способность подавлять апоптоз играет решающую роль в развитии радиационной устойчивости (11, 26). Результаты на фигуре , фиг. 2E , показали, что клетки NF639R проявляют значительно меньший апоптоз, чем клетки NF639, подтверждая повышенную антиапоптотическую способность клеток NF639R. Наконец, были обнаружены базальные уровни АФК в клетках NF639 и NF639R, и результаты показали, что средняя интенсивность флуоресценции в клетках NF639R была в 1,54 раза ниже, чем у клеток NF639 ( Рисунок 2F, G ), что указывает на более низкий базальный уровень АФК в клетках. Клетки NF639R.

Рисунок 2 Разница в нескольких свойствах ячеек NF639 и NF639R. (А) Морфология клеток NF639 и NF639R. Масштабная линейка 200 мкм. (B) Типичные изображения мигрировавших клеток NF639 и NF639R, окрашенных 0,2% раствором кристаллического фиолетового. Масштабная линейка, 100 мкм. (C) Количественная оценка мигрировавших клеток NF639 и NF639R. (D) Способность к пролиферации, измеренная с помощью тестов Cell Counter Kit-8 в клетках NF639 и NF639R. (E) Апоптоз, обнаруженный с помощью проточной цитометрии через 72 часа после облучения 4 или 8 Гр.(F, G) Обнаружение активных форм кислорода с использованием CELLROX ™ DEEP RED в клетках NF639 и NF639R. (F) Профили гистограмм клеток NF639 и NF639R с проточной цитометрией. (G) Количественная оценка средней интенсивности флуоресценции в клетках NF639 и NF639R. Все данные представлены как среднее значение ± стандартное отклонение из трех независимых экспериментов. *, P <0,05; **, P <0,01.

В совокупности, изменение морфологии клеток, усиление миграционной способности, пролиферации и антиапоптозной способности и снижение базальных АФК наблюдались в клетках NF639R с приобретенной радиорезистентностью.Эти результаты показали, что клетки NF639R должны быть более злокачественными, чем их родительские клетки NF639.

Перепрограммирование энергетического метаболизма в клетках NF639R

Аэробный гликолиз и митохондриальное окислительное фосфорилирование являются двумя основными путями энергетического метаболизма, обеспечивающими достаточно энергии для выживания клеток. Изменения в энергетическом обмене могут существенно повлиять на судьбу опухолевых клеток (27,28). Следовательно, способность к гликолизу и функция митохондрий в клетках NF639 и NF639R были дополнительно изучены.Были получены кинетические профили OCR и ECAR в клетках NF639 и NF639R ( Рисунок 3A, B ) и рассчитаны различные основные параметры. Значительное увеличение базального OCR, утечки протонов, выработки АТФ, резервной дыхательной емкости и максимального уровня дыхания, но значительное снижение немитохондриального потребления кислорода наблюдалось в клетках NF639R по сравнению с клетками NF639 ( Рисунок 3C ). Эти результаты свидетельствуют о том, что способность митохондриального дыхания была увеличена в клетках NF639R по сравнению с клетками NF639.Более того, более высокая резервная респираторная функция также может быть связана с повышенной доступностью энергии в зависимости от OXPHOS в клетках NF639R. Анаэробный гликолиз, определяемый как превращение глюкозы в лактат, является основным путем производства АТФ, не зависящим от митохондриального дыхания. Гликолитическую активность оценивали путем измерения скорости внеклеточного закисления (ECAR). Клетки NF639R показали более высокий щелочной гликолиз, гликолитическую способность, гликолитический резерв и негликолитическое закисление, чем клетки NF639 (, фиг. 3D ), что указывает на повышенную гликолитическую активность в радиорезистентной клеточной линии NF639R.Повышенный анаэробный гликолиз может также производить больше предшественников для синтеза макромолекул, таких как нуклеотиды, белки и липиды, которые необходимы для выживания и пролиферации клеток.

Рисунок 3 Глобальные метаболические различия между клетками NF639 и NF639R. (A) Кинетический профиль OCR (скорость потребления кислорода) в клетках NF639 и NF639R, измеренный в режиме реального времени, в базовых условиях и в ответ на митохондриальные препараты олигомицин, фенилгидразон, антимицин A и ротенон для OCR.(B) Кинетический профиль ECAR (скорость внеклеточного закисления) в клетках NF639 и NF639R, измеренный в режиме реального времени в базовых условиях и в ответ на глюкозу, олигомицин и 2-дезоксиглюкозу для ECAR. (C) Индексы дыхательной функции митохондрий, рассчитанные из профиля OCR клеток NF639 и NF639R: базальный OCR, утечка протонов, производство АТФ, максимальная дыхательная способность, резервная дыхательная способность и немитохондриальное потребление кислорода. (D) Показатели активации гликолитического пути, рассчитанные из профиля ECAR клеток NF639 и NF639R: базальный ECAR, гликолитическая емкость, гликолитический резерв и негликолитическое подкисление.Все данные представлены как среднее значение ± стандартное отклонение из трех независимых экспериментов. *, P <0,05; **, P <0,01.

Идентификация по-разному экспрессируемых генов между клетками NF639 и NF639R

Для систематической идентификации генов, связанных с измененными свойствами клеток NF639R, использовали высокопроизводительное секвенирование РНК. Было обнаружено высокое сходство трех независимых биологических повторов и значительная разница между клетками NF639R и NF639 ( Рисунок 4A ).После серии биоинформатических анализов было идентифицировано 490 DEG, включая 187 гена с усиленной регуляцией и 303 гена с пониженной регуляцией, в соответствии со строгим порогом q <0,05 и | log 2 FC | > 1 (https://cdn.amegroups.cn/static/public/atm-20-4667-1.pdf, Рисунок 4B ). Иерархическая кластеризация DEG была визуализирована на рис. 4C . После того, как PPI DEG были предсказаны с помощью базы данных STRING, была визуализирована сеть PPI (рисунок S1).

Рисунок 4 Биоинформатический анализ РНК-секвенирования.(A) Тепловая карта корреляции образцов среди всех шести образцов. (B, C) Дифференциально экспрессируемые гены (DEG) между клетками NF639 и NF639R отображаются на графике вулкана (B) и тепловой карте (C). (D, E) Топ-30 терминов обогащения пути GO (онтология генов) (D) и пути обогащения пути KEGG (киото-энциклопедия генов и геномов) (E) с помощью дифференциально экспрессируемых генов. (F) Визуализация тепловой карты top50 up-DEGs и down-DEG между ячейками NF639 и NF639R. (G, H) Количественная ПЦР (кПЦР) в реальном времени для проверки девяти генов с усиленной регуляцией (G) и семи генов с пониженной регуляцией (H), случайно выбранных из 100 наиболее дифференциально экспрессируемых генов.(I, J) Проверка qPCR генов, связанных с EMT (эпителиально-мезенхимальный переход) и CSC (раковые стволовые клетки). (I) Проверка активированных генов, включая четыре гена ( Sox9 , Mapk12 , Wnt6 и Tcf7 ), которые способствуют фенотипам CSC, и один ген ( Msx2 ), который способствует фенотипам EMT. (J) Валидация генов с пониженной регуляцией, включая два гена ( Gja1 и Gjb3 ), которые ингибируют фенотипы ЕМТ. Данные выражены как среднее значение ± стандартное отклонение, n = 3, для каждого из трех образцов.*, P <0,05; **, P <0,01; ***, P <0,001.

Для дальнейшего понимания DEG, связанных со свойствами клеток NF639R, с помощью clusterProfiler был проведен анализ обогащения GO с 490 DEG. Всего было обогащено 1772 значимых термина GO (P <0,05) (https://cdn.amegroups.cn/static/public/atm-20-4667-2.pdf), включая 1385 терминов биологических процессов, 176 терминов клеточных компонентов. и 211 членов молекулярных функций. В биологических процессах TOP30 GO ( Рисунок 4D ) категории GO с очень значимыми значениями p, включая регуляцию дифференцировки клеток, регуляцию пролиферации клеток, перемещение клеточных компонентов и регуляцию клеточного цикла, соответствовали ускоренной пролиферации и измененной морфологии клеток в NF639R. клетки.В соответствии с фенотипом гипермиграции NF639R, термины, связанные с миграцией, включая миграцию клеток, подвижность клеток, адгезию клеток и развитие мезенхимальных клеток, также наблюдались в биологических процессах TOP150 GO. Кроме того, термины, относящиеся к апоптозу (гибель клеток, положительная и отрицательная регуляция запрограммированной гибели клеток), термины, относящиеся к опухолевым стволовым клеткам (положительная регуляция дифференцировки стволовых клеток и положительная регуляция пролиферации стволовых клеток) и термины, связанные с энергетическим метаболизмом ( регуляция метаболического процесса, реакция на глюкозу и положительная регуляция транспорта глюкозы) также наблюдались в 1772 значимых условиях GO (https: // cdn.amegroups.cn/static/public/atm-20-4667-2.pdf). Кроме того, были некоторые важные термины GO, такие как сигнальный путь рецептора клеточной поверхности, каскад MAPK, сигнальный путь Wnt, каскад ERK1 и ERK2, сигнальный путь ERBB, регуляция процесса метаболизма белков, воспалительный ответ и сигнальный путь Notch (https: / /cdn.amegroups.cn/static/public/atm-20-4667-2.pdf), которые заслуживают большего внимания и дальнейших исследований.

Анализ обогащения путей DEGs может обеспечить дальнейшее понимание функции генов и их взаимодействий.Мы выполнили анализ обогащения пути KEGG для DEG и обнаружили 221 термин пути, в том числе 49 со значимостью (P <0,05) (https://cdn.amegroups.cn/static/public/atm-20-4667-3.pdf). В 30 основных путях (, рис. 4E ) с наибольшим обогащением, есть некоторые пути, вовлеченные в пролиферацию, миграцию, иммунитет и опухолевые стволовые клетки, в том числе путь передачи сигналов рецептора, индуцируемого ретиноевой кислотой, гена I (RIG-I), МикроРНК при раке, сигнальный путь TNF, биосинтез аргинина, сигнальный путь hedgehog, деградация гликозаминогликанов, сигнальный путь трансформирующего фактора роста-β (TGF-β), метаболизм бета-аланина, сигнальный путь Toll-подобного рецептора, метаболизм аланина, аспартата и глутамата, Путь передачи сигналов Wnt и путь передачи сигналов рецептора, подобного домену олигомеризации нуклеотидов (NOD).Стоит отметить, что несколько путей метаболизма аминокислот также были изменены в радиорезистентных клетках NF639R. Шестнадцать генов были случайным образом выбраны из 100 лучших по-разному экспрессируемых генов ( Рисунок 4F ) и затем проверены с помощью qPCR. В соответствии с данными РНК-seq, более высокая экспрессия Ttyh4, Col3a1, Fabp5, Slpi, Ube2v1, Nqo1, Nfatc4, Tgfbi и Aldh4a1 ( рисунок 4G ), но более низкая экспрессия Sdpr2 Ct, Hoxd13 , Angptl7, Arhgap24 и Efemp1 были обнаружены в клетках NF639R ( Рисунок 4H ) по сравнению с клетками NF639.Эти результаты показали, что результаты RNA-seq были надежными. Учитывая, что EMT-подобный (тонкие клетки и повышенная миграция) и CSC-подобный (низкий базальный ROS) фенотип наблюдались в клетках NF639R, мы обнаружили по-разному экспрессируемые гены, связанные с EMT ( Aldh4a1, Sox9, Mapk12, Wnt6 и Tcf7 ) и CSC ( Msx2, Gja1 и Gjb3 ) с помощью qPCR (29-36). В предыдущих исследованиях было подтверждено, что Aldh4a1, Sox9, Mapk12, Wnt6 и Tcf7 могут способствовать фенотипам CSC, а Msx2 могут способствовать фенотипам EMT.Сообщалось также, что Gja1 и Gjb3 ингибируют фенотипы EMT. Наши результаты показали, что клетки NF639R демонстрируют повышенную экспрессию Aldh4a1, Sox9, Mapk12, Wnt6, Tcf7 и Msx2 ( Figure 4I ), но пониженную экспрессию Gja1 и Gjb3 ( Gjb3 ( Figure 4I ) ) по сравнению с клетками NF639, предполагая, что ЕМТ-подобные и CSC-подобные характеристики могут быть приобретены в клетках NF639R.

Усиление злокачественности опухоли после двух режимов облучения

В нашем исследовании были выполнены два режима облучения (всего 40 Гр / курс) с интервалом в 4 недели.Мы оценили базальный уровень АФК и способность к миграции в клетках после одной схемы облучения (NF639R 40 Гр ) и в клетках после двух схем облучения (NF639R). По сравнению с клетками NF639R 40 Гр , клетки NF639R продемонстрировали повышенную миграционную способность ( Рисунок 5A, B ) и более низкий базальный уровень ROS ( Рисунок 5C, D ), что позволяет предположить, что два графика облучения (40 Гр / график) делают клетки NF639R более агрессивными. Кроме того, мы обнаружили экспрессию некоторых генов, включая положительный прогностический индикатор ( Hoxd13 ), два индуктора радиорезистентности ( Nqo1 и Aldh4a1 ) (37,38), один индуктор миграции клеток. ( Tgfbi ) и два супрессора миграции клеток ( Sdpr и Klk10 ) с использованием кПЦР в клетках NF639R 40 Гр и клетках NF639R.Результаты показали, что экспрессия Aldh4a1, Tgfbi и Nqo1 была увеличена, но экспрессия Sdpr, Klk10 и Hoxd13 была снижена в обоих клетках NF639R 40 Gy и NF639R. По сравнению с клетками NF639R 40 Gy в клетках NF639R наблюдалась более высокая экспрессия Aldh4a1, Tgfbi и Nqo1 , но более низкая экспрессия Sdpr и Hoxd13 ( Рисунок 5E, F ), что дополнительно подтверждает увеличение. злокачественности после двух режимов облучения.

Рисунок 5 Сравнение злокачественности между клетками NF639R 40 Гр и клетками NF639R. (A) Типичные изображения мигрировавших клеток NF639, NF639R 40 Гр и NF639R, окрашенных 0,2% раствором кристаллического фиолетового. Масштабная линейка, 100 мкм. (B) Количественная оценка мигрировавших клеток NF639, NF639R 40 Гр и NF639R. (C, D) Обнаружение активных форм кислорода с использованием темно-красного зонда CellROX в клетках NF639, NF639R 40 Гр и NF639R. (C) Профили гистограмм клеток NF639, NF639R 40 Гр и NF639R, полученные с помощью проточной цитометрии.(D) Количественная оценка средней интенсивности флуоресценции в клетках NF639, NF639R , 40 Гр, и NF639R. (E, F) Количественная ПЦР (кПЦР) в реальном времени для проверки некоторых генов, связанных с прогрессированием опухоли в клетках NF639, NF639R 40 Гр, и NF639R. (E) Проверка активированных генов, включая два гена ( Aldh4a1 и Nqo1 ), которые способствуют радиорезистентности, и один ген ( Tgfbi ), который способствует миграции. (F) Валидация генов с пониженной регуляцией, включая прогностический индикатор ( Hoxd13 ) и два гена ( Sdpr и Klk10 ), которые ингибируют миграцию.Все данные представлены как среднее значение ± стандартное отклонение из трех независимых экспериментов. **, P <0,01; ***, P <0,001.


Обсуждение

В настоящем исследовании радиорезистентные клетки были получены путем облучения родительских клеточных линий повторяющейся суточной дозой, соответствующей стандартной клинической лучевой терапии (39). Хотя облучение с высокой долей дозы (10 Гр) также использовалось для индукции радиорезистентности в предыдущих исследованиях, некоторые исследователи предположили, что облучение высокими дозами способствует снижению радиорезистентности вместо индукции радиорезистентности, поскольку облучение высокой дозой может подавить механизмы радиорезистентности (40). ).В большинстве литературных источников все еще подтверждается, что фракции с дозой 2 Гр или ниже подходят для отбора радиорезистентных клеток (41,42). В предыдущем исследовании приобретенные радиорезистентные клетки, созданные фракционированным излучением, также могли вернуться к дикому типу после субкультивирования в течение нескольких пассажей (10–20 пассажей) в отсутствие излучения (10). Однако было интересно отметить, что фенотип радиорезистентности в клетках NF639R все еще сохранялся после 30 пассажей. Фактически, некоторые исследователи отметили, что облучения в 40 Гр достаточно, чтобы вызвать радиорезистентность в некоторых клетках рака груди, таких как MCF7 и MDA-MB-231 (43,44).Однако радиорезистентные клетки, образовавшиеся при суммарной дозе облучения 40 Гр или меньше, могут быть нестабильными из-за временных генетических изменений. Напротив, два прерывистых режима (40 Гр в каждом режиме) в нашем исследовании могут вызвать необратимые генетические изменения, аналогично наблюдению, что краткосрочное лекарственное лечение приводит к обратимой лекарственной устойчивости, в то время как длительное лекарственное лечение приводит к постоянной лекарственной устойчивости. (45). Кроме того, клетки NF639R также демонстрируют более низкий базальный уровень ROS и повышенную способность к миграции по сравнению с NF639R 40 Гр , подтверждая, что два режима облучения (40 Гр / график) делают клетки NF639R более агрессивными.Это может иметь потенциальные клинические последствия, поскольку возобновление лучевой терапии с кратковременным рецидивом после лучевой терапии может привести к повышению радиорезистентности и способствовать прогрессированию опухоли. Безусловно, чтобы сделать вывод, необходимы дальнейшие исследования. Кроме того, мышиные клетки NF639R также будут идеальным инструментом исследования in vivo для изучения взаимодействия между радиорезистентным и иммунологическим микроокружением.

После облучения в дозе 80 Гр клетки NF639R приобрели не только радиорезистентность, но и некоторые другие свойства, отличные от родительской линии клеток NF639.Результаты других групп подтвердили, что миграция, инвазия, пролиферация и антиапоптотическая способность изменяются вместе с приобретенной радиорезистентностью (10,12,15). В отличие от предыдущих исследований, показывающих снижение способности радиорезистентных клеток к пролиферации (46,47), мы обнаружили значительное увеличение пролиферации устойчивых клеток по сравнению с их родительскими клетками. Недавно Tahmasebi-Birgani et al. также обнаружил, что фракционированное облучение индуцирует радиорезистентность, наряду с ингибированием или усилением пролиферативной способности, в зависимости от клеточного контекста (48).Более того, наши результаты также согласуются с сообщениями об ускорении репопуляции после клинической лучевой терапии (49). В нашем исследовании радиорезистентные клетки также продемонстрировали повышенную миграцию и антиапоптотическую способность, что согласуется с предыдущими сообщениями (50). Интересно, что морфологические изменения, наблюдаемые в клетках NF639R, включая уменьшение и удлинение клеточных тел, аналогичны клеткам, претерпевающим эпителиально-мезенхимальный переход (EMT). Предыдущие исследования показали, что радиация может индуцировать ЭМП, которая усиливает миграцию клеток в различных линиях раковых клеток (48,51).Кроме того, базальный уровень АФК в клетках NF639R был ниже, чем в клетках NF639. Учитывая более низкий уровень ROS в раковых стволовых клетках (CSC), чем в их неканцерогенных потомках, мы предположили, что индуцированное излучением образование CSC при трансформации из NF639 в NF639R, и увеличенное количество CSC может усиливать антиоксидантную способность из-за повышенной экспрессии. антиоксидантных ферментов АФК, что приводит к радиорезистентности (52). Более того, различная экспрессия нескольких генов, связанных с EMT и CSC, включая Aldh4a1, Sox9, Mapk12, Wnt6, Tcf7, Msx2, Gja1 и Gjb3 между клетками NF639 и NF639R, также поддерживает наши предположения о приобретенных EMT-подобных и CSC-клетках. подобные характеристики в клетках NF639R.

В ответ на усиление активности миграции, пролиферации и радиорезистентности необходимо больше АТФ, основного источника энергии. Фактически, мы обнаружили больше продукции АТФ в клетках NF639R по сравнению с клетками NF639. Кроме того, наши данные также показали, что два основных пути генерации АТФ, митохондриальное окислительное фосфорилирование и аэробный гликолиз, были усилены в клетках NF639R. Как наиболее эффективный процесс генерации АТФ, митохондриальное окислительное фосфорилирование может удовлетворить повышенные потребности в энергии для выживания радиорезистентных клеток от облучения (53).Предыдущий отчет также показал, что химиорезистентные клетки рака молочной железы также обладают повышенной митохондриальной способностью к OXPHOS (54), что, возможно, указывает на общий механизм устойчивости. Кроме того, клетки NF639R демонстрируют повышенную запасную дыхательную способность, которая, как было подтверждено, имеет сильную физиологическую корреляцию с устойчивостью к смерти (55,56). Интересно, что накопились доказательства того, что гликолитический метаболизм участвует в приобретении радиорезистентности (12,56). Поскольку ECAR является индикатором продукции лактата посредством гликолиза, увеличение ECAR также указывает на повышенное производство лактата в клетках NF639R (57).Groussard и др. . сообщили, что лактат, основной продукт гликолитического метаболизма, может эффективно улавливать АФК и положительно коррелирует с радиорезистентностью (58,59). Таким образом, повышенный уровень лактата может быть причиной выработки приобретенной радиорезистентности после фракционированного облучения. Более того, повышение подвижности клеток NF639R также может быть связано с повышенной выработкой лактата, который, как было обнаружено, вызывает миграцию раковых клеток (60). В совокупности перепрограммирование энергетического метаболизма во время развития приобретенной радиорезистентности не только поставляет АТФ для удовлетворения энергетических потребностей пролиферации, миграции и устойчивости, но также производит множество метаболитов, способствующих прогрессированию опухоли.

С помощью биоинформационного анализа результатов RNA-seq мы обнаружили, что облучение влияет на некоторые важные биологические процессы, такие как пролиферация клеток, регуляция клеточного цикла, миграция клеток, подвижность клеток, ответ на окислительный стресс, морфогенез ветвящейся структуры, эпителиальные клетки. к мезенхимальному переходу, процессу метаболизма фосфатсодержащих соединений, процессу метаболизма супероксида, поддержанию стволовых клеток и апоптозу и т. д. Эти нерегулируемые биологические процессы связаны с радиорезистентностью и другими фенотипическими изменениями.Более того, сигнальные каскады, такие как TGF-β, Wnt, Hedgehog, фактор роста эндотелия сосудов (VEGF), RIG-I-подобный рецептор, Toll-подобный рецептор и пути NOD-подобного рецептора, значительно изменены в клетках NF639R. Предыдущие исследования подтвердили, что эти дисрегулируемые пути тесно связаны с фенотипическими изменениями в радиорезистентных клетках. Пути TGF-β и Wnt-β-катенин играют важную роль в активации EMT (61,62). Более того, активация передачи сигналов TGF-β может увеличивать злокачественность Neu-индуцированных опухолей молочной железы, а передача сигналов Wnt / β-catenin, как сообщается, опосредует радиорезистентность (63-65).Накапливающиеся данные демонстрируют, что пути Hedgehog (HH) и Wnt участвуют в регуляции самообновления РСК, устойчивых к химиотерапии и / или лучевой терапии (66). Активация пути VEGF способствует пролиферации и радиорезистентности рака груди (67,68). RIG-I-подобный рецептор, Toll-подобный рецептор и NOD-подобный рецептор относятся к рецепторам распознавания образов (PRR), которые могут активироваться молекулярными паттернами, связанными с повреждениями (DAMP), такими как HMGB1, АТФ, ДНК и РНК, высвобождаемые из поврежденных или умирающих клеток (69).Известно, что активация PRR-индуцированной передачи сигналов с помощью DAMPs способствует пролиферации, миграции и неоваскуляризации опухолей (70). Кроме того, пути PRR также играют ключевую роль в регуляции иммуносупрессивного микроокружения опухоли (71,72). В нашем исследовании пути PRR, такие как RIG-I-подобный рецептор, Toll-подобный рецептор и NOD-подобный рецептор в клетках NF639R, не регулируются, что указывает на то, что приобретенные радиорезистентные клетки также могут приобретать иммунную толерантность, что помогает избежать противоопухолевого иммунитета.Другое интересное наблюдение в нашем исследовании заключается в том, что микроРНК при раке представляют собой наиболее обогащающий путь KEGG, что указывает на нарушение регуляции miRNA в клетках NF639R. Таким образом, miRNA может играть важную роль в радиорезистентности и прогрессировании рака груди, что согласуется с предыдущими исследованиями, показывающими, что miRNA участвуют в различных биологических процессах рака, таких как пролиферация, миграция, апоптоз, энергетический метаболизм, устойчивость к радиотерапии и иммунный ответ ( 73,74). Конечно, корреляция между этими путями и фенотипическими изменениями нуждается в дальнейшей проверке.В целом, приобретенные радиорезистентные клетки NF639R демонстрировали профили экспрессии мРНК, отличные от профилей экспрессии их родительских клеток. Это обеспечило поддержку нашей глубокой интерпретации радиорезистентности.


Выводы

Таким образом, мы успешно создали клеточную модель приобретенной радиорезистентности с помощью нового метода и выявили некоторые фенотипические изменения, включая меньшее и более длинное тело клетки, повышенную активность пролиферации и миграции, повышенную антиапоптозную активность, снижение базальной АФК. и усиление способности к гликолизу и функции митохондрий.Более того, было идентифицировано 490 DEG, включая 187 генов с повышенной регуляцией и 303 гена с пониженной регуляцией, и множественные сигнальные пути были обогащены с помощью анализа данных RNA-seq, что предоставило доказательства на молекулярном уровне для этих фенотипических изменений. Некоторые потенциальные сигнальные пути также послужили основой для дальнейших исследований. Наше исследование дало представление о радиорезистентности и клиническое предположение о том, что лечение приобретенных радиорезистентных видов рака должно не только сосредотачиваться на радиорезистентности, но также всесторонне учитывать изменения в других свойствах, которые способствуют прогрессированию рака.


Благодарности

Финансирование: Это исследование было поддержано Китайским национальным фондом естественных наук (№ 81703168, U1632145 и 81227902), Фондом инновационной программы развития Центра физических наук и технологий Хэфэй (№ 2019HSC-CIP010 ), Фонд естественных наук провинции Аньхой (№ 1608085Qh281) и проект, финансируемый Приоритетной академической программой развития высших учебных заведений Цзянсу (PAPD) и ключевой лабораторией радиационной медицины и защиты провинции Цзянсу.Это исследование также было поддержано исследовательским грантом IRF / 0024 Государственной ключевой лаборатории загрязнения морской среды Городского университета Гонконга.


Контрольный список для отчетности : Авторы заполнили контрольный список для отчетности MDAR. Доступно на http://dx.doi.org/10.21037/atm-20-4667

Заявление о совместном использовании данных: Доступно на http://dx.doi.org/10.21037/atm-20-4667

Пир Файл обзора: Доступен по адресу http://dx.doi.org/10.21037/atm-20-4667

Конфликты интересов : Все авторы заполнили унифицированную форму раскрытия информации ICMJE (доступна по адресу http: // dx.doi.org/10.21037/atm-20-4667). Авторы не заявляют о конфликте интересов.

Этическое заявление : Авторы несут ответственность за все аспекты работы, гарантируя, что вопросы, связанные с точностью или целостностью любой части работы, должным образом исследованы и решены. Это было исследование in vitro с использованием клеточных линий. Не было необходимости в этическом одобрении или согласии пациента.

Заявление об открытом доступе: Это статья в открытом доступе, распространяемая в соответствии с лицензией Creative Commons Attribution-NonCommercial-NoDerivs 4.0 Международная лицензия (CC BY-NC-ND 4.0), которая разрешает некоммерческое тиражирование и распространение статьи со строгим условием, что никакие изменения и правки не будут внесены, а оригинальная работа будет должным образом процитирована (включая ссылки на официальные публикация через соответствующий DOI и лицензию). См. Https://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/.


Ссылки

  1. Брей Ф., Ферлай Дж., Сурджоматарам И. и др. Глобальная статистика рака 2018: оценки GLOBOCAN заболеваемости и смертности от 36 раковых заболеваний во всем мире в 185 странах.CA Cancer J Clin 2018; 68: 394-424. [Crossref] [PubMed]
  2. Maughan KL, Lutterbie MA, Ham PS. Лечение рака груди. Am Fam Physician 2010; 81: 1339-46. [PubMed]
  3. Лян К., Джин В., Кнуферманн С. и др. Нацеленность на путь фосфатидилинозитол-3-киназы / Akt для повышения эффективности лучевой терапии клеток рака молочной железы. Mol Cancer Ther 2003; 2: 353-60. [PubMed]
  4. Duru N, Candas D, Jiang G, et al. Адаптивная резистентность к раку молочной железы: репопуляция HER2 и раковых стволовых клеток в гетерогенном опухолевом обществе.J Cancer Res Clin Oncol 2014; 140: 1-14. [Crossref] [PubMed]
  5. Candas-Green D, Xie B, Huang J, et al. Двойная блокада CD47 и HER2 устраняет радиорезистентные клетки рака молочной железы. Нац Коммуна 2020; 11: 4591. [Crossref] [PubMed]
  6. Ким С.Х., Ли У.Х., Ким С.В. и др. EphA3 поддерживает радиорезистентность при раке головы и шеи за счет эпителиального мезенхимального перехода. Cell Signal 2018; 47: 122-30. [Crossref] [PubMed]
  7. Xie P, Li X, Tan X и др. Последовательная сыворотка let-7 – новый биомаркер для прогнозирования ускоренной репролиферации во время фракционной лучевой терапии при раке легких.Clin рака легких 2016; 17: e95-101. [Crossref] [PubMed]
  8. Донг К., Шарма С., Лю Х. и др. Ингибиторы HDAC обращают приобретенную радиорезистентность клеток карциномы пищевода KYSE-150R путем модуляции экспрессии Bmi-1. Toxicol Lett 2014; 224: 121-9. [Crossref] [PubMed]
  9. Грей М., Тернбулл А. К., Уорд С. и др. Разработка и характеристика приобретенных радиорезистентных клеточных линий рака молочной железы. Радиат Онкол 2019; 14: 64. [Crossref] [PubMed]
  10. Рассел Дж., Велдон Т.Э., Стэнтон П. Радиорезистентный вариант, полученный из линии клеток нейробластомы человека, менее подвержен радиационному апоптозу.Cancer Res 1995; 55: 4915. [PubMed]
  11. Su WH, Chuang PC, Huang EY, et al. Вызванное излучением увеличение клеточной миграции и метастатического потенциала клеток рака шейки матки осуществляется через путь K-Ras. Am J Pathol 2012; 180: 862-71. [Crossref] [PubMed]
  12. Тан Л., Вэй Ф, Ву И и др. Роль метаболизма в методах радиорезистентности и радиосенсибилизации раковых клеток. Журнал J Exp Clin Cancer Res 2018; 37: 87. [Crossref] [PubMed]
  13. Lehuédé C, Dupuy F, Rabinovitch R et al. Метаболическая пластичность как фактор, определяющий рост и метастазирование опухоли.Cancer Res 2016; 76: 5201-8. [Crossref] [PubMed]
  14. Jiang H, Xu Y, Li W и др. Низкие дозы облучения не вызывают пролиферации опухолевых клеток in vitro и in vivo. Радиат Рес 2008; 170: 477-87. [Crossref] [PubMed]
  15. Ма Х, Рао Л., Ван Х. Л. и др. Транскриптомный анализ клеток глиомы на динамический ответ на гамма-облучение и двойную регуляцию генов апоптоза: новый взгляд на лучевую терапию глиобластом. Cell Death Dis 2013; 4: e895 [Crossref] [PubMed]
  16. Young A, Berry R, ​​Holloway AF, et al.Профилирование РНК-секвенирования радиационно-устойчивой и радиационно-чувствительной клеточной линии рака простаты подчеркивает противоположную регуляцию репарации ДНК и мишени для радиосенсибилизации. BMC Рак 2014; 14: 808. [Crossref] [PubMed]
  17. Bolger AM, Lohse M, Usadel B. Trimmomatic: гибкий триммер для данных последовательности Illumina. Биоинформатика 2014; 30: 2114-20. [Crossref] [PubMed]
  18. Ким Д., Лангмид Б., Зальцберг С.Л. HISAT: выравниватель с быстрым сращиванием и малыми требованиями к памяти. Нат Методы 2015; 12: 357-60.[Crossref] [PubMed]
  19. Pertea M, Pertea GM, Antonescu CM, et al. StringTie обеспечивает улучшенную реконструкцию транскриптома из считываний RNA-seq. Nat Biotechnol 2015; 33: 290-5. [Crossref] [PubMed]
  20. Робинсон MD, Ошлак А. Метод масштабной нормализации для анализа дифференциальной экспрессии данных РНК-seq. Genome Biol 2010; 11: R25. [Crossref] [PubMed]
  21. Лав М.И., Хубер В., Андерс С. Умеренная оценка кратного изменения и дисперсии данных РНК-seq с помощью DESeq2. Геном Биол 2014; 15: 550.[Crossref] [PubMed]
  22. Эшбернер М., Болл Калифорния, Блейк Дж. А. и др. Генная онтология: инструмент для объединения биологии. Консорциум генных онтологий. Нат Генет 2000; 25: 25-9. [Crossref] [PubMed]
  23. Одеро-Марах В., Хавсави О., Хендерсон В. и др. Эпителиально-мезенхимальный переход (ЭМП) и рак простаты. Adv Exp Med Biol 2018; 1095: 101-10. [Crossref] [PubMed]
  24. Крейтон CJ, Розен CJM. Эпителиально-мезенхимальный переход (EMT) в опухолевых клетках и его клиническое значение при раке молочной железы.J Mammary Gland Biol Neoplasia 2010; 15: 253-60. [Crossref] [PubMed]
  25. Панг М.Ф., Георгоудаки А.М., Ламбут Л. и др. ЭМП, индуцированная TGF-бета1, способствует направленной миграции клеток рака груди через лимфатическую систему за счет активации CCR7 / CCL21-опосредованного хемотаксиса. Онкоген 2016; 35: 748-60. [Crossref] [PubMed]
  26. Рут А.С., Ронинсон И.Б. Влияние переносчика множества лекарственных средств Р-гликопротеина на клеточные реакции на ионизирующее излучение. Cancer Res 2000; 60: 2576-8. [PubMed]
  27. Амоэдо Н.Д., Эль-Бача Т., Родригес М.Ф. и др.Клеточный цикл и энергетический метаболизм в опухолевых клетках: стратегии лекарственной терапии. Недавние открытия Pat Anticancer Drug Discov 2011; 6: 15-25. [Crossref] [PubMed]
  28. Морено-Санчес Р., Родригес-Энрикес С., Марин-Эрнандес А. и др. Энергетический обмен в опухолевых клетках. Фев. J 2007; 274: 1393-418. [Crossref] [PubMed]
  29. Терцуоли Э., Беллан С., Аверса С. и др. Сверхэкспрессия ALDh4A1 в меланоме и опухолях легких приводит к увеличению раковых стволовых клеток, ухудшая иммунный надзор за счет увеличения выработки PD-L1.Раки (Базель) 2019; 11: 1963. [Crossref] [PubMed]
  30. Kadaja M, Keyes BE, Lin M, et al. SOX9: регулятор транскрипции стволовых клеток секретируемых сигнальных факторов ниши. Genes Dev 2014; 28: 328-41. [Crossref] [PubMed]
  31. Qi X, Yin N, Ma S, et al. P38gamma MAPK является терапевтической мишенью для трижды отрицательного рака молочной железы путем стимуляции роста раковых стволовых клеток. Стволовые клетки 2015; 33: 2738-7. [Crossref] [PubMed]
  32. Gonçalves CS, Castro JV, Pojo M, et al. WNT6 – это новый онкогенный прогностический биомаркер глиобластомы человека.Тераностика 2018; 8: 4805-23. [Crossref] [PubMed]
  33. Ван И, Хе Л., Ду И и др. Длинная некодирующая РНК lncTCF7 способствует самообновлению стволовых клеток рака печени человека посредством активации Wnt-сигнальной клеточной стволовой клетки 2015; 16: 413-25. [Crossref] [PubMed]
  34. ди Бари М.Г., Гинзбург Э., Плант Дж. И др. Msx2 индуцирует эпителиально-мезенхимальный переход в эпителиальных клетках молочных желез мышей посредством активации Cripto-1. J. Cell Physiol 2009; 219: 659-66. [Crossref] [PubMed]
  35. Ли Ю., Ван Дж., Асахина К.Мезотелиальные клетки дают начало звездчатым клеткам печени и миофибробластам посредством мезотелиально-мезенхимального перехода при повреждении печени. Proc Natl Acad Sci U S A 2013; 110: 2324-9. [Crossref] [PubMed]
  36. Оберштейн А., Шенк Т. Клеточные реакции на цитомегаловирусную инфекцию человека: индукция фенотипа перехода от мезенхимы к эпителию (MET) Proc Natl Acad Sci U S. A 2017; 114: E8244-53. [Crossref] [PubMed]
  37. Хуанг В., Ши Г., Юн З. и др. Подавление RKIP способствует радиорезистентности карциномы носоглотки путем активации оси NRF2 / NQO1 посредством подавления miR-450b-5p.Диск Смерти Клетки 2020; 11: 504. [Crossref] [PubMed]
  38. Вулгариду Г.П., Кизириду М., Манцо Т. и др. Альдегиддегидрогеназа 3A1 способствует развитию многомодальной устойчивости и изменяет профиль экспрессии генов в клетках аденокарциномы молочной железы человека MCF-7. Int J Biochem Cell Biol 2016; 77: 120-8. [Crossref] [PubMed]
  39. Bartelink H, Horiot JC, Poortmans PM, et al. Влияние более высокой дозы радиации на местный контроль и выживаемость при консервативной терапии рака груди на ранних стадиях: 10-летние результаты рандомизированного исследования по сравнению с испытанием EORTC 22881-10882 рандомизированной бустерной терапии по сравнению с отсутствием бустерной терапии.Дж. Клин Онкол 2007; 25: 3259-65. [Crossref] [PubMed]
  40. Вергин М.С., Баллмер-Хофер К., Роос М. и др. Предварительное исследование фактора роста эндотелия сосудов плазмы (VEGF) во время низко- и высокодозной лучевой терапии собак со спонтанными опухолями. Vet Radiol Ultrasound 2004; 45: 247-54. [Crossref] [PubMed]
  41. Niedbala M, Alsbeih G, Ng CE, et al. Эквивалентность импульсной мощности дозы облучению с низкой мощностью дозы в линиях опухолевых и нормальных клеток. Радиат Рес 2001; 155: 297-303. [Crossref] [PubMed]
  42. Кувахара Ю., Мори М., Китахара С. и др.Нацеливание на эндотелиальные клетки опухоли при сочетании 2 Гр / день рентгеновского излучения с эверолимусом является эффективным методом преодоления клинически значимых радиорезистентных опухолей. Cancer Med 2014; 3: 310-21. [Crossref] [PubMed]
  43. Perez-Añorve IX, Gonzalez-De la Rosa CH, Soto-Reyes E, et al. Новые данные о радиорезистентности при раке молочной железы указывают на двойную функцию miR-122 как супрессора опухолей и oncomiR Mol Oncol 2019; 13: 1249-67. [Crossref] [PubMed]
  44. Lin LC, Lee HT, Chien PJ, et al. ChienNAD (P) H: хинон оксидоредуктаза 1 определяет радиочувствительность тройных отрицательных клеток рака молочной железы и контролируется длинной некодирующей РНК NEAT1.Int J Med Sci 2020; 17: 2214-24. [Crossref] [PubMed]
  45. Руссо М., Кризафулли Г., Согари А. и др. Адаптивная изменчивость колоректального рака в ответ на таргетную терапию. Наука 2019; 366: 1473-80. [Crossref] [PubMed]
  46. Ши Д., Ши Дж., Ганг Х. Химиочувствительность радиорезистентных клеток в многоклеточных сфероидах аденокарциномы легкого A549. Журнал J Exp Clin Cancer Res 2009; 28: 72. [Crossref] [PubMed]
  47. Сайто Ю., Абико Р., Кишида А. и др. Утрата EGF-зависимой способности клеток к пролиферации на радиорезистентных клетках HepG2-8960-R.Функция биохимии клетки 2015; 33: 73-9. [Crossref] [PubMed]
  48. Тахмасеби-Биргани М.Дж., Теймури А., Гадири А. и др. Фракционная лучевая терапия может вызывать эпителиально-мезенхимальный переход и радиорезистентность в клеточном контексте. J Cell Biochem 2018; [Epub перед печатью]. [PubMed]
  49. Йом СС. Ускоренная репопуляция как причина неудач лучевого лечения немелкоклеточного рака легкого: обзор текущих данных и будущих клинических стратегий. Семин Радиат Онкол 2015; 25: 93-9.[Crossref] [PubMed]
  50. Mao G, Yao Y, Kong Z. Длительное воздействие гамма-излучения индуцирует радиорезистентность и увеличивает способность к миграции клеток рака мочевого пузыря. Мол Мед Реп 2018; 18: 5834-40. [PubMed]
  51. Цукамото Х., Сибата К., Кадзияма Х. и др. Эпителиально-мезенхимальный переход (ЭМП), индуцированный облучением, связан с инвазивным потенциалом в клетках карциномы эндометрия. Гинеколь Онкол 2007; 107: 500-4. [Crossref] [PubMed]
  52. Дин М., Чо Р.В., Лобо Н.А. и др. Связь уровней активных форм кислорода и радиорезистентности в раковых стволовых клетках.Природа 2009; 458: 780-3. [Crossref] [PubMed]
  53. Линам-Леннон Н., Махер С.Г., Магуайр А. и др. Измененная функция митохондрий и энергетический метаболизм связаны с радиорезистентным фенотипом аденокарциномы пищевода. PLoS One 2014; 9: e100738 [Crossref] [PubMed]
  54. Ли К.М., Гилтнейн Дж. М., Балко Дж. М. и др. MYC и MCL1 совместно способствуют развитию стволовых клеток рака молочной железы, устойчивых к химиотерапии, посредством регуляции митохондриального окислительного фосфорилирования. Клеточный метаболизм 2017; 26: 633-47.e7.[Crossref] [PubMed]
  55. Никенс К.П., Викстром Дж. Д., Ширихай О.С. и др. Биоэнергетический профиль нетрансформированных фибробластов обнаруживает связь между устойчивостью к смерти и повышенной резервной респираторной способностью. Митохондрия 2013; 13: 662-7. [Crossref] [PubMed]
  56. Ли К.М., Гилтнейн Дж. М., Балко Дж. М. и др. MYC и MCL1 совместно продвигают устойчивые к химиотерапии стволовые клетки рака молочной железы посредством регуляции митохондриального окислительного фосфорилирования. Cell Metab 2017; 26: 633-47.e7. [Crossref] [PubMed]
  57. Ижак К., Деведек Л.С., Рогкоти В.М. и др.Вычислительное исследование эффекта Варбурга определяет метаболические цели, препятствующие миграции рака. Мол сист биол 2014; 10: 744. [Crossref] [PubMed]
  58. Groussard C, Morel I, Chevanne M, et al. Улавливание свободных радикалов и антиоксидантные эффекты лактат-иона: исследование in vitro. J. Appl Physiol (1985) 2000; 89: 169-75. [Crossref] [PubMed]
  59. Sattler UG, Meyer SS, Quennet V, et al. Гликолитический метаболизм и ответ опухоли на фракционное облучение. Радиотер Онкол 2010; 94: 102-9. [Crossref] [PubMed]
  60. Goetze K, Walenta S, Ksiazkiewicz M, et al.Лактат увеличивает подвижность опухолевых клеток и подавляет миграцию моноцитов и высвобождение цитокинов. Инт Дж. Онкол 2011; 39: 453-63. [Crossref] [PubMed]
  61. Yook JI, Li XY, Ota I, et al. Wnt-зависимая регуляция репрессора E-кадгерина улитки. J Biol Chem 2005; 280: 11740-8. [Crossref] [PubMed]
  62. Thiery JP, Acloque H, Huang RY и др. Эпителиально-мезенхимальные переходы в развитии и заболевании. Cell 2009; 139: 871-90. [Crossref] [PubMed]
  63. Siegel PM, Shu W., Cardiff RD, et al.Передача сигналов трансформирующего фактора роста бета нарушает индуцированный Neu онкогенез молочной железы, одновременно способствуя легочным метастазам. Proc Natl Acad Sci U S A 2003; 100: 8430-5. [Crossref] [PubMed]
  64. Muraoka RS, Koh Y, Roebuck LR, et al. Повышенная злокачественность опухолей молочной железы, индуцированных Neu, сверхэкспрессирующих активный трансформирующий фактор роста бета1. Mol Cell Biol 2003; 23: 8691-703. [Crossref] [PubMed]
  65. Jun S, Jung YS, Suh HN, et al. LIG4 опосредует радиорезистентность, индуцированную передачей сигналов Wnt. Нац Коммуна 2016; 7: 10994.[Crossref] [PubMed]
  66. Takebe N, Miele L., Harris PJ, et al. Нацеленность на пути Notch, Hedgehog и Wnt в раковых стволовых клетках: обновленная клиническая информация. Нат Рев Клин Онкол 2015; 12: 445-64. [Crossref] [PubMed]
  67. Лян Ю., Бреккен Р.А., Хайдер С.М. Фактор роста эндотелия сосудов вызывает пролиферацию клеток рака груди и подавляет антипролиферативную активность антигормонов. Endocr-relat Cancer 2006; 13: 905-19. [Crossref] [PubMed]
  68. Джамиль Дж. К., Рао В. С., Коуквелл Л. и др.Радиорезистентность при раке груди. Грудь 2004; 13: 452-60. [Crossref] [PubMed]
  69. Такеучи О., Акира С. Рецепторы распознавания образов и воспаление. Cell 2010; 140: 805-20. [Crossref] [PubMed]
  70. Панди С., Сингх С., Ананг В. и др. Рецепторы распознавания образов при прогрессировании и метастазировании рака. Рост рака и метастазирование 2015; 8: 25-34. [Crossref] [PubMed]
  71. Хуанг Б., Чжао Дж., Ункелесс Дж. К. и др. Передача сигналов TLR опухолевыми и иммунными клетками: палка о двух концах.Онкоген 2008; 27: 218-24. [Crossref] [PubMed]
  72. Кент А., Бландер Дж. М.. Nod-подобные рецепторы: ключевые молекулярные переключатели в головоломке рака Front Immunol 2014; 5: 185. [Crossref] [PubMed]
  73. Касинский А.Л., Slack FJ. МикроРНК на пути в клинику: прогресс в проверке и нацеливании микроРНК для лечения рака. Нат Рев Рак 2011; 11: 849-64. [Crossref] [PubMed]
  74. Stahlhut C, Slack FJ. МикроРНК и фенотип рака: профилирование, сигнатуры и клиническое значение.Геном Мед 2013; 5: 111. [Crossref] [PubMed]

Цитируйте эту статью как: Qin F, Fan Q, Yu PKN, Almahi WA, Kong P, Yang M, Cao W, Nie L, Chen G, Han W. Свойства и экспрессия генов профилирование приобретенной радиорезистентности в клетках рака молочной железы мышей. Энн Трансл Мед 2021; 9 (8): 628. DOI: 10.21037 / ATM-20-4667

Уретановые конформные покрытия 1A20

Конформное покрытие HumiSeal® 1A20:

  • Химия уретана
  • быстротвердеющий, химически стойкий
  • однокомпонентный
  • используется в сочетании с разбавителем 521
  • Соответствует директиве RoHS 2002/95 / EC
  • признан под номером файла UL E105698.

Конформное покрытие HumiSeal 1A20 имеет:

  • отличная защита от влаги и окружающей среды для печатных плат
  • Флуоресценция в УФ-свете для удобства контроля
  • Соответствует стандарту MIL-I-46058C
  • Соответствие IPC-CC-830
  • Директива RoHS 2015/863 / EU

Хотя его состав позволяет наносить HumiSeal® 1A20 с использованием самых разных методов, следует позаботиться о том, чтобы его наносили только в среде, где относительная влажность окружающей среды составляет 60% или меньше.Нанесение покрытия при относительной влажности выше 60% может вызвать ускорение реакции отверждения, что приведет к образованию пузырьков в высохшей пленке.

Нанесение конформного покрытия 1A20

Покрытия

Conformal могут быть успешно нанесены на подложки, которые были очищены перед нанесением покрытия, а также на подложки, собранные из «неочищенных» материалов с низким содержанием остатков. Пользователи должны провести соответствующие испытания, чтобы подтвердить совместимость между конформным покрытием и конкретными сборочными материалами, условиями процесса и уровнем чистоты.Пожалуйста, свяжитесь с представителем HumiSeal для получения дополнительной информации.

Погружение
В зависимости от сложности, плотности и конфигурации компонентов в сборке может потребоваться уменьшить вязкость HumiSeal 1A20 с помощью HumiSeal Thinner 521, чтобы получить однородную пленку. После определения оптимальной вязкости регулируемая скорость погружения и удаления (обычно от 5 до 15 см / мин) дополнительно обеспечит равномерное нанесение покрытия и однородную пленку.Во время нанесения испарение растворителя вызывает увеличение вязкости, которую следует регулировать путем добавления небольшого количества HumiSeal® Thinner 521. Вязкость в погружном баке следует регулярно проверять с помощью простого измерительного прибора, такого как вискозиметр Цана или Форда.

Распыление
HumiSeal 1A20 можно распылять с помощью обычного распылительного оборудования. Распыление следует производить в помещении с соответствующей вентиляцией, чтобы пары и туман уносились от оператора.Добавление HumiSeal® Thinner 521 необходимо для обеспечения равномерного распыления, что приводит к образованию пленки без отверстий. Количество разбавителя и давление распыления будут зависеть от конкретного типа распылительного оборудования и техники оператора. Рекомендуемое соотношение HumiSeal 1A20 и HumiSeal Thinner 521 составляет 1: 1 по объему; однако, возможно, потребуется отрегулировать это соотношение для получения равномерного покрытия.

Чистка
HumiSeal 1A20 можно чистить щеткой с небольшой добавкой HumiSeal Thinner 521.Однородность пленки зависит от плотности компонентов и техники оператора.

Плотность согласно ASTM D1475 1,02 ± 0,02 г / см 3
Содержание твердых веществ,% по массе согласно Fed-Std-141, Meth. 4044 50 ± 3%
Вязкость, по Fed-Std-141, Meth. 4287 100 ± 30 сантипуаз
ЛОС 511 грамм / литр
Рекомендуемая толщина покрытия 25-75 мкм
Время высыхания до обработки согласно Fed-Std-141, Meth.4061 60 минут
Рекомендуемые условия отверждения 24 часа при комнатной температуре или 3 часа при 76 ° C
Время, необходимое для достижения оптимальных свойств 7 дней
Разбавитель, при необходимости (окунание, нанесение кистью, распыление) Разбавитель HumiSeal® 521, 521EU
Рекомендуемый стриппер Стриппер HumiSeal® 1072
Срок годности при комнатной температуре, DOM 6 месяцев
Тепловой удар, согласно MIL-I-46058C от -65 ° C до 125 ° C
Коэффициент теплового расширения – TMA 515 частей на миллион / ° C
Температура стеклования – DSC 71 ° С
Модуль упругости – DMA 89.6 МПа
Воспламеняемость, согласно UL94 V-0
Выдерживаемое напряжение диэлектрика, согласно MIL-I-46058C> 1500 вольт
Диэлектрическая постоянная при 1 МГц и 25 ° C согласно ASTM D150-98 3,5
Коэффициент рассеяния при 1 МГц и 25 ° C согласно ASTM D150-98 0,028
Сопротивление изоляции, согласно MIL-I-46058C 3,0 x 10 14 Ом (300 ТОм)
Сопротивление влагоизоляции, согласно MIL-I-46058C 4.8 x 10 10 Ом (48 ГОм)
Устойчивость к грибкам, согласно ASTM G21 Пасс
Химическая стойкость Отлично

Структура генома и особенности метаболизма красных водорослей Chondrus crispus проливают свет на эволюцию Archaeplastida

Abstract

Красные водоросли являются ключевыми компонентами прибрежных экосистем и экономически важны в качестве пищи и как источник желирующих агентов, но их гены и геномам уделялось мало внимания.Здесь мы сообщаем о секвенировании генома 105 Mbp флоридофита Chondrus crispus (ирландский мох) и аннотации 9606 генов. Геном имеет необычную структуру, характеризующуюся плотными участками генов, окруженными участками с большим количеством повторов, в которых преобладают мобильные элементы. Несмотря на довольно большой размер, этот геном демонстрирует черты, типичные для компактных геномов, например, в среднем всего 0,3 интрона на ген, короткие интроны, низкое среднее расстояние между генами, небольшие семейства генов и отсутствие признаков крупномасштабной дупликации генома.Геном также дает представление о метаболизме морских красных водорослей и адаптации к морской среде, включая гены, связанные с метаболизмом галогенов, оксилипинами и многоклеточностью (факторы обработки микроРНК и транскрипции). Особенно интересны особенности, связанные с метаболизмом углеводов, которые включают минималистичный набор генов для биосинтеза крахмала, присутствие синтаз целлюлозы, приобретенных до первичного эндосимбиоза, демонстрирующее полифилию синтеза целлюлозы у Archaeplastida, и отсутствие целлюлаз у наземных растений, а также появление маннозилглицератсинтаза, потенциально происходящая из морских бактерий.Чтобы объяснить наблюдения за структурой генома и содержанием генов, мы предлагаем эволюционный сценарий с участием предковой красной водоросли, которая под воздействием ранних экологических сил потеряла гены, интроны и межгенетическую ДНК; за этой потерей последовало увеличение размера генома как следствие активности мобильных элементов.

Красные водоросли, вместе с глаукофитами и хлоропластидами, являются членами Archaeplastida, филогенетической группы, сформировавшейся во время первичного эндосимбиоза, давшего начало первым фотосинтетическим эукариотам.Геномы красных водорослей, как пластидные, так и ядерные, также внесли свой вклад посредством вторичного эндосимбиоза в несколько других эукариотических линий, включая страменопилы, альвеолиты, криптофиты и гаптофиты (1), и, таким образом, гены происхождения красных водорослей широко распространены среди эукариот. Поэтому знание о генах и геномах красных водорослей имеет решающее значение для понимания эволюции эукариот. Летопись окаменелостей красных макроводорослей насчитывает 1,2 миллиарда лет и является старейшим свидетельством морфологически развитых, многоклеточных, воспроизводящихся половым путем эукариот (2).С экологической точки зрения красные водоросли представляют собой наиболее богатую видами группу морских макрофитов, насчитывающую более 6000 описанных видов (www.algaebase.org). Они являются важными компонентами многих морских экосистем, включая скалистые приливные берега и коралловые рифы, а также присутствуют в пресной воде (3). Красные водоросли также обладают некоторыми необычными физиологическими особенностями. Их фотосинтетические антенны построены из фикобилипротеинов, тилакоиды разложены, и у них полностью отсутствуют жгутики и центриоли. В отличие от Chloroplastida, которые производят крахмал в своих хлоропластах, красные водоросли хранят углерод в виде гранул крахмала в своем цитозоле (флоридовый крахмал) (3).Их клеточная стенка представляет собой сложную совокупность целлюлозы, различных гемицеллюлоз и уникальных сульфатированных галактанов (агаров и каррагинанов) (4). С экономической точки зрения красные макроводоросли важны из-за содержания в них полисахаридов. Например, каррагинаны, основные сульфатсодержащие соединения многих красных водорослей, используются в качестве текстурирующих агентов и в 2010 г. имели рыночную стоимость более 500 миллионов долларов США (5). Красные водоросли, особенно нори (виды Pyropia и Porphyra ), также используются непосредственно в пищу человеком с рыночной стоимостью около 1300 миллионов долларов США в год (6).

Ряд транскриптомных исследований доступен на красных водорослях, включая роды Porphyra, Chondrus и Gracilaria (см. Ссылку 7 и ссылки в ней), которые исследуют процессы развития и физиологические реакции и устанавливают вклад красных водорослей. к различным эволюционным линиям через вторичные эндосимбиозные события. Однако красные макроводоросли были последней группой сложных многоклеточных организмов, у которых отсутствует качественная эталонная последовательность генома.Ближайшим полностью секвенированным родственником красных макроводорослей является одноклеточный экстремофил Cyanidioschyzon merolae , имеющий сокращенный геном (8) и принадлежащий к Cyanidiales, группе, которая отделилась от других красных водорослей около 1,4 миллиарда лет назад (1).

В настоящем исследовании мы анализируем геном Chondrus crispus Stackhouse (Gigartinales), или ирландского мха, литоральной красной водоросли длиной до 20 см, обнаруженной на скалистых берегах северной части Атлантического океана. Chondrus является представителем флоридофитов, самой большой группы современных красных водорослей, составляющих 95% известных видов (3).Это обычные водоросли с типичной трехфазной историей красных водорослей с легким доступом ко всем трем фазам жизненного цикла: гаплоидным женским и мужским гаметофитам, диплоидным тетраспорофитам и диплоидным карпоспорофитам (присутствующим на женском гаметофите). Клеточная стенка содержит каррагинан, обычно с ι- и κ-каррагинаном в гаметофите и λ-каррагинаном в спорофите. В отличие от большинства других красных водорослей, для Chondrus существуют важные научные фоновые знания, включая исследования митохондриального генома (9), транскриптомики (10, 11), взаимодействия с патогенами (12), воздействия УФ-излучения (13), стрессовый метаболизм (14) и популяционная экология (15, 16).Таким образом, наличие генома C. crispus должно способствовать продвижению этого организма в качестве модельного вида для флоридофитных водорослей и пролить свет на ключевые аспекты эволюции эукариот.

Результаты и обсуждение

Редуцированный геном с исключительно компактными кластерными генами.

Геномную последовательность получали с использованием ДНК, очищенной из клонально растущей одноалгальной культуры гаметофита Chondrus crispus , и секвенировали с использованием технологии Сэнгера.Собранный ядерный геном Chondrus содержит 1266 каркасов общим объемом 105 Мбит / с. Сочетание экспертной и автоматической аннотации предсказывает 9 606 генов. Результаты аннотации подробно описаны в Приложении SI . Гены удивительно компактны, в среднем содержат только 1,32 экзона (т.е. намного меньше, чем у других организмов с таким же размером генома), и большинство генов (88%) являются моноэксонными (рис. 1 A ). Редкие интроны небольшие, их средняя длина составляет 182 нуклеотида (таблица 1).Содержание интронов Chondrus и его дальнего родственника C. merolae, , а также ограниченные данные о структуре генов других красных водорослей (17) позволяют предположить, что компактные гены типичны для этой группы и, следовательно, могут быть родовая черта. Стоит отметить, что нуклеоморфы красных водорослей криптомонад также имеют низкое содержание интронов (18). Хотя мы не можем исключить возможность того, что массовая потеря интронов могла произойти после вторичного эндосимбиотического события, это наблюдение предполагает, что у предковой эндосимбиотической красной водоросли, которая дала начало этим нуклеоморфам, также было мало интронов.Появляется все больше свидетельств того, что последний общий предок эукариот был богат интронами и что в эволюции эукариот наблюдались как потери интронов, так и их усиление (19). Таким образом, небольшое количество интронов в красных водорослях было бы вторичной особенностью, которая возникла после раскола между зеленой и красной ветвями около 1,5 миллиарда лет назад (1). Несколько интронов, которые присутствуют в Chondrus , возможно, имеют регуляторную функцию, потому что в среднем транскрипты интрон-содержащих генов накапливаются на более высоком уровне, чем транскрипты моноэксонных генов ( SI Приложение , рис.С1.1 В ). Этот результат согласуется с предыдущими наблюдениями у других эукариот (20, 21).

Рис. 1.

Структурные особенности генома Chondrus crispus (Cc). ( A ) Процент генов с интронами в зависимости от размера генома у выбранных эукариот. ( B ) Плотность генов как функция кластеризации у выбранных эукариот. Виды: Ostreococcus lucimarinus (Ol), Cyanidioschyzon merolae (Cm), Micromonas pusilla (Mp), Saccharomyces cerevisiae (Sc), Phaeodactylum 0005, Pheodactishmainia major, Pheodactishmainia major, Pheodactylum , Ph. Thalassiosira pseudonana (Tp), Phytophthora ramorum (Pr), Paramecium tetraurelia (Pt), Phytophthora sojae (Ps), Caenorhabditis remorum, (Ceenorhabditis), (Ceenorhabditis), ) thaliana (At), Ectocarpus siliculosus (Es), Oryza sativa (Os), Physcomitrella patens (Pp), Vitis vinifera (Vv ), Sorghum bicolor (Sballus ) (Gg), Danio rerio (Dr), Zea mays (Zm), Homo sapiens (Hs).Зеленые символы обозначают хлоропластиды; красные, родофиты; синий, опистоконц; коричневые, страменопилы; и черный, другие.

Таблица 1. Статистика генома

из C . crispus и избранные фотосинтетические виды

Гены в Chondrus сгруппированы в генно-плотные области, перемежающиеся с последовательностями, содержащими многочисленные повторяющиеся элементы. В результате мы наблюдали низкое среднее расстояние (0,8 т.п.н.) между генами по сравнению со средним расстоянием (6,9 т.п.н.).Соотношение между средними и медианными межгенными расстояниями у разных эукариот показывает, что Chondrus имеет исключительно низкую плотность генов и высокую степень кластеризации (рис. 1 B ). Близость кодирующих ORF усиливается короткими нетранслируемыми участками (в среднем 142 п.н.). Геномы C. merolae и Chondrus , хотя и различаются по размеру, схожи в том, что они регионально компактны с небольшим количеством интронов и ограниченным числом генов по сравнению с другими видами эукариот (Таблица 1).Следовательно, возможно, что красные макроводоросли (и другие красные водоросли, не относящиеся к Cyanidiales) имеют общего предка с C. merolae , который имел уменьшенный геном и что размер генома макроводорослей увеличился [размеры генома красных макроводорослей составляют 80– 1,200 Мбит / с (22)] произошло после отделения от Cyanidiales.

Недавнее расширение генома в результате вторжения переносного элемента.

Повторяющиеся последовательности составляют 73% генома Chondrus . Наиболее распространенными мобильными элементами являются ретротранспозоны LTR класса I, размер которых составляет 58 Мбит / с; Были также обнаружены не-LTR ретроэлементы.Было обнаружено 21 семейство концевых инвертированных повторяющихся элементов (элементы класса II), представляющих 13 Мб генома, а также одно активное семейство гелитронов. Ретротранспозонный компонент генома чрезвычайно сложен не только из-за огромного количества недавно транспонированных элементов, но также из-за того, что в каждой семье есть члены, которые значительно разошлись. Анализ показал доказательства продолжающегося всплеска транспозиционной активности, которая ответственна как минимум за 18 Мбит / с генома.Гистограмма сходства между LTR показывает унимодальное распределение, что указывает на то, что перестановка всех элементов произошла одновременно и произошла совсем недавно ( SI Приложение , рис. S2.3). Среднее сходство составляет 98%, причем более 100 элементов демонстрируют идентичные LTR. Размеры эталонных элементов copia и gypsy также очень похожи, что свидетельствует о низкой частоте вставок / делеций. Вместе эти результаты показывают, что ретроэлементы LTR были основной движущей силой в формировании генома Chondrus и что их пролиферация значительно увеличила размер генома за последние 300000 лет ( SI Приложение , рис.S2.3).

Пониженное содержание генов.

В соответствии с компактной структурой его генома, у Chondrus имеется множество примеров пониженного генного разнообразия. Например, мы не обнаружили типичных и широко распространенных эукариотических генов, таких как селенопротеины, механизмы метилирования ДНК, сульфатазы, основные компоненты эндоцитарного аппарата (Rab5 GTPase, адаптерный комплекс AP-2, эндоцитарный Qc-SNARE), гетеротримерный G белки или гены, специфичные для жгутиков (у красных водорослей жгутики отсутствуют на всех этапах жизненного цикла).Вдобавок, что удивительно для фотосинтезирующего организма, был обнаружен только один фоторецептор, криптохром, и, следовательно, Chondrus , похоже, не имеет большинства типов фоторецепторов, известных на сегодняшний день, включая ауреохромы, фитохромы, родопсин или фототропины. Более того, большинство семейств генов небольшие, с несколькими паралогами, вовлеченными в данный функциональный процесс. Например, Chondrus кодирует 82 гена цитоплазматических рибосомных белков по сравнению с 349 в Arabidopsis thaliana , хотя почти все типы рибосомных белков присутствуют в Chondrus ( SI Приложение , Таблица S4.8). Метаболизм крахмала – еще один пример использования минимального набора генов для функции (см. Ниже). Количество кодируемых факторов транскрипции и регуляторов транскрипции также невелико: 193 белка по сравнению с 161 в одноклеточной красной водоросли C. merolae , 401 в многоклеточной бурой водоросли Ectocarpus siliculosus , которая имеет аналогичную сложную морфологию и более 1500 в морфологически более сложном эмбриофите A. thaliana (23). Несмотря на то, что количество факторов транскрипции ограничено, стоит отметить, что в геноме обнаружены гены Dicer и Argonaute, которые участвуют в процессинге малых РНК (24).Гены Argonaute не были описаны у одноклеточных красных водорослей, глаукофитов или большинства празинофитов, а Dicer не может быть обнаружен ни в каких других красных, зеленых или одноклеточных гетероконтальных водорослях (23). Это наблюдение указывает на сложную регуляцию miRNAs в Chondrus , сравнимую с таковой у многоклеточных растений и животных.

Взятые вместе, эти результаты доказывают, что упрощение пути, наряду с потерей генов и интронов, является наследственным для родофитов и не происходит от Cyanidiales и других линий одноклеточных красных водорослей.

Большое неизученное генетическое разнообразие.

Это исследование дает представление о большом количестве ранее неизвестных генов, обнаруженных в Chondrus , то есть 52% генов, не имевших аналогов (blastp e-value> 10 −5 ) в GenBank. Предсказанные белки в геноме Chondrus сравнивали с 5 064 белками из C. merolae (25), предсказанными 23 961 белками Calliarthron tuberculosum (26) и 839 белками Pyropia ( Porphyra ). ) yezoensis присутствует в GenBank.Этот набор белков был дополнен 22 431 EST P. yezoensis и 36 167 EST Porphyridium cruentum (26) (подробности см. В приложении SI ). Как показано на рис. 2, 57% ортологических групп Chondrus не были обнаружены у других красных водорослей, что свидетельствует о большом генетическом разнообразии даже в пределах этой линии.

Рис. 2.

Ортологические группы в генах, кодирующих белок красных водорослей. Диаграмма Венна показывает группы ортологов, идентифицированные в геномах C.crispus и Cyanidioschyzon merolae и в пределах доступных последовательностей Calliarthron tuberculosum , P . cruentum и Pyropia (Porphyra) yezoensis .

Уникальный углеводный метаболизм.

Геном Chondrus содержит 31 гликозидгидролазу (GH) и 65 гликозилтрансфераз (GT), принадлежащих к 16 семействам GH и 27 GT, соответственно ( SI, приложение , таблица S7.13). Эти ферменты участвуют в метаболизме клеточной стенки и в синтезе других полисахаридов, а также в гликозилировании белков и липидов. Chondrus содержит все гены, необходимые для синтеза и переработки крахмала ( SI, приложение , таблица S7.14), но с удивительно низкой избыточностью. Обнаружение только 12 генов, связанных с крахмалом, революционизирует наше понимание создания этого важного полимера. Действительно, до недавнего времени предполагалось, что сложность метаболизма крахмала в зеленой ветви отражает сложность структуры гранул крахмала. Геном Chondrus явно опровергает эту гипотезу.

Идентифицирован один ген, гомологичный хондроитинсинтазе семейства GT7, и девять генов, сходных с углеводными сульфотрансферазами (CST). Эти ферменты участвуют в биосинтезе сульфатированных полисахаридов, гликозаминогликанов, у животных, что позволяет предположить, что их гомологи Chondrus участвуют в биосинтезе каррагинана. CST также законсервированы у бурых водорослей, но отсутствуют в доступных геномах наземных растений. Группирование КСТ красных водорослей с КСТ животных и бурых водорослей ( SI Приложение , рис.S7.3 – S7.5) подтверждает, что синтез сульфатированных полисахаридов – это древняя эукариотическая способность, которая была утрачена растениями во время завоевания земли (27). Кроме того, Chondrus содержит 12 галактозо-6-сульфурилаз, которые отвечают за последнюю стадию биосинтеза каррагинана и являются уникальными для красных водорослей (28), и три фермента Gh26, связанных с κ-каррагеназами морских бактерий (29), которые предположительно участвуют в расширении и переработке клеточной стенки.

Chondrus содержит две целлюлозосинтазы (CESA), аналогичные синтазам красных водорослей Porphyra sp.(Идентичность 55%) и Griffithsia monilis (идентичность 62%). Как и CESA из G. monilis , Chondrus CESA отображают CBM48 на N-конце (30). При поиске методом Blast по базе данных NR ближайшими гомологами последовательностей красных водорослей являются CESA от Oomycetes (идентичность ~ 35%), от Dictyostelium spp. (Идентичность ~ 30%) и от различных бактерий (идентичность ~ 28%). Напротив, CESA наземных растений более далеки (идентичность ~ 20%). Филогенетический анализ с бактериальными CESA в качестве внешней группы показывает, что CESA и целлюлозосинтазоподобные белки (CSL) из Chloroplastida расходятся на две несвязанные клады (рис.3). Первая клада включает CESA и CLSB, D, E, F, G и H и, вероятно, происходит от единственной целлюлозосинтазы харофитов. Вторая клада, которая включает CSLA и CSLC, происходит от CSL хлорофитов, которых нет в транскриптомах харофитов (31). Красные водоросли CESA появляются вместе с CESA от оомицетов в отдельном кластере, корнями уходящем в CESA от Amoebozoa, что подтверждает тенденцию, наблюдаемую при поисках blastp. Следовательно, CESA красных водорослей и зеленых водорослей и эмбриофитов имеют разное происхождение.Амёбозои не участвовали в первичном пластидном эндосимбиозе; таким образом, приобретение бактериальной синтазы целлюлозы, вероятно, произошло до первичного эндосимбиоза и не обязательно имеет цианобактериальное происхождение (32, 33). Природу различных предковых бактерий, участвующих в горизонтальном переносе генов (HGT) с красными водорослями и зелеными водорослями, трудно определить, потому что все гены бактериального синтеза целлюлозы A (bCsA) имеют тенденцию группироваться вместе в неукорененном дереве. В Chondrus отсутствуют целлюлазы семейства GH9, обнаруженные в наземных растениях.Напротив, геном содержит три других семейства целлюлаз (GH5, GH6 и Gh55), которые отсутствуют у Chloroplastida, но законсервированы у различных бактерий и гетеротрофных эукариот. Филогенетический анализ подтверждает, что целлюлазы GH5 возникают в кладе, охватывающей целлюлазы оомицетов, амебозоа и нематод, тогда как целлюлазы Gh55 красных водорослей родственны целлюлазам грибов (рис. 3). Целлюлазы GH6 из Chondrus консервативны как у бактерий, так и у грибов, но, по-видимому, ближе к бактериальным целлюлазам GH6.Поскольку по крайней мере целлюлазы красных водорослей GH5 и Gh55 имеют общих предков с целлюлазами опистоконтов или амобозоа, эти белки являются древними эукариотическими ферментами, предшествующими первичному пластидному эндосимбиозу. Таким образом, эти предковые целлюлазы, вероятно, изначально участвовали в деградации бактериальной целлюлозы. После освоения пути биосинтеза целлюлозы эти ферменты красных водорослей, вероятно, эволюционировали, чтобы участвовать в ремоделировании клеточной стенки.

Рис. 3.

Филогенетические деревья целлюлозосинтаз CESA и целлюлозосинтазоподобных белков CSL (семейство GT2) и целлюлаз семейств GH5 и Gh55.Все филогенетические деревья были построены с использованием подхода максимального правдоподобия (ML) с программой MEGA 5.05 (www.megasoftware.net). Числа указывают значения начальной загрузки в анализе машинного обучения.

Необычные метаболические особенности.

Из-за своей эволюционной истории и среды обитания красные водоросли обладают некоторыми необычными ферментами, связанными с первичным и вторичным метаболизмом. В качестве иллюстрации геном Chondrus содержит ген, похожий на ген маннозилглицератсинтазы (MGS) морской бактерии Rhodothermus marinus ( 48% идентичности) и некоторых архей (идентичность ~ 29%).Этот фермент семейства GT78 синтезирует маннозилглицерат – осмолит, необходимый для термической адаптации термофильных микроорганизмов (34, 35). Это редкое соединение, известное в красных водорослях как «дигенезид», накапливается во время фотосинтеза (36). MGS не обнаружены в доступных геномах глаукофитов, зеленых водорослей или наземных растений, за исключением Physcomitrella patens и Selaginella moellendorffii . Тем не менее, мы идентифицировали гомологи GT78 в транскриптомных данных пяти других красных водорослей и пяти стрептофитных водорослей.Филогенетический анализ показывает, что последовательности GT78 из красных водорослей, стрептофитов, мхов и ликофитов составляют две отдельные клады, укорененные в MGS из R. marinus ( SI Приложение , рис. S7.2). Таким образом, произошел латеральный перенос между общим предком зеленых и красных водорослей с термофильной морской бактерией. Большинство современных красных водорослей сохранили этот фермент; у зеленой линии этот ген был рано утерян хлорофитами, но был сохранен стрептофитами, мхами и ликофитами.Окончательно утрачен наземными растениями после отделения от ликофитов.

Несколько наборов анаболических и катаболических реакций, ранее считавшихся специфическими для растений или животных, были обнаружены в Chondrus . Этот результат поднимает интригующие вопросы о биологических ролях и регуляции связанных генов, молекул и метаболических путей, в частности, сохраняются ли их функции и механизмы действия в разных клонах. Примерами являются оксилипины C18 (растительные) и C20 (животные) и родственные соединения, которые были идентифицированы в Chondrus в контексте исследований реакции на биотический стресс (28, 29).Интересно, что были идентифицированы только два гена, кодирующие липоксигеназу ( SI, приложение , таблица S7.10), что является неожиданным результатом, учитывая разнообразие оксилипинов, наблюдаемое у этой водоросли. Присутствие метилжасмоната, растительного гормона, участвующего в передаче сигналов стресса, было обнаружено in vitro после инкубации с линоленовой кислотой (37, 38). Однако не было найдено кандидатов на использование алленоксидсинтазы, алленоксидциклазы или карбоксиметилтрансферазы жасмоновой кислоты. Этот результат указывает на то, что синтез метилжасмоната и оксилипина в Chondrus может осуществляться другими ферментами, кроме охарактеризованных до сих пор.

Несмотря на общее сокращение генома, ряд семейств генов оставались разнообразными или подвергались недавней диверсификации и расширению. Одним из примеров такого разнообразия является сравнительно большой набор генов, связанных с метаболизмом галогенов. Галогены играют важную роль в метаболизме морских красных водорослей (9), и транскриптомные данные указывают на высокую экспрессию соответствующих генов ( S1, приложение , таблица S8.1). Например, было идентифицировано 20 генов, кодирующих животные-подобные гомологи пероксидазы гема ( SI Приложение , рис.S8.4). У млекопитающих эти гены играют важную роль во время проникновения патогенов, выделяя гипогалогеновые кислоты (39), но их функция у красных водорослей неизвестна. Насколько нам известно, животные и морские бактерии – единственные группы организмов, у которых был обнаружен этот тип белка. Их появление в Chondrus является дополнительным доказательством гипотезы о древнем происхождении белков из суперсемейства пероксидаза-циклооксигеназа (например, гемпероксидазы) (40). Кроме того, геном Chondrus кодирует 15 членов семейства галопероксидаз фосфатидной кислоты 2-го типа.Интересно, что он также содержит группу ферментов галогеналкандегалогеназы и галогенкислоты дегалогеназы, которые удаляют галогены из алканов. Эта группа ферментов ранее была обнаружена только у прокариот и у бурых водорослей E. siliculosus (41). Большой размер этих семейств генов, связанных с галогенами, вероятно, является специфической эволюционной адаптацией к морской среде, позволяя коричневым и красным макроводорослям использовать преимущества химии галогенов и тонко модулировать метаболизм галогенов, который играет важную роль в защитных реакциях, окислительно-восстановительных реакциях. , и производство вторичных метаболитов.Эту гипотезу подтверждают тот факт, что E. siliculosus имеет столь же богатый репертуар пероксидаз и галопероксидаз, с ~ 16 представителями (41), и что бурые водоросли в целом обладают активным метаболизмом галогенов (42).

Эволюционный сценарий.

Геном Chondrus проливает свет на раннюю эволюцию Archaeplastida. Присутствие семейств целлюлаз GH5 и Gh55 в Chondrus подтверждает мнение о том, что предком Archaeplastida были целлюлолитические протисты, питавшиеся бактериальными экзополисахаридами, такими как целлюлоза.Эта гипотеза согласуется с древним эукариотическим происхождением целлюлаз семейства GH9 (43). После своего расхождения красные водоросли сохраняли только целлюлазы GH5 и Gh55, а зеленые водоросли и растения утратили эти гены и сохранили целлюлазы GH9. Повторное знакомство с бактериальной геномной ДНК также может объяснить HGT различного бактериального происхождения, обнаруженные в геноме Chondrus (например, GT2, GT78). Биосинтез целлюлозы был приобретен независимо у красных и зеленых водорослей; Независимое приобретение может частично объяснить структурное разнообразие синтезирующих целлюлозу ферментных комплексов и микрофибрилл целлюлозы у Archaeplastida (44).

Компактная структура неповторяющейся части генома и генов Chondrus также указывает на то, что линия красных водорослей прошла через узкое место в эволюции (рис. 4). На раннем этапе эволюции красных водорослей, но после их отделения от зеленых водорослей, давление отбора для небольшого физического размера или низких потребностей в питательных веществах, вероятно, вызывало сокращение генома с потерей интронов и межгенетического материала. Это узкое место также может объяснить отсутствие жгутиков на всех стадиях жизненного цикла красных водорослей, поскольку соответствующие гены могли быть потеряны во время уплотнения генома.Ранее предполагалось (45), что из-за ограниченной устойчивости цианобактерий к низкому pH, ранние эукариотические водоросли имели бы меньшую конкуренцию в кислой среде, где присутствовало меньше фотосинтезирующих организмов. Существующие красные водоросли C. merolae или Galdieria sulphuraria живут в среде с высокой температурой и низким pH, и хотя непонятно, почему такие условия уменьшают размер генома, ясно, что эти условия благоприятствуют компактным геномам в красных водорослей и может указывать на то, что исконная красная водоросль была ацидо- и термофильным организмом.Эволюционное «узкое место» также может объяснить большое количество генов-сирот в геноме, потому что красные водоросли были вынуждены заново изобретать функции генов, которые были потеряны во время редукции генома. Если эта гипотеза верна, мы прогнозируем, что продолжающийся геном красных водорослей проектируется на Porphyra spp (6), P . cruentum (46) и C . tuberculosum (47) покажет сходную генную и геномную организацию.

Рис. 4.

Предлагаемый сценарий эволюции красных водорослей.Предок со жгутиками и богатым интронами геномом вторгся в экстремальную среду, возможно, кислую и высокую температуру, с сильным давлением отбора в сторону уменьшенного генома, где произошло сокращение генома. Позднее красные водоросли повторно заселили морскую и пресноводную среду и испытали расширение генома за счет активности мобильных элементов. В настоящее время они представлены флоридофитами и бангиофитами (красные водоросли, которые не являются ни Cyanidiales, ни флоридофитами).Красные овалы представляют пластиды; голубые круги – ядро ​​с наследственными генами; желтые, сменные элементы.

В заключение, это исследование представляет собой эталонный геном многоклеточной красной водоросли и дает ряд неожиданных сведений о происхождении и эволюции этой наследственной линии растений. Он также предоставляет фундаментальные данные об уникальных путях метаболизма этой большой и экономически важной группы морских водорослей. Кроме того, из-за уникальных характеристик генома C . crispus представляет собой новый модельный вид для изучения сложных эволюционных сил, которые формируют эукариотические геномы. Наконец, как архив генного содержания морских предков растений, этот геном поможет сравнительно выделить инновации, которые были необходимы для появления наземных растений и их адаптации к наземным условиям.

Таблетки эсциталопрама по 20 мг – Сводка характеристик продукта (SmPC)

Эта информация предназначена для медицинских работников

Эсциталопрам, таблетки, покрытые пленочной оболочкой 20 мг

Каждая таблетка, покрытая пленочной оболочкой, содержит 20 мг эсциталопрама (в виде оксалата).

Полный список вспомогательных веществ см. В разделе 6.1.

Таблетка, покрытая пленочной оболочкой.

Эсциталопрам 20 мг: от белого до почти белого цвета, овальной формы, двояковыпуклые таблетки с пленочным покрытием, с тиснением «F» на одной стороне и «56» на другой стороне с глубокой линией счета между «5» и «6». Размер составляет 11,6 мм X 7,1 мм.

Таблетки можно разделить на равные дозы.

Лечение депрессивных эпизодов.

Лечение панического расстройства с агорафобией или без нее.

Лечение социального тревожного расстройства (социофобии).

Лечение генерализованного тревожного расстройства.

Лечение обсессивно-компульсивного расстройства.

Позология

Безопасность суточных доз выше 20 мг не была продемонстрирована.

Большие депрессивные эпизоды

Обычная доза составляет 10 мг один раз в сутки. В зависимости от индивидуальной реакции пациента доза может быть увеличена максимум до 20 мг в день.

Обычно для получения антидепрессивного ответа требуется 2–4 недели. После исчезновения симптомов требуется лечение в течение не менее 6 месяцев для закрепления ответа.

Паническое расстройство с агорафобией или без нее

Рекомендуется начальная доза 5 мг в течение первой недели перед увеличением дозы до 10 мг в день. Доза может быть увеличена до максимальной до 20 мг в день, в зависимости от индивидуальной реакции пациента.

Максимальная эффективность достигается примерно через 3 месяца.Лечение длится несколько месяцев.

Социальное тревожное расстройство

Обычная доза составляет 10 мг один раз в сутки. Обычно для облегчения симптомов требуется 2-4 недели. Впоследствии, в зависимости от индивидуальной реакции пациента, доза может быть уменьшена до 5 мг или увеличена до максимум 20 мг в день.

Социальное тревожное расстройство – это заболевание с хроническим течением, для закрепления которого рекомендуется лечение в течение 12 недель. Долгосрочное лечение респондеров изучалось в течение 6 месяцев и может рассматриваться в индивидуальном порядке для предотвращения рецидива; пользу лечения следует пересматривать через регулярные промежутки времени.

Социальное тревожное расстройство – это четко определенная диагностическая терминология конкретного расстройства, которую не следует путать с чрезмерной застенчивостью. Фармакотерапия показана только в том случае, если заболевание существенно мешает профессиональной и общественной деятельности.

Место этого лечения по сравнению с когнитивно-поведенческой терапией не оценивалось. Фармакотерапия является частью общей терапевтической стратегии.

Генерализованное тревожное расстройство

Начальная доза составляет 10 мг один раз в сутки.В зависимости от индивидуальной реакции пациента доза может быть увеличена максимум до 20 мг в день.

Долгосрочное лечение респондеров изучалось в течение не менее 6 месяцев у пациентов, получающих 20 мг / день. Польза от лечения и дозы следует пересматривать через регулярные промежутки времени (см. Раздел 5.1).

Обсессивно-компульсивное расстройство

Начальная доза составляет 10 мг один раз в сутки. В зависимости от индивидуальной реакции пациента доза может быть увеличена максимум до 20 мг в день.

Поскольку ОКР является хроническим заболеванием, пациенты должны проходить лечение в течение достаточного периода времени, чтобы гарантировать отсутствие у них симптомов.

Польза от лечения и дозы следует пересматривать через регулярные промежутки времени (см. Раздел 5.1).

Пациенты пожилого возраста (> 65 лет)

Начальная доза составляет 5 мг один раз в сутки. В зависимости от индивидуальной реакции пациента доза может быть увеличена до 10 мг в день (см. Раздел 5.2).

Эффективность эсциталопрама при социальном тревожном расстройстве у пожилых пациентов не изучалась.

Педиатрия

Эсциталопрам не следует применять для лечения детей и подростков в возрасте до 18 лет (см. Раздел 4.4).

Снижение функции почек

Коррекция дозы не требуется пациентам с почечной недостаточностью легкой или средней степени тяжести. Следует соблюдать осторожность пациентам с сильно сниженной функцией почек (CL CR менее 30 мл / мин) (см. Раздел 5.2).

Снижение функции печени

Начальная доза 5 мг в день в течение первых двух недель лечения рекомендуется пациентам с легкой или умеренной печеночной недостаточностью. В зависимости от индивидуальной реакции пациента доза может быть увеличена до 10 мг в день. Пациентам с серьезно сниженной функцией печени рекомендуется осторожно и очень осторожно подбирать дозу (см. Раздел 5.2).

Плохие метаболизаторы CYP2C19

Для пациентов, которые, как известно, плохо метаболизируют CYP2C19, рекомендуется начальная доза 5 мг в день в течение первых двух недель лечения.В зависимости от индивидуальной реакции пациента доза может быть увеличена до 10 мг в день (см. Раздел 5.2).

Симптомы отмены, наблюдаемые при прекращении лечения

Следует избегать резкого прекращения приема. При прекращении лечения эсциталопрамом дозу следует постепенно снижать в течение как минимум одной-двух недель, чтобы снизить риск появления симптомов отмены (см. Разделы 4.4 и 4.8). Если после снижения дозы или прекращения лечения возникают непереносимые симптомы, можно рассмотреть возможность возобновления ранее назначенной дозы.Впоследствии врач может продолжить снижение дозы, но более постепенно.

Способ применения

Эсциталопрам вводят в виде однократной суточной дозы, которую можно принимать с пищей или без нее.

Повышенная чувствительность к эсциталопраму или к любому из вспомогательных веществ.

Сопутствующее лечение неселективными необратимыми ингибиторами моноаминоксидазы (ингибиторами МАО) противопоказано из-за риска серотонинового синдрома с возбуждением, тремором, гипертермией и т. Д.(см. раздел 4.5).

Комбинация эсциталопрама с обратимым ингибитором MAO-A (например, моклобемидом) или обратимым неселективным ингибитором MAO-A линезолидом противопоказана из-за риска развития серотонинового синдрома (см. Раздел 4.5).

Эсциталопрам противопоказан пациентам с известным удлинением интервала QT или врожденным синдромом удлиненного интервала QT.

Эсциталопрам противопоказан вместе с лекарственными средствами, которые, как известно, удлиняют интервал QT (см. Раздел 4.5).

Следующие специальные предупреждения и меры предосторожности относятся к терапевтическому классу СИОЗС ( S факультативный S эротонин R e-захват I ингибиторы).

Педиатрия

Эсциталопрам не следует применять для лечения детей. Поведение, связанное с самоубийством (попытка самоубийства и суицидальные мысли), и враждебность (преимущественно агрессия, оппозиционное поведение и гнев) чаще наблюдались в клинических испытаниях среди педиатров , получавших антидепрессанты по сравнению с теми, кто получал плацебо.Если на основании клинической необходимости решение о лечении все же принято, за пациентом следует внимательно наблюдать на предмет появления суицидных симптомов. Кроме того, отсутствуют долгосрочные данные о безопасности в педиатрической популяции, касающиеся роста, созревания, когнитивного и поведенческого развития.

Парадоксальная тревога

Некоторые пациенты с паническим расстройством могут испытывать усиление тревожных симптомов в начале лечения антидепрессантами.Эта парадоксальная реакция обычно проходит в течение двух недель при продолжении лечения. Рекомендуется низкая начальная доза для снижения вероятности анксиогенного эффекта (см. Раздел 4.2).

Изъятия

Эсциталопрам следует отменить, если у пациента впервые развиваются судороги или если наблюдается учащение приступов (у пациентов с предыдущим диагнозом эпилепсия). Следует избегать приема СИОЗС пациентам с нестабильной эпилепсией, а пациенты с контролируемой эпилепсией должны находиться под тщательным наблюдением.

Мания

СИОЗС

следует применять с осторожностью пациентам с манией / гипоманией в анамнезе. Всем пациентам, входящим в маниакальную фазу, следует прекратить прием СИОЗС.

Диабет

У пациентов с диабетом лечение СИОЗС может изменить гликемический контроль (гипогликемия или гипергликемия). Может потребоваться корректировка дозы инсулина и / или пероральных гипогликемических средств.

Суицид / суицидальные мысли или клиническое ухудшение

Депрессия связана с повышенным риском суицидальных мыслей, членовредительства и суицида (событий, связанных с самоубийством).Этот риск сохраняется до тех пор, пока не наступит значительная ремиссия. Поскольку улучшение может не наступить в течение первых нескольких недель или более лечения, пациенты должны находиться под тщательным наблюдением до тех пор, пока не наступит такое улучшение. Общий клинический опыт показывает, что риск суицида может увеличиваться на ранних стадиях выздоровления.

Другие психические состояния, при которых назначают эсциталопрам, также могут быть связаны с повышенным риском суицидальных событий. Кроме того, эти состояния могут сочетаться с большим депрессивным расстройством.Поэтому те же меры предосторожности, которые наблюдаются при лечении пациентов с большим депрессивным расстройством, следует соблюдать при лечении пациентов с другими психическими расстройствами.

Известно, что пациенты, у которых в анамнезе были суицидальные события, или пациенты со значительной степенью суицидальных мыслей до начала лечения, подвержены большему риску суицидальных мыслей или попыток самоубийства и должны находиться под тщательным наблюдением во время лечения. Мета-анализ плацебо-контролируемых клинических испытаний антидепрессантов у взрослых пациентов с психическими расстройствами показал повышенный риск суицидального поведения при приеме антидепрессантов по сравнению с плацебо у пациентов младше 25 лет.Тщательное наблюдение за пациентами, особенно из группы высокого риска, должно сопровождать лекарственную терапию, особенно на ранних этапах лечения и после изменения доз.

Пациенты (и лица, осуществляющие уход за пациентами) должны быть предупреждены о необходимости отслеживать любое клиническое ухудшение, суицидальное поведение или мысли, а также необычные изменения в поведении и немедленно обращаться за медицинской помощью, если эти симптомы присутствуют.

Акатизия / психомоторное возбуждение

Использование СИОЗС / ИОЗСН связано с развитием акатизии, характеризующейся субъективно неприятным или тревожным возбуждением и потребностью в движении, часто сопровождающейся неспособностью сидеть или стоять на месте.Скорее всего, это произойдет в течение первых нескольких недель лечения. У пациентов, у которых развиваются эти симптомы, увеличение дозы может быть вредным.

Гипонатриемия

Гипонатриемия, вероятно из-за несоответствующей секреции антидиуретического гормона (SIADH), редко сообщается при применении СИОЗС и обычно проходит после прекращения терапии. Следует проявлять осторожность у пациентов из группы риска, таких как пожилые люди или пациенты с циррозом печени, или при использовании в сочетании с другими лекарствами, которые могут вызвать гипонатриемию.

Кровоизлияние

Поступали сообщения о кожных кровотечениях, таких как экхимозы и пурпура, при применении СИОЗС. Следует соблюдать осторожность пациентам, принимающим СИОЗС, особенно при одновременном применении с пероральными антикоагулянтами, с лекарственными средствами, которые, как известно, влияют на функцию тромбоцитов (например, атипичные нейролептики и фенотиазины, большинство трициклических антидепрессантов, ацетилсалициловая кислота и нестероидные противовоспалительные препараты (НПВП). тиклопидин и дипиридамол) и пациентам с известной склонностью к кровотечениям.

СИОЗС / СИОЗСН могут повышать риск послеродового кровотечения (см. Разделы 4.6, 4.8).

ЭСТ (электросудорожная терапия)

Имеется ограниченный клинический опыт одновременного применения СИОЗС и ЭСТ, поэтому рекомендуется соблюдать осторожность.

Серотониновый синдром

Следует соблюдать осторожность при одновременном применении эсциталопрама с лекарственными средствами с серотонинергическим действием, такими как суматриптан или другие триптаны, триптофан и опиоиды (например, бупренорфин и трамадол).

В редких случаях сообщалось о серотониновом синдроме у пациентов, принимающих СИОЗС одновременно с серотонинергическими лекарственными средствами. Сочетание симптомов, таких как возбуждение, тремор, миоклонус, гипертермия, изменения психического статуса, вегетативная нестабильность, нервно-мышечные аномалии и / или желудочно-кишечные симптомы, может указывать на развитие этого состояния. В этом случае лечение СИОЗС и серотонинергическим лекарственным средством следует немедленно прекратить и начать симптоматическое лечение.

Зверобой

Одновременный прием СИОЗС и лечебных трав, содержащих зверобой ( Hypericum perforatum ), может привести к увеличению числа побочных реакций (см. Раздел 4.5).

Симптомы отмены, наблюдаемые при прекращении лечения

Симптомы отмены при прекращении лечения являются обычными, особенно если прекращение лечения происходит внезапно (см. Раздел 4.8). В клинических испытаниях побочные эффекты, наблюдаемые при прекращении лечения, наблюдались примерно у 25% пациентов, получавших эсциталопрам, и у 15% пациентов, принимавших плацебо.

Риск симптомов отмены может зависеть от нескольких факторов, включая продолжительность и дозу терапии, а также скорость снижения дозы. Головокружение, сенсорные расстройства (включая парестезию и ощущение поражения электрическим током), нарушения сна (включая бессонницу и интенсивные сны), возбуждение или беспокойство, тошноту и / или рвоту, тремор, спутанность сознания, потливость, головную боль, диарею, сердцебиение, эмоциональную нестабильность, раздражительность, и расстройства зрения являются наиболее частыми реакциями.Обычно эти симптомы от легкой до умеренной, однако у некоторых пациентов они могут быть тяжелыми.

Обычно они возникают в течение первых нескольких дней после прекращения лечения, но были очень редкие сообщения о таких симптомах у пациентов, которые случайно пропустили дозу.

Как правило, эти симптомы проходят самостоятельно и обычно проходят в течение 2 недель, хотя у некоторых людей они могут длиться дольше (2–3 месяца и более). Поэтому рекомендуется постепенно снижать дозу эсциталопрама при прекращении лечения в течение нескольких недель или месяцев, в зависимости от потребностей пациента (см. «Симптомы отмены, наблюдаемые при прекращении лечения», раздел 4.2).

Ишемическая болезнь сердца

Из-за ограниченного клинического опыта пациентам с ишемической болезнью сердца рекомендуется соблюдать осторожность (см. Раздел 5.3).

Удлинение интервала QT

Было обнаружено, что эсциталопрам вызывает дозозависимое удлинение интервала QT. Случаи удлинения интервала QT и желудочковой аритмии, включая Torsade de Pointes, были зарегистрированы в течение постмаркетингового периода, преимущественно у пациентов женского пола, с гипокалиемией или с уже существующим удлинением интервала QT или другими сердечными заболеваниями (см.3, 4.5, 4.8, 4.9 и 5.1).

С осторожностью рекомендуется пациентам с выраженной брадикардией; или у пациентов с недавно перенесенным острым инфарктом миокарда или некомпенсированной сердечной недостаточностью.

Электролитные нарушения, такие как гипокалиемия и гипомагниемия, повышают риск злокачественных аритмий и должны быть скорректированы до начала лечения эсциталопрамом.

Если лечатся пациенты со стабильным сердечным заболеванием, перед началом лечения следует рассмотреть возможность проведения обзора ЭКГ.

Если во время лечения эсциталопрамом возникают признаки сердечной аритмии, лечение следует отменить и провести ЭКГ.

Закрытоугольная глаукома

СИОЗС, включая эсциталопрам, могут влиять на размер зрачка, приводя к мидриазу. Этот мидриатический эффект может сужать угол зрения, что приводит к повышению внутриглазного давления и закрытоугольной глаукоме, особенно у пациентов, находящихся в предрасположенном состоянии. Поэтому эсциталопрам следует с осторожностью назначать пациентам с закрытоугольной глаукомой или глаукомой в анамнезе.

Сексуальная дисфункция

Селективные ингибиторы обратного захвата серотонина (СИОЗС) / ингибиторы обратного захвата серотонина и норэпинефрина (СИОЗСН) могут вызывать симптомы сексуальной дисфункции (см. Раздел 4.8). Были сообщения о длительной сексуальной дисфункции, когда симптомы продолжались, несмотря на прекращение приема СИОЗС / СИОЗСН.

Эсциталопрам содержит натрий

Это лекарство содержит менее 1 ммоль натрия (23 мг) на каждую таблетку, то есть практически не содержит натрия.

Фармакодинамические взаимодействия

Противопоказанные комбинации:

Необратимые неселективные ИМАО

Сообщалось о случаях серьезных реакций у пациентов, получавших СИОЗС в сочетании с неселективным необратимым ингибитором моноаминоксидазы (ИМАО), и у пациентов, которые недавно прекратили лечение СИОЗС и начали такое лечение ИМАО (см. Раздел 4 .3). В некоторых случаях у пациента развивался серотониновый синдром (см. Раздел 4.8).

Эсциталопрам противопоказан в сочетании с неселективными необратимыми ИМАО. Эсциталопрам можно начать через 14 дней после прекращения лечения необратимыми ИМАО. После прекращения лечения эсциталопрамом должно пройти не менее 7 дней, прежде чем начинать неселективный необратимый ИМАО.

Обратимый селективный ингибитор МАО-А (моклобемид)

Из-за риска серотонинового синдрома комбинация эсциталопрама с ингибитором МАО-А, например моклобемидом, противопоказана (см.3). Если комбинация окажется необходимой, ее следует начать с минимальной рекомендуемой дозировки и усилить клинический мониторинг.

Обратимый неселективный ингибитор МАО (линезолид)

Антибиотик линезолид является обратимым неселективным ингибитором МАО и не должен назначаться пациентам, принимающим эсциталопрам. Если комбинация окажется необходимой, ее следует назначать в минимальных дозах и под тщательным клиническим наблюдением (см. Раздел 4.3).

Необратимый селективный ингибитор МАО-В (селегилин)

В комбинации с селегилином (необратимым ингибитором МАО-В) требуется осторожность из-за риска развития серотонинового синдрома. Селегилин в дозах до 10 мг / сут безопасно назначал одновременно с рацемическим циталопрамом.

Удлинение интервала QT

Фармакокинетические и фармакодинамические исследования эсциталопрама в сочетании с другими лекарственными средствами, удлиняющими интервал QT, не проводились.Нельзя исключить аддитивный эффект эсциталопрама и этих лекарственных средств. Таким образом, одновременный прием эсциталопрама с лекарственными средствами, удлиняющими интервал QT, такими как антиаритмические средства класса IA ​​и III, нейролептики (например, производные фенотиазина, пимозид, галоперидол), трициклические антидепрессанты, некоторые противомикробные средства (например, спарфлоксацин, моксифлоксацин, пентамидин, противомалярийное лечение, особенно галофантрин), некоторые антигистаминные препараты (астемизол, мизоластин) противопоказаны.

Комбинации, требующие мер предосторожности при использовании:

Серотонинергические лекарственные средства

Совместное применение с серотонинергическими лекарственными средствами (например, опиоидами (такими как бупренорфин и трамадол), суматриптаном и другими триптанами) может привести к серотониновому синдрому.

Лекарственные средства, снижающие порог изъятия

СИОЗС могут снизить порог судорожной готовности. Следует соблюдать осторожность при одновременном применении других лекарственных средств, снижающих судорожный порог (например,грамм. антидепрессанты (трициклики, СИОЗС), нейролептики (фенотиазины, тиоксантены и бутирофеноны), мефлохин, бупропион и трамадол).

Литий, триптофан

Имеются сообщения об усилении эффектов при назначении СИОЗС вместе с литием или триптофаном, поэтому одновременное применение СИОЗС с этими лекарственными средствами следует проводить с осторожностью.

Зверобой

Одновременный прием СИОЗС и растительных лекарственных средств, содержащих зверобой.Зверобой ( Hypericum perforatum ) может привести к увеличению частоты побочных реакций (см. Раздел 4.4).

Кровоизлияние

Измененные антикоагулянтные эффекты могут возникать при сочетании эсциталопрама с пероральными антикоагулянтами. Пациенты, получающие пероральную антикоагулянтную терапию, должны подвергаться тщательному мониторингу свертывания крови при начале или прекращении приема эсциталопрама (см. Раздел 4.4).

Одновременный прием нестероидных противовоспалительных препаратов (НПВП) может усилить склонность к кровотечениям (см.4).

Алкоголь

Фармакодинамических или фармакокинетических взаимодействий между эсциталопрамом и алкоголем не ожидается. Однако, как и в случае с другими психотропными лекарственными средствами, сочетание с алкоголем не рекомендуется.

Лекарственные средства, вызывающие гипокалиемию / гипомагниемию

Следует соблюдать осторожность при одновременном применении лекарственных средств, вызывающих гипокалиемию / гипомагниемию, поскольку эти состояния повышают риск злокачественных аритмий (см.4).

Фармакокинетические взаимодействия

Влияние других лекарственных средств на фармакокинетику эсциталопрама

Метаболизм эсциталопрама в основном опосредуется CYP2C19. CYP3A4 и CYP2D6 также могут вносить вклад в метаболизм, хотя и в меньшей степени. Метаболизм основного метаболита S-DCT (деметилированного эсциталопрама), по-видимому, частично катализируется CYP2D6.

Совместное применение эсциталопрама с 30 мг омепразола один раз в сутки (ингибитор CYP2C19) приводило к умеренному (приблизительно 50%) увеличению концентрации эсциталопрама в плазме.

Совместное применение эсциталопрама с циметидином 400 мг два раза в день (умеренно мощный общий ингибитор ферментов) приводило к умеренному (примерно 70%) увеличению концентрации эсциталопрама в плазме. Следует соблюдать осторожность при назначении эсциталопрама в сочетании с циметидином.

Может потребоваться корректировка дозы.

Таким образом, следует проявлять осторожность при одновременном применении с ингибиторами CYP2C19 (например, омепразолом, эзомепразолом, флуконазолом, флувоксамином, лансопразолом, тиклопидином) или циметидином.Снижение дозы эсциталопрама может потребоваться на основании мониторинга побочных эффектов во время сопутствующего лечения (см. Раздел 4.4).

Влияние эсциталопрама на фармакокинетику других лекарственных средств

Эсциталопрам – ингибитор фермента CYP2D6. Рекомендуется с осторожностью назначать эсциталопрам одновременно с лекарственными препаратами, которые в основном метаболизируются этим ферментом и имеют узкий терапевтический индекс, например флекаинид, пропафенон и метопролол (при использовании при сердечной недостаточности) или некоторые лекарственные средства, действующие на ЦНС, которые в основном метаболизируются CYP2D6, e.грамм. антидепрессанты, такие как дезипрамин, кломипрамин и нортриптилин, или нейролептики, такие как рисперидон, тиоридазин и галоперидол. Может потребоваться корректировка дозировки.

Совместное введение с дезипрамином или метопрололом привело в обоих случаях к двукратному увеличению уровней этих двух субстратов CYP2D6 в плазме.

Исследования in vitro показали, что эсциталопрам может также вызывать слабое ингибирование CYP2C19. С осторожностью рекомендуется одновременный прием лекарственных средств, метаболизируемых CYP2C19.

Плодородие

Данные на животных показали, что циталопрам может влиять на качество спермы (см. Раздел 5.3). Отчеты о случаях применения некоторых СИОЗС у людей показали, что их влияние на качество спермы обратимо. Влияние на фертильность человека пока не наблюдается.

Беременность

В отношении эсциталопрама доступны лишь ограниченные клинические данные о беременностях после контакта с ним. Исследования на животных показали репродуктивную токсичность (см. Раздел 5.3). Эсциталопрам не следует применять во время беременности, кроме случаев очевидной необходимости и только после тщательного рассмотрения соотношения риск / польза.

Новорожденных следует наблюдать, если мать продолжает прием эсциталопрама на более поздних сроках беременности, особенно в третьем триместре. Следует избегать резкого прекращения приема во время беременности.

Следующие симптомы могут возникать у новорожденных после применения материнскими СИОЗС / СИОЗСН на более поздних сроках беременности: респираторный дистресс, цианоз, апноэ, судороги, нестабильность температуры, затруднения при кормлении, рвота, гипогликемия, гипертонус, гипотония, гиперрефлексия, тремор, нервозность, раздражительность, вялость, постоянный плач, сонливость и трудности со сном.Эти симптомы могут быть следствием серотонинергических эффектов или симптомов отмены. В большинстве случаев осложнения начинаются сразу или вскоре (<24 часов) после родов.

Эпидемиологические данные свидетельствуют о том, что использование СИОЗС во время беременности, особенно на поздних сроках беременности, может повысить риск стойкой легочной гипертензии у новорожденных (ПРЛГ). Наблюдаемый риск составлял примерно 5 случаев на 1000 беременностей. В общей популяции происходит от 1 до 2 случаев ПРГН на 1000 беременностей.

Данные наблюдений указывают на повышенный (менее чем в 2 раза) риск послеродового кровотечения после воздействия СИОЗС / СИОЗСН в течение месяца до рождения (см. Разделы 4.4, 4.8).

Грудное вскармливание

Ожидается, что эсциталопрам будет выделяться с грудным молоком.

Следовательно, кормление грудью во время лечения не рекомендуется.

Хотя было показано, что эсциталопрам не влияет на интеллектуальную функцию или психомоторную работоспособность, любой психоактивный лекарственный препарат может ухудшить суждение или навыки.Пациентов следует предупредить о потенциальном риске влияния на их способность управлять автомобилем и работать с механизмами.

Побочные реакции наиболее часты в течение первой или второй недели лечения и обычно уменьшаются по интенсивности и частоте при продолжении лечения.

Табличный список побочных реакций

Неблагоприятные реакции, известные для СИОЗС, а также зарегистрированные для эсциталопрама в плацебо-контролируемых клинических исследованиях или как спонтанные постмаркетинговые события, перечислены ниже по классам органов системы и их частоте.

Частоты взяты из клинических исследований; они не корректируются плацебо. Частоты определяются как: очень часто (≥1 / 10), часто (от ≥1 / 100 до <1/10), нечасто (от ≥1 / 1000 до <1/100), редко (от ≥1 / 10,000 до <1 / 1000), очень редко (<1/10 000) или неизвестно (невозможно оценить по имеющимся данным).

Класс системного органа

Частота

Нежелательные эффекты

Заболевания крови и лимфатической системы

Неизвестно

Тромбоцитопения

Нарушения иммунной системы

Редкий

Анафилактическая реакция

Эндокринные расстройства

Неизвестно

Нарушение секреции АДГ

Нарушения обмена веществ и питания

Обычный

Снижение аппетита, повышение аппетита, увеличение веса

Необычный

Масса уменьшена

Неизвестно

Гипонатриемия, анорексия 1

Психиатрические расстройства

Обычный

Беспокойство, беспокойство, ненормальные сновидения, снижение либидо

Женщина: аноргазмия

Необычный

Бруксизм, возбуждение, нервозность, паническая атака, состояние спутанности сознания

Редкий

Агрессия, деперсонализация, галлюцинации

Неизвестно

Мания, суицидальные мысли, суицидальное поведение 2

Расстройства нервной системы

Очень часто

Головная боль

Обычный

Бессонница, сонливость, головокружение, парестезия, тремор

Необычный

Нарушение вкуса, нарушение сна, обморок

Редкий

Серотониновый синдром

Неизвестно

Дискинезия, двигательное расстройство, судороги, психомоторное возбуждение / акатизия 1

Заболевания глаз

Необычный

Мидриаз, нарушение зрения

Заболевания уха и лабиринта

Необычный

Тиннитус

Сердечные расстройства

Необычный

Тахикардия

Редкий

Брадикардия

Неизвестно

Электрокардиограмма удлиненного интервала QT Желудочковая аритмия, включая torsade de pointes

Сосудистые заболевания

Неизвестно

Ортостатическая гипотензия

Заболевания органов дыхания, грудной клетки и средостения

Обычный

Синусит, зевота

Необычный

Носовое кровотечение

Желудочно-кишечные расстройства

Очень часто

Тошнота

Обычный

Диарея, запор, рвота, сухость во рту

Необычный

Желудочно-кишечные кровотечения (включая кровотечение из прямой кишки)

Заболевания гепатобилиарной системы

Неизвестно

Гепатит, нарушение функции печени

Заболевания кожи и подкожной клетчатки

Обычный

Повышенное потоотделение

Необычный

Крапивница, алопеция, сыпь, кожный зуд

Неизвестно

Экхимоз, отек Квинке

Заболевания опорно-двигательного аппарата и соединительной ткани

Обычный

Артралгия, миалгия

Нарушения со стороны почек и мочевыводящих путей

Неизвестно

Задержка мочи

Заболевания репродуктивной системы и груди

Обычный

Мужчина: нарушение эякуляции, импотенция

Необычный

Женщина: метроррагия, меноррагия

Неизвестно

Галакторея

Самец: приапизм

Послеродовое кровотечение 3

Общие расстройства и состояние места введения

Обычный

Усталость, гипертермия

Необычный

Отек

1 Эти события были зарегистрированы для терапевтического класса СИОЗС.

2 Сообщалось о случаях суицидальных мыслей и суицидального поведения во время терапии эсциталопрамом или сразу после прекращения лечения (см. Раздел 4.4).

3 Это событие было зарегистрировано для терапевтического класса СИОЗС / СИОЗСН (см. Разделы 4.4, 4.6).

Удлинение интервала QT

Сообщалось о случаях удлинения интервала QT и желудочковой аритмии, включая torsade de pointes, в постмаркетинговый период, преимущественно у пациентов женского пола, с гипокалиемией или с уже существующим удлинением интервала QT или другими сердечными заболеваниями (см.3, 4.4, 4.5, 4.9 и 5.1).

Класс эффекты

Эпидемиологические исследования, проводимые в основном у пациентов в возрасте 50 лет и старше, показывают повышенный риск переломов костей у пациентов, получающих СИОЗС и ТЦА. Механизм, приводящий к этому риску, неизвестен.

Симптомы отмены, наблюдаемые при прекращении лечения

Прекращение приема СИОЗС / СИОЗСН (особенно резкое) обычно приводит к появлению симптомов отмены.Головокружение, сенсорные расстройства (включая парестезию и ощущение поражения электрическим током), нарушения сна (включая бессонницу и интенсивные сны), возбуждение или беспокойство, тошноту и / или рвоту, тремор, спутанность сознания, потливость, головную боль, диарею, сердцебиение, эмоциональную нестабильность, раздражительность, и расстройства зрения являются наиболее частыми реакциями.

Как правило, эти явления являются легкими или умеренными и проходят самостоятельно, однако у некоторых пациентов они могут быть тяжелыми и / или продолжительными.Поэтому рекомендуется, чтобы, когда лечение эсциталопрамом больше не требуется, следует проводить постепенное прекращение приема путем снижения дозы (см. Разделы 4.2 и 4.4).

Сообщение о предполагаемых побочных реакциях

Важно сообщать о предполагаемых побочных реакциях после получения разрешения на лекарственный препарат. Это позволяет непрерывно контролировать соотношение польза / риск лекарственного средства. Медицинских работников просят сообщать о любых предполагаемых побочных реакциях через национальную систему отчетности, указанную в схеме желтых карточек, веб-сайт: www.mhra.gov.uk/yellowcard.

Токсичность

Клинические данные о передозировке эсциталопрама ограничены, и многие случаи связаны с одновременной передозировкой других препаратов. В большинстве случаев не сообщалось о легких симптомах или их отсутствии. Смертельные случаи передозировки эсциталопрама при приеме только эсциталопрама регистрировались редко; в большинстве случаев была передозировка сопутствующими лекарствами. Дозы от 400 до 800 мг одного эсциталопрама принимались без каких-либо серьезных симптомов.

Симптомы

Симптомы, наблюдаемые при передозировке эсциталопрама, включают симптомы, в основном связанные с центральной нервной системой (от головокружения, тремора и возбуждения до редких случаев серотонинового синдрома , судороги и комы), со стороны желудочно-кишечного тракта (тошнота / рвота), и сердечно-сосудистая система (гипотензия , тахикардия , удлинение интервала QT и аритмия) и состояния электролитно-жидкостного баланса (гипокалиемия, гипонатриемия).

Менеджмент

Специфического антидота нет. Установите и поддерживайте проходимость дыхательных путей, обеспечьте адекватную оксигенацию и дыхательную функцию. Следует рассмотреть возможность промывания желудка и использования активированного угля. Промывание желудка следует проводить как можно скорее после приема внутрь. Рекомендуется наблюдение за сердечными и жизненно важными показателями наряду с общими симптоматическими поддерживающими мерами.

Мониторинг ЭКГ рекомендуется в случае передозировки у пациентов с застойной сердечной недостаточностью / брадиаритмией, у пациентов, принимающих сопутствующие препараты, удлиняющие интервал QT, или у пациентов с измененным метаболизмом, например.грамм. нарушение функции печени.

Фармакотерапевтическая группа: антидепрессанты, селективные ингибиторы обратного захвата серотонина

ATC-код: N 06 AB 10

Механизм действия

Эсциталопрам – селективный ингибитор обратного захвата серотонина (5-HT) с высоким сродством к первичному сайту связывания. Он также связывается с аллостерическим сайтом на транспортере серотонина с сродством в 1000 раз ниже.

Эсциталопрам не имеет сродства или имеет низкое сродство к ряду рецепторов, включая 5-HT 1A , 5-HT 2 , DA D 1 и D 2 рецептора , α 1 -, α 2 – , β-адренорецепторы, гистамин H 1 , мускариновые холинергические, бензодиазепиновые и опиоидные рецепторы.

Ингибирование обратного захвата 5-HT – единственный вероятный механизм действия, объясняющий фармакологические и клинические эффекты эсциталопрама.

Фармакодинамические эффекты

В двойном слепом плацебо-контролируемом исследовании ЭКГ у здоровых субъектов изменение QTc по сравнению с исходным уровнем (коррекция Фридериции) составило 4,3 мс (90% ДИ: 2,2, 6,4) при дозе 10 мг / день и 10,7 мс ( 90% ДИ: 8,6, 12,8) в сверхтерапевтической дозе 30 мг / день (см.4, 4.5, 4.8 и 4.9).

Клиническая эффективность

Крупные депрессивные эпизоды

Эсциталопрам оказался эффективным в лечении острых депрессивных эпизодов в трех из четырех двойных слепых плацебо-контролируемых краткосрочных (8-недельных) исследований. В долгосрочном исследовании профилактики рецидивов 274 пациента, которые ответили на начальную 8-недельную открытую фазу лечения эсциталопрамом 10 или 20 мг / день, были рандомизированы для продолжения приема эсциталопрама в той же дозе или плацебо в течение более длительного периода. до 36 недель.В этом исследовании у пациентов, продолжавших лечение эсциталопрамом, в течение последующих 36 недель наблюдалось значительно более длительное время рецидива по сравнению с пациентами, получавшими плацебо.

Социальное тревожное расстройство

Эсциталопрам был эффективен как в трех краткосрочных (12-недельных) исследованиях, так и у респондентов в 6-месячном исследовании профилактики рецидивов социального тревожного расстройства. В 24-недельном исследовании по подбору доз была продемонстрирована эффективность эсциталопрама в дозе 5, 10 и 20 мг.

Генерализованное тревожное расстройство

Эсциталопрам в дозах 10 и 20 мг / день был эффективен в четырех из четырех плацебо-контролируемых исследований.

В объединенных данных трех исследований с аналогичным дизайном, включавших 421 пациента, получавшего эсциталопрам, и 419 пациентов, получавших плацебо, было 47,5% и 28,9% пациентов, ответивших на лечение, соответственно, и 37,1% и 20,8% пациентов, реализующих терапию. Устойчивый эффект наблюдался с 1 недели.

Сохранение эффективности эсциталопрама в дозе 20 мг / день было продемонстрировано в рандомизированном исследовании поддержания эффективности в течение 24–76 недель у 373 пациентов, которые ответили на лечение во время начального 12-недельного открытого лечения.

Обсессивно-компульсивное расстройство

В рандомизированном двойном слепом клиническом исследовании эсциталопрам в дозе 20 мг / день отделялся от плацебо по общему баллу Y-BOCS через 12 недель. Через 24 недели и 10, и 20 мг / день эсциталопрама были лучше по сравнению с плацебо.

Профилактика рецидивов была продемонстрирована при применении эсциталопрама в дозе 10 и 20 мг / день у пациентов, которые ответили на эсциталопрам в течение 16-недельного открытого периода и вошли в 24-недельный рандомизированный, двойной слепой, плацебо-контролируемый период.

Поглощение

Всасывание почти полное и не зависит от приема пищи. (Среднее время достижения максимальной концентрации (среднее значение T макс ) составляет 4 часа после многократного введения). Как и в случае с рацемическим циталопрамом, абсолютная биодоступность эсциталопрама ожидается на уровне около 80%.

Распределение

Кажущийся объем распределения (V d, β / F) после перорального приема составляет примерно от 12 до 26 л / кг.Связывание с белками плазмы ниже 80% для эсциталопрама и его основных метаболитов.

Биотрансформация

Эсциталопрам метаболизируется в печени до деметилированных и дидеметилированных метаболитов. Оба они фармакологически активны. Альтернативно азот можно окислить с образованием метаболита N-оксида. Как исходное вещество, так и метаболиты частично выводятся в виде глюкуронидов. После многократного введения средние концентрации метаболитов деметила и дидеметила обычно составляют 28-31% и <5% соответственно от концентрации эсциталопрама.Биотрансформация эсциталопрама в деметилированный метаболит в основном опосредуется CYP2C19. Возможен некоторый вклад ферментов CYP3A4 и CYP2D6.

Ликвидация

Период полувыведения (t ½ β ) после многократного приема составляет около 30 часов, а пероральный плазменный клиренс (Cl пероральный ) составляет около 0,6 л / мин. Основные метаболиты имеют значительно более длительный период полураспада. Предполагается, что эсциталопрам и основные метаболиты выводятся как печеночным (метаболическим), так и почечным путями, при этом большая часть дозы выводится в виде метаболитов с мочой.

Линейность

Существует линейная фармакокинетика. Устойчивый уровень в плазме достигается примерно через 1 неделю. Средние стационарные концентрации 50 нмоль / л (от 20 до 125 нмоль / л) достигаются при суточной дозе 10 мг.

Пациенты пожилого возраста (> 65 лет)

У пожилых пациентов эсциталопрам выводится медленнее, чем у более молодых. Системное воздействие (AUC) примерно на 50% выше у пожилых людей по сравнению с молодыми здоровыми добровольцами (см. Раздел 4.2).

Снижение функции печени

У пациентов с легким или умеренным нарушением функции печени (критерии Чайлд-Пью A и B) период полувыведения эсциталопрама был примерно вдвое больше, а экспозиция была примерно на 60% выше, чем у пациентов с нормальной функцией печени (см. Раздел 4.2) .

Снижение функции почек

При использовании рацемического циталопрама более длительный период полувыведения и незначительное увеличение экспозиции наблюдались у пациентов со сниженной функцией почек (CL cr 10-53 мл / мин).Концентрации метаболитов в плазме не изучались, но они могут быть повышены (см. Раздел 4.2).

Полиморфизм

Было замечено, что у слабых метаболизаторов по отношению к CYP2C19 концентрация эсциталопрама в плазме в два раза выше, чем у интенсивных метаболизаторов. Не наблюдалось значительных изменений в экспозиции CYP2D6 у слабых метаболизаторов (см. Раздел 4.2).

Никакой полной стандартной серии доклинических исследований эсциталопрама не проводилось, поскольку переходные токсикокинетические и токсикологические исследования, проведенные на крысах с эсциталопрамом и циталопрамом, показали аналогичный профиль.Следовательно, всю информацию о циталопраме можно экстраполировать на эсциталопрам.

В сравнительных токсикологических исследованиях на крысах эсциталопрам и циталопрам вызвали сердечную токсичность, включая застойную сердечную недостаточность, после лечения в течение нескольких недель при использовании доз, вызывающих общую токсичность. Кардиотоксичность, по-видимому, коррелировала с пиковыми концентрациями в плазме, а не с системным воздействием (AUC). Пиковые концентрации в плазме на уровне отсутствия эффекта превышали (в 8 раз) те, которые были достигнуты при клиническом применении, в то время как AUC для эсциталопрама была только в 3-4 раза выше, чем экспозиция, достигнутая при клиническом применении.Для циталопрама значения AUC для S-энантиомера были в 6-7 раз выше, чем экспозиция, достигнутая при клиническом использовании. Полученные данные, вероятно, связаны с чрезмерным влиянием на биогенные амины, т.е. вторичными по отношению к первичным фармакологическим эффектам, что приводит к гемодинамическим эффектам (снижение коронарного кровотока) и ишемии. Однако точный механизм кардиотоксичности у крыс не ясен. Клинический опыт применения циталопрама и опыт клинических испытаний эсциталопрама не указывают на то, что эти данные имеют клиническую корреляцию.

Повышенное содержание фосфолипидов наблюдается в некоторых тканях, например, в тканях. легкие, придатки яичка и печень после длительного лечения эсциталопрамом и циталопрамом у крыс. Находки в придатках яичка и печени наблюдались при воздействии, аналогичной таковой у человека. Эффект обратимый после прекращения лечения. Накопление фосфолипидов (фосфолипидоз) у животных наблюдалось в связи со многими катионными амфифильными лекарствами. Неизвестно, имеет ли это явление какое-либо значение для человека.

В исследовании токсичности для развития на крысах наблюдались эмбриотоксические эффекты (снижение веса плода и обратимая задержка окостенения) при воздействии с точки зрения AUC, превышающей воздействие, достигаемое во время клинического использования. Повышения частоты пороков развития не отмечено. Пред- и послеродовое исследование показало снижение выживаемости в период лактации при воздействии с точки зрения AUC, превышающей воздействие, достигаемое во время клинического использования.

Данные на животных показали, что циталопрам вызывает снижение индекса фертильности и индекса беременности, уменьшение количества имплантаций и аномальных сперматозоидов при воздействии, значительно превышающем воздействие на человека.Для эсциталопрама нет данных о животных, относящихся к этому аспекту.

Ядро планшета:

Силикатная микрокристаллическая целлюлоза

Бутилированный гидроксилтолуол (E321)

Бутилированный гидроксиланизол (E320)

Кроскармеллоза натрия

Целлюлоза микрокристаллическая

Кремнезем коллоидный безводный

Тальк

Стеарат магния

Пленка:

Гипромеллоза

Макрогол 400

Диоксид титана (E 171)

Лекарственное средство не требует особых условий хранения

Таблетки доступны в блистерах из ПВХ / Aclar – Aluminium и в белых непрозрачных бутылках из полиэтилена высокой плотности, закрытых полипропиленовой крышкой.

Размер упаковки

Блистерные упаковки ПВХ / Aclar – Aluminium: 14, 20, 28, 50, 56, 100 и 500 таблеток

Бутылки из полиэтилена высокой плотности в упаковке: 28, 30, 100, 250 и 500 таблеток

Доступны не все размеры упаковок.

Любой неиспользованный продукт или отходы следует утилизировать в соответствии с местными требованиями.

Милфарм Лимитед

AresBlock

Бизнес-парк Одиссей

Вест-Энд-роуд

Руислип HA4 6QD

Соединенное Королевство

Цетилтриметиламмонийбромид ослабляет мезенхимальные характеристики плоскоклеточного рака гипофарингеальной клетки за счет ингибирования сигнального пути EGFR / PI3K / AKT клеточный режим плоскоклеточного рака головы и шеи (HNSCC), модулирующий апоптотические и цитотоксические процессы.Однако механизмы, с помощью которых CTAB проявляет свои эффекты против эпителиально-мезенхимального перехода в HNSCC, остаются плохо изученными. В настоящем исследовании мы исследовали, подавляет ли CTAB клеточную подвижность и инвазивность клеток плоскоклеточной карциномы гипофарингеальной клетки (HPSCC). Материалы и методы. Были проведены WST-1, фазовое распределение клеточного цикла и заживление ран, а также анализы через лунки. Изменения в паттернах экспрессии белков и связанных сигнальных путях, участвующих в эффектах CTAB на клеточные линии HPSCC, оценивали с помощью вестерн-блоттинга.Результаты: Обработка клеточных линий HPSCC человека с помощью CTAB значительно изменила их морфологию от веретенообразной до булыжной за счет снижения мезенхимальных фенотипических характеристик. CTAB также препятствовал функциональным свойствам клеток, включая миграцию и инвазию, независимо от жизнеспособности клеток. Кроме того, результаты вестерн-блоттинга показали, что лечение CTAB снижает экспрессию мезенхимальных маркеров. Дальнейшие исследования показали, что обработка CTAB подавляла фосфорилирование внеклеточной регулируемой киназы 1/2, механистической мишени рапамицинкиназы и серин / треонинкиназы 1 AKT.CTAB также подавлял уровни экспрессии и фосфорилирования рецептора эпидермального фактора роста (EGFR) и фосфатидилинозитол-4,5-бисфосфат-3-киназы (PI3K), а частичное восстановление мезенхимального фенотипа добавлением EGF подтвердило, что CTAB ингибирует миграцию и инвазию в HPSCC. клетки, блокируя сигнальный путь EGFR. Заключение. Наши результаты предполагают, что CTAB участвует в подавлении EGFR-опосредованного мезенхимального фенотипа, и молекулярный механизм, с помощью которого CTAB препятствует метастазированию клеток HPSCC, может представлять собой многообещающую стратегию для использования в лечении HPSCC.

Социально-демографические характеристики участников

Социально-демографические характеристики участников

Таблица 1A: Социально-демографические характеристики участников.

Социально-демографический характеристики

Частота (N = 70)

%

Возраст

≤ 20

10

14.2

20-30

40

57,1

31-40

16

22,8

≥ 40

4

5,0

В браке статус

женат

40

57.1

Одноместный

20

28,5

В разводе

3

4,2

Вдова

7

10,0

Секс

Мужской

26

37.1

Женский

44

62,9

Уровень образования

Школа

20

28,5

Колледж

35

50

университет

15

21.4

Работа единица

Мужской

45

64,2

Женский

15

21,4

Наркомания

10

14,4

Сдвиг

Утро

45

64.

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован.